專利名稱：一種千金藤素的分離提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種千金藤素的提取分離方法，具體地說，是一種從植物地不容中提 取千金藤素的方法。
背景技術(shù)：
千金藤素(C^pharanthine)，是一種具有生物活性的雙芐基異喹啉生物堿，主要來 源于防已科植物，例如地不容，光葉地不容、金線吊烏龜、江南地不容和臺灣千金藤等。由于 地理環(huán)境、氣候條件等因素的影響，不同來源的同一藥材質(zhì)量多存在差異，種屬和源產(chǎn)地的 差異導(dǎo)致植物中千金藤素含量高低不一。千金藤素能促進骨髓組織增生，增加血液中白細胞的數(shù)量，適用于白細胞減少癥； 同時也是較好的抗癌藥增效劑，能提高抗癌藥物的療效，降低抗癌藥的用量，減輕毒副作 用；對多種動物炎性水腫和疼痛均有明顯的抑制作用，且無任何毒性反應(yīng)?，F(xiàn)有技術(shù)中千金藤素主要通過純甲醇或乙醇粗提，酸溶堿沉，硅膠柱層析或氧化 鋁柱層析，丙酮結(jié)晶，這些傳統(tǒng)方法提取分離所得千金藤素回收率較低，純化過程中千金藤 素損失較大，有機溶劑消耗量大，工業(yè)化成本較高，工業(yè)污染嚴重。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了 一種適用于工業(yè)化生產(chǎn)的千金藤素制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案為
取干燥地不容塊根，粉碎，每公斤粉碎物加入2-3L水和0. 5-5ml混合生物酶液泡1小 時后，加入9-11 L的1- (質(zhì)量百分比，下同)HCL水溶液加熱到90°C浸泡3小時；分離藥 液，藥渣再次加入9-11 L的1-2%HCL水溶液煎煮3小時，過濾。合并2次濾液，采用陽離子 交換柱或者陽離子纖維素柱吸附，富集千金藤素，用添加氫氧化鈉到60-90% (質(zhì)量百分比， 下同)乙醇水溶液中至飽和狀態(tài)的溶液作為洗脫液，洗脫，收集千金藤素段洗脫液，調(diào)節(jié)PH 值至7，濃縮回收乙醇，過濾，沉淀物用無水乙醇溶解后，用陰離子柱洗脫純化，收集千金藤 素段洗脫液，濃縮，結(jié)晶，干燥即得千金藤素?；旌仙锩敢河砂肜w維素酶，果膠裂解酶，中溫液化酶，低溫液化酶，蝸牛酶，黑曲 酶等中的一種或幾種組成。氫氧化鈉飽和的乙醇水溶液的優(yōu)選濃度為80%。采用上述技術(shù)方案制備千金藤素，采用混合生物酶酸水提取能提高提取效率，提 取完全，減少粗提物中有機雜質(zhì)，用離子交換法替代酸溶堿沉法提高收率，提高千金藤素純 度，使用陰離子柱層析替代硅膠和氧化鋁柱層析，降低溶劑成本，對木質(zhì)素去除效果更佳。 整個工藝操作簡單、有機溶劑使用少僅使用少量乙醇和水，工藝路線綠色環(huán)保，生產(chǎn)成本 低，利于工業(yè)化生產(chǎn)。下面結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明做進一步的描述，但本發(fā)明要求保護的內(nèi)容并不 局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1
取干燥地不容塊根1kg，塊根粉碎到40目加2L水和3ml混合生物酶液(果膠裂解酶α 低溫液化酶=1:4)50°C浸泡1小時后，加入10升1%HCL (質(zhì)量百分比，下同)水溶液加熱到 90°C提取3小時。分離藥液，藥渣再次加入10升1%HCL水溶液煎煮3小時，過濾，合并2次 濾液，采用強酸苯乙烯磺酸基陽離子交換樹脂001X7交換吸附，富集千金藤素，用添加氫氧 化鈉到80% (質(zhì)量百分比，下同)乙醇水溶液中至飽和狀態(tài)的溶液5L作為洗脫液，洗脫，流 速為lOml/min，收集千金藤素段洗脫液調(diào)節(jié)PH值至7，濃縮回收乙醇，過濾，沉淀物用無水 乙醇溶解后，采用陰離子DESE纖維素柱純化，收集洗脫液，濃縮，用50%乙醇水結(jié)晶干燥得 淡黃色粉末9. O克，含量99. 6%。實施例2
取干燥地不容塊根1kg，塊根粉碎到60目加2L水和Iml混合生物酶液(蝸牛酶黑曲 酶=3:2) 50°C浸泡1小時后，加入11升2%HCL (質(zhì)量百分比，下同)水溶液加熱到90°C提 取3小時。分離藥液，藥渣再次加入11升2%HCL水溶液煎煮3小時，過濾，合并2次濾液， 采用陽離子CM纖維素柱吸附，富集千金藤素，用添加氫氧化鈉到70%乙醇水溶液中至飽和 狀態(tài)的溶液5L作為洗脫液，洗脫，流速為lOml/min。收集千金藤素段洗脫液調(diào)節(jié)PH值至 7，濃縮回收乙醇，過濾，沉淀物用無水乙醇溶解后，采用700B陰離子樹脂柱純化，收集洗脫 液，濃縮，60%乙醇水結(jié)晶干燥得淡黃色粉末8. 6克，含量99.實施例3
取干燥地不容塊根1kg，塊根粉碎到40目加3L水和5ml混合生物酶液(半纖維素酶 α中溫液化酶=1:4) 60°C浸泡1小時后，加入9升1%HCL (質(zhì)量百分比，下同)水溶液加熱 到90°C提取3小時。分離藥液，藥渣再次加入9升1%HCL水溶液煎煮3小時，過濾，合并2 次濾液，采用弱酸性丙稀酸陽離子交換樹脂152交換吸附生物堿，富集千金藤素，用添加氫 氧化鈉到90%乙醇水溶液中至飽和狀態(tài)的溶液5L作為洗脫液，洗脫，流速為lOml/min。收 集千金藤素段洗脫液調(diào)節(jié)PH值至7，濃縮回收乙醇，過濾，沉淀物用無水乙醇溶解后，采用 D941陰離子柱洗脫純化，收集洗脫液，濃縮，30%乙醇水結(jié)晶干燥得淡黃色粉末9. 1克，含量 98. 9%。實施例4
取干燥地不容塊根1kg，塊根粉碎到40目加2. 5L水和細1混合生物酶液(果膠裂解酶 蝸牛酶=2:3)45°C浸泡1小時后，加入10升P/oHCL (質(zhì)量百分比，下同)水溶液加熱到90°C 提取3小時。分離藥液，藥渣再次加入10升1%HCL水溶液煎煮3小時，過濾，合并2次濾液， 采用陽離子交換樹脂001X7交換吸附生物堿，富集千金藤素，用添加氫氧化鈉到80%乙醇水 溶液中至飽和狀態(tài)的溶液5L作為洗脫液，洗脫，流速為lOml/min。收集千金藤素段洗脫液 調(diào)節(jié)PH值至7，濃縮回收乙醇，過濾，沉淀物用無水乙醇溶解后，采用D900陰離子柱洗脫純 化，收集洗脫液，濃縮，50%乙醇水結(jié)晶干燥得淡黃色粉末8. 9克，含量99. 5%。
權(quán)利要求
1.一種千金藤素的分離提取方法，其特征在于按以下步驟進行取干燥地不容塊根， 粉碎，每公斤粉碎物加入2-3L水和0. 5-5ml混合生物酶液泡1小時后，加入9_11 L的1- 質(zhì)量百分比HCL水溶液加熱到90°C浸泡3小時；分離藥液，藥渣再次加入9-11 L的1_2%HCL 水溶液煎煮3小時，過濾，合并2次濾液，采用陽離子交換柱或者陽離子纖維素柱吸附，富集 千金藤素，用添加氫氧化鈉到60-90%質(zhì)量濃度的乙醇水溶液中至飽和狀態(tài)的溶液作為洗 脫液，洗脫，收集千金藤素段洗脫液，調(diào)節(jié)PH值至7，濃縮回收乙醇，過濾，沉淀物用無水乙 醇溶解后，用陰離子柱洗脫純化，收集千金藤素段洗脫液，濃縮，結(jié)晶，干燥即得千金藤素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的千金藤素分離提取方法，其特征在于復(fù)合生物酶液由半纖維 素酶，果膠裂解酶，中溫液化酶，低溫液化酶，蝸牛酶，黑曲酶中的一種或幾種組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的千金藤素分離提取方法，其特征在于用添加氫氧化鈉到80% 乙醇水溶液中至飽和狀態(tài)的溶液作為洗脫液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種千金藤素的分離提取方法。取干燥地不容塊根，粉碎，每公斤粉碎物加入2-3L水和0.5-5ml混合生物酶液泡1小時后，加入9-11L的1-2%質(zhì)量百分比HCL水溶液加熱到90℃浸泡3小時；分離藥液，藥渣再次加入9-11L的1%-2%HCL水溶液煎煮3小時，過濾，合并2次濾液，采用陽離子交換柱或者陽離子纖維素柱吸附，富集千金藤素，用添加氫氧化鈉到60-90%乙醇水溶液中至飽和狀態(tài)的溶液作為洗脫液，洗脫，收集千金藤素段洗脫液，調(diào)節(jié)pH值至7，濃縮回收乙醇，過濾，沉淀物用無水乙醇溶解后，用陰離子柱洗脫純化，收集千金藤素段洗脫液，濃縮，結(jié)晶，干燥即得千金藤素。本發(fā)明操作簡單，污染小、成本低，回收率高，千金藤素純度高，易于實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化。
文檔編號C07D491/056GK102146083SQ20111005691
公開日2011年8月10日 申請日期2011年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月10日
發(fā)明者蔡群虎 申請人:云南漢德生物技術(shù)有限公司