專利名稱：一種麥冬皂苷d的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，尤其涉及一種麥冬皂苷D的提取方法。
背景技術(shù)：
麥冬Ophiopogon japonicus (Thunb. ) Ker-Gawl.又名沿階草、書帶草、麥門冬，為
百合科沿階草屬多年生常綠草本植物，是一味常用于滋陰的中藥，始于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代本草都有記載。麥冬具有養(yǎng)陰生津，潤肺清心?？捎糜诜卧锔煽龋摪A咳嗽，津傷口渴，心煩失眠，內(nèi)熱消渴，腸燥便秘，咽白喉等癥?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)麥冬含有留體皂苷、高異黃酮、多糖、氨基酸等成分，藥理實(shí)驗(yàn)表明麥冬皂苷類成分具有一定的抗心肌缺血、抗心律失常等作用。麥冬皂苷D =C44H7tlO16,屬于甾體皂苷類，易溶于乙醇和水，不溶于丙酮、石油醚等非極性溶劑。其對心腦血管系統(tǒng)方面具有顯著的作用，如蔣風(fēng)榮等發(fā)表的“麥冬皂苷D對過氧化氫造模的HUVEC保護(hù)作用機(jī)制研究”，該文獻(xiàn)明確了麥冬皂苷D可以穩(wěn)定線粒體膜電位， 減少鈣離子內(nèi)流，增加細(xì)胞的活力，對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)有一定的保護(hù)作用。 因此本發(fā)明提供一種麥冬皂苷D的分離方法，為麥冬有效成分的開發(fā)奠定基礎(chǔ)?，F(xiàn)有文獻(xiàn)中提取麥冬皂苷D多是通過回流，萃取和大孔樹脂純化等手段得到麥冬總皂苷，再通過反復(fù)柱層析的方法得到麥冬皂苷D。如盧克剛等發(fā)表的“川麥冬中麥冬皂苷 D對照品的制備”，該文獻(xiàn)公開的方法是80%乙醇回流提取，加水稀釋后，用乙酸乙酯萃取， 萃余液用水飽和正丁醇萃取，萃取液過減壓硅膠柱，收集含目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫液再過加壓硅膠柱，洗脫液過ODS硅膠柱，最后通過凝膠柱洗脫得麥冬皂苷D，工藝步驟繁多，操作復(fù)雜， 制備量少且周期長?，F(xiàn)有專利“一種治療慢性支氣管炎的中藥制劑及制備方法和應(yīng)用”(專利號200510069530.幻，該專利以70 90%的乙醇回流提取，濃縮，加水分散后用石油醚萃取，萃余液再用水飽和正丁醇萃取，然后上大孔樹脂柱，高醇洗脫液濃縮后上氧化鋁柱吸附，用70%乙醇洗脫，最后經(jīng)高效液相制備色譜梯度分離得到麥冬皂苷D。該方法采用回流提取能耗大，高效液相的處理量小，且樣品有損失?，F(xiàn)有提取麥冬皂苷D的方法普遍存在著能耗大，工藝步驟多，制備量少的的問題，因此提供一種能耗低、制備量大的麥冬皂苷D的提取方法是很有必要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種麥冬皂苷D的提取方法，該方法操作簡單，
廣品含量尚。本發(fā)明之所以采用微波提取，是因?yàn)槲⒉ㄌ崛【哂羞x擇性，極性較大的分子可以獲得較多的微波能，因而采用微波提取可以選擇性的提取一些極性成分，微波提取還具有加熱均勻，高效清潔的優(yōu)點(diǎn)；采用高速逆流色譜法分離純化，因?yàn)樵摲蛛x方法操作簡便，同時(shí)也避免了樣品的損失，與傳統(tǒng)分離手段相比，克服了其操作繁瑣，分離周期長的缺點(diǎn)，并具有制備量大，產(chǎn)品純度高的優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的一種麥冬皂苷D的提取方法，其特征在于包含以下步驟取麥冬干燥藥材粉碎至 20 60目，置微波裝置中用8 15倍量60 80%的乙醇溶液提取15 30分鐘，提取液濃縮至浸膏，加適量水分散后，加入1 3倍量的水飽和正丁醇萃取1 4次，合并萃取液加0. 5 1倍量丙酮沉淀，過濾，濾液蒸干得麥冬總皂苷，再采用高速逆流色譜法對其進(jìn)行分離純化，以氯仿-甲醇-1%氨水(6 10 11 15 5)作為兩相溶劑系統(tǒng)，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將麥冬總皂苷粉末用下相溶解，流出物減壓蒸干即得麥冬皂苷D產(chǎn)品。所述的微波提取是指先將藥材和提取液浸泡0. 5 5小時(shí)，再置于微波裝置中輻照提取，設(shè)定額定功率為200 1000W，提取溫度為60 80°C。所述的高速逆流色譜法分離，參數(shù)設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速700 lOOOr/min，流動(dòng)相流速 0. 8 3. Oml/min。本發(fā)明的積極效果是1)微波提取選擇性的提取極性成分，減少非極性雜質(zhì)混入，且提取均勻、快速、 能耗低；2)高速逆流色譜法分離無需使用載體，減少了操作過程中樣品的損失，分離效果好，制備量大。下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 取麥冬干燥藥材500g，粉碎過40目篩，加入4L80%的乙醇溶液浸泡0. 5小時(shí)，再置于微波裝置中輻照提取15min，提取溫度為60 70°C，微波裝置功率設(shè)定為200W，提取液濃縮得浸膏68g，加150ml水分散，再加200ml水飽和正丁醇萃取2次，合并萃取液，用300ml 丙酮沉淀，過濾，濾液蒸干得麥冬總皂苷11. Sg。將氯仿、甲醇、氨水按7 13 5的體積比量取，超聲混合后加入分液漏斗中， 靜置使上、下相分層，取上相作為固定相，下相作為流動(dòng)相，將上述黃色粉末用500ml下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流動(dòng)相，平衡后設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為850r/min，通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為150mg，收集流出液，減壓蒸干即得麥冬皂苷 D2. 7g，含量 99. 3%。實(shí)施例2:取麥冬干燥藥材500g，粉碎過60目篩，加入6L70%的乙醇溶液浸泡2. 5小時(shí)，再置于微波裝置中輻照提取18min，提取溫度為60 70°C，微波裝置功率設(shè)定為500W，提取液濃縮得浸膏71g，加180ml水分散，再加250ml水飽和正丁醇萃取3次，合并萃取液，用400ml 丙酮沉淀，過濾，濾液蒸干得麥冬總皂苷13. 3g。將氯仿、甲醇、氨水按(6 15 5)的體積比量取，超聲混合后加入分液漏斗中，靜置使上、下相分層，取上相作為固定相，下相作為流動(dòng)相，將上述黃色粉末用600ml下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以0. Sml/min的流速泵入流動(dòng)相，平衡后設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為lOOOr/min，通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為180mg，收集流出液，減壓蒸干即得麥冬皂苷 D3. 4g，含量 98. 6%0實(shí)施例3:取麥冬干燥藥材lOOOg，粉碎過20目篩，加入12L60%的乙醇溶液浸泡4小時(shí)，再置于微波裝置中輻照提取20min，提取溫度為70 80°C，微波裝置功率設(shè)定為1000W，提取液濃縮得浸膏147g，加350ml水分散，再加500ml水飽和正丁醇萃取2次，合并萃取液，用 600ml丙酮沉淀，過濾，濾液蒸干得麥冬總皂苷25. 4g。將氯仿、甲醇、氨水按(10 14 5)的體積比量取，超聲混合后加入分液漏斗中，靜置使上、下相分層，取上相作為固定相，下相作為流動(dòng)相，將上述黃色粉末用1.2L下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以3. Oml/min的流速泵入流動(dòng)相，平衡后設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為800r/min，通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為200mg，收集流出液，減壓蒸干即得麥冬皂苷 D6. 3g，含量 99. 1%ο實(shí)施例4 取麥冬干燥藥材lOOOg，粉碎過40目篩，加入15L65%的乙醇溶液浸泡5小時(shí)，再置于微波裝置中輻照提取30min，提取溫度為60 65°C，微波裝置功率設(shè)定為1000W，提取液濃縮得浸膏127g，加300ml水分散，再加400ml水飽和正丁醇萃取3次，合并萃取液，用 700ml丙酮沉淀，過濾，濾液蒸干得麥冬總皂苷21. lg。將氯仿、甲醇、氨水按(7 12 5)的體積比量取，超聲混合后加入分液漏斗中，靜置使上、下相分層，取上相作為固定相，下相作為流動(dòng)相，將上述黃色粉末用900ml下相溶解，再用上相泵滿色譜柱，然后以2. 5ml/min的流速泵入流動(dòng)相，平衡后設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速為900r/min，通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為160mg，收集流出液，減壓蒸干即得麥冬皂苷 D4. 6g，含量 99. 5%。
權(quán)利要求
1.一種麥冬皂苷D的提取方法，其特征在于包含以下步驟取麥冬干燥藥材粉碎至 20 60目，置微波裝置中用8 15倍量60 80%的乙醇溶液提取15 30分鐘，提取液濃縮至浸膏，加適量水分散后，加入1 3倍量的水飽和正丁醇萃取1 4次，合并萃取液加0. 5 1倍量丙酮沉淀，過濾，濾液蒸干得麥冬總皂苷，再采用高速逆流色譜法對其進(jìn)行分離純化，以氯仿-甲醇-1%氨水(6 10 11 15 5)作為兩相溶劑系統(tǒng)，混勻后置分液漏斗中靜置分層，取上相為固定相，下相為流動(dòng)相，將麥冬總皂苷粉末用下相溶解，流出物減壓蒸干即得麥冬皂苷D產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的一種麥冬皂苷D的提取方法，其特征在于所述的微波提取是指先將藥材和提取液浸泡0. 5 5個(gè)小時(shí)，再置于微波裝置中輻照提取，設(shè)定額定功率為 200 1000W，提取溫度為60 80°C。
3.如權(quán)利要求2所述的一種麥冬皂苷D的提取方法，其特征在于所述的高速逆流色譜法分離，參數(shù)設(shè)定色譜儀轉(zhuǎn)速700 lOOOr/min，流動(dòng)相流速0. 8 3. Oml/min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種麥冬皂苷D的提取方法，工藝步驟包括將麥冬藥材粉碎，用60～80％的乙醇溶液微波提取，提取液濃縮至浸膏，加適量水分散后，加入水飽和正丁醇萃取2～4次，合并萃取液加丙酮沉淀，過濾，濾液蒸干得麥冬總皂苷，再采用高速逆流色譜法對麥冬總皂苷進(jìn)行分離純化，流出物減壓蒸干即得產(chǎn)品。本方法制備量大，樣品損失少，產(chǎn)品含量高。
文檔編號C07J71/00GK102558284SQ201010603888
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月24日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司