專利名稱：一種去除噴司他丁發(fā)酵液中雜質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種去除噴司他丁發(fā)酵液中雜質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
BtwJftkT (Pentostatin) T 1974^ Woo 等從 Streptomyces antiboticus 液中分離得到，是一種極強(qiáng)的腺苷脫氨酶(ADA)抑制劑。噴司他丁與ADA的親和力很高，可與ADA緊密結(jié)合，抑制ADA的活性，而使細(xì)胞脫氧腺苷三磷酸(dATP)水平增高，dATP通過抑制核糖核苷酸還原酶阻斷DNA合成。另外，噴司他丁還能抑制RNA合成并增強(qiáng)對DNA的損傷。1998年2月美國FDA正式批準(zhǔn)了注射用噴司他丁(商品名Nipent)上市，主要用于干細(xì)胞白血病(Hairy cell leukemia,HCL)以及慢性淋巴細(xì)胞白血病(Chroniclymphocytic leukemia, CLL)禾口章樣霄菌病(Mycosis fungoides)的治療。但是，現(xiàn)有技術(shù)對于噴司他丁的分離純化工藝，國內(nèi)外的研究并不多，USP5463035 中報(bào)道的噴司他丁的預(yù)處理方法是將發(fā)酵液高速離心，濾液用氫氧化鈉等堿性溶液調(diào)PH 到8. 7，置于< 15°C環(huán)境中數(shù)小時(shí)或數(shù)天(視體積大小而定)，過濾，濾液調(diào)pH至6. 0，再經(jīng) Dowex-50樹脂進(jìn)一步除雜。此法雖然也能取得一定的效果，但操作步驟繁瑣，有機(jī)溶媒使用量大，環(huán)境污染嚴(yán)重，非常不利于工業(yè)化生產(chǎn)。噴司他丁的發(fā)酵液由于雜質(zhì)較多，濾液混濁，目前現(xiàn)有技術(shù)中還沒有一種簡單、有效的方法能夠?qū)l(fā)酵液的雜質(zhì)去除，并將發(fā)酵液中噴司他丁的純度提到較高的水平，該現(xiàn)狀亟待解決。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服了現(xiàn)有的預(yù)處理噴司他丁發(fā)酵液預(yù)處理方法存在操作步驟繁瑣，有機(jī)溶媒使用量大，環(huán)境污染嚴(yán)重的缺陷，提供了一種操作方便、工藝步驟簡單、不要特別加入有機(jī)溶劑，能夠有效去除噴司他丁發(fā)酵液中雜質(zhì)的方法。本發(fā)明的去除噴司他丁發(fā)酵液中雜質(zhì)的方法包括如下步驟將經(jīng)離心的噴司他丁發(fā)酵液的上清液，過截流分子量為5000 20000的超濾膜，之后將超濾液過截流分子量為 500 2000的納濾膜，再將納濾液過截流分子量為100 200的納濾膜，得濾液即可。本發(fā)明中，所述的噴司他丁發(fā)酵液為本領(lǐng)域常規(guī)制備噴司他丁的微生物菌發(fā)酵液，一般由Sti^ptomyces antiboticus按本領(lǐng)域常規(guī)方法發(fā)酵培養(yǎng)獲得。所述的 Streptomyces antiboticus具體菌種沒有特殊限定，常規(guī)能夠生產(chǎn)噴司他丁的菌種均可使用，如 Streptomyces antiboticus NRRL3238 等。其中，所述的 Streptomyces antiboticus 經(jīng)培養(yǎng)發(fā)酵獲得含噴司他丁發(fā)酵液具體菌種不受限定是鑒于目前產(chǎn)生噴司他丁的菌種均為Mi^ptomyces antiboticusNRRL3238經(jīng)自然分離或系列誘變產(chǎn)生，不同的具體菌株雖然在噴司他丁產(chǎn)量、雜質(zhì)的比例上有所不同，但發(fā)酵液的主要成分相對固定，故本發(fā)明同樣適用于其他產(chǎn)生噴司他丁的菌種。本發(fā)明中，所述的截流分子量為5000 20000的超濾膜較佳的為截流分子量為8000的超濾膜。本發(fā)明中，所述的過截流分子量為5000 20000的超濾膜的條件為本領(lǐng)域常規(guī)條件，為獲得更好的效果，進(jìn)一步地優(yōu)選下述條件pH值較佳的為3 6 ；和/或溫度較佳的為 30 °C 40 0C ；禾口 /或操作壓力較佳的為0. IMpa 0. 3Mpa。本發(fā)明中，所述的超濾膜較佳的為中空纖維膜。本發(fā)明中，所述的截流分子量為500 2000的納濾膜較佳的為截流分子量為 500 1000的納濾膜，更佳的為截流分子量為500的納濾膜。本發(fā)明中，所述的過截流分子量為500 2000的納濾膜的條件為本領(lǐng)域常規(guī)條件，為獲得更好的效果，進(jìn)一步地優(yōu)選下述條件PH值較佳的為3 6 ；和/或溫度較佳的為 40°C 60°C ；和/或操作壓力較佳的為0. 2Mpa 0. 4Mpa。本發(fā)明中，所述的截流分子量為100 200的納濾膜較佳的為截流分子量為 150 200的納濾膜，更佳的為截流分子量為150的納濾膜。本發(fā)明中，所述的過截流分子量為100 200的納濾膜的條件為本領(lǐng)域常規(guī)條件， 為獲得更好的效果，進(jìn)一步地優(yōu)選下述條件PH值較佳的為8 9 ；和/或溫度較佳的為 40°C 60°C ；和/或操作壓力較佳的為0. 2Mpa 0. 4Mpa。本發(fā)明中，所述的納濾膜較佳的為醋酸纖維素膜。本發(fā)明中，所述的pH值的調(diào)節(jié)劑為本領(lǐng)域常規(guī)所用pH調(diào)節(jié)劑，當(dāng)調(diào)節(jié)pH為酸性時(shí)，PH調(diào)節(jié)劑較佳的為鹽酸；當(dāng)調(diào)節(jié)pH為堿性時(shí)，pH調(diào)節(jié)劑較佳的為氫氧化鈉。所述的pH 值的調(diào)節(jié)劑的使用濃度較佳的為lmol/L。本發(fā)明所用試劑和原料除特殊說明外均市售可得。在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，本發(fā)明中上述的各技術(shù)特征優(yōu)選條件可以任意組合得到較佳實(shí)例。本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于本發(fā)明的去除噴司他丁發(fā)酵液中雜質(zhì)的方法操作方便、工藝步驟簡單、不要特別加入有機(jī)溶劑，分離效果良好、處理得到的噴司他丁預(yù)處理液中的噴司他丁 HPLC純度可達(dá)50%以上，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。下述實(shí)施例中，檢測噴司他丁的高效液相色譜(HPLC)檢測條件為色譜柱為 Agilent C18 (5 μ m，250 X 4. 6mm)，流動相為甲醇乙腈乙酸銨水溶液(IOmmo 1/L)體積比為2. 5 2.5 95，柱溫40°C，流速為lmL/min，檢測波長觀011111，進(jìn)樣量為10yL。下述實(shí)施例中，各濾膜的來源為上海亞東核級樹脂有限公司，超濾膜為中空纖維膜，納濾膜為醋酸纖維素膜。制備實(shí)施例制備噴司他丁發(fā)酵液，使用的菌種為Mi^ptomyces antiboticus NRRL3238(來源美國農(nóng)業(yè)研究菌種保藏中心)。具體發(fā)酵培養(yǎng)條件為1、斜面培養(yǎng)培養(yǎng)10天
培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖10、酵母膏20、瓊脂25、自來水，消毒前pH7. 2;2、種子培養(yǎng)，2天，搖床轉(zhuǎn)速250rpm培養(yǎng)基(g/L)葡萄20、豆粕粉20、氯化鈉5、碳酸鈣2. 5、自來水，消毒前pH 7. 5 ；3、發(fā)酵培養(yǎng)121°C滅菌20min，接種量10%，搖瓶裝量100mL/750mL，置于30°C恒溫室中旋轉(zhuǎn)式搖床250rpm搖瓶發(fā)酵5天后，得到噴司他丁發(fā)酵液；培養(yǎng)基(g/L):葡萄糖50、豆粕粉20、氯化鈉5、碳酸鈣2. 5、自來水，消毒前pH 7. 2。實(shí)施例1將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，lmol/L鹽酸調(diào)pH至3. 0，采用截流分子量為20000的中空纖維超濾膜在30°C、0. 3Mpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為49. 5L/h，超濾膜的收率為98. 3%，濃縮倍數(shù)約為1. 5倍，去除了上清液中可溶性蛋白，高聚物，培養(yǎng)基，菌絲體等雜質(zhì)，濾出液澄清度較好；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至5. 0，再用截流分子量為500的納濾膜在40°C、0. 3Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為30. 7L/h，濃縮倍數(shù)約為 2倍，收集濾出液，收率約為82. 1 %，并且除去了部分多糖，多肽、色素等雜質(zhì)；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至8.0，再用截流分子量為150的納濾膜在 40°C、0. 2Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為19. 5L/h，濃縮倍數(shù)約為3倍，收率約為89. 3%，除去了溶液中小分子鹽類，色素等極性雜質(zhì)，得到澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為
50.4%。實(shí)施例2將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至4. 0再用截流分子量為5000的中空纖維超濾膜在35°C、0. 2Mpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為45. 8L/h，超濾膜的收率為94.8%，濃縮倍數(shù)約為1.5倍，去除了上清液中可溶性蛋白，高聚物，培養(yǎng)基， 菌絲體等雜質(zhì)，濾出液澄清度較好；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至6. 0，再用截流分子量為500的納濾膜在45°C、0. 25Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為30. 5L/h，濃縮倍數(shù)約為 2倍，收集濾出液，收率約為82. 8%，并且除去了部分多糖，多肽、色素等雜質(zhì)；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至8.0，再用截流分子量為150的納濾膜在 55°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為17. 9L/h，濃縮倍數(shù)約為3倍，收率約為91. 5%，除去了溶液中小分子鹽類，色素等極性雜質(zhì)，得到澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為
51.7%。實(shí)施例3將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至5. 0，再用截流分子量為8000的中空纖維超濾膜在30°C、0. 3Mpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為47. 6L/h，超濾膜的收率為96.4%，濃縮倍數(shù)約為1.5倍，去除了上清液中可溶性蛋白，高聚物，培養(yǎng)基， 菌絲體等雜質(zhì)，濾出液澄清度較好；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至4. 5，再用截流分子量為500的納濾膜在60°C、0. 35Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為26. 4L/h，濃縮倍數(shù)約為 2倍，收集濾出液，收率約為79. 5%，并且除去了部分多糖，多肽、色素等雜質(zhì)；
將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至8.0，再用截流分子量為150的納濾膜在 45°C、0. 3Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為19. lL/h，濃縮倍數(shù)約為3倍，收率約為88. 1%，除去了溶液中小分子鹽類，色素等極性雜質(zhì)，得到澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為 52. 1%。實(shí)施例4將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至6. 0，再用截流分子量為8000的中空纖維超濾膜在40°C、0. 15Mpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為46. 2L/h， 超濾膜的收率為95. 3%，濃縮倍數(shù)約為1. 5倍，去除了上清液中可溶性蛋白，高聚物，培養(yǎng)基，菌絲體等雜質(zhì)，濾出液澄清度較好；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L鹽酸調(diào)pH至3. 0，再用截流分子量為1000的納濾膜在40°C、0. 2Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為27. 9L/h，濃縮倍數(shù)約為2 倍，收集濾出液，收率約為81.4%，并且除去了部分多糖，多肽、色素等雜質(zhì)；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至8. 5，再用截流分子量為150的納濾膜在 60°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為18. 4L/h，濃縮倍數(shù)約為3倍，收率約為90. 7%，除去了溶液中小分子鹽類，色素等極性雜質(zhì)，得到澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為 54. 3%。實(shí)施例5將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至4. 5，再用截流分子量為8000的中空纖維超濾膜在35°C、0. IMpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為49. 3L/h，超濾膜的收率為97. 7%，濃縮倍數(shù)約為1. 5倍，去除了上清液中可溶性蛋白，高聚物，培養(yǎng)基， 菌絲體等雜質(zhì)，濾出液澄清度較好；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至3. 5，再用截流分子量為800的納濾膜在50°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為27. lL/h，濃縮倍數(shù)約為 2倍，收集濾出液，收率約為80. 5%，并且除去了部分多糖，多肽、色素等雜質(zhì)；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至8. 5，再用截流分子量為150的納濾膜在 50°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為17. 8L/h，濃縮倍數(shù)約為3倍，收率約為91. 2%，除去了溶液中小分子鹽類，色素等極性雜質(zhì)，得到澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為 54. 2%。實(shí)施例6將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至5. 5，再用截流分子量為5000的中空纖維超濾膜在30°C、0. 25Mpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為46. lL/h， 超濾膜的收率為95.4%，濃縮倍數(shù)約為1.5倍，去除了上清液中可溶性蛋白，高聚物，培養(yǎng)基，菌絲體等雜質(zhì)，濾出液澄清度較好；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至4. 0，再用截流分子量為500的納濾膜在55°C、0. 2Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為26. 7L/h，濃縮倍數(shù)約為 2倍，收集濾出液，收率約為79. 6%，并且除去了部分多糖，多肽、色素等雜質(zhì)；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至8. 5，再用截流分子量為200的納濾膜在 40°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為19. 8L/h，濃縮倍數(shù)約為3倍，收率約為88. 7%，除去了溶液中小分子鹽類，色素等極性雜質(zhì)，得到澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為55. 3%。實(shí)施例7將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至6. 0，再用截流分子量為8000的中空纖維超濾膜在30°C、0. 2Mpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為46. lL/h，超濾膜的收率為95.4%，濃縮倍數(shù)約為1.5倍，去除了上清液中可溶性蛋白，高聚物，培養(yǎng)基， 菌絲體等雜質(zhì)，濾出液澄清度較好；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至4. 0，再用截流分子量為500的納濾膜在45°C、0. 35Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為26. 7L/h，濃縮倍數(shù)約為 2倍，收集濾出液，收率約為79. 6%，并且除去了部分多糖，多肽、色素等雜質(zhì)；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至9.0，再用截流分子量為150的納濾膜在 50°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為19. 8L/h，濃縮倍數(shù)約為3倍，收率約為88. 7%，除去了溶液中小分子鹽類，色素等極性雜質(zhì)，得到澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為 55. 3%。對比例1將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至4. 0，再用截流分子量為50000的中空纖維超濾膜在30°C、0. 15Mpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為54. IL/ h，超濾膜的收率為96. 4%，濃縮倍數(shù)約為1. 5倍；然后依次用截流分子量為500的納濾膜在40°C、0. 3Mpa和截流分子量為150的納濾膜在50°C、0. 3Mpa除雜，得到較澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為43. 2%。對比例2將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至5. 0，再用截流分子量為100000的中空纖維超濾膜在30°C、0. 15Mpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為59. 4L/ h，超濾膜的收率為99. 2%，濃縮倍數(shù)約為1. 5倍；然后依次用截流分子量為500的納濾膜在45°C、0. 2Mpa和截流分子量為150的納濾膜在60°C、0. 4Mpa除雜，得到較澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為38. 2%。結(jié)論由對比例1、2可以看出，超濾膜截流分子量太大會顯著影響噴司他丁濾液的純度，增加了后期分離純化的難度。對比例3將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至6. 0，再用截流分子量為5000的中空纖維超濾膜在30°C、0. 15Mpa時(shí)過濾上清液，再用截流分子量為300 的納濾膜在40°C、0. 2Mpa進(jìn)一步提純，得到較澄清的噴司他丁納濾液，HPLC檢測其純度為 41. 2%。結(jié)論可見，不在本發(fā)明納濾膜截流分子量范圍內(nèi)，納濾液中噴司他丁的純度增加了后期分離純化的難度。實(shí)施例8將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至9，再用截流分子量為8000的中空纖維超濾膜在35°C、0. IMpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為41. 3L/h，超濾膜的收率為85.7% ；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至10，再用截流分子量為800的納濾膜在50°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為23. lL/h，收率約為 70. 5% ；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至10，再用截流分子量為150的納濾膜在50°C、 0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為16. 7L/h，收率約為81. 1 %，HPLC檢測其純度為51. 2%。實(shí)施例9將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至1.0，再用截流分子量為8000的中空纖維超濾膜在35°C、0. IMpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為48. 5L/h，超濾膜的收率為84. ；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至2. 5，再用截流分子量為800的納濾膜在50°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為26. lL/h，收率約為 72. 1% ；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至8，再用截流分子量為150的納濾膜在50°C、 0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為16. 3L/h，收率約為81.1%。實(shí)施例10將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至10，再用截流分子量為8000的中空纖維超濾膜在35°C、0. IMpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為37. 3L/h，超濾膜的收率為67.8% ；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至13，再用截流分子量為800的納濾膜在50°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為20. lL/h，收率約為 63. 5% ；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至9，再用截流分子量為150的納濾膜在50°C、 0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為15. 7L/h，收率約為77. 4%, HPLC檢測其純度為42. 2%。實(shí)施例11將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至4. 0，再用截流分子量為8000的中空纖維超濾膜在45°C、0. IMpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為43. lL/h，超濾膜的收率為88.7% ；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至3. 0，再用截流分子量為800的納濾膜在70°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為26. 4L/h，收率約為 72. 5% ；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至8. 5，再用截流分子量為150的納濾膜在 75°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為16. 7L/h，收率約為79. 2%，HPLC檢測其純度為52. 2%。實(shí)施例12將噴司他丁發(fā)酵液高速離心后取上清液，先用lmol/L鹽酸調(diào)pH至4. 0，再用截流分子量為8000的中空纖維超濾膜在15°C、0. IMpa時(shí)過濾上清液，平均膜通量為33. lL/h，超濾膜的收率為87. ；再用納濾膜進(jìn)一步提純超濾液，先將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至3. 0，再用截流分子量為800的納濾膜在20°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為21. 4L/h，收率約為 77. 5% ；將濾過液用lmol/L氫氧化鈉調(diào)pH至8. 5，再用截流分子量為150的納濾膜在25°C、0. 4Mpa時(shí)過濾，平均膜通量為13. 7L/h，收率約為71. 2%，HPLC檢測其純度為53. 4%。
權(quán)利要求
1.一種去除噴司他丁發(fā)酵液中雜質(zhì)的方法，其包括如下步驟將經(jīng)離心的噴司他丁發(fā)酵液的上清液，過截流分子量為5000 20000的超濾膜，之后將超濾液過截流分子量為 500 2000的納濾膜，再將納濾液過截流分子量為100 200的納濾膜，得濾液即可。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的噴司他丁發(fā)酵液由Sti^ptomyces antiboticus按本領(lǐng)域常規(guī)方法發(fā)酵培養(yǎng)獲得。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的Sti^ptomycesantiboticus為 Streptomyces antiboticus NRRL3238。
4.如權(quán)利要求1 3任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述的截流分子量為5000 20000的超濾膜為截流分子量為8000的超濾膜。
5.如權(quán)利要求1 4任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述的過截流分子量為5000 20000的超濾膜的條件為pH值為3 6 ；和/或溫度為30°C 40°C ；和/或操作壓力為 0. IMpa 0. 3Mpa。
6.如權(quán)利要求1 5任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述的截流分子量為500 2000 的納濾膜為截流分子量為500 1000的納濾膜，較佳的為截流分子量為500的納濾膜；和 /或所述的截流分子量為100 200的納濾膜為截流分子量為150 200的納濾膜，較佳的為截流分子量為150的納濾膜。
7.如權(quán)利要求1 6任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述的過截流分子量為500 2000的納濾膜的條件為pH值為3 6 ；和/或溫度為40°C 60°C ；和/或操作壓力為 0. 2Mpa 0. 4Mpa。
8.如權(quán)利要求1 7任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述的過截流分子量為100 200的納濾膜的條件為pH值為8 9 ；和/或溫度為40°C 60°C ；和/或操作壓力為 0. 2Mpa 0. 4Mpa。
9.如權(quán)利要求1 8任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述的超濾膜為中空纖維膜；所述的納濾膜為醋酸纖維素膜。
10.如權(quán)利要求1 9任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于所述的PH值的調(diào)節(jié)劑當(dāng)調(diào)節(jié) PH為酸性時(shí)，pH調(diào)節(jié)劑為鹽酸；當(dāng)調(diào)節(jié)pH為堿性時(shí)，pH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉；所述的pH值的調(diào)節(jié)劑的使用濃度為lmol/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種去除噴司他丁發(fā)酵液中雜質(zhì)的方法包括如下步驟將經(jīng)離心的噴司他丁發(fā)酵液的上清液，過截流分子量為5000～20000的超濾膜，之后將超濾液過截流分子量為500～2000的納濾膜，再將納濾液過截流分子量為100～200的納濾膜，得濾液即可。該方法操作方便、工藝步驟簡單、不要特別加入有機(jī)溶劑，分離效果良好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07H19/23GK102453065SQ201010526100
公開日2012年5月16日 申請日期2010年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月29日
發(fā)明者劉文靜, 盧亮, 李繼安 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院