專利名稱：前列腺干細(xì)胞及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及前列腺干細(xì)胞和前列腺癌干細(xì)胞以及它們?cè)谥委熐傲邢侔┖褪骨傲邢俳M織再生中的用途。
背景已經(jīng)基于這樣的觀察提出了前列腺干細(xì)胞(PSCs)的存在，所述觀察即在嚙齒動(dòng)物中，正常的前列腺再生可以在雄激素剝奪和替代的重復(fù)循環(huán)后發(fā)生\前列腺依賴于雄激素進(jìn)行正確的生長(zhǎng)和組織穩(wěn)態(tài)7。在雄激素剝奪后，由于需要雄激素進(jìn)行生存的細(xì)胞的凋亡，前列腺經(jīng)歷了退化。明顯地，雄激素的替代誘導(dǎo)前列腺再生回到其起初的大小和功能狀態(tài)。在嚙齒動(dòng)物前列腺中退化/再生過程可以重復(fù)超過30個(gè)循環(huán)的事實(shí)1證實(shí)成年人前列腺包含長(zhǎng)壽命的，不依賴雄激素的干細(xì)胞群體。已經(jīng)在小鼠和人前列腺中鑒定了富含干細(xì)胞的群體2_6’8_1(1。已經(jīng)報(bào)道了一些細(xì)胞表面標(biāo)記用于鑒定候選的PSCs，所述標(biāo)記包括干細(xì)胞抗原-1 (Sca-I)，CD133(prominin-l)，和CD442-6。然而，在小鼠前列腺中的非-PSCs也表達(dá)這些標(biāo)記并且因此鑒定定義的PSC群體仍舊是難以捉摸的。⑶117(c_Kit，干細(xì)胞因子受體)是受體酪氨酸激酶亞類III家族的成員并且與關(guān)于血小板衍生生長(zhǎng)因子、巨噬細(xì)胞集落刺激因子，和FMS-樣受體酪氨酸激酶(FLT3)配體的受體相關(guān)。Heinrich, M. C.等，J. Clin. Oncol. 20 (6) 1692-1703 (2002). c_Kit 及其配體干細(xì)胞因子(SCF)對(duì)于血生成、黑素原生成和生育力是必要的。SCF在造血體系(hierarchy) 的多種水平上作用以促進(jìn)細(xì)胞存活、增殖、分化、粘附和功能激活。Ashman，L. K.，等，Intl. J. of Biochem. Cell Biol (生物化學(xué)細(xì)胞生物學(xué)國(guó)際雜志).31 :1037-1051 (1999).已經(jīng)在人惡性腫瘤中觀察到⑶117表達(dá)，并且⑶117的激酶活性涉及許多這些腫瘤的病理生理學(xué)，所述腫瘤包括肥大細(xì)胞增生/肥大細(xì)胞白血病(mastocytosis/mast cell leukemia)、 生殖細(xì)胞腫瘤(germ cell tumors)、小細(xì)胞肺癌(small-cell lung carcinoma) (SCLC), 胃腸道間質(zhì)瘤(gastrointestinal stromal tumors) (GIST)、急性髓細(xì)胞性白血病(AML) (acute myelogenous leukemia)、神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma)、黑素瘤(melanoma)、 卵巢癌(ovarian carcinoma)禾口乳腺癌(breast carcinoma)。 J. Clin. Oncol. 20 (6) 1692-1703(2002)(上文)。癌干細(xì)胞(CSCs)是在腫瘤中具有自我更新能力并且產(chǎn)生構(gòu)成腫瘤的癌細(xì)胞的異質(zhì)譜系的細(xì)胞。Clark,M. F.等，Cancer Res (癌癥研究).66 (19) =9339-9344(2006) 認(rèn)為這些細(xì)胞負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)移、治療抗性和復(fù)發(fā)。然而，CSCs僅組成癌腫瘤塊的小部分，并且難以進(jìn)行鑒定和/或分離。認(rèn)為癌干細(xì)胞來自經(jīng)歷突變的正常干細(xì)胞。這些突變的干細(xì)胞經(jīng)歷了致瘤性轉(zhuǎn)化以形成包含癌干細(xì)胞的腫瘤，所述癌干細(xì)胞可以通過存在于正常干細(xì)胞上的相同
4標(biāo)記進(jìn)行鑒定。Zhu, L.等，Nature (自然)457，603-607 Q009)。發(fā)明概述本發(fā)明的一個(gè)方面提供表達(dá)CD117的分離的前列腺干細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述干細(xì)胞還表達(dá)⑶133和⑶44。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞還表達(dá)⑶133和⑶44 和ka-Ι。在一些實(shí)施方案中，所述前列腺干細(xì)胞能夠在體外產(chǎn)生包含腺腔的前列腺集落 (lumen-containing prostate colonies)。在另一些實(shí)施方案中，所述前列腺干細(xì)胞能夠在體內(nèi)產(chǎn)生功能性前列腺。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供表達(dá)CD117的分離的前列腺癌干細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述前列腺癌干細(xì)胞還表達(dá)CD133和CD44。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述前列腺癌干細(xì)胞還表達(dá)⑶133和⑶44和ka-Ι。在一些實(shí)施方案中，所述前列腺癌干細(xì)胞能夠在體內(nèi)模型中產(chǎn)生前列腺癌。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供分離前列腺干細(xì)胞的方法，所述方法包括獲得譜系消減的(lineage depleted) (Lin-)前列腺細(xì)胞群和分選Lin-細(xì)胞群以獲得表達(dá)CD117，CD133， 和CD44的細(xì)胞群。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括分選Lin-前列腺細(xì)胞群以獲得表
的細(xì)胞群。例如，使用熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACQ來分選這些細(xì)胞。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供抑制表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺干細(xì)胞或前列腺癌干細(xì)胞增殖的方法，所述方法包括使前列腺干細(xì)胞或前列腺癌干細(xì)胞與治療有效量的 ⑶117拮抗劑接觸。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供預(yù)防患者中前列腺癌復(fù)發(fā)的方法，所述方法包括確定患者的前列腺癌是否包含表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺細(xì)胞，并且如果患者的前列腺癌包含表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺細(xì)胞，向所述患者施用治療有效量的⑶117拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，還將有效量的CD133拮抗劑或CD44拮抗劑施用于所述患者。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供選擇用CD117拮抗劑治療的前列腺癌患者的方法，所述方法包括確定患者是否具有包含表達(dá)CD117，CD133，和CD44的前列腺細(xì)胞的前列腺癌，并且如果患者具有包含表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺細(xì)胞的前列腺癌，選擇所述患者用CD117拮抗劑進(jìn)行治療。在一些實(shí)施方案中，所述患者已經(jīng)具有前列腺癌的復(fù)發(fā)。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供治療患者中前列腺癌的方法，所述方法包括確定所述患者是否具有包含表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺細(xì)胞的前列腺癌，并且如果患者具有包含表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺細(xì)胞的前列腺癌，向所述患者施用治療有效量的 ⑶117拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，還向所述患者施用有效量的⑶133拮抗劑或⑶44拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，所述患者已經(jīng)具有前列腺癌的復(fù)發(fā)。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供選擇前列腺癌患者用于用CD117拮抗劑進(jìn)行輔助治療的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含表達(dá)CD117，CD133，和CD44的前列腺細(xì)胞，并且如果所述患者的前列腺癌包含表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺細(xì)胞，選擇患者用于用⑶117拮抗劑進(jìn)行輔助治療。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供向治療前列腺癌的患者提供輔助療法的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺細(xì)胞，并且如果所述患者的前列腺癌包含表達(dá)CD117，CD133，和CD44的前列腺細(xì)胞，向所述患者施用治療有效量的CD117拮抗劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，還向所述患者施用有效量的CD133拮抗劑或⑶44拮抗劑。在上述方面的一些實(shí)施方案中，所述CDl 17拮抗劑是抗-CDl 17抗體，或小分子，如甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)或馬來酸舒尼替尼(sunitinib malate)。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供促進(jìn)前列腺組織生長(zhǎng)或修復(fù)的方法，所述方法包括在需要前列腺組織生長(zhǎng)或修復(fù)的患者中植入表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺干細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述患者具有不完全的前列腺，并且干細(xì)胞被植入所述不完全的前列腺。本發(fā)明的又一個(gè)方面提供促進(jìn)前列腺生長(zhǎng)的方法，所述方法包括在產(chǎn)生功能性前列腺的條件下，在哺乳動(dòng)物宿主中植入表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺干細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，在宿主的腎被膜下(under renal capsule)植入所述干細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，宿主是人，在另一個(gè)實(shí)施方案中，宿主是豬。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供向需要其的患者提供功能性前列腺的方法，所述方法包括在產(chǎn)生功能性前列腺的條件下，在哺乳動(dòng)物宿主中植入表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的人前列腺干細(xì)胞，和收集所述前列腺。在一個(gè)實(shí)施方案中，將收集的前列腺移植到需要功能性前列腺的人患者中。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供篩選抑制前列腺癌干細(xì)胞增殖的化合物的方法，所述方法包括使表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44的前列腺癌干細(xì)胞與測(cè)試化合物接觸，并且檢測(cè)所述測(cè)試化合物是否抑制細(xì)胞的增殖。附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示來自成年C57BL/6小鼠的完整前列腺。顯示四對(duì)葉(D_背葉，L-側(cè)葉， V-腹葉，A-前葉)。底版顯示相對(duì)于尿道關(guān)于每個(gè)前列腺葉的遠(yuǎn)側(cè)、中間和近側(cè)區(qū)域。圖2是這樣的圖表，其顯示在成熟C57BL/6前列腺的不同區(qū)域中基因表達(dá)的Q-RT-PCR，針對(duì)遠(yuǎn)端區(qū)域標(biāo)準(zhǔn)化。與遠(yuǎn)端的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較*P < 0. 05廣P < 0. 01 ；***P < 0. 001。圖3a是顯示在成熟C57BL/6前列腺的不同葉中基因表達(dá)的Q-RT-PCR的圖表，針對(duì)背葉標(biāo)準(zhǔn)化。圖: 是在背葉(D)、側(cè)葉(L)、腹葉(V)，和前葉㈧中基因表達(dá)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。*P < 0. 05 ；**P < 0. 01 ；***P < 0. 001 ；****P < 0. 0001。圖4是在成熟C57BL/6前列腺中基因表達(dá)的Q-RT-PCR分析(正常，閹割后3天，閹割后14天，和閹割后14天加3天的激素替代(hormone r印lacement))。將數(shù)據(jù)表示為相對(duì)于GADPH的倍數(shù)變化。與激素替代的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較:*P < 0. 05廣P < 0. 01 ；***P < 0. 0001. 所有的棒表示平均值+s. e.m。圖5是顯示使用磁珠分選富集⑶117+細(xì)胞的圖表。圖6是用于證實(shí)CD117+前列腺干細(xì)胞具有自我更新能力的系列分離和移植程序的示意圖。圖7a是顯示關(guān)于用抗-CD117抗體治療的前列腺和關(guān)于未治療的前列腺，前列腺區(qū)域中隨時(shí)間的凈生長(zhǎng)的量化的圖表。乍<0.05廣P <0.01。圖7b是關(guān)于如在抗-⑶117 治療的第8天確定的前列腺和關(guān)于未治療的前列腺的每mm2的分支點(diǎn)的量化的圖表。
< 0. 001。圖8a是在CD117+/-分選的群體中，關(guān)于SLUG表達(dá)的Q-RT-PCR分析。*P < 0. 03。 圖8b是在成熟C57BL/6前列腺中，關(guān)于SLUG表達(dá)的微陣列分析(正常，閹割后3天，閹割后14天，和閹割后14天加3天的激素替代)。將數(shù)據(jù)表示為相對(duì)于正常的倍數(shù)變化。與激素替代的統(tǒng)計(jì)學(xué)比較卞< 0.02.圖8c是在用抗-⑶117抗體治療的先體外后體內(nèi)(ex vivo)的前列腺中的SLUG表達(dá)的Q-RT-PCR分析。將數(shù)據(jù)表示為相對(duì)于第1天對(duì)照的倍數(shù)變化。*P < 0. 003。圖9是這樣的圖表，其顯示在表達(dá)單一和多種前列腺干細(xì)胞標(biāo)記的成熟C57BL/6 前列腺中活細(xì)胞的百分比。圖10是用于獲得表達(dá)表面標(biāo)記ka-Ι，⑶133，⑶44，和⑶117的組合的細(xì)胞群的熒光激活的細(xì)胞分選術(shù)程序的流程圖。圖11是顯示在腎被膜植入后三個(gè)月移植物重量的量化的圖表。數(shù)據(jù)來自兩個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)。*(LirTSca-rCD133+CD44+CD117+對(duì)比 LirTSca-rCD133TD44XD117- P = 0. 002 ;Lin_Sca-l+CD133+CD44+CD117+ 對(duì)比 LirrSca-l+CD133+CD44+CD117- P = 0. 03 ； Lin-Sca-1+CD133+CD44+CD117+ 對(duì)比僅 UGM P = 0. 004)。圖12是顯示在腎被膜植入后三個(gè)月僅UGM、Lin4ca-1-CD133-CD44-CD117-， Lin-Sca-1+CD133+CD44+CD117+,和 Lin4ca-1+CD133+CD44+CD117_ 植入物的前列腺產(chǎn)生能力的圖表。圖13是單細(xì)胞移植程序的示意圖。圖1 顯示在對(duì)分離自單細(xì)胞植入物的細(xì)胞進(jìn)行激光捕獲顯微切割(LCM)后基于 PCR的基因分型。圖14b顯示確定前列腺干細(xì)胞在Lin4ca-1+CD133+CD44+CD117+細(xì)胞群中的頻率的有限稀釋分析。圖1 是顯示在表達(dá)單一和多種前列腺干細(xì)胞標(biāo)記的人臨床良性非-BPH前列腺樣本中的活細(xì)胞百分比的圖表。圖1 是顯示在表達(dá)單一和多種前列腺干細(xì)胞標(biāo)記的人臨床BPH前列腺樣本中的活細(xì)胞百分比的圖表。優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述定義術(shù)語“⑶117”指來自任何脊椎動(dòng)物來源的任何⑶117，所述脊椎動(dòng)物包括哺乳動(dòng)物如靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如人和猴)和嚙齒動(dòng)物(例如小鼠和大鼠)，除非另外指出。術(shù)語涵蓋“全長(zhǎng)，”未加工的⑶117以及由在所述細(xì)胞中加工所產(chǎn)生的任何形式的⑶117。術(shù)語還涵蓋天然存在的CD117的變體，例如剪接變體、等位基因變體和其它同種型。術(shù)語還涵蓋維持CD117至少一種生物學(xué)活性(例如激酶活性)的天然CD117的片段或變體。在科學(xué)文獻(xiàn)中，還將⑶117稱為c-kit和干細(xì)胞因子受體。術(shù)語“CD44”指來自來自任何脊椎動(dòng)物來源的任何CD44，所述脊椎動(dòng)物來源包括哺乳動(dòng)物如靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如人和猴)和嚙齒動(dòng)物(例如小鼠和大鼠)，除非另外指出。術(shù)語涵蓋“全長(zhǎng)，”未加工的⑶44以及由在所述細(xì)胞中加工所產(chǎn)生的任何形式的⑶44。術(shù)語還涵蓋天然存在的⑶44的變體，例如剪接變體、等位基因變體和其它同種型。術(shù)語還涵蓋維持⑶44至少一種生物學(xué)活性的天然⑶44的片段或變體。術(shù)語“⑶133”指來自任何脊椎動(dòng)物來源的任何⑶133，所述脊椎動(dòng)物來源包括哺乳動(dòng)物如靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如人和猴)和嚙齒動(dòng)物(例如小鼠和大鼠)，除非另外指出。術(shù)語涵蓋“全長(zhǎng)，”未加工的⑶133以及由在所述細(xì)胞中加工所產(chǎn)生的任何形式的⑶133。術(shù)語還涵蓋天然存在的CD133的變體，例如剪接變體、等位基因變體和其它同種型。術(shù)語還涵蓋維持⑶133至少一種生物學(xué)活性的天然⑶44的片段或變體。在科學(xué)文獻(xiàn)中，還將⑶133稱為 prominin-Ι。術(shù)語“Sca-1”指來自來自任何脊椎動(dòng)物來源的任何，所述脊椎動(dòng)物來源包括哺乳動(dòng)物如靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如人和猴)和嚙齒動(dòng)物(例如小鼠和大鼠)，除非另外指出。 術(shù)語涵蓋“全長(zhǎng)，”未加工的ka-Ι以及由在所述細(xì)胞中加工所產(chǎn)生的任何形式的&a-l。 術(shù)語還涵蓋天然存在的^^-1的變體，例如剪接變體、等位基因變體和其它同種型。術(shù)語還涵蓋維持ka-Ι至少一種生物學(xué)活性的天然Sca-I的片段或變體。術(shù)語“一種前列腺干細(xì)胞(prostate stem cell) ”(PSC)或“多種前列腺干細(xì)胞 (prostate stem cells) ”(PSCs)用于本文時(shí)指可以自我更新并且能夠產(chǎn)生在前列腺中發(fā)現(xiàn)的所有上皮細(xì)胞類型的一種前列腺細(xì)胞或多種前列腺細(xì)胞。前列腺干細(xì)胞可以通過它們?cè)隗w外產(chǎn)生包含腺腔的前列腺集落的能力進(jìn)行檢測(cè)。前列腺干細(xì)胞最終能夠在體內(nèi)產(chǎn)生功能性前列腺。術(shù)語“一種前列腺癌干細(xì)胞(prostate cancer stem cell)” (PCSC)或多種“前列腺癌干細(xì)胞(prostate cancer stem cells)” (PCSCs)用于本文時(shí)指能夠產(chǎn)生與前列腺癌相關(guān)的發(fā)生腫瘤的細(xì)胞的一種細(xì)胞或多種細(xì)胞。前列腺癌干細(xì)胞是負(fù)責(zé)由突變的正常前列腺中形成前列腺癌，和/或在最初的癌癥治療后重新形成前列腺癌的細(xì)胞。前列腺癌干細(xì)胞可以使用體外細(xì)胞增殖測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)。它們還可以使用體內(nèi)移植測(cè)定法進(jìn)行檢測(cè)。例如，將提議的前列腺癌干細(xì)胞注射或移植到體內(nèi)宿主模型中，并檢查所述模型以確定是否所述細(xì)胞的注射/移植形成發(fā)展前列腺癌的模型。在模型中產(chǎn)生前列腺癌的那些細(xì)胞是前列腺癌干細(xì)胞。術(shù)語“多核苷酸”或“核酸”可以在本文互換使用，指任何長(zhǎng)度的核苷酸的聚合物， 并包括DNA和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修飾的核苷酸或堿基，和/ 或它們的類似物，或可以通過DNA或RNA聚合酶結(jié)合到聚合物中的任何底物。多核苷酸可以包括修飾的核苷酸，如甲基化的核苷酸和它們的類似物。術(shù)語“檢測(cè)”包括任何檢測(cè)方式，包括直接和間接檢測(cè)。術(shù)語“診斷”在本文中用于意指鑒定分子的或病理學(xué)的狀態(tài)、疾病或病癥，諸如確定癌癥(例如前列腺癌)或癌癥的特定類型(例如以特定變異為特征的前列腺癌)。術(shù)語" 預(yù)測(cè)"用于本文時(shí)指預(yù)測(cè)可歸因于癌癥的死亡或進(jìn)展(包括例如瘤形成疾病如癌癥的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移擴(kuò)散和藥物抵抗)的可能性。術(shù)語"預(yù)測(cè)"用于本文時(shí)，也指患者對(duì)藥物或一組藥物響應(yīng)良好或不良的可能性。在一個(gè)實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)涉及那些響應(yīng)的程度。在一個(gè)實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)涉及患者在治療后是否存活一定時(shí)間而不伴隨癌癥的復(fù)發(fā)和/或這樣存活的可能性，該治療例如用特定治療劑治療和/或手術(shù)去除原發(fā)性腫瘤，和/或化療。在另一個(gè)實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)涉及患者是否經(jīng)歷癌癥的復(fù)發(fā)和/或患者經(jīng)歷癌癥復(fù)發(fā)的可能性。本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法可以在臨床上通過選擇對(duì)于任何特定患者的最適合的治療方式來做出治療決定。本發(fā)明的預(yù)測(cè)方法在預(yù)測(cè)患者是否可能對(duì)治療方案(如給定的治療方案，包括例如施用給定的治療劑或組合，外科手術(shù)干預(yù)，化療等)響應(yīng)良好，或預(yù)測(cè)治療方案后患者是否可能長(zhǎng)期存活中是有價(jià)值的工具?；诒景l(fā)明的預(yù)測(cè)方法可選擇接受特定治療的患者。術(shù)語“細(xì)胞增殖病癥”和“增殖病癥”指與可測(cè)量程度的異常細(xì)胞增殖相關(guān)的病癥。 在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞增殖病癥是癌癥。
“腫瘤”在用于本文時(shí)指所有瘤形成性細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，無論是惡性的或者是良性的，及所有癌前的和癌性的細(xì)胞和組織。術(shù)語“癌癥”、“癌性”、“細(xì)胞增殖病癥”、“增殖病癥” 和“腫瘤”在本文中不相互排他的引用。術(shù)語“癌癥”和“癌性”指或描述哺乳動(dòng)物中特征典型地為細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖不受調(diào)節(jié)的生理病況。癌癥的實(shí)例包括但不限于癌瘤(carcinoma)、淋巴瘤(lymphoma) (例如霍奇金和非霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’ s and non-Hodgkin，s lymphoma))、母細(xì)胞瘤(blastoma)、肉瘤(sarcoma)、和白血病(leukemia)。癌癥的更具體實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell cancer)、小細(xì)胞月市癌(small-cell lung cancer)、非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer)、肺的腺癌、肺的鱗癌、腹膜癌(cancer of the peritoneum)、月干細(xì)—(hepatocellular cancer)、i^l細(xì)—(renal cell carcinoma) > Mliit! (gastrointestinal cancer) > (gastric cancer)(esophageal cancer) > 姨腺癌(pancreatic cancer)、神經(jīng)膠質(zhì)瘤(glioma)、宮頸癌(cervical cancer)、卵巢癌 (ovarian cancer) >H1Flg (liver cancer) >MD^fg (bladder cancer) >M'-JM (hepatoma) > 乳腺癌(breast cancer)、結(jié)腸癌(colon cancer)、直腸癌(rectal cancer)、肺癌 (lung cancer)、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌(endometrial or uterine carcinoma)、唾液腺
(salivary gland carcinoma) > W IS (kidney cancer) > H1F (liver cancer) > |if ^lJ (prostate cancer)、夕卜陰 (vulval cancer) > ￥ ^1/1 IS (thyroid cancer)、月干· (hepatic carcinoma)、黑素瘤(melanoma)、白血病(leukemia)和其它淋巴增殖性病癥 (lymphoprol if erative disorder)、禾口各禾中類型白勺頭禾口頸癌(head and neck cancer)。術(shù)語“前列腺腫瘤”或“前列腺癌”是指前列腺的任何腫瘤或癌癥。術(shù)語“前列腺腫瘤細(xì)胞”或“前列腺癌細(xì)胞”是指體內(nèi)或體外的前列腺腫瘤細(xì)胞或前列腺癌細(xì)胞，并包括來源于此類細(xì)胞的細(xì)胞系。術(shù)語“贅生物”或“贅生性細(xì)胞”是指比相應(yīng)正常組織或細(xì)胞增殖更快的異常組織或細(xì)胞，并且在去除啟動(dòng)生長(zhǎng)的刺激后繼續(xù)生長(zhǎng)?！澳[瘤細(xì)胞”或“癌細(xì)胞”是指體內(nèi)或體外的腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞，并包括來源于此類細(xì)胞的細(xì)胞系。用于本文時(shí)，“治療” ("treatment")(以及變化諸如“治療” ("treat")或“治療”(“treating”))或“療法”(“therapy”)指臨床介入，其試圖改變被治療的個(gè)體或細(xì)胞的自然過程，并且可以為了預(yù)防或者在臨床病理的過程中進(jìn)行。希望的治療效果包括預(yù)防疾病的發(fā)生或復(fù)發(fā)、減輕癥狀、減少疾病的任何直接或間接病理學(xué)結(jié)果，防止轉(zhuǎn)移，減低疾病發(fā)展速率，減輕或緩和疾病狀態(tài)，和緩和/或者改善的預(yù)后。術(shù)語“輔助療法”是指在初次癌癥治療之后給予的另外的癌癥治療以降低癌癥復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)?！皞€(gè)體”、“受試者”或“患者”是脊椎動(dòng)物。在某些實(shí)施方案中，所述脊椎動(dòng)物是哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物包括，但不限于，家畜(如豬和牛)、競(jìng)技動(dòng)物、寵物(如貓、狗和馬)、靈長(zhǎng)類動(dòng)物(包括人和非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物)、和嚙齒動(dòng)物(例如小鼠和大鼠)。在某些實(shí)施方案中，哺乳動(dòng)物是人?！坝行Я俊敝冈谛枰膭┝亢蜁r(shí)間階段，有效獲得需要的治療或預(yù)防效果的量。本發(fā)明的物質(zhì)/分子的“治療有效量”可以根據(jù)因素如個(gè)體的疾病狀態(tài)、年齡、性別和體重，以及所述物質(zhì)/分子激發(fā)個(gè)體中需要的反應(yīng)的能力而改變。治療有效量涵蓋這樣的量，其中治療有益作用超出所述物質(zhì)/分子的任何毒性或有害作用。術(shù)語“長(zhǎng)期”存活在用于本文時(shí)是指治療性處理后存活至少1年，5年，8年或10年。在根據(jù)本發(fā)明使用時(shí)，術(shù)語對(duì)特定治療劑或治療選項(xiàng)“抵抗性升高”意味著對(duì)標(biāo)準(zhǔn)劑量的藥物或?qū)?biāo)準(zhǔn)治療方案的響應(yīng)降低。在根據(jù)本發(fā)明使用時(shí)，術(shù)語對(duì)特定治療劑或治行選項(xiàng)“敏感性降低”意味著對(duì)標(biāo)準(zhǔn)劑量的藥劑或?qū)?biāo)準(zhǔn)治療方案的響應(yīng)降低，其中降低的響應(yīng)可通過增加藥劑劑量或治療密度來彌補(bǔ)(至少部分彌補(bǔ))。“患者響應(yīng)”可利用表明對(duì)患者有益處的任何終點(diǎn)來評(píng)估，包括但不限于⑴在某種程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)，包括減緩和完全的生長(zhǎng)阻滯；( 減少腫瘤細(xì)胞數(shù)目；C3)減小腫瘤尺寸；(4)抑制(即降低、減緩或完全阻止)腫瘤細(xì)胞滲入臨近的周圍器官和/或組織； (5)抑制(即降低、減緩或完全阻止)轉(zhuǎn)移；(6)增強(qiáng)抗腫瘤的免疫壓答，其可以但不必造成腫瘤消退或排斥；(7)在某種程度上減輕一種或多種與腫瘤有關(guān)的癥狀；(8)延長(zhǎng)治療后存活的長(zhǎng)度；和/或(9)降低治療后給定時(shí)間點(diǎn)的死亡率?！绊憫?yīng)”治療劑的腫瘤或癌癥是顯示任何腫瘤進(jìn)展減退的腫瘤或癌癥，所述減退包括但不限于(1)在某種程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)，包括減緩和完全的生長(zhǎng)阻滯；( 減少腫瘤細(xì)胞數(shù)目；(3)減小腫瘤尺寸；(4)抑制(即降低、減緩或完全阻止)腫瘤細(xì)胞滲入臨近的周圍器官和/或組織；和/或(5)抑制(即降低、減緩或完全阻止)轉(zhuǎn)移。術(shù)語“拮抗劑”以最廣意義使用，包括部分或完全抑制或中和多肽(例如CDl 17)的生物學(xué)功能(例如激酶活性)的任何分子，或部分或完全抑制編碼該多肽的核酸的轉(zhuǎn)錄或翻譯的任何分子。適當(dāng)?shù)霓卓箘┓肿影ǖ幌抻谵卓剐钥贵w、多肽片段、寡肽、有機(jī)分子 (包括小分子)和反義核酸。術(shù)語“激動(dòng)劑”以最廣意義使用，包括部分或完全模擬多肽的生物學(xué)活性的任何分子，或增加編碼該多肽的核酸的轉(zhuǎn)錄或翻譯的任何分子。適當(dāng)?shù)募?dòng)劑分子包括但不限于激動(dòng)性抗體、多肽片段、寡肽、有機(jī)分子(包括小分子)、多核苷酸、多肽和多肽-Fc融合體。本文所用的術(shù)語“細(xì)胞毒性試劑”指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或引起細(xì)胞死亡或破壞的物質(zhì)。該術(shù)語意在包括放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、 Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)，化療劑(例如，甲氨喋呤(methotrexate)、阿霉素(adriamicin)、長(zhǎng)春花生物堿(vinca alkaloids)(長(zhǎng)春新堿(vincristine)、長(zhǎng)春堿 (vinblastine)、依托泊昔(etoposide))、多柔比星(doxorubicin)、美法倉(cāng)(melphalan)、 絲裂霉素C (mitomycin C)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、柔紅霉素(daunorubicin)或其它嵌入劑(intercalating agents)、酶及其片段，諸如核酸降解酶(nucleolytic enzymes)、 抗生素和毒素，如小分子毒素或細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物來源的酶活性毒素，包括其片段和/ 或變體，以及下文公開的多種抗腫瘤藥或抗癌藥。下文記述了其它的細(xì)胞毒性試劑?！皻⒛[瘤細(xì)胞”劑引起腫瘤細(xì)胞的破壞?！岸舅亍笔悄軌?qū)?xì)胞的生長(zhǎng)或增殖具有破壞效應(yīng)的任何物質(zhì)?！盎焺笔怯行в糜谥委煱┌Y的化合物?；焺┑膶?shí)例包括烷基化試劑，如塞替哌(thiotepa)和CYTOXAN 環(huán)磷酰胺(cyclosphosphamide)；烷基磺酸酯(alkyl sulfonates)如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡 (piposulfan) ； 口丫丙 類(aziridines)如苯佐替派(benzodopa)、卡波酉昆(carboquone)、 美妥替哌(meturedopa)和烏瑞替哌(uredopa)；乙撐亞胺類(ethylenimines) 和甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、曲他胺 (triethylenemelamine)、三亞乙基磷酉先胺(triethylenephosphoramide)、三乙烯硫代磷酸胺(triethylenethiophosphoramide)禾口三輕甲蜜胺(trimethylolomelamine)；聚乙酸類(acetogenins)(特別是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))； Δ-9-(delta-9-tetrahydrocannabinol) ((dronabinol) >MARIN0L
);β _ 拉中白酉昆(beta—lapachone)；拉中白醇(Iapachol)；秋 7_Κ 仙喊(colchicines)； 樺木酸(betulinic acid)；喜樹堿(camptothecin)(包括合成的類似物托泊替康 (topotecan) (HYCAMTIN )、CPT-11 (伊立替康(irinotecan) CAMPTOSAR )、乙酰喜樹喊(acetylcamptothecin)、scopolectin 禾口 9_ 氨基喜樹喊(9-aminocamptothecin))；苔蘚抑素(bryostatin) ；callystatin ;CC_1065 (包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)； 鬼白酸(podophyllinic acid)；替尼泊昔(teniposide)；隱藻素類(cryptophycins) (特別是隱藻素1和隱藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成的類似物、KW-2189 和 CB1-TM1)；艾槽素(eleutherobin) ；pancratistatin ；匍枝珊瑚酉享(sarcodictyin)；海綿素(spongistatin)；氮芥(nitrogen mustards)如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽磷酉先胺(cholophosphamide)、 雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法倉(cāng)(melphalan)、新氮芥 (novembichin)、苯芥膽留酉享(phenesterine)、撥尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺 (trofosfamide)、尿啼唆氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲類(nitrosoureas)如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀 (Iomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素如烯二炔類 (enediyne)抗生素(例如，加利車霉素(calicheamicin)、特別是加利車霉素Y II和加利車霉素 ω Il (參見，例如，Agnew, Chem Intl. Ed. Engl. ,33 :183-186(1994))；烯二炔蒽環(huán)類抗生素(dynemicin)，包括烯二炔蒽環(huán)類抗生素A;埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)生色團(tuán)和相關(guān)色素蛋白烯二炔類抗生素生色團(tuán))、阿克拉霉素(aclacinomysins)、方文線菌素(actinomycin)、蒽霉素(authramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來霉素(bleomycins)、放線菌素 C(cactinomycin)、carabicin、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycins)、方文線菌素 D(dactinomycin)、柔紅霄素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6_ 重氣 _5_ 氧代-L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、ADRIAMYCIN 多柔比星(doxorubicin) (包括嗎啉代-多柔比星(morpholino-doxorubicin)、氰基嗎啉代-多柔比星 (cyanomorpho 1 ino-doxorubicin)、2_ 口比口各啉-多柔比星(2-pyrro 1 ino-doxorubicin)禾口月兌氧比星(deoxydoxorubicin))比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、馬塞羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素類(mitomycins)如絲裂霉素 C、麥考酚酸(mycophenolic acid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycins) >培洛霉素(ρ印lomycin)、紫菜霉素(porf iromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑霉素(str印tonigrin)、鏈佐 M (streptozocin), ^ ^tM M M (tubercidin)、^； $ _ 目(ubenimex) > W] ftk T (zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物如甲氨喋呤(methotrexate)和5_氟尿嘧啶(5-fluorouracil) (5-FU)；葉酸類似物如二甲葉酸(denopterin)、甲氨喋呤、喋羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物如氟達(dá)拉濱(fludarabine), 6-巰嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮尿苷(6-azauridine)、 卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxif luridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(f loxuridine)；雄激素類諸如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環(huán)硫雄醇(epitiostanol)、美雄燒(mepitiostane)、睪內(nèi)酉旨(testolactone)；抗腎上腺藥(anti-adrenals)如氛魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補(bǔ)償劑如亞葉酸(frolinic acid)；醋葡醛內(nèi)酯(aceglatone)； aldophosphamide glycoside ；5_ 氨基酮戊酸(aminolevulinic acid)；恩尿啼唆(eniluracil)；安口丫唆(amsacrine) ；bestrabucil ；比生群(bisantrene)；依達(dá)曲沙(edatraxate) ；defofamine ；秋水仙胺(demecolcine)；地口丫酉昆(diaziquone)； elfornithine ；依利醋銨(elliptinium acetate) ；epothilone ；依托格魯(etoglucid)； 硝酸鎵(gallium nitrate)；羥基脲(hydroxyurea)；香菇多糖(Ientinan)；氯尼達(dá)明 (Ionidainine)；美登木素生物堿類(maytansinoids)如美登素(maytansine)和安絲 MM (ansamitocins)；米托月瓜月宗(mitoguazone)；米托惠酉昆(mitoxantrone)；莫口jS達(dá)酉享 (mopidanmol)；尼曲口丫唆(nitraerine)；噴司他丁 (pentostatin)；異丙嗪(phenamet)； 吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(Iosoxantrone) ；2-乙基酰胼 Q-ethylhydrazide)； 丙卡巴胼(procarbazine) ；PSK 多糖復(fù)合物(JHS Natural Products (JHS 天然產(chǎn)品)，Eugene, OR)；雷佐生(razoxane)；利索新(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；鍺螺月安(spirogermanium)；細(xì)交鏈 包菌麗酸(tenuazonic acid)；三亞月安酉昆(triaziquone)； 2，2，，2”_三氯三乙胺(2, 2', 2" -trichlorotriethylamine)；單端孢霉烯族化合物 (trichothecenes)(特別是 T-2 毒素、verracurin Α、桿孢菌素 A (roridin A)和蛇形菌素 (anguidineO)；烏拉坦(urethan)；長(zhǎng)春地辛(vindesine) (ELDISINE 、FILDESIN )； 達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine) ；二溴甘露酉享(mitobronitol) ；二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol)；哌泊溴燒(pipobroman) ；gacytosine ；阿糖胞昔(arabinoside) (“Ara-C")；塞替哌(thiotepa)；紫杉烷類化合物(taxoids)，例如，TAXOL 紫杉醇 (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton,新澤西)無克列莫佛(Cremophor-free)的 ABRAXANE 、紫杉醇的白蛋白改造的納米顆粒制劑(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg,伊利諾伊州)；和 TAXOTERE 多西他賽(docetaxel) ( Rhone -Poulenc Rorer、Antony、法國(guó))；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；吉西他濱(gemcitabine) (GEMZAR, )；6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)；巰嘌呤(mercaptopurine)；甲氨喋呤；鉬類似物如順鉬(cisplatin)和卡鉬(carboplatin)；長(zhǎng)春堿(vinblastine) (VELBAN )；鉬；依托泊苷(etoposide) (VP-16)；異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長(zhǎng)春新堿(vincristine) (ONCOVIN )；奧沙利鉬(oxaliplatin) ；Ieucovovin ；長(zhǎng)春瑞濱 (vinorelbine) (NAVELBINE )；諾安托(novantrone)；依達(dá)曲沙(edatrexate)；道諾霉素 (daunomycin)；氨基喋呤(aminopterin)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑 RFS 2000 ；二氟甲基鳥氨酸(difluoromethylornithine) (DMFO)；維甲類(retinoids)如視黃酸(retinoic acid)；卡培他濱(capecitabine) (XEL0DA )；任何上述物質(zhì)的藥用鹽、 酸或衍生物；以及上述物質(zhì)中兩種或多種的組合，如CHOP，即環(huán)磷酰胺、多柔比星、長(zhǎng)春新堿和潑尼松龍組合治療法的縮寫，和F0LF0X，使用奧沙利鉬(oxaliplatin) (EL0XATIN )與 5-FU和leucovovin聯(lián)合的治療方案的縮寫。下列物質(zhì)也包含在本定義中，它們是起調(diào)控、減少、阻斷或抑制可以促進(jìn)癌癥生長(zhǎng)的激素的作用的抗激素藥劑，所述抗激素藥劑通常處在系統(tǒng)治療或全身治療形式中。它們可以是激素本身。實(shí)例包括抗雌激素藥和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)物(SERMs)，包括例如， 他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX: 他莫昔芬)、EVISTA 雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)，4_ 羥基他莫昔芬 0-hydroxytamoxifen)，曲沃昔芬(trioxifene)、 keoxifene、LY117018、奧那司酮(onapristone)和 FAREST0N 托瑞米芬(toremifene)； 抗黃體酮藥(anti-progesterones)；雌激素受體下調(diào)劑(ERDs)；起作用抑制或關(guān)閉卵巢的藥齊[J，例如，促黃體生成激素釋放素(leutinizing hormone-releasing hormone) (LHRH) 激動(dòng)劑如LUPRON 和ELIGARD 醋酸亮丙立德(leuprolide acetate)、醋酸戈舍瑞林 (goserelin acetate)、醋酸布舍瑞林(buserelin acetate)禾口 tripterelin ；其它抗雄激素藥諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)和比卡魯胺(bicalutamide)； 和芳香酶抑制劑(aromatase inhibitors)，其抑制芳香酶，該酶調(diào)節(jié)腎上腺中的雌激素生成，諸如，例如，4(5)-咪唑類(4(5)-imidazoles)、氨魯米特(aminoglutethimide)、 MEGASE 醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、AR0MASIN 依西美坦(exemestane)、赴美司坦(formestanie)、法倔唑(fadrozole)、RIVIS0R 伏氯唑(vorozole)、FEMARA 來曲唑(Ietrozole)和ARIMIDEX 阿那曲唑(anastrozole)。另外，所述化療劑的定義包括二膦酸鹽(bisphosphonates)如氯膦酸鹽(clodronate)(例如，B0NEF0S 或 OSTAC
)、DIDR0CAL 依替膦酸鹽(etidronate)、NE-58095、ZOMETA 唑來膦酸(zoledronic acid) / 唑來膦酸鹽(zoledronate)、F0SAMAX 阿侖膦酸鹽(alendronate)、AREDIA 帕米膦酸鹽(pamidronate)、SKELID 替魯膦酸鹽(tiludronate)、或 ACT0NEL 利塞膦酸鹽(risedronate)；以及曲沙他濱(troxacitabine) (1，3_ 二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸、特別是抑制異常細(xì)胞增生所涉及的信號(hào)傳導(dǎo)途徑中的基因表達(dá)的那些反義寡核苷酸，諸如例如，PKC-α、Raf、H-Ras和表皮生長(zhǎng)因子受體(EGF-R)；疫苗諸如 THERAT0PE 疫苗和基因治療疫苗、例如,ALL0VECTIN 疫苗、LEUVECTIN 疫苗和VAXID 疫苗；LURT0TECAN 拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑；ABARELIX: rmRH ；托西拉帕替尼(lapatinib ditosylate) (ErbB-2和EGFR雙重酪氨酸激酶小分子抑制劑，也已知為GW572016)；和上述任意物質(zhì)的藥用鹽、酸或衍生物?！翱贵w"(Abs)和"免疫球蛋白"(Igs)指具有類似結(jié)構(gòu)特征的糖蛋白。當(dāng)抗體顯示針對(duì)特異性抗原的結(jié)合特異性時(shí)，免疫球蛋白包括抗體和通常缺乏抗原特異性的其它抗體樣分子。后者的多肽例如由淋巴系統(tǒng)在低水平產(chǎn)生，和由骨髓瘤以增加的水平產(chǎn)生。術(shù)語"抗體"和“免疫球蛋白”，廣義地在本文交互使用，并包括單克隆抗體(例
13如全長(zhǎng)的或完整的單克隆抗體)、多克隆抗體、單價(jià)抗體、多價(jià)抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性)并且還可以包括某些抗體片段(如本文更詳細(xì)描述)?？贵w可以是嵌合的抗體、人抗體、人源化抗體和/或親和力成熟抗體。術(shù)語“抗-⑶117抗體”或“與⑶117結(jié)合的抗體”指這樣的抗體，其能夠以足夠的親和性結(jié)合CD117，從而使所述抗體可以用作靶向CD117的診斷劑和/或治療劑。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合CDl 17的抗體具有彡ΙμΜ,^ IOOnM, ^ IOnM, ^ InM，或彡0. InM的解離常數(shù)(Kd)。在某些實(shí)施方案中，抗-CD117抗體結(jié)合在不同物種的CD117中都保守的CD117 的表位。術(shù)語“抗-CD44抗體”指這樣的抗體，其能夠以足夠的親和性結(jié)合CD44，從而使所述抗體可以用作靶向CD44的診斷劑和/或治療劑。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合CD44的抗體具有彡ΙμΜ,^ ΙΟΟηΜ，彡IOnM, ^ InM，或彡0. InM的解離常數(shù)(Kd)。在某些實(shí)施方案中， 抗-CD44抗體結(jié)合在不同物種的CD44中都保守的CD44的表位。術(shù)語“抗-⑶133抗體”指這樣的抗體，其能夠以足夠的親和性結(jié)合⑶133，從而使所述抗體可以用作靶向CD133的診斷劑和/或治療劑。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合CD133的抗體具有彡1 μ M，< IOOnM, ( IOnM, ( InM,或彡0. InM的解離常數(shù)(Kd)。在某些實(shí)施方案中，抗-⑶133抗體結(jié)合在不同物種的⑶133中都保守的⑶133的表位。術(shù)語“抗-Sca-I抗體”指這樣的抗體，其能夠以足夠的親和性結(jié)合ka_l，從而使所述抗體可以用作靶向Sca-I的診斷劑和/或治療劑。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合ka-Ι的抗體具有彡1 μ M，< IOOnM, ( IOnM, ( InM,或彡0. InM的解離常數(shù)(Kd)。在某些實(shí)施方案中，抗-Sca-I抗體結(jié)合在不同物種的Sca-I中都保守的Sca-I的表位。術(shù)語“全長(zhǎng)抗體，，，“完整的抗體”和“完整抗體”在本文交替地用于指以其基本完整形式存在的抗體，而非下文定義的抗體片段。術(shù)語特別指具有包含F(xiàn)c區(qū)的重鏈的抗體。“抗體片段”僅包含完整抗體的一部分，其中所述部分保留至少一種，和多到大部分或全部當(dāng)其在完整抗體中存在時(shí)在正常情況下與該部分相關(guān)的功能。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段包含完整抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)，并且由此保持其結(jié)合抗原的能力。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段，例如，包含F(xiàn)c區(qū)的抗體片段保持至少一種當(dāng)其存在于完整抗體中時(shí)， 正常情況下與Fc區(qū)相關(guān)的生物學(xué)功能，如Fcfoi結(jié)合、抗體半衰期調(diào)節(jié)、ADCC功能和補(bǔ)體結(jié)合。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體片段是具有基本與完整抗體類似的體內(nèi)半衰期的單價(jià)抗體。例如，所述抗體片段可以包含與能夠賦予所述片段體內(nèi)穩(wěn)定性的Fc序列相連的抗原結(jié)合臂?？贵w的木瓜蛋白酶消化產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段，稱為“Fab”片段，所述 “Fab”片段每個(gè)具有單抗原結(jié)合位點(diǎn)，以及殘余的“Fe”片段，其名稱反映其容易結(jié)晶的能力。胃蛋白酶處理產(chǎn)生F (ab’)2片段，所述片段具有兩個(gè)抗原組合位點(diǎn)，并且仍舊能夠交聯(lián)抗原。“Fv”是包含完整抗原結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。在一個(gè)實(shí)施方案中，雙鏈Fv種類由一個(gè)重鏈可變結(jié)構(gòu)域和一個(gè)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域以緊密的，非共價(jià)締合的二聚體組成。在單鏈Fv(SCFV)種類中，一個(gè)重鏈可變結(jié)構(gòu)域和一個(gè)輕鏈可變結(jié)構(gòu)域可以通過柔性肽接頭共價(jià)連接從而使輕鏈和重鏈可以以類似于雙鏈Fv種類的“二聚體”結(jié)構(gòu)締合。在這種構(gòu)型中，每個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的三個(gè)CDRs相互作用從而限定在VH-VL 二聚體的表面上的抗原結(jié)合位點(diǎn)。總而言之，六個(gè)CDRs將抗原結(jié)合特異性賦予抗體。然而，即使是單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域(或
14只包含對(duì)抗原特異的三個(gè)CDRs的半個(gè)Fv)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，然而親和性低于
完整結(jié)合位點(diǎn)。Fab片段包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域并且還包含輕鏈的恒定結(jié)構(gòu)域和重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域(CHl)。Fab’片段與Fab片段的不同之處在于在重鏈CHl結(jié)構(gòu)域的羧基端加入幾個(gè)殘基，包括來自抗體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸。Fab’ -SH是本文關(guān)于 Fab'的名稱，其中恒定結(jié)構(gòu)域的半胱氨酸殘基具有游離巰基。F(ab’)2抗體片段最初作為在它們之間具有鉸鏈半胱氨酸的Fab’片段對(duì)產(chǎn)生。還已知抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)?！皢捂淔v”或“scFv”抗體片段包含抗體的VH和VL結(jié)構(gòu)域，其中這些結(jié)構(gòu)域以單多肽鏈存在。一般地，所述scFv多肽在VH和VL結(jié)構(gòu)域之間還包含多肽接頭，所述接頭使 scFv形成對(duì)于抗原結(jié)合需要的結(jié)構(gòu)。關(guān)于scFv的綜述參見Pluckthun于The Pharmacology of Monoclonal Antibodies (單克隆抗體藥理學(xué))，卷 113，Rosenburg 和 Moore 編輯， (Springer-Verlag, New York, 1994)，269-315 頁(yè)中。術(shù)語“雙抗體(diabodies) ”指具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的小抗體片段，所述片段在相同的多肽鏈(VH-VL)中包含與輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VL)連接的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(VH)。通過使用太短所以不能在相同鏈上的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間配對(duì)的接頭，迫使所述結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)從而產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。雙抗體可以是二價(jià)或雙特異性的。雙抗體更充分地描述于例如 EP 404, 097 ；WO 93/1161 ；Hudson 等.(2003)，Nat. Med. 9 :129-134 ； 和 Hollinger 等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 90 :6444-6448 (1993) 中。三鏈抗體(triabodies)和四鏈抗體(tetrabodies)還在 Hudson 等· Q003) Nat. Med. 9 129-134中進(jìn)行描述。術(shù)語“單克隆抗體”在用于本文時(shí)指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即構(gòu)成群體的各個(gè)抗體是相同的，除了可以以極小量存在的可能突變(例如天然存在突變)夕卜。 因此，修飾語“單克隆”表明抗體不是不同抗體混合物的特征。在某些實(shí)施方案中，所述單克隆抗體典型地包括包含結(jié)合靶標(biāo)的多肽序列的抗體，其中靶標(biāo)結(jié)合多肽序列是通過包括從眾多多肽序列中選擇單一靶標(biāo)結(jié)合多肽序列在內(nèi)的過程得到的。例如，選擇方法可以是從眾多克隆(諸如雜交瘤克隆、噬菌體克隆或重組DNA克隆的集合)中選擇獨(dú)特克隆。應(yīng)當(dāng)理解，所選擇的靶標(biāo)結(jié)合序列可進(jìn)一步改變，例如為了提高對(duì)靶標(biāo)的親和性、將靶標(biāo)結(jié)合序列人源化、提高其在細(xì)胞培養(yǎng)物中的產(chǎn)量、降低其在體內(nèi)的免疫原性、創(chuàng)建多特異性抗體等，而且包含改變后的靶標(biāo)結(jié)合序列的抗體也是本發(fā)明的單克隆抗體。與典型地包含針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，單克隆抗體制備物的每種單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一決定簇。除它們的特異性之外，單克隆抗體制備物的優(yōu)點(diǎn)在于它們典型地未受到其它免疫球蛋白的污染。修飾語“單克隆”表明抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過任何特定方法來生產(chǎn)抗體。例如，將依照本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過多種技術(shù)來生成，包括例如雜交瘤法(例如Kohler等.，自然(Nature) 256 =495(1975) ； Har low 等，抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(Antibodies :A Laboratory Manual),(冷泉港實(shí)驗(yàn)室出版社，第2 版· 1988) ；Hammerling 等，于單克隆抗體和 T-細(xì)胞雜交瘤(Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas), 563-681 (Elsevier, N. Y.，1981)、重組 DNA 法(參見例如美國(guó)專利號(hào) 4，816，567)、噬菌體展示技術(shù)(參見例如 Clackson 等，自然(Nature) 352 :624-628(1991)；Marks等，分子生物學(xué)雜志(J. Mol. Biol. )222 :581-597(1992) ；Sidhu等，分子生物學(xué)雜志 (J. Mol. Biol. )338(2) :299-310(2004) ；Lee 等，分子生物學(xué)雜志(J. Mol. Biol.) 340 (5) 1073-1093(2004) ；Fellouse，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc. Nat. Acad. Sci. USA) 101 (34) 12467-12472(2004)；及 Lee 等，免疫學(xué)方法雜志(J. Immunol. Methods) 284 (1-2) 119-132(2004))、及用于在具有部分或整個(gè)人免疫球蛋白基因座或編碼人免疫球蛋白序列的基因的動(dòng)物中生成人或人樣抗體的技術(shù)(參見例如WO 98/24893 ；WO 96/34096 ； WO 96/33735 ；W091/10741 Jakobovits 等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc. Nat. Acad. Sci. USA) 90 :2551(1993) Jakobovits 等，自然(Nature) 362 :255-258 (1993) ；Bruggemann 等， Year in Immuno. 7 :33 (1993)；美國(guó)專利號(hào) 5，545，807 ；5，545，806 ；5，569，825 ；5，625，126 ； 5，633，425 ;5，661，016 ;Marks 等，生物.技術(shù)(Bio. Technology) 10 :779-783 (1992)； Lonberg 等，自然(Nature)368 :856-859(1994) ；Morrison,自然(Nature)368 812-813(1994) ；Fishwild 等，自然生物技術(shù)(Nature Biotechnol.) 14 :845-851 (1996)； Neuberger，自然生物技術(shù)(Nature Biotechnol.) 14 :826(1996)；禾口 Lonberg 禾口 Huszar， Intern. Rev. Immunol. 13 :65-93(1995))。單克隆抗體在本文中具體地包括“嵌合”抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(美國(guó)專利號(hào).4，816，567 ；和Morrison 等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc. Nat. Acad. Sci. USA) USA 81 :6851-6855 (1984))。非人(例如鼠)抗體的“人源化”形式是包含衍生自非人免疫球蛋白的最少序列的嵌合抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，人源化抗體指這樣的人免疫球蛋白(受體抗體)，其中受體的高變區(qū)殘基用具有期望特異性、親和性和/或能力的非人物種(供體抗體)(諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物)的高變區(qū)殘基替換。在有些情況中，將人免疫球蛋白的構(gòu)架區(qū)(FR)殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體中或在供體抗體中沒有發(fā)現(xiàn)的殘基。進(jìn)行這些修飾是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能。一般而言，人源化抗體將包含基本上全部的至少一個(gè)、典型地兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或基本上所有高變環(huán)對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白的高變環(huán)，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的 FR0人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fe)，典型地是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)例如參見Jones等，自然(Nature) 321 :522-525(1986) ；Riechmann等， 自然(Nature) 332 :323-329 (1988)；及 Presta，Curr. Op. Struct. Biol. 2 :593-596 (1992)。 還可參見下述綜述文章和其中引用的文獻(xiàn)Vaswani和Hamilton，Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1 :105-115(1998) ；Harris, Biochem. Soc. Transactions 23 :1035-1038(1995)； Hurle 禾口 Gross, Curr. Op. Biotech. 5 :428-433(1994)?！叭丝贵w”是這樣的抗體，其包含與由人生成的抗體的氨基酸序列對(duì)應(yīng)的氨基酸序列和/或使用本文所公開的用于生成人抗體的任何技術(shù)產(chǎn)生。所述技術(shù)包括篩選人源的組合文庫(kù)，如噬菌體展示文庫(kù)(見，例如，Marks等，分子生物學(xué)雜志(J. Mol. Biol).，222 581-597(1991)和Hoogenboom等，核酸研究(Nuc 1. Acids Res.)，19 :4133-4137(1991))；使用人骨髓瘤和小鼠-人異源骨髓瘤細(xì)胞系來生產(chǎn)人單克隆抗體(見，例如，Kozbor免疫學(xué)雜志(J. Immunol). ,133 =3001(1984) ；Brodeur 等，單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù)和應(yīng)用(Monoclonalantibody Production Techniques and Applications),第 51—63 頁(yè)(Marcel Dekker, Inc.，紐約，1987)；和 Boerner 等，免疫學(xué)雜(J. Immunol.), 147 :86(1991))；和在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如小鼠)中產(chǎn)生單克隆抗體，所述轉(zhuǎn)基因動(dòng)物能夠在缺乏內(nèi)源免疫球蛋白生產(chǎn)的情況下產(chǎn)生人抗體的全部所有組成成分(見，例如，Jakobovits等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc. Natl. Acad. Sci USA)，90 :2551 (1993) Jakobovits 等，自然(Nature)，362 255(1993) ；Bruggermann 等，Year in Immunol.，7 :33 (1993))。人抗體的這種定義具體地排除了包含來自非人動(dòng)物的抗原結(jié)合殘基的人源化抗體?！坝H和力成熟的”抗體是在抗體的一個(gè)或多個(gè)CDRs中具有一處或多處改變、導(dǎo)致該抗體對(duì)抗原的親和性與沒有那些改變的母體抗體相比有所提高的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，親和力成熟的抗體具有納摩爾或甚至皮摩爾量級(jí)的對(duì)靶抗原的親和性。親和力成熟的抗體可使用一些本領(lǐng)域已知方法來生成。Marks等，生物/技術(shù)(Bio/Technology) 10 779-783(1992)記載了通過VH和VL結(jié)構(gòu)域改組進(jìn)行的親和力成熟。以下文獻(xiàn)記載了 HVR和/或構(gòu)架殘基的隨機(jī)誘變=Barbas等，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院學(xué)報(bào)(Proc. Nat. Acad. Sci. USA) 91 :3809-3813(1994) fchier 等，基因(Gene) 169 :147-155 (1995) ；Yelton 等，免疫學(xué)雜志(J. Immunol.) 155 :1994-2004(1995) Jackson 等，免疫學(xué)雜志(J. Immunol.) 154(7) 3310-9 (1995)；及 Hawkins 等，分子生物學(xué)雜志(J. Mol. Biol.) 226 :889-896 (1992)?！胺忾]”抗體或“拮抗劑”抗體是抑制或減少其結(jié)合的抗原的生物學(xué)活性的抗體。某些封閉抗體或拮抗劑抗體基本上或完全抑制抗原的生物學(xué)活性。將“小分子”或“小有機(jī)分子”在本文定義為具有低于約500道爾頓的分子量的有機(jī)分子。“⑶117-結(jié)合的寡肽”或“結(jié)合⑶117的寡肽”是能夠以足夠的親和性結(jié)合⑶117 從而使得所述寡肽可以用作靶向CD117的診斷劑和/或治療劑的寡肽。在某些實(shí)施方案中，⑶117-結(jié)合寡肽與不相關(guān)的非-⑶117蛋白結(jié)合的程度少于⑶117-結(jié)合寡肽與⑶117 結(jié)合的約10%，如通過例如表面等離子共振測(cè)定法(surface ρlasmon resonance assay) 所測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，CDl 17-結(jié)合寡肽具有彡ΙμΜ,^ IOOnM, ^ IOnM, ^ InM，或彡0. InM的解離常數(shù)(Kd)?！阿?17-結(jié)合有機(jī)分子”或“結(jié)合⑶117的有機(jī)分子”是除了如本文定義能夠以足夠的親和性結(jié)合CD117從而使得所述有機(jī)分子可以用作靶向CD117的診斷劑和/或治療劑的寡肽或抗體的有機(jī)分子。在某些實(shí)施方案中，CD117-結(jié)合有機(jī)分子與不相關(guān)的非CD117 蛋白的結(jié)合的程度少于CDl 17-結(jié)合有機(jī)分子與CDl 17結(jié)合的約10%，如通過例如表面等離子共振測(cè)定法所測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，⑶117-結(jié)合有機(jī)分子具有< 1μΜ，< ΙΟΟηΜ， 彡IOnM,彡InM,或彡0. InM的解離常數(shù)(Kd)。結(jié)合靶多肽的任何分子的解離常數(shù)(Kd)可以使用表面等離子共振測(cè)定法方便地進(jìn)行測(cè)量。所述測(cè)定法可以使用BIAcore -2000或BIAcore -3000 (BIAcore，Inc.， Piscataway, NJ)在25°C用固定的靶多肽CM5芯片以 10反應(yīng)單位(RU)進(jìn)行。簡(jiǎn)言之， 將羧甲基化的葡聚糖生物傳感器芯片(CM5，BIAcore, Inc.)用N-乙基-N’ _ (3-二甲基氨基丙基)_碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(MB)根據(jù)生產(chǎn)商的說明書進(jìn)行活化。在以5 μ 1/分鐘的流速注射之前，將靶多肽用IOmM乙酸鈉，ρΗ 4. 8稀釋到5 μ g/ml ( 0.2μΜ)從而獲得約10反應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白。在注射靶多肽后，注射IM乙醇胺以封閉未反應(yīng)的基團(tuán)。關(guān)于動(dòng)力學(xué)測(cè)量，將結(jié)合分子的兩倍系列稀釋物(0. 78nM到500nM)在具有0.05%Tween 20 (PBST)的PBS中，在25°C，以約25 μ 1/min的流速進(jìn)行注射。使用簡(jiǎn)單的一對(duì)一 Langmuir結(jié)合模型(BIAcore評(píng)估軟件版本3.幻，通過同時(shí)擬合締合和解離傳感圖來計(jì)算締合速率(k。n)和解離速率(k。ff)。將平衡解離常數(shù)(Kd)計(jì)算為k。ff/k。n&比率。 見，例如，Chen, Y.，等，(1999)分子生物學(xué)雜志(J. Mol. Biol.) 293 :865-881。如果抗體的締合速率通過上述的表面等離子共振測(cè)定法確定超過IO6M-1S-1,那么締合速率可以通過使用熒光猝滅技術(shù)來確定，所述熒光猝滅技術(shù)在25°C，在存在增加濃度的抗原時(shí)，測(cè)量20nM 在PBS，pH 7. 2中的抗體(Fab形式)的熒光發(fā)射強(qiáng)度(激發(fā)=295nm ；發(fā)射=340nm, 16nm 帶通)的增加或減少，如使用分光光度計(jì)，如滯流裝備的分光光度計(jì)(stop-flow equipped spectrophometer) (Aviv儀器)，或具有攪拌的比色杯的8000-系列的SLM-Aminco分光光度計(jì)(ThermoSpectronic)進(jìn)行測(cè)量的?！爸|(zhì)體”是由各種類型的脂質(zhì)、磷脂和/或表面活性劑組成的用于將藥劑，例如藥物遞送給哺乳動(dòng)物的小囊泡。所述脂質(zhì)體的成分一般以雙層形式排列，類似于生物膜的脂質(zhì)排列。術(shù)語"標(biāo)記"當(dāng)用于本文時(shí)，指可檢測(cè)的化合物或組合物。所述標(biāo)記本身是可檢測(cè)的(例如放射性同位素標(biāo)記或熒光標(biāo)記)，或在酶促標(biāo)記的情形中，可以催化形成可檢測(cè)產(chǎn)物的基底化合物或組合物的化學(xué)改變。可以作為可檢測(cè)標(biāo)記的放射性核素包括，例如 1-131，1-123，1-125，Y-90，Re-188，Re-186，At-211，Cu-67, Bi-212，和 Pd-109?！胺蛛x”的生物分子，如核酸、多肽或抗體是已經(jīng)從其天然環(huán)境的至少一種成分進(jìn)行鑒定和分離和/或回收的生物分子?！胺蛛x的細(xì)胞"是這樣的細(xì)胞，所述細(xì)胞已經(jīng)從其天然環(huán)境的至少一種成分鑒定和分離和/或回收。本發(fā)明的組合物和方法如本文所提供，CD117是具有多能、自我更新能力的前列腺干細(xì)胞(PSCs)的稀有標(biāo)記。⑶117表達(dá)主要位于尿道近側(cè)的小鼠前列腺的區(qū)域，并且在閹割誘導(dǎo)的前列腺退化后被上調(diào)，與PSC標(biāo)記一致的兩個(gè)特征。當(dāng)體內(nèi)移植時(shí)，⑶117+ PSCs可以產(chǎn)生功能性的， 產(chǎn)生分泌的前列腺。而且，⑶117+ PSCs顯示長(zhǎng)期的自我更新能力，如通過體內(nèi)系列分離和移植所證實(shí)的。PSCs的另外的純化在一些實(shí)施方案中是需要的，并且通過基于另外的標(biāo)記CD133，和/或CD44，和/或分選或分離細(xì)胞而實(shí)現(xiàn)。如在實(shí)施例中所述，由 Lin-ka-rCD133+⑶44+⑶117+表型限定的成年小鼠前列腺分離的單細(xì)胞可以在體內(nèi)移植后產(chǎn)生前列腺。因此，在本發(fā)明的一個(gè)方面中提供分離PSCs的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，前列腺細(xì)胞群獲自供體的前列腺。在一些實(shí)施方案中，所述供體是哺乳動(dòng)物供體。在一些實(shí)施方案中，所述供體是人。在其它實(shí)施方案中，所述供體是小鼠、大鼠、豬或其它適合的哺乳動(dòng)物供體。在一些實(shí)施方案中，對(duì)所述前列腺細(xì)胞群進(jìn)行處理以去除所有的導(dǎo)致譜系消減的 (Lin-)細(xì)胞群的譜系細(xì)胞。獲得Lin-細(xì)胞群的方法是本領(lǐng)域公知的，并且在實(shí)施例中進(jìn)行描述。對(duì)所述前列腺細(xì)胞群進(jìn)行分選從而獲得這樣的細(xì)胞群，所述細(xì)胞群表達(dá)細(xì)胞表面標(biāo)記⑶117，⑶133，⑶44 JPSca-I的至少一種、至少兩種、至少三種、或至少四種。在具體的實(shí)施方案中，對(duì)Lin-細(xì)胞群進(jìn)行分選從而獲得表達(dá)⑶117，⑶133，和⑶44 (表型Lin-/CD117+/CD133+/CD44+)或 CD117，CD133, CD44, (表型 Lin-/CD117+/CD133+/CD44+/ Sca-I+)的細(xì)胞群。另外的實(shí)施方案包括，例如分選細(xì)胞群從而獲得具有下列表型Lin-/ CDl17+， Lin-/CD117+/CD133+， Lin_/CD117+/CD44+， Lin-/CD117+/Sca_l+， Lin_/CD117+/ CD133+/Sca-1+, Lin-/CD117+/CD44+/Sca-1+ 的細(xì)胞的方法?；诩?xì)胞表面標(biāo)記分選細(xì)胞的方法是本領(lǐng)域公知的，并且包括，例如標(biāo)準(zhǔn)的流式細(xì)胞術(shù)，磁法細(xì)胞分選，和熒光激活的細(xì)胞分選術(shù)(FACS)。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供獲自所述細(xì)胞分選方法的細(xì)胞群和/或單細(xì)胞。所述細(xì)胞群是基本純的并且不包含不表達(dá)用于分選所述細(xì)胞的標(biāo)記的顯著細(xì)胞群。在一些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群是至少 90%，91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，99%，或 99. 5%純的。使用所述分選方法獲得的PSCs可以用在許多方法中，包括前列腺組織再生的方法和篩選化合物的方法。在男性中失去功能性前列腺通常會(huì)導(dǎo)致許多不合需要的生理和情感狀況，包括失去性功能、尿失禁、腸功能障礙和抑郁癥。Kirby，R. S.等，Prost Can Prost Disease 1 179-184(1998), Weber, B.等，Am J Men' s Health, 2 (2) :165-171 (2008) 因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供在患者中再生功能性前列腺的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，將本發(fā)明的PSC 植入患者中從而使所述PSC再生功能性的前列腺。在一個(gè)實(shí)施方案中，患者沒有前列腺并且所述PSC被植入患者的尿道附近導(dǎo)致產(chǎn)生前列腺。在另一個(gè)實(shí)施方案中，患者具有不完全的前列腺，并且所述PSC被植入在不完全的前列腺中或不完全的前列腺附近，導(dǎo)致前列腺組織和功能性前列腺的再生。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述患者是人患者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述患者時(shí)人男性患者。在又一個(gè)實(shí)施方案中，將宿主生物用于產(chǎn)生移植到患者中的前列腺。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述患者是人患者。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述患者是人男性患者。在一個(gè)實(shí)施方案中，將來自患者、或來自與患者相同物種的成員的PSC植入宿主生物體中，導(dǎo)致產(chǎn)生前列腺。將所述PSC以提供足夠的血管化作用從而產(chǎn)生前列腺的方式植入宿主生物體中。在一個(gè)實(shí)施方案中，將所述PSC植入在所述宿主的腎被膜下。將所述前列腺?gòu)乃鏊拗髦幸迫ゲ⑶乙浦驳叫枰δ苄郧傲邢俚幕颊咧小Ｔ谝粋€(gè)實(shí)施方案中，所述宿主和患者是相同的或來自相同的物種。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述宿主和患者是人。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述宿主和患者不是相同的物種。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述宿主是豬或其它適合的非人哺乳動(dòng)物。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述患者是人。在又一個(gè)實(shí)施方案中，前列腺在先體外后體內(nèi)(ex vivo)系統(tǒng)中產(chǎn)生。先體外后體內(nèi)產(chǎn)生組織和器官的系統(tǒng)是已知的并且描述在例如美國(guó)專利號(hào)6，121，042,6, 210，957， 6，171，812,7, 410，792,6, 432，713,6, 599，734,6, 607，917，和 6，921，662 中。用于分離正常PSCs的標(biāo)記在分離前列腺癌干細(xì)胞(PCSCs)中也是有用的。本發(fā)明的PCSCs表達(dá)用于分離正常的PSCs的相同標(biāo)記。正常的PSCs和PCSCs可以使用確定所述細(xì)胞是否分化為前列腺(正常PSCs)或增殖并產(chǎn)生前列腺癌(PCSCs)的測(cè)定法從一種或其它種進(jìn)行分化。所述測(cè)定法是本領(lǐng)域已知的并且在本文描述。將PSCs和PCSCs用于篩選這樣的化合物的方法，所述化合物可以用于增加組織產(chǎn)生或減少細(xì)胞增殖并且用于治療前列腺癌。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面提供鑒定用于治療前列腺癌的化合物的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括使PSC或PCSC(或基本純的PSCs 或PCSCs的群體)與測(cè)試化合物接觸，并且篩選測(cè)試化合物對(duì)于PSC或PCSC的增殖或存活性的作用。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117和⑶44。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117 和CD133。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)CD117，CD44，和CD133。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117，⑶44，⑶133，和。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法確定所述測(cè)試化合物是否抑制所述PSC或PCSC的增殖。對(duì)增殖的抑制可以使用任何本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行確定，所述方法包括體外細(xì)胞增殖測(cè)定法。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括確定在缺乏測(cè)試化合物的情況下PSC或PCSC的增殖以提供關(guān)于測(cè)試化合物的作用的比較。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法確定所述測(cè)試化合物是否殺死PSC或PCSC。用于抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或增殖的測(cè)定法是本領(lǐng)域中公知的。用于細(xì)胞增殖的某些測(cè)定法，由本文所述的“細(xì)胞殺傷”測(cè)定法例示，測(cè)量細(xì)胞存活力。一種所述測(cè)定法是 CellTiter-Glo 發(fā)光細(xì)胞存活測(cè)定法，這是可以從!Iomega(MadiSOn，WI)商購(gòu)的。該測(cè)定法基于存在的ATP的量化(其指示代謝活性細(xì)胞)確定在培養(yǎng)物中的活細(xì)胞的數(shù)量。見 Crouch 等(1993) J. Immunol. Meth. 160 :81_88，美國(guó)專利號(hào) 6602677。該測(cè)定法可以以 96 孔或384孔形式進(jìn)行，使其易于進(jìn)行自動(dòng)的高通量篩選(HTQ。見Cree等(199 Anticancer Drugs (抗癌藥物)6 :398-404。該測(cè)定法包括直接將單試劑(CellTiter-Glo Reagent)加入培養(yǎng)的細(xì)胞中。這導(dǎo)致細(xì)胞裂解并且產(chǎn)生由螢光素酶反應(yīng)得到的發(fā)光信號(hào)。發(fā)光信號(hào)與存在的ATP的量成比例，所述ATP的量與在培養(yǎng)物中存在的活細(xì)胞的數(shù)目直接成比例。數(shù)據(jù)可以由發(fā)光計(jì)或CCD照相成像裝置記錄。將發(fā)光輸出量表示為相對(duì)光單位(RLU)。用于細(xì)胞增殖的另外的測(cè)定法是“MTT”測(cè)定法，一種測(cè)量通過線粒體還原酶將 3- ，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5_聯(lián)苯基四氮唑溴化物氧化為甲勝的比色測(cè)定法。象 CellTiter-Glo 測(cè)定法一樣，該測(cè)定法顯示在細(xì)胞培養(yǎng)物中存在的代謝活性細(xì)胞的數(shù)量。 見，例如 Mosmann (1983) J. Immunol. Meth.(免疫學(xué)方法雜志)65 :55_63，和 Zhang 等(2005) Cancer Res.(癌癥研究)65 :3877-3882。用于誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的測(cè)定法是本領(lǐng)域公知的。在一些實(shí)施方案中，這樣的測(cè)定法測(cè)量，例如膜完整性的損失，如通過碘化丙錠(PI)、錐蟲藍(lán)(見Moore等(1995) Cytotechnology (細(xì)胞技術(shù))，17 :1_11)，或7AAD的吸收所顯示的。在示例性PI吸收測(cè)定法中，將細(xì)胞在補(bǔ)充了 10%熱滅活的FBS(Hyclone)和2mM L-谷氨酰胺的Dulbecco‘ s改進(jìn)的fegle培養(yǎng)基(D-MEM) Ham' s F_12(50 50)中進(jìn)行培養(yǎng)。由此，將測(cè)定法在缺乏補(bǔ)體和免疫效應(yīng)細(xì)胞的情況下進(jìn)行。將細(xì)胞以3x IO6/碟的密度接種在100x20mm的碟中，并使其附著過夜。移去培養(yǎng)基，并將其用單獨(dú)的新鮮培養(yǎng)基或包含各種濃度的抗體或免疫綴合物的培養(yǎng)基替換。將細(xì)胞溫育3天時(shí)間階段。在處理后，將單層用PBS洗滌，并通過胰蛋白酶消化脫離。接著，將細(xì)胞在4°C以1200rpm離心5分鐘，將沉淀物重新懸浮在:3ml 7令 Ca2+結(jié)合緩沖液(IOmM Hepes, pH 7. 4,140mM NaCl, 2. 5mM CaCl2)中，并等分到:35mm 濾器-加帽的lh75mm管(lml/管，每處理組3管)中以去除細(xì)胞塊。管接著接受PI (10 μ g/ ml) ο 使用 FACSCAN 流式細(xì)胞儀和 FACSCONVERT CellQuest 軟件(Becton Dickinson)來分析樣品。由此鑒定誘導(dǎo)如通過PI吸收確定的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著水平的細(xì)胞死亡的化合物。關(guān)于誘導(dǎo)凋亡的化合物的示例性測(cè)定法是用于檢測(cè)基因組DNA的核小體間降解的膜聯(lián)蛋白結(jié)合測(cè)定法和組蛋白DNA ELISA比色測(cè)定法。這樣的測(cè)定法可以使用例如細(xì)胞死亡檢測(cè)ELISA試劑盒(Roche, Palo Alto, CA)進(jìn)行。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供鑒定用于促進(jìn)組織再生的化合物的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括使PSC (或基本純的PSCs的群體)與測(cè)試化合物接觸，并評(píng)估所述測(cè)試化合物對(duì)于PSCs生長(zhǎng)和分化為前列腺組織、前列腺集落或功能性前列腺的作用。在具體的實(shí)施方案中，PSC表達(dá)⑶117。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC表達(dá)⑶117和⑶44。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC表達(dá)⑶117和⑶133。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC表達(dá)⑶117， CD44，和CD133。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC表達(dá)⑶117，⑶44，⑶133，和^^_1。在一些實(shí)施方案中，所述方法包括在缺乏測(cè)試化合物的情況下確定測(cè)試化合物對(duì)于PSCs的生長(zhǎng)和分化的作用從而提供關(guān)于測(cè)試化合物的作用的比較。用于確定化合物的生長(zhǎng)促進(jìn)作用的測(cè)定法見于實(shí)施例中。在另一個(gè)方面中，提供抑制PSC或PCSC的增殖的方法，所述方法包括將PSC或 PCSC暴露于CD117的拮抗劑或與CD117的拮抗劑接觸。在具體的實(shí)施方案中，所述PSC或 PCSC表達(dá)⑶117。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117和⑶44。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117和⑶133。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117，⑶44，和⑶133。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117，⑶44，⑶133， 禾口 Sea-I。本發(fā)明的另一個(gè)方面提供基于PSCs或PCSCs在患者的前列腺癌中存在與否治療前列腺癌的方法。預(yù)期其前列腺癌包含PSCs或PCSCs的患者對(duì)用抑制PSCs或PCSCs的增殖的化合物進(jìn)行的治療有響應(yīng)。因此，PSCs或PCSCs的存在與否可以用于確定抑制PSCs 或PSC^s的增殖的化合物是否應(yīng)該包括在患者的治療方案中。治療方案可以是初級(jí)治療方案(primary treatment regime)。PSCs或PSCSs的存在在預(yù)測(cè)前列腺癌是否有可能在患者中復(fù)發(fā)中是特別有用的，所述患者已經(jīng)具有明顯成功的初級(jí)治療方案。如果在前列腺癌中檢測(cè)到PSCs或PSCk的存在，那么預(yù)測(cè)所述患者可能經(jīng)歷前列腺癌的復(fù)發(fā)并且是用于輔助療法的候選物，所述輔助療法用抑制PSC^s的增殖，或預(yù)防PCSCs產(chǎn)生前列腺癌的化合物進(jìn)行。一種具體的實(shí)施方案提供治療患者中前列腺癌的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且如果患者的前列腺癌包含PSC或PCSC，對(duì)所述患者施用治療有效量的CD117拮抗劑。另一個(gè)實(shí)施方案提供用于治療患者中前列腺癌的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且如果所述患者的前列腺癌包含PSC或PCSC，則向所述患者施用治療有效量的CD133拮抗劑。另一個(gè)實(shí)施方案提供用于治療患者中的前列腺癌的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含 PSC或PCSC，并且如果所述患者的前列腺癌包含PSC或PCSC，則向所述患者施用治療有效量的CD44拮抗劑。另一個(gè)實(shí)施方案提供用于治療患者中的前列腺癌的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且如果所述患者的前列腺癌包含PSC或 PCSC，則向所述患者施用治療有效量的ka-Ι拮抗劑。另一實(shí)施方案提供治療患者中前列腺癌的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且如果所述患者的前列腺癌包含PSC或PCSC，向所述患者施用治療有效量的CD117拮抗劑和至少一種的⑶133拮抗劑、⑶44拮抗劑和/或ka-Ι拮抗劑的組合。
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本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及預(yù)測(cè)前列腺癌患者在結(jié)束用于治療前列腺癌的初級(jí)療法后，是否可能經(jīng)歷前列腺癌的復(fù)發(fā)。一個(gè)實(shí)施方案提供預(yù)測(cè)前列腺癌患者是否可能經(jīng)歷前列腺癌的復(fù)發(fā)的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC并且如果患者的前列腺癌包含PSC或PCSC，則預(yù)測(cè)所述患者可能經(jīng)歷復(fù)發(fā)。這種預(yù)測(cè)可以用于指導(dǎo)患者的進(jìn)一步治療并可以導(dǎo)致輔助療法的應(yīng)用。在一個(gè)實(shí)施方案中，在預(yù)測(cè)患者可能經(jīng)歷前列腺癌的復(fù)發(fā)的之后進(jìn)行包括向患者施用CD117拮抗劑的輔助療法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在預(yù)測(cè)所述患者可能經(jīng)歷前列腺癌的復(fù)發(fā)之后進(jìn)行包括向患者施用⑶133拮抗劑的輔助療法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在預(yù)測(cè)所述患者可能經(jīng)歷前列腺癌的復(fù)發(fā)后，進(jìn)行包括向患者施用CD44拮抗劑的輔助療法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，在預(yù)測(cè)所述患者可能經(jīng)歷前列腺癌的復(fù)發(fā)之后，進(jìn)行包括向患者施用ka-Ι拮抗劑的輔助療法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，預(yù)測(cè)患者可能經(jīng)歷前列腺癌的復(fù)發(fā)后，進(jìn)行輔助療法，所述輔助療法包括向患者施用治療有效量的⑶117拮抗劑和至少一種的⑶133拮抗劑、⑶44拮抗劑、和/或ka-Ι拮抗劑的組
口 O另一個(gè)實(shí)施方案提供用于預(yù)防患者中前列腺癌的復(fù)發(fā)的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且如果患者的前列腺癌包含PSC或PCSC則向所述患者施用治療有效量的CD117拮抗劑。另一個(gè)實(shí)施方案提供向治療前列腺癌的患者提供輔助療法的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且如果患者的前列腺癌包含PSC或PCSC，則向所述患者施用治療有效量的⑶117拮抗劑。另一個(gè)實(shí)施方案提供向治療前列腺癌的患者提供輔助療法的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且如果所述患者前列腺癌包含PSC或PCSC，則向所述患者施用治療有效量的CD133拮抗劑。另一個(gè)實(shí)施方案提供向治療前列腺癌的患者提供輔助療法的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且如果所述患者前列腺癌包含PSC或PCSC，則向所述患者施用治療有效量的⑶44拮抗劑。另一個(gè)實(shí)施方案提供向治療前列腺癌的患者提供輔助療法的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且如果所述患者前列腺癌包含PSC或PCSC，則向所述患者施用治療有效量的ka-Ι拮抗劑。另一個(gè)實(shí)施方案提供向治療前列腺癌的患者提供輔助療法的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC，并且向所述患者施用治療有效量的⑶117拮抗劑和至少一種的⑶133拮抗劑、⑶44拮抗劑、和/或Sca-I 拮抗劑的組合。另一種實(shí)施方案提供選擇前列腺癌患者用CD117拮抗劑進(jìn)行治療的方法，所述方法包括確定所述患者是否具有包含PSC或PCSC的前列腺癌，并且如果所述患者具有包含 PSC或PCSC的前列腺癌，選擇所述患者用CD117拮抗劑進(jìn)行治療。又一個(gè)實(shí)施方案提供選擇前列腺癌患者用CD117拮抗劑進(jìn)行輔助治療的方法，所述方法包括確定所述患者的前列腺癌是否包含PSC或PCSC并且如果所述患者的前列腺癌包含PSC或PCSC，選擇所述患者用⑶117拮抗劑進(jìn)行輔助治療。在上述方面的具體實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117和⑶44。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117 和CD133。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)⑶117，⑶44，和⑶133。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述PSC或PCSC表達(dá)CDl 17，⑶133，CD44，和Sca-I。
檢測(cè)標(biāo)記⑶117，⑶133，⑶44，和Sca-I的表達(dá)可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法進(jìn)行。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過確定標(biāo)記基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平檢測(cè)標(biāo)記的過量表達(dá)。mRNA轉(zhuǎn)錄的水平可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種方法，定量地或定性地進(jìn)行確定。mRNA轉(zhuǎn)錄的水平也可以通過檢測(cè)從mRNA產(chǎn)生的cDNA水平來直接或間接地確定。用于確定mRNA轉(zhuǎn)錄水平的示例性方法包括，但不限于PCR，實(shí)時(shí)定量RT-PCR和基于雜交的測(cè)定法，包括基于微陣列的測(cè)定法和基于濾器的測(cè)定法(filter-based assay)如RNA印跡。在其它實(shí)施方案中，標(biāo)記的表達(dá)通過確定標(biāo)記多肽表達(dá)的水平來檢測(cè)。標(biāo)記多肽的水平可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的某些方法定量地或定量地確定，所述方法包括基于抗體的檢測(cè)方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，在測(cè)試樣品中檢測(cè)標(biāo)記基因的表達(dá)包括使測(cè)試樣品與對(duì)標(biāo)記多肽特異的抗體接觸，并且通過檢測(cè)抗體與標(biāo)記多肽的結(jié)合確定測(cè)試樣品中的標(biāo)記多肽表達(dá)的水平(定量地或定性地)。在某些實(shí)施方案中，抗體與標(biāo)記多肽的結(jié)合可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種方法檢測(cè)，所述方法包括但不限于免疫組化、熒光激活細(xì)胞分選術(shù)、蛋白質(zhì)印跡、放射性免疫測(cè)定法、ELISA等。癌細(xì)胞的樣品，或測(cè)試樣品優(yōu)選地包含直接從前列腺癌腫瘤中取出的細(xì)胞，但是所述測(cè)試樣品還可以包含轉(zhuǎn)移性癌細(xì)胞、循環(huán)腫瘤細(xì)胞，或任何適合的鑒定標(biāo)記基因或多肽在癌癥中的擴(kuò)增或表達(dá)狀態(tài)的細(xì)胞樣品。在一些實(shí)施方案中，可以通過確定用于確定標(biāo)記表達(dá)的相同測(cè)試樣品中，或在來自將測(cè)試標(biāo)記表達(dá)的相同癌癥的樣品中持家基因(如肌動(dòng)蛋白家族成員)的表達(dá)，來產(chǎn)生對(duì)照。持家基因作用為比較對(duì)照，關(guān)于所述比較對(duì)照確定標(biāo)記基因的表達(dá)。在上述方面的具體實(shí)施方案中，CD117的拮抗劑是小分子拮抗劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述CD117的拮抗劑是拮抗劑抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，CD117的拮抗劑是可溶的⑶117受體或其變體。多種CD117激酶拮抗劑是本領(lǐng)域已知的。所述激酶拮抗劑包括，但不限于拮抗劑抗體和小分子拮抗劑例如，3-[2，4- 二甲基吡咯-5-基)亞甲基(methylidene)]-吲哚滿-2-酮("SU5416") ；5-[1，2_ 二氫-2-氧代-3H-吲哚-3-基亞基)甲基]_2，4_ 二甲基-IH-吡咯-3-丙酸(“SU6668”)；甲磺酸伊馬替尼(“STI571 ”，Gleevec Novartis)，馬來酸舒尼替尼(Sutent Pfizer)，3-苯基-IH-苯并呋喃并[3，2_c]吡唑(“ GTP-14564 ”)， 5-[(Z)-(5-氯-2-氧代-1，2-二氫-3H-吲哚-3-基亞基)甲基]N-[2-( 二乙基氨基)乙基]-2，4- 二甲基-IH-吡咯-3-羧酰胺(carboxamide) ("SUl 1652”) ,6,7- 二甲氧基 _3_ 苯基喹噁啉("AG 1四6”)，1，2_ 二甲基-6-(2-噻吩基)-咪唑并[5,4-g]喹喔啉("AGL 2043”)·和吲哚滿酮如3-[3-(2-羧乙基)-4-甲基吡咯_2_亞甲基(methylidenyl) ]-2-吲哚滿酮(“SU5402”)(見，例如，Bernard-Pierrot Q004)癌基因(Oncogene) 23 :9201-9211)。在上述方面的具體實(shí)施方案中，⑶133、⑶44或的拮抗劑是小分子拮抗劑。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，CD133，0044，或^^-1的拮抗劑是拮抗劑抗體。在另一個(gè)實(shí)施方案中，⑶133，⑶44，或ka-Ι的拮抗劑分別是⑶133，⑶44，或的變體。藥物組合物包含所述拮抗劑的治療制劑包括在內(nèi)，并且通過混合具有需要純度的活性成分和任選的生理可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑使用本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行制備(雷明頓藥物禾斗學(xué)(Remington' s Pharmaceutical Sciences) (20. sup. th edition)，A. Gennaro編
23輯，2000，Lippincott, Williams & ffilkins, Philadelphia, Pa.).?？山邮艿妮d體包括鹽水或緩沖劑如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗氧化劑包括抗壞血酸；低分子量(少于約 10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物如聚乙烯吡咯烷酮，氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA ；糖醇如甘露糖醇或山梨糖醇；形成鹽的平衡離子如鈉；和/或非離子表面活性劑如TWEEN ，PLUR0NICS ,或PEG。任選地，所述制劑包含藥用鹽、優(yōu)選地氯化鈉并且優(yōu)選地在約生理濃度包含藥用鹽。任選地，本發(fā)明的制劑可以包含藥用防腐劑。在一些實(shí)施方案中，防腐劑的濃度范圍是0.1到2.0%，典型地以ν/ν計(jì)。適合的防腐劑包括在藥物領(lǐng)域中已知的那些。芐醇、苯酚、間甲苯酚、羥苯甲酯和羥苯丙酯是優(yōu)選的防腐劑。任選地，本發(fā)明的制劑可以包含濃度為0. 005到0. 02%的藥用表面活性劑。本文制劑也可以包含超過一種活性化合物，如被治療的特定適應(yīng)癥所需要，優(yōu)選地是對(duì)彼此沒有不良影響具有補(bǔ)充活性的那些。所述分子適當(dāng)?shù)匾詫?duì)于意欲目的有效的量組合存在?；钚猿煞忠部梢园裨诶缤ㄟ^凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微囊劑中，例如分別在膠狀藥物遞送系統(tǒng)(例如，脂質(zhì)體，白蛋白微球體，微乳，納米顆粒和納米膠囊)或在微乳中的羥甲基纖維素或明膠-微囊劑和聚_(甲基丙烯酸甲酯)微囊劑。所述技術(shù)在雷明頓藥物科學(xué)(Remington' s Pharmaceutical Sciences)中公開,見上文。可以制備緩釋制劑。緩釋制劑的適合的實(shí)例包括包含抗體的固體疏水性聚合物的半透性基質(zhì)，所述基質(zhì)以成形的制品的形式存在，例如薄膜或微囊劑。緩釋基質(zhì)的實(shí)例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))，聚丙交酯(美國(guó)專利號(hào)3，773，919)，L-谷氨酸和.、.乙基-L-谷氨酸酯的共聚物，不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯，可降解的乳酸-羥基乙酸共聚物如LUPRON DEPOT (由乳酸-羥基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射的微球體)，和聚-D-(-)-3-羥丁酸。聚合物如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-羥基乙酸能夠釋放分子超過100天，而某些水凝膠則在更短的時(shí)間階段釋放蛋白。 當(dāng)包封的抗體仍舊在體內(nèi)較長(zhǎng)時(shí)間時(shí)，它們可能由于在37°C暴露于水分而變性或聚集，導(dǎo)致生物學(xué)活性的損失和免疫原性的可能變化。根據(jù)涉及的機(jī)制，可以設(shè)計(jì)合理的策略來進(jìn)行穩(wěn)定。例如，如果發(fā)現(xiàn)聚集機(jī)制是通過硫-二硫化物交換的分子間S-S鍵形成，那么穩(wěn)定可以通過修飾巰基殘基、從酸性溶液冷凍干燥、控制水分含量、使用適合的添加劑并且開發(fā)特定的聚合物基質(zhì)組合物來實(shí)現(xiàn)。根據(jù)已知方法，將如本文所述的拮抗劑，如CD117拮抗劑施用于人受試者，所述方法如作為推注(bolus)的靜脈內(nèi)施用或在一定時(shí)間階段內(nèi)通過持續(xù)輸注施用，通過肌內(nèi)、 腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)(intracerobrospinal)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑液內(nèi)、鞘內(nèi)、口服、局部或吸入途徑進(jìn)行施用。如果大量副作用或毒性與具體的拮抗作用相關(guān)，則局部施用可能是特別需要的。還可以將先體外后體內(nèi)(ex vivo)策略用于治療應(yīng)用。先體外后體內(nèi)策略包括用編碼抗體或抗體片段的多核苷酸轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)獲自受試者的細(xì)胞。接著，使轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞返回到受試者中。所述細(xì)胞可以是下述寬范圍類型細(xì)胞的任一種，包括，但不限于造血細(xì)胞 (例如骨髓細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、樹突細(xì)胞、T細(xì)胞或B細(xì)胞)、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、 內(nèi)皮細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞或肌肉細(xì)胞。
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在一個(gè)實(shí)例中，當(dāng)所述疾病或腫瘤定位允許，將治療化合物局部施用，例如通過直接注射施用，并且可以將注射周期性重復(fù)。還可以在外科手術(shù)切除腫瘤后，將拮抗劑全身性遞送給受試者或直接遞送到腫瘤細(xì)胞，例如遞送到腫瘤或腫瘤床中，從而預(yù)防或減少局部復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移。為了預(yù)防或治療疾病，本發(fā)明的拮抗劑的適合劑量(當(dāng)單獨(dú)使用或與一種或多種其它另外的治療劑組合)將取決于待治療的疾病類型，抗體的類型，疾病的嚴(yán)重性和進(jìn)程， 而不管抗體是用于預(yù)防還是治療目的、以前的療法、患者的臨床病史和對(duì)抗體的響應(yīng)，以及主治醫(yī)師的判斷。將抗體以一次或以一系列治療適當(dāng)?shù)厥┯糜诨颊?。根?jù)疾病的類型和嚴(yán)重性，約1 μ g/kg到20mg/kg (例如0. lmg/kg-15mg/kg)的抗體可以是施用于患者的起始候選劑量，而不管例如是通過一次或多次單獨(dú)施用還是通過持續(xù)輸注進(jìn)行施用。一種典型的每日劑量范圍可以在約1 μ g/kg到100mg/kg或更多，這取決于上述因素。對(duì)于在數(shù)日或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)的重復(fù)施用，取決于病況，治療通常將持續(xù)直到對(duì)疾病癥狀需要的抑制發(fā)生?？贵w的一個(gè)示例性劑量是在約0. 05mg/kg到約20mg/kg的范圍內(nèi)。因此，可以將約0. 5mg/kg, 2. Omg/kg, 4. Omg/kg, 10mg/kg, 15mg/kg,或20mg/kg的一個(gè)或多個(gè)劑量(或其任何組合)施用于患者。可以將所述劑量間歇性地施用，例如每周、每?jī)芍堋⒒蛎咳?例如，從而使所述患者接受約2到約20，或例如約6個(gè)劑量的抗體)施用?？梢蚤_始施用更高的負(fù)載劑量，隨后施用一劑或多劑更低的劑量。示例性的給藥方案包括施用約^ig/kg的起始負(fù)載劑量，隨后每周一次施用約ang/kg抗體的維持劑量。然而，其它劑量方案可以是有用的。該療法的進(jìn)程容易通過常規(guī)技術(shù)和測(cè)定法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。組合療法本發(fā)明的拮抗劑可以與具有抗癌性質(zhì)的第二化合物組合在藥物組合制劑中，或作為組合療法組合在給藥方案中。藥物組合制劑或給藥方案的第二化合物可以對(duì)組合中的抗體具有補(bǔ)充活性從而使它們不會(huì)對(duì)彼此存在不利的影響。所述第二化合物可以是抗體、化療劑、細(xì)胞毒性劑、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)抑制劑、抗激素劑、和/或保心藥。所述分子以對(duì)于意欲的目的是有效的量適當(dāng)?shù)亟M合存在。包含本發(fā)明化合物的藥物組合物也可以含有治療有效量的化療劑如微管蛋白-形成抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、DNA嵌入劑或DNA結(jié)合物。其它的治療方案可以與根據(jù)本發(fā)明鑒定的拮抗劑的施用組合。所述組合療法可以作為同時(shí)或順序方案進(jìn)行施用。當(dāng)順序施用時(shí)，組合可以以兩次或更多次施用進(jìn)行施用。 所述組合的施用包括使用單獨(dú)的制劑或單一藥物制劑的共同施用，和以任意順序的連續(xù)施用，其中存在兩種(或全部)活性劑同時(shí)發(fā)揮它們的生物學(xué)活性時(shí)的時(shí)期。如上討論，本發(fā)明的某些實(shí)施方案提供⑶117拮抗劑和⑶133拮抗劑、⑶44拮抗劑或ka-Ι拮抗劑的組合。另外的實(shí)施方案提供⑶117拮抗劑和超過一種⑶133拮抗劑、 ⑶44拮抗劑和/或ka-Ι拮抗劑的組合。組合療法的另外實(shí)例包括與化療劑的組合，所述化療劑如厄洛替尼(erlotinib) (TARCEVA Genentech/OSI Pharm.)、硼替佐米(bortezomib) (VELCADE ，Millenium Pharm.)、氟維斯群(fulvestrant) (FASL0DEX ，AstraZeneca)、sutent (SUl 1248，Pfizer)、 來曲唑(Ietrozole) (FEMARA Novartis)、PTK787/ZK 222584 (Novartis)、奧沙利鉬 (oxaliplatin) (Eloxatin ，Sanofi)、5_FU(5_ 氟尿嘧啶(5-fluorouracil))、亞葉酸(Ieucovorin)、雷帕霉素(Rapamycin)(西羅莫司(Sirolimus)、RAPAMUNE Wyeth)、拉帕替尼(Iapatinib) (TYKERB GSK572016, GlaxoSmithKline)、氯那法尼(Ionafarnib) (SCH 66336)、索拉非尼(sorafenib) (BAY43-9006,Bayer Labs.)和吉非替尼(gefitinib) (IRESSA AstraZeneca)、AG1478、AG1571 (SU 5271 ；Sugen)，燒化劑類(alkylating agents)，諸如塞替哌(thiotepa)和 CYTOXAN 環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)；烷基磺酸酯(alkyl sulfonates)，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；吖丙啶類(aziridines)，諸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)和烏瑞替哌(uredopa)；乙撐亞胺類 (ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三乙烯硫代憐酸胺(triethylenephosphoramide)、三乙撐硫代磷酉先胺(triethylenethiophosphoramide)禾口三輕甲蜜胺(trimethylomelamine)；聚乙 Μ^ζ (acetogenins) ((bullatacin)禾口(bullatacinone)) -M
樹堿(camptothecin)(包括合成類似物托泊替康(topotecan)；苔蘚抑素(bryostatin)； callystatin ;CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類似物)；隱藻素類(cryptophycins)(特別是隱藻素1 和隱藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成類似物，KW-2189 和 CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin) ；pancratistatin ；匍枝珊瑚醇 (sarcodictyin)；海綿素(spongistatin)；氮芥類(nitrogen mustards),諸如苯丁酸氮芥(chlorarmbucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、膽憐酉先胺(cholophosphamide)、 雌莫司汀(estramustine)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法倉(cāng)(melphalan)、新氮芥 (novembichin)、苯芥膽留酉享(phenesterine)、撥尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺 (trofosfamide)、尿啼唆氮芥(uracil mustard)；亞硝脲類(nitrosoureas),諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀 (Iomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素類，諸如烯二炔類抗生素類，加利車霉素(calicheamicin)，加利車霉素Y II和加利車霉素ω Il ；烯二炔蒽環(huán)類抗生素(dynemicin)，包括烯二炔蒽環(huán)類抗生素AWynemicin Α) ；二膦酸鹽類(bisphosphonates),諸如氯膦酸鹽(clodronate) ;±矣斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)發(fā)色團(tuán)和相關(guān)色蛋白烯二炔類抗生素發(fā)色團(tuán)、阿克拉霉素(aclacinomysins)、方文線菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來霉素(bleomycins)、放線菌素 C (cactinomycin)、carabicin、 洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、方文線菌素 D (dactinomycin)、柔紅霄素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6_ 重氣基-5-氧-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN 多柔比星(doxorubicin)(包括嗎啉代多柔比星 (morpho 1 ino-doxorubicin)、氛基嗎琳代多柔比星(cyanomorpho 1 ino-doxorubicin)、2-口比咯啉代多柔比星 0-pyrrolino-doxorubicin)和脫氧多柔比星(deoxydoxorubicin))、 表柔比星(印irubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、馬塞羅霉素 (marcellomycin)、絲裂霉素類(mitomycins)諸如絲裂霉素C、麥考酚酸(mycophenolic acid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、紫菜霉素(porfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑霉素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結(jié)核菌素 (tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)； 抗代謝物類，諸如甲氨喋呤(methotrexate)和5_氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物， 諸如二甲葉酸(denopterin)、甲氨喋呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達(dá)拉濱(f ludarabine)、6_巰基嘌呤 (mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物， 諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6_氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素類，諸如卡魯睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環(huán)硫雄醇 (epitiostanol)、美雄燒(mepitiostane)、辜內(nèi)酉旨(testolactone)；抗腎上腺類，諸如氛魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補(bǔ)充劑， 諸如亞口十酸(frolinic acid)；醋葡酸內(nèi)酉旨(aceglatone) ；aldophosphamide glycoside ； 5-氨基酮戊酸(aminolevulinic acid)；恩尿啼唆(eniluracil)；安口丫唆(amsacrine)； bestrabucil ；比生群(bisantrene)；依達(dá)曲夕少(edatraxate) ； defofamine ；秋 7_K il]月安 (demecolcine)；地口丫酉昆(diaziquone) ；elfornithine ；依禾lJSt 安(elliptinium acetate)； epothilone ；{衣托格魯(etoglucid)；石肖酸嫁(gallium nitrate) ；ψ Μ. (hydroxyurea)； 香菇多糖(Ientinan)；氯尼達(dá)明(Ionidainine)；美登木素生物堿類(maytansinoids), 諸如美登素(maytansine)禾口安絲菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)； 米托蒽酉昆(mitoxantrone)；莫哌達(dá)醇(mopidanmol)；尼曲吖啶(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；異丙嗪(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌 (losoxantrone ；鬼白酸(podophyllinic acid) ；2-乙基酉先月井(2-ethylhydrazide)； 丙卡巴胼(procartazine) ；PSK 多糖復(fù)合物(JHS天然產(chǎn)物，Eugene, OR)；雷佐生 (razoxane)；禾[I索新(rhizoxin)；西佐口南(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone) ；2，2，，2” -三氯三乙胺(2，2，， 2" -trichlorotriethylamine)；單端孢霉烯族化合物(trichothecenes)(尤其是 T-2 毒素、verracurin Α、桿孢菌素(roridin)A 禾口蛇形菌素(anguidine))；烏拉坦(urethan)； 長(zhǎng)春地辛(vindesine)；達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine) ；二溴甘露酉享(mitobronitol) ；二漠衛(wèi)矛酉享(mitolactol)；喊泊漠燒(pipobroman) ；gacytosine ； 阿糖胞苷(arabinoside) ( “Ara-C")；環(huán)磷酰胺；塞替派(thiotepa)；紫杉烷類化合物(taxoid)，例如紫杉醇(paclitaxel) (TAXOL ，Bristol—Myers Squibb Oncology, Princeton, N. J.)、無克列莫佛(Cremophor)的ABRAXANE 、紫杉醇的白蛋白改造的納米顆粒制劑(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois)、禾口 TAXOTERE 多西他塞(doxetaxel) ( Rhone -Poulenc Rorer, Antony, France)；苯丁酸氮芥 (chloranbucil) ；GEMZAR 吉西他濱(gemcitabine) ；6-硫鳥嘌呤(thioguanine)；巰嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；鉬類似物如順鉬(cisplatin)和卡鉬 (carboplatin)；長(zhǎng)春喊(vinblastine)；怕(platinum)；依托泊昔(etoposide) (VP-16)； 異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長(zhǎng)春新堿(vincristine)；NAVELBINE, 長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)；諾安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)； 依達(dá)曲沙(edatrexate)；道諾霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；希羅達(dá) (xeloda)；伊本膦酸鹽(ibandronate) ；CPT-11 ；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS 2000 ；二氟甲基鳥氛酸(difluoromehtylornithine) (DMFO)；類視黃酸類(retinoids)如視黃酸(retinoic acid)；卡培他濱(capecitabine)；和上述任一種的藥用鹽，酸或衍生物。所述組合療法還包括(i)抗激素劑，其作用于調(diào)節(jié)或抑制激素對(duì)腫瘤的作用如抗-雌激素和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMs)，包括，例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX 他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4_羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、keoxifene、LY117018、奧那司酮(onapristone)和 FAREST0N ·托瑞米芬(toremifene) ； (ii)抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，其調(diào)節(jié)腎上腺中的雌激素產(chǎn)生，如例如，4 (5)-咪唑、氨魯米特(aminoglutethimide)、MEGASE 醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、AR0MASIN ⑧益西美坦(exemestane)、福美坦(formestanie)、 法倔唑(fadrozole)、RIVIS0R 伏氯唑(vorozole)、FEMARA 來曲唑(Ietrozole) 和ARIMIDEX 阿那曲唑(anastrozole) ； (iii)抗-雄激素如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(ni lutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙立德(Ieuprolide)和戈舍瑞林 (goserelin)；以及曲沙他濱(troxacitabine) (1，3_ 二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；(iv) 芳香酶抑制劑；(ν)蛋白激酶抑制劑；(vi)脂質(zhì)激酶抑制劑；(vii)反義寡核苷酸，特別是抑制在涉及異常細(xì)胞增殖的信號(hào)傳導(dǎo)途徑中基因的表達(dá)的那些，如例如I3KC-Ci，Ralf和 H-Ras ； (viii)核酶如VEGF表達(dá)抑制劑(例如，ANGIOZYME 核酶)和HER2表達(dá)抑制劑； (ix)疫苗如基因治療疫苗，例如ALLOVECTIN 疫苗，LEUVECTIN 疫苗，和VAXID 疫苗； PROLEUKIN rIL-2 ；LURTOTECAN 拓?fù)洚悩?gòu)酶 1 抑制劑；ABARELIX rmRH ； (χ)抗生血管藥劑如貝伐珠單抗(AVASTIN ，Genentech)；和(xi)上述任一種的藥用鹽、酸或衍生物。關(guān)于所述化療劑的制備和給藥時(shí)間表可以根據(jù)生產(chǎn)商的說明書使用或由技術(shù)人員根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定。關(guān)于所述化療法的制備和給藥時(shí)間表也在Chemotherapy Service, (1992)Ed.，Μ. C. Perry, Williams & Wilkins，Baltimore, Md 中進(jìn)行描述。組合療法可以提供“協(xié)同性”并證實(shí)“協(xié)同作用”，即一起使用活性成分時(shí)獲得的作用大于由單獨(dú)使用化合物獲得的作用的總和。當(dāng)活性成分(1)共同配制和施用或在組合的單位劑量制劑中同時(shí)遞送；(2)交替地或平行地作為單獨(dú)的制劑遞送；或( 通過一些其他方案時(shí)，獲得協(xié)同作用。當(dāng)在交替療法中遞送時(shí)，當(dāng)順序施用或遞送所述化合物(例如通過在單獨(dú)的注射器中不同的注射)時(shí)，獲得協(xié)同作用。一般地，在交替療法過程中，每種活性成分的有效劑量順序地，即連續(xù)地進(jìn)行施用，而在組合療法中，將兩種以上的活性成分的有效劑量一起施用。制品和試劑盒本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案是包含用于治療癌癥的物質(zhì)的制品。所述制品包含容器和在容器上或與容器一起的標(biāo)簽或包裝說明書(package insert) 0適合的容器包括，例如，瓶子、玻璃小瓶、注射器等。所述容器可以由各種材料諸如玻璃或塑料制成。容器裝有對(duì)于所述病癥的治療有效的組合物，并且可以具有無菌的取用口(例如，所述容器可以是具有可被皮下注射針刺穿的塞子的靜脈溶液袋或玻璃小瓶)。組合物中至少一種活性劑是本發(fā)明的多特異性抗體或抗體片段抗體。標(biāo)簽或包裝說明書標(biāo)明該組合物用于治療特定的病癥。標(biāo)簽或包裝說明書還包括向患者施用該組合物的說明書。也考慮了包含本文描述的聯(lián)合療法的制品和試劑盒。包裝說明書是指常規(guī)地在治療產(chǎn)品的商業(yè)化包裝中包含的說明書，其含有關(guān)于適應(yīng)癥、用法、劑量、施用、禁忌癥和/或關(guān)于使用此類治療產(chǎn)品的警告的信息。在一個(gè)實(shí)施方案中，包裝說明書標(biāo)明該組合物用于治療前列腺癌。在另一個(gè)實(shí)施方案中，包裝說明書標(biāo)明該組合物用于治療如本文所述包含PSC或PCSC的前列腺癌。另外，制品還可以包括第二容器，其中裝有藥用緩沖液，如抑菌性注射用水 (BffFI)、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液和右旋糖溶液。它可以進(jìn)一步包括從商業(yè)和用戶立場(chǎng)出發(fā)的其它需要的材料，包括其它的緩沖劑、稀釋劑、濾器、針和注射器。標(biāo)簽或包裝說明書可以提供所述組合物的描述以及關(guān)于意欲的體外或診斷應(yīng)用的說明書。認(rèn)為前文的書面描述足以使本領(lǐng)域技術(shù)人員實(shí)施本發(fā)明。提供下述實(shí)施例僅為了說明用途，且無意以任何方式限制本發(fā)明的范圍。事實(shí)上，根據(jù)前文描述，對(duì)本文顯示和描述的那些以外的對(duì)本發(fā)明的多種修改對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是明顯的并落入所附權(quán)利要求的范圍。除非另有說明，實(shí)施例中提及的商業(yè)上可獲得的試劑根據(jù)生產(chǎn)商的說明書使用。 在以下實(shí)施例中及在整個(gè)說明書中以ATCC登記號(hào)鑒定的那些細(xì)胞的來源是美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection，Manassas，VA)。除非另有說明，本發(fā)明使用重組DNA技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)程序，如上文描述的和下述教科書中的那些=Sambrook等人， 見上文；Ausubel 等人，Current Protocols in Molecular Biology (現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方案)(Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y. , 1989) ；Innis 等人，PCR Protocols :A Guide to Methods and Applications (PCR 實(shí)驗(yàn)方案方法和應(yīng)用指南)(Academic Press (學(xué)術(shù)出版社)，Inc. :N. Y.，1990) Harlow 等人，Antibodies :A Laboratory Manual (抗體實(shí)驗(yàn)室手冊(cè))(冷泉港出版社(Cold Spring Harbor Press) 冷泉港，1988) ;Gait, Oligonucleotide Synthesis (寡核苷酸合成)(IRL Press :0xford, 1984) ；Freshney, Animal Cell Culture (動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng))，1987 ；Coligan 等人，Current Protocols in Immunology (現(xiàn)代免疫學(xué)學(xué)實(shí)驗(yàn)方案)，1991。
實(shí)施例實(shí)施例1-方法動(dòng)物懷孕的SD大鼠和C57BL/6雄性小鼠(出生后4天和8_10周齡)購(gòu)自Charles River實(shí)驗(yàn)室，無胸腺nu/nu雄性小鼠(6-8周齡)購(gòu)自Harlan Sprague Dawley,并且 WBB6F1/J雄性小鼠(野生型或W/Wv ；4-8周齡)購(gòu)自The Jackson實(shí)驗(yàn)室。W等位基因編碼CDl 17基因，其中跨膜結(jié)構(gòu)域和激酶結(jié)構(gòu)域的氨基端缺失，而Wv等位基因編碼具有單點(diǎn)突變的⑶117基因?？贵w抗體購(gòu)自下列來源-BD Biosciences :APC_綴合的CD117(抗-小鼠克隆2B8 ； 抗-人克隆YB5.B8)，PE-Cy7-綴合的克隆D7)，Ki67(克隆B56)，E-鈣黏著蛋白(克隆36)，活性胱天蛋白酶3 (多克隆557035) ；eBioscience =PE-綴合的CD133 (抗-小鼠克隆13A4), APC-Alexa Fluor 750_綴合的CD44(抗-小鼠/人克隆IM7)，功能封閉的 CD117(克隆 ACK2) ；Miltenyi Biotec :PE_ 綴合的 CD133 (抗-人克隆 AC133) ；Abcam CK18(克隆 C-04)，H-2kb (克隆 ER-HR52)，CD117 (多克隆 ab956) ；Chemicon 小鼠特異性 β 1整聯(lián)蛋白(克隆MBl. 2)，突觸小泡蛋白(克隆SY38) ；R&D系統(tǒng)CDl 17 (克隆180627)； Covance :CK14 (多克隆 AF64) ；AbD Serotec :CD31(克隆 2H8) ；Sigma α -SMA (克隆 1Α4)； Santa Cruz Biotechnology :probasin (M-18), p63 ( 4A4) ；Invitrogen
小泡蛋白(多克隆Z66)，綴合于Alexa Fluor· 488或594的二級(jí)抗體.Nkx3. 1多克隆抗體由 C. Abate-Shen(UMDNJ-Robert Wood Johnson Medical School, New Jersey)惠贈(zèng)。UGM基質(zhì)細(xì)胞制備.已經(jīng)在前面描述了尿殖竇間充質(zhì)(UGM)分離方法18。簡(jiǎn)言之，將來自懷孕SD大鼠的E18胚胎處死，并且收集尿殖竇。在從尿殖竇上皮分離UGM后，用在補(bǔ)充了 10%胎牛血清，2mM谷氨酰胺，IOOU ml—1青霉素和IOOmg ml—1鏈霉素的DMEM中的Img ml—1膠原酶/ 分散酶(Roche)在37°C將UGM消化60分鐘，在前列腺培養(yǎng)基(補(bǔ)充了 10%胎牛血清，2mM 谷氨酰胺，IOyg mr1 胰島素，5. 5μ g mL—1 轉(zhuǎn)鐵蛋白，6. 7ng mL—1 硒，InM 睪酮(Innovative Research of America(美國(guó)創(chuàng)新研究))，IOOU πιΓ1 青霉素，禾口 IOOmg πιΓ1 鏈霉素的 DMEM) 中洗滌2次，并在相同的培養(yǎng)基中，在包被了 10 μ g πιΓ1的I型膠原蛋白的M孔板中培養(yǎng)。 將UGM細(xì)胞通過胰蛋白酶消化在匯合狀態(tài)下傳代，并在體外培養(yǎng)多達(dá)1周。前列腺細(xì)胞制備.將新鮮切下的人前列腺樣本(良性前列腺過度增生(BPH)和良性非-BPH樣本，通過病理學(xué)家的肉眼區(qū)分；濕重在l_3g之間)獲自Bio-options Inc.和The University of California, San Francisco，根據(jù)聯(lián)邦和州政府指導(dǎo)來自知情的患者。將人和小鼠的前列腺切碎，置于補(bǔ)充了 10%胎牛血清，2mM谷氨酰胺，IOOU ml—1青霉素和IOOmg ml—1鏈霉素的 DMEM中，用Img πιΓ1膠原酶/分散酶在37°C消化90分鐘，伴隨攪拌，并通過70 μ m濾器。體內(nèi)系列分離/移植.對(duì)于CD117+細(xì)胞的次級(jí)移植，將原代移植物進(jìn)行磁力分選(每個(gè)原代移植物獲得 49，000個(gè)離解的細(xì)胞，其中CD117+細(xì)胞構(gòu)成19 %的磁力分選的細(xì)胞)，并將分選的細(xì)胞(每個(gè)移植物10，000個(gè)細(xì)胞)與UGM基質(zhì)細(xì)胞(每個(gè)移植物250，000個(gè)細(xì)胞) 混合。對(duì)于CD117+細(xì)胞的三級(jí)移植，將次級(jí)移植物進(jìn)行磁力分選(每個(gè)次級(jí)移植物獲得 40，000個(gè)離解的細(xì)胞，其中CD117+細(xì)胞構(gòu)成11 %磁力分選的細(xì)胞)，并將分選的細(xì)胞0，200個(gè)細(xì)胞/移植物)與UGM基質(zhì)細(xì)胞050，000個(gè)細(xì)胞/移植物)混合。關(guān)于 LirTka-Γ⑶133+⑶44+CD117+細(xì)胞的次級(jí)移植，通過FACS分選原代移植物(每個(gè)次級(jí)移植物獲得 31，000個(gè)離解的細(xì)胞，其中1^11-&3-1+^133+0044+^117+細(xì)胞構(gòu)成0. 02%的有活力的FACS-分選的細(xì)胞)。將分選的細(xì)胞(15個(gè)細(xì)胞/移植物)與UGM基質(zhì)細(xì)胞Q50，000 細(xì)胞/移植物)混合。所有的系列移植移植物在植入后12周收集。在具有Coolpix 4300 數(shù)碼照相機(jī)(Nikon)的SMZ 800解剖顯微鏡(Nikon)上獲得肉眼(gross)移植物圖像。RNA 分離和 Q-RT-PCR.收集來自8-10周齡C57BL/6小鼠的前列腺并撥開以延伸細(xì)管。為了比較前列腺區(qū)，將每個(gè)前列腺葉分為遠(yuǎn)側(cè)/中間/近側(cè)區(qū)域。為了比較前列腺葉，將每個(gè)前列腺分為背葉/側(cè)葉/腹葉/前葉。使用RNeasy Mini試劑盒^jiagen)分離總的RNA并用Power SYBR Green (Applied Biosystems (應(yīng)用生物系統(tǒng)))使用下列引物組進(jìn)行Q-RT-PCR Sca-1,5 ‘ -ATGGACACTTCTCACACTACAAAG-3‘ (SEQ ID N0:1)和 5' -TCAGAGCA AGGTCTGCAGGAGGACTG-3 ‘ (SEQ ID NO 2) ；CD44,5 ‘ -AATTCCGAGGATTCATCCCA-3 ‘ (SEQ ID NO 3)and 5 ‘ -CGCTGCTGACATCGTCATC-3 (SEQ ID NO 4) ；CD49b, 5' -CCGGCATACGAAAGAATTGG-3‘ (SEQ ID NO :5)and 5' -GAAGAGCTGAGGGTTATGT-3‘ (SEQ ID NO 6) ；CD49f, 5 ‘ -GTGGCCCAAGGAGATTAGC-3 ‘ (SEQ ID NO 7) and 5 ‘ -GTTGACGCTGCAGTTGAGA-3 ‘ (SEQ ID NO 8) ；CD 133， 5' -ACCAACACCAAGAACAAGGC-3‘ (SEQ ID NO :9)and 5' -GGAGCTGACTTGAATTGAGG-3 (SEQ ID NO 10) ；Bcl2，5 ' -ATGTGTGTGGAGAGCGTCAAC-3 ' (SEQ ID NO 11) and 5 ' -AGACA GCCAGGAGAAATCAAAC-3 ' (SEQ ID NO 12) ；TERT,5 ' -ATGGCGTTCCTGAGTATG-3 ' (SEQ ID NO :13)and 5 ' -TTCAACCGCAAGACCGACAG-3 ' (SEQ ID NO 14) ；p63, 5' -TTGTACCTGGAAAACAATG-3' (SEQ ID NO 15)and 5' -TCGAAGCTGTGTGGGCCCGGG-3(SEQ ID NO 16) ；CK14,5 ' -GACTTCCGGACCAAGTTTGA-3 ' (SEQ ID NO: 17) an d 5 ' - CTTGAGG CT CT CAA T C TG C-3 ' (SEQ ID NO 1 8)； CK18, 5 ' -ACTCCGCAAGGTGGTAGATG-3 ' (SEQ ID NO 1 9) and 5 ' -GCCTCGATTTCTGTCTCCAG-3 ' (SEQ ID NO :20) ;CD24，5 ' -TAAAGGACG CGTGAAAGGTTTGA-3 ' (SEQ ID NO :21) and 5 ' -GACAAAATGGGTCTCCATTCCG CAC-3 ' (SEQ ID NO :22) ;CD34，5 ' -ATGCAGGTCCACAGGGACACG-3 ' (SEQ ID NO 23) and 5 ' -CT GT CC TG AT AG AT C AAGT AG-3 ' (SEQ ID NO: 24) ； CD 1 1 7,5 ' -GACGCAACTTCCTTATGATC-3 ' (SEQ ID NO 25) and 5 ' - TGGTTTGA G C A T C TT CA C GG - 3 ' (SEQ ID NO 2 6 )； S 1 u g , 5 ' -TTTCTCCAGACCCTGGCTGCT-3 ' (SEQ ID NO 2 7) and 5 ' -TTTTCCCCAGTGTGAGTTCTA-3 ' (SEQ ID NO :28) ；GAPDH, 5' -ACTGGCATGGCCTTCCG-3' (SEQ ID NO 29)and 5' -CAGGCGGCACGTCAGATC-3' (SEQ ID NO :30)。使用Δ Ct方法將基因表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)化為GAPDH。流式細(xì)胞術(shù)將前列腺細(xì)胞(非譜系消減的)用0. 1% Triton X-100進(jìn)行透化處理，用一級(jí)抗體(CK14，CK18，APC-綴合的 CD117)和二級(jí)抗體(Alexa Fluor· 488 或 594)染色，并在 LSR-II流式細(xì)胞儀(Becton Dickinson)上分析。體外集落形成將來自8-10周齡的C57BL/6小鼠的前列腺細(xì)胞磁力分選為⑶117v_級(jí)分，以 8，000細(xì)胞/10(^1 3mg πιΓ1的I型膠原蛋白重新懸浮在DMEM中，將其在37°C置于平底96 孔板中1小時(shí)，并覆蓋補(bǔ)充了 15ng πιΓ1的表皮生長(zhǎng)因子(Roche)的前列腺培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基每48小時(shí)更換，并在7天后評(píng)估集落形成。先體外后體內(nèi)的前列腺培養(yǎng)物收集新生后4天的C57BL/6小鼠前列腺，并將其置于8 μ m孔徑的細(xì)胞培養(yǎng)插入物 (insert) (BD Falcon )上，并將插入物置于包含300 μ 1補(bǔ)充了 0. 5%葡萄糖，2mM谷氨酰胺，IOyg mr1 胰島素，5. 5yg mL—1 轉(zhuǎn)鐵蛋白，6. 7ng ι Γ1 硒，100U ml—1 青霉素，IOOmg πιΓ1
31鏈霉素，和25ng ml—1兩性霉素B(fungizone)的DMEM/F-12的M孔板中。還使用補(bǔ)充了功能-封閉的抗-⑶117抗體05 μ g ml—1)的培養(yǎng)基。更換培養(yǎng)基，并每48小時(shí)獲得圖像， 在10天后收集前列腺。在具有Retiga Exi數(shù)字照相機(jī)(QImaging)的MZ16FA解剖顯微鏡 (Leica)上獲得圖像。使用MetaMorph 軟件(Molecular Devices (分子裝置))對(duì)前列腺區(qū)域的凈生長(zhǎng)進(jìn)行量化。對(duì)8天前列腺的肉眼圖像進(jìn)行分支點(diǎn)量化。閹割和雄激素替代關(guān)于微陣列和Q-RT-PCR分析使用8_10周齡的C57BL/6小鼠。在第O天，對(duì)小鼠進(jìn)行閹割。在閹割后3和14天，收集來自子集(subset)或小鼠的前列腺。在閹割后第14 天，植入睪酮丸劑(15mg/丸劑/小鼠)。在第17天(激素替代后3天)，收集前列腺。使用RNeasy Mini試劑盒分離總的RNA，并將M0E430v2 Affymetrix 芯片用于微陣列分析。 為了在體內(nèi)前列腺再生過程中評(píng)估CD117功能使用8周齡的C57BL/6小鼠。在第O天， 閹割小鼠。在閹割后第12天，將抗-豚草對(duì)照抗體(在PBS中的IOmg kg—1)或功能封閉的抗-⑶117抗體(IOmg kg—1在PBS中)通過i. p.注射施用。在閹割后第14天，植入睪酮丸劑(15mg/丸劑/小鼠)。在第15天(激素替代后1天)，施用抗體治療。在第19天(激素替代后5天)，收集前列腺，對(duì)其進(jìn)行稱重，處理用于組織學(xué)分析。將前列腺重量表示為在閹割前列腺后14天與對(duì)照相比的凈增加。免疫組化.將OCT冷凍的組織切成8μπι的切片，固定在4%低聚甲醛(關(guān)于CK14，CK18， CD117，突觸小泡蛋白，probasin, β 1整聯(lián)蛋白，H_2kb，CD31，SMA)或甲醇丙酮(1 1 vol/vol ；關(guān)于E-鈣黏著蛋白，激活的胱天蛋白酶3，Κ 67, Nkx3. 1)中，并用一級(jí)抗體溫育 45分鐘，用次級(jí)抗體溫育30分鐘。將人前列腺樣本固定在福爾馬林中，切成6 μ m的切片，并用BD RetrievagenA(BD Biosciences)進(jìn)行抗原回收。關(guān)于特異性對(duì)照，使用物種-匹配的一級(jí)抗體。在具有ORCA-ER數(shù)字照相機(jī)(Hamamatsu)的Axioplan 2成像顯微鏡(kiss) 上獲得圖像。關(guān)于先體外后體內(nèi)的前列腺，通過分別評(píng)估至少600，400，和1，200個(gè)細(xì)胞來量化關(guān)于CK14/CK18，Ki67，和E-鈣黏著蛋白是陽性的細(xì)胞的百分比。關(guān)于在體內(nèi)再生的前列腺，通過分別評(píng)估至少800和2，500個(gè)細(xì)胞來量化關(guān)于CK14/CK18和Ki67是陽性的細(xì)胞的百分比。激光捕獲顯微切割和基于PCR的基因分型將單細(xì)胞來源的移植物切成8μπι的切片，置于金屬構(gòu)架膜(metal frame membrane)載玻片(Molecular Machines & hdustries)上，并用小鼠-特異性 β 1 整聯(lián)蛋白和CD31染色。在移植物中，用Nikon E2000 CellCut激光捕獲顯微解剖刀(laser capture microdissector) (Molecular Machines & Industries)分離 β 整聯(lián)蛋白 7 CD31—細(xì)胞。關(guān)于^ !！廣+細(xì)胞對(duì)照，分離在移植物內(nèi)的大鼠基質(zhì)細(xì)胞(β 1整聯(lián)蛋白7 ⑶3Γ)。關(guān)于i^oxnl+A細(xì)胞對(duì)照，分離鄰近移植物的無胸腺nu/nu腎細(xì)胞(β 整聯(lián)蛋白+)。將捕獲的細(xì)胞用PicoPure DNA提取試劑盒(Molecular Devices)裂解，并進(jìn)行基于 PCR 的基因分型(http://jaxmice. jax.org/pub_cgi/protocols/protocols· sh) ο 用關(guān)于 Foxnl 的引物(5 ‘ -GGCCCAGCAGGCAGCCCAAG-3 ‘ (SEQ ID NO 31)和 5' -AGGGATCTCCTCAAAGGCTTC-3 ‘ (SEQ ID NO :3 通過 PCR 擴(kuò)增基因組 DNA，并將其用 BsaJI消化，在4%瓊脂糖凝膠上運(yùn)行。未消化的PCR產(chǎn)物是168bp ；消化的R)Xnlv+PCR產(chǎn)
32物提供了 90bp,58bp,^P 20bp 片段；消化的 i^oxnl+PCR 產(chǎn)物提供了 llObp，90bp，58bp，和 20bp片段。缺失IlObp產(chǎn)物指示基因組DNA來自R)xnlv+(野生型)細(xì)胞。PCR對(duì)照反應(yīng)包括水(陰性對(duì)照)和野生型小鼠基因組DNA (陽性對(duì)照)。共焦和單細(xì)胞顯微鏡檢查掃描共焦圖像并且用LSM 510 META共焦顯微鏡(kiss)獲得所述共焦圖像。在具有 Cascade Photometries 數(shù)字照相機(jī)(Roper Scientific)的 Eclipse TE300 倒置顯微鏡(Nikon)上獲得單細(xì)胞圖像。有限稀釋分析使用在'statmod'軟件包中的'limdil'功能進(jìn)行有限稀釋分析(http:// bioinf. wehi. edu. au/software/1 imdi 1/index, html)。使用 95%的置信區(qū)間。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析通過雙尾斯氏t檢驗(yàn)評(píng)估組之間的差異。將少于0. 05的P值認(rèn)為是顯著的。體內(nèi)前列腺產(chǎn)生在以前描述了前列腺產(chǎn)生測(cè)定法17’18。關(guān)于⑶117+細(xì)胞的原代移植，將來自8-10 周齡的C57BL/6小鼠的前列腺離解，并且用抗-小鼠⑶117微珠(Miltenyi Biotec)磁力分選為⑶117+級(jí)分(每個(gè)前列腺獲得 500，000個(gè)離解的細(xì)胞，其中⑶117+細(xì)胞構(gòu)成7%的磁力分選的細(xì)胞，其中17. 5 士 2. 4% (n = 10)是有活力的，如通過流式細(xì)胞術(shù)所確定的)。將分選的細(xì)胞(100，000細(xì)胞/移植物)與在;3mg πιΓ1 I型膠原蛋白(20 μ 1/ 移植物)UGM基質(zhì)細(xì)胞050，000細(xì)胞/移植物)混合，在;TC溫育1小時(shí)從而使膠原蛋白膠凝，并用前列腺培養(yǎng)基覆蓋。在3°C過夜溫育后，將膠原蛋白凝膠以及皮下90天的緩慢釋放睪酮的丸劑(12. 5mg/丸劑/小鼠；Innovative Research of America(美國(guó)創(chuàng)新研究))移植在6-8周齡的無胸腺nu/nu小鼠的腎被膜下。在植入后8周收集移植物。對(duì)于Lin-Sca-Γ⑶133+⑶44+CD117+細(xì)胞的原代移植，通過FACS分選前列腺，并將分選的細(xì)胞 (1，300細(xì)胞/移植物)與UGM基質(zhì)細(xì)胞(250，000細(xì)胞/移植物)混合。將移植物在植入后12周收集。單細(xì)胞FACS和體內(nèi)前列腺產(chǎn)生將方法的詳情描述在實(shí)施例8中。將來自8-10周齡的C57BL/6小鼠的前列腺進(jìn)行解離，并使用小鼠譜系細(xì)胞消減試劑盒(Mouse Lineage Cell Depletion Kit) (Miltenyi Biotec)以及生物素綴合的抗小鼠CD-31單克隆抗體(BD Biosciences ；克隆390)進(jìn)行譜系消減。用FACSAria流式細(xì)胞儀(Becton Dickinson)進(jìn)行FACS。用單色陽性對(duì)照進(jìn)行補(bǔ)償調(diào)節(jié)。將單細(xì)胞分選到包含20ml的;3mg ml21的I型膠原蛋白的Microtest U底96孔板(BD Falcon)中。檢查來自單細(xì)胞FACS的共127個(gè)單獨(dú)的細(xì)胞，其中證實(shí)106個(gè)孔包含來自6個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的有活力的單細(xì)胞。實(shí)施例2-鑒定前列腺干細(xì)胞標(biāo)記小鼠的前列腺是由四對(duì)葉(背葉/側(cè)葉/腹葉/前葉)組成的分支導(dǎo)管網(wǎng)絡(luò) (branched ductal network)，其中每個(gè)葉相對(duì)于尿道被分為三個(gè)區(qū)(遠(yuǎn)側(cè)/中間/近側(cè)；圖 1) "ο將野生型前列腺解剖為遠(yuǎn)側(cè)/中間/近側(cè)區(qū)域并且進(jìn)行定量逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Q-RT-PCR)以鑒定干細(xì)胞標(biāo)記12 。四種細(xì)胞表面標(biāo)記6ca-l，CD44，CD49bjPCD133)， 所有已知的PSCs標(biāo)記2_6’8，以及三種細(xì)胞內(nèi)干細(xì)胞標(biāo)記(Bcl2，端粒末端轉(zhuǎn)移酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)，和ρ6!3)在近側(cè)區(qū)域顯示優(yōu)先的表達(dá)(圖2和圖3a/3b)，由此證實(shí)該測(cè)定系統(tǒng)的有效性。CD44，CD49b, CD133, Bcl2, TERT，和 p63 都是前列腺基底標(biāo)記(basal marker)的事實(shí)3_5’8’15’16提示基底標(biāo)記，相對(duì)于腺腔標(biāo)記(luminal markers)可以以更高的水平在近側(cè)區(qū)域中表達(dá)。與此相一致，基底標(biāo)記細(xì)胞角蛋白14(CK14)在近側(cè)區(qū)域中顯示優(yōu)先表達(dá)，而關(guān)于腺腔標(biāo)記CK18則觀察到相反的模式。這些數(shù)據(jù)支持PSCs可以組成基底細(xì)胞的亞群，如以前所提議的8’9。評(píng)估了在以前沒有報(bào)道用于鑒定正常PSCs的干細(xì)胞表面標(biāo)記(⑶24，⑶34，和 ⑶117)的表達(dá)水平。⑶34和⑶117，而不是⑶對(duì)主要在近側(cè)區(qū)域中表達(dá)。因?yàn)榕c⑶34比較，⑶117顯示了在近側(cè)和遠(yuǎn)側(cè)區(qū)域之間更大的差異表達(dá)，⑶117作為潛在的PSC標(biāo)記而受到關(guān)注。免疫染色證實(shí)具有主要的近側(cè)表達(dá)模式的基底⑶117+CK14+群。然而，還在近側(cè)區(qū)域中觀察到⑶117+CK14_群，隨后進(jìn)行分析鑒定腺腔⑶117+CK18+群。用關(guān)于CK14，CK18， 和⑶117的三重標(biāo)記進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。盡管⑶117+細(xì)胞在基底區(qū)室中富集，這些發(fā)現(xiàn)表明 ⑶117+細(xì)胞并不是專門定位于基底或腺腔區(qū)室的。而且，⑶117表達(dá)沒有局限于特定的前列腺葉。相反，⑶117以及⑶44，⑶49b和⑶133在所有的4對(duì)葉中進(jìn)行表達(dá)，在前列腺背葉中檢測(cè)到主要的表達(dá)(圖3a和北)。因此，⑶117顯示類似于已知PSC標(biāo)記的表達(dá)圖譜。盡管正常的PSCs是不依賴雄激素的，并且在閹割過程后存活，它們?nèi)耘f保持雄激素-響應(yīng)性并且在激素替代后實(shí)現(xiàn)前列腺的再生、如果正常的PSCs表達(dá)⑶117，預(yù)期⑶117 表達(dá)在閹割后增加(由于干細(xì)胞富集)并且在激素替代后減少(由于分化細(xì)胞擴(kuò)增)。事實(shí)上，⑶117，CK14和⑶44，而不是⑶對(duì)顯示這種模式(圖4)。這些發(fā)現(xiàn)還表明⑶117顯示與正常PSC標(biāo)記相容的表達(dá)圖譜。實(shí)施例3-關(guān)于PSCs富集CDl 17+群為了提供關(guān)于PSCs富集⑶117+群的功能性證據(jù)，通過磁珠分選制備來自解離的成熟C57BL/6前列腺的⑶117v_級(jí)分，并且通過Q-RT-PCR證實(shí)富集(圖幻。在體外進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的前列腺集落形成測(cè)定法13。CDl 17+細(xì)胞，而不是CDl 17_細(xì)胞產(chǎn)生許多包含腺腔的集落。 盡管這種體外測(cè)定法提示⑶117+群包含PSCs，⑶117+細(xì)胞在體內(nèi)產(chǎn)生前列腺的能力是必要的干細(xì)胞表型評(píng)估。使用體內(nèi)前列腺產(chǎn)生系統(tǒng)17’18，將來自C57BL/6小鼠供體的CDldl 分與大鼠胚胎尿殖竇間充質(zhì)(UGM)基質(zhì)細(xì)胞組合并且植入在無胸腺nu/nu小鼠宿主的腎被膜下。盡管CD117_細(xì)胞在腎被膜下仍舊是有活力的，CD117_移植物是小的，不透明的，并且它們僅在不能產(chǎn)生前列腺上與UGM細(xì)胞的移植物類似(前列腺產(chǎn)生頻率，η = 1/10)。與此相反，⑶117+移植物是大的、血管化的，并且是半透明的(前列腺產(chǎn)生頻率，η = 10/12)。 ⑶117+移植物的組織學(xué)檢查揭示關(guān)于由基底(CK14)和腺腔(CK18)細(xì)胞譜系組成的上皮小管的分支形態(tài)學(xué)。在相同的植入物內(nèi)和穿過多種植入物的一些前列腺導(dǎo)管和腺泡中觀察到在野生型小鼠前列腺的基底區(qū)室中19被鑒定為孤立突觸小泡蛋白+細(xì)胞的稀有神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞。⑶117+移植物也表達(dá)前列腺-特異性蛋白probasin^1和Nkx3. I21，指示功能性前列腺產(chǎn)生。使用小鼠β 1整聯(lián)蛋白-特異性抗體，證實(shí)⑶117+移植物是小鼠起源的，并且不是由于污染來自UGM基質(zhì)細(xì)胞制備物的大鼠上皮細(xì)胞造成的。而且，使用特異性識(shí)別供體 (C57BL/6)而不是宿主(無胸腺nu/nu)小鼠細(xì)胞的I類MHC單倍型H_2kb抗體，證實(shí)產(chǎn)生的前列腺來自移植的⑶117+供體細(xì)胞。這些發(fā)現(xiàn)證實(shí)，關(guān)于具有功能性前列腺產(chǎn)生能力的正常的PSCs富集⑶117+群。
實(shí)施例4-CD117+ PSCs具有自我更新的能力干細(xì)胞的定義的特征是自我更新的能力22。為了評(píng)估CD117+細(xì)胞的自我更新能力并且確定減少數(shù)量的CDl 17+細(xì)胞是否仍舊保持前列腺產(chǎn)生能力，用連續(xù)減少數(shù)量的CDl 17+ 細(xì)胞進(jìn)行系列移植(圖6)。⑶117+細(xì)胞，而不是⑶117—細(xì)胞的二級(jí)和三級(jí)移植產(chǎn)生的功能性前列腺包含來自供體C57BL/6小鼠細(xì)胞的多種細(xì)胞類型。這些發(fā)現(xiàn)提供⑶117+群包含具有自我更新能力的正常PSCs的直接證據(jù)。實(shí)施例5-⑶117+信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于正常的前列腺發(fā)育和對(duì)于前列腺再生是重要的確定功能性CD117信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于正常前列腺發(fā)育的重要性。小鼠的前列腺 (prostrate)發(fā)育以在懷孕的17. 5天從尿殖竇芽殖的上皮細(xì)胞開始，伴隨延伸的導(dǎo)管向外生長(zhǎng)以及在出生后發(fā)育的前三周中出現(xiàn)的分支“。關(guān)于顯性-白斑基因座純合(W/W)的小鼠缺乏CD117信號(hào)傳導(dǎo)并且是圍產(chǎn)期致死的23，由此排除了對(duì)正常前列腺發(fā)育的評(píng)估。分析了顯示部分受損的CDl 17信號(hào)傳導(dǎo)并因此具有活力的雜合W/Wv小鼠23。盡管在4周齡具有相同的體積大小，突變的前列腺顯示在成體具有類似減少的減少的大小。檢查了突變體前列腺細(xì)胞的增殖、分化和存活狀態(tài)，這是因?yàn)镃D117信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)在不同的干細(xì)胞類型中的這些過程24。突變體前列腺顯示被抑制的增殖，盡管與野生型比較，基底/腺腔分化、 細(xì)胞存活和血管/平滑肌細(xì)胞募集沒有改變。類似地，在出生后第4天收集的和在存在功能性封閉抗-CD117抗體(ACD)時(shí)先體外后體內(nèi)培養(yǎng)的野生型C57BL/6前列腺顯示被抑制的生長(zhǎng)和減少的分支(圖7a和7b)。通過評(píng)估轉(zhuǎn)錄因子Slug(圖8a-c)，一種⑶117途徑的下游靶標(biāo)的表達(dá)M證實(shí)了⑶117信號(hào)傳導(dǎo)的ACK2抑制。明顯地，被處理的前列腺顯示減弱的增殖和增加的基底與腺腔細(xì)胞比率，而對(duì)細(xì)胞存活沒有影響。為了進(jìn)一步評(píng)估⑶117在體內(nèi)PSC功能中的可能作用，在體內(nèi)抑制劑量26將ACK2 施用于被閹割的成年C57BL/6小鼠并且在激素替代后評(píng)估前列腺再生。與先體外后體內(nèi)處理的前列腺類似，減弱的體內(nèi)CD117功能抑制前列腺再生，這與被抑制的增殖和增加的基底-腺腔細(xì)胞比率一致，而對(duì)細(xì)胞存活或血管/平滑肌細(xì)胞募集沒有作用。這些發(fā)現(xiàn)表明用拮抗劑封閉劑對(duì)CD117信號(hào)傳導(dǎo)的損害，與在W/Wv小鼠中觀察到的CD117信號(hào)傳導(dǎo)的部分受損相反，可以抑制前列腺腺腔細(xì)胞分化，并且加強(qiáng)CD117信號(hào)傳導(dǎo)在正常前列腺發(fā)育中的可能作用?？紤]到CDl 17信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于骨髓-衍生細(xì)胞的功能(包括造血干細(xì)胞和內(nèi)皮先祖細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性2O是重要的，以及血管系統(tǒng)及其支持基質(zhì)可能在建立PSC小生境中具有重要作用14，可能消除的CD117功能可以對(duì)非上皮細(xì)胞在前列腺中的募集/維持具有不利影響，這又可能損害前列腺的發(fā)育。實(shí)施例6-干細(xì)胞標(biāo)記頻率為了比較⑶117+細(xì)胞在前列腺中的百分比與在其它PSC群體中的百分比，獲得譜系消減(LirT)群體，并進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)。盡管CD117+細(xì)胞在有活力的細(xì)胞群中顯示最低的頻率(約)，ka-Γ和CD133+細(xì)胞在有活力的細(xì)胞群中以高得多的頻率進(jìn)行檢測(cè) (圖9)。這與其它研究是一致的，其報(bào)道了 Sca-I和CD133在干細(xì)胞和非干細(xì)胞類型(包括基質(zhì)和分化的上皮細(xì)胞)中的表達(dá)6’28。這些更高的頻率顯示ka-Ι和⑶133可能標(biāo)記高度異質(zhì)的前列腺細(xì)胞亞群?？紤]到單染細(xì)胞群的異質(zhì)性，預(yù)期每種單獨(dú)使用的標(biāo)記不會(huì)產(chǎn)生完全由干細(xì)胞組成的亞群。因此，將組合的多種標(biāo)記用于進(jìn)一步精選PSC表型。確定 Lin-ka-rCD133+⑶44+⑶117+細(xì)胞占在小鼠前列腺中有活力細(xì)胞群的0. 12% (圖9)
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實(shí)施例7-具有表型LinTca-l+CD133+CD44+CD117+的PSCs能夠生產(chǎn)產(chǎn)生分泌物的前列腺進(jìn)行熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACQ來獲得表達(dá)多種表面標(biāo)記組合的細(xì)胞群(圖 10)，隨后進(jìn)行腎被膜植入。在該實(shí)驗(yàn)中，通過磁珠分選解離的前列腺細(xì)胞以獲得Lin-細(xì)胞，其隨后通過FACS進(jìn)行分選。Lin-碘化丙錠-(Lin-,有活力的)群體關(guān)于表達(dá)門控以獲得 Linlca-I+ 和 Linlca-I-群體。Lin-Sca-I-群體關(guān)于 CD133-，CD44-,和 CDl 17-級(jí)分的連續(xù)門控產(chǎn)生Lin4ca-1-CD133-CD44-CD117-細(xì)胞。Linlca-I+群體關(guān)于CD133+和 ⑶44+級(jí)分的連續(xù)門控產(chǎn)生Lin-ka-Ι+⑶133+⑶44+群體，其又關(guān)于⑶117表達(dá)門控，以獲得 Lin4ca-1+CD133+CD44+CD117+ 細(xì)胞和 Lin4ca-1+CD133+CD44+CD117_ 細(xì)胞。在移植后三個(gè)月的移植物重量量化表明僅LirTka-Γ⑶133+⑶44+CD117+群體能夠產(chǎn)生前列腺(圖11和12)。關(guān)于各種分選的細(xì)胞群的前列腺產(chǎn)生頻率如下:Lin_Sca-l_CD133_CD44_CD117_，η = 0/8 ；LirrSca-l+CD133+CD44+CDl 17+，η = 6/9 ； LirTSca-rCD133+CD44+CD117 η = 0/6。進(jìn)行了組織學(xué)檢查(如在上述實(shí)施例3中所述)，表明再生的前列腺由基底 (CK14)和腺腔(CK18)細(xì)胞譜系組成，并且所述前列腺表達(dá)前列腺特異性蛋白prcAasin2° 和Nkx3. I21，表明功能性前列腺產(chǎn)生。使用小鼠β 1整聯(lián)蛋白-特異性抗體證實(shí)所述前列腺是小鼠起源的，并不是由于污染了來自UGM基質(zhì)細(xì)胞制備物的大鼠上皮細(xì)胞造成的，并且使用特異性識(shí)別供體(C57BL/6)而不是宿主(無胸腺nu/nu)小鼠細(xì)胞的I類MHC單倍型H-2kb抗體證實(shí)產(chǎn)生的前列腺來自移植的⑶117+供體細(xì)胞。系列移植產(chǎn)生類似的結(jié)果，其中關(guān)于各種分選的細(xì)胞群的前列腺產(chǎn)生頻率如下:Lin_Sca-l_CD133_CD44_CD117_，η = 0/3 ；LirrSca-l+CD133+CD44+CDl 17+，η = 1/3 ； Lin3ca-l+CD133+CD44+CD117、n = 0/3，證實(shí) LirTSca-rCD133+CD44+CD117+群體包含具有自我更新能力的正常PSCs。實(shí)施例8-從單Lin-Sca-1+CD133+CD44+CD117+細(xì)胞產(chǎn)生前列腺為了確實(shí)證實(shí)前列腺產(chǎn)生可以從單LirTka-Γ⑶133+⑶44+CD117+細(xì)胞實(shí)現(xiàn)，通過 FACS將有活力的單細(xì)胞分選到各個(gè)孔中。對(duì)每個(gè)孔成像以證實(shí)單細(xì)胞的存在，并將單供體 C57BL/6小鼠細(xì)胞與大鼠UGM基質(zhì)細(xì)胞組合移植到宿主無胸腺nu/nu小鼠的腎被膜下(圖 13)。更具體地，收集成熟的C57BL/6前列腺，將其解離為單細(xì)胞，通過磁珠分選進(jìn)行譜系消減以獲得Lin-群體，并且用碘化丙錠和針對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記&￡1-1，⑶133，⑶44，和⑶117的抗體染色。通過FACS，將有活力(碘化丙錠_)的單Lin4ca-1+CD133+CD44+CD117+細(xì)胞分選到包含4°C的膠原蛋白溶液的96孔板的各個(gè)孔中。接著，將板在37°C溫度調(diào)節(jié)的室中進(jìn)行顯微鏡檢查從而證實(shí)每個(gè)孔的單細(xì)胞的存在，并且捕獲在每個(gè)孔中的每個(gè)單細(xì)胞的數(shù)字圖像。在膠原蛋白膠凝作用后，將大鼠UGM基質(zhì)細(xì)胞加入每個(gè)孔050，000細(xì)胞/孔)并將板在37°C溫育過夜，導(dǎo)致膠原蛋白凝膠收縮。接著，將凝膠伴隨皮下緩慢釋放睪酮丸劑移植在宿主無胸腺nu/nu小鼠的腎被膜下。移植后三個(gè)月，收集單細(xì)胞植入物并進(jìn)行組織學(xué)檢查。明顯地，14個(gè)前列腺產(chǎn)生自97個(gè)單細(xì)胞移植物。組織學(xué)分析證實(shí)盡管單獨(dú)的UGM 細(xì)胞的移植物不能產(chǎn)生前列腺，14個(gè)成功的單細(xì)胞移植的移植物顯示明顯的前列腺發(fā)育。 上皮小管的存在包含多種細(xì)胞譜系并證實(shí)了 probasin和Nkx3. 1的表達(dá)。重要的是，單細(xì)胞來源的前列腺表達(dá)小鼠-特異性的β 整聯(lián)蛋白和C57BL/6-供體特異性的H-2kb。還通過激光捕獲顯微切割的細(xì)胞的基于PCR的基因分型證實(shí)產(chǎn)生的前列腺來自單移植的供體細(xì)胞(圖14a)。單細(xì)胞來源的前列腺顯示由基質(zhì)細(xì)胞和結(jié)締組織的厚層圍繞的相互連接的分支腺功能形態(tài)學(xué)。通過有限稀釋分析，將PSCs在Lin7ca-1+CD133+⑶44+CD117+群體中的頻率確定為1/10(圖14b)。實(shí)施例9-人PSC為了確定CD117是否也標(biāo)記人前列腺中的潛在的PSC群，進(jìn)行人良性前列腺過度增生(BPH ；η = 5)和良性非-BPH(η = 4)前列腺樣本的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)分析。在良性非-BPH 和BPH樣本中在有活力的細(xì)胞群中觀察到低頻的⑶117+細(xì)胞(分別地約0.2%和0.4% ； 圖1 和15b)。Sca-I人的直向同源物已經(jīng)被確定性地鑒定，但是通過組合⑶117和標(biāo)記 ⑶133和⑶44，將在良性非-BPH和BPH樣本中⑶133+⑶44+⑶117+細(xì)胞的有活力細(xì)胞的頻率分別確定為0. 004%和0. 01% (圖1 和15b)。通過在共表達(dá)基底細(xì)胞標(biāo)記p63的前列腺上皮細(xì)胞中進(jìn)行免疫染色，在良性非-BPH和BPH樣本中檢測(cè)CD117+細(xì)胞。用于組織學(xué)分析的良性非-BPH和BPH樣本是取自相同患者的配對(duì)樣本。這些發(fā)現(xiàn)表明，除了在小鼠前列腺中標(biāo)記PSC群體之外，預(yù)期CD117表達(dá)標(biāo)記在人前列腺中的潛在PSC群體。將在本說明書中引用或提及的所有的專利、專利申請(qǐng)、專利申請(qǐng)公開物，和其它公開物通過參考結(jié)合在本文，結(jié)合的程度如同將每個(gè)獨(dú)立專利、專利申請(qǐng)、專利申請(qǐng)公開物或公開物特別地和單獨(dú)地指定通過參考結(jié)合在本文中的程度一樣。參考文獻(xiàn)1. 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權(quán)利要求
1.表達(dá)⑶117的分離的前列腺干細(xì)胞。
2.權(quán)利要求1的干細(xì)胞，其中所述干細(xì)胞還表達(dá)⑶133和⑶44。
3.權(quán)利要求1或2的干細(xì)胞，其中所述干細(xì)胞還表達(dá)ka-1。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的干細(xì)胞，其中所述干細(xì)胞能夠在體外產(chǎn)生包含腺腔的前列腺集落。
5.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的干細(xì)胞，其中所述干細(xì)胞能夠在體內(nèi)產(chǎn)生功能性前列腺。
6.表達(dá)⑶117的分離的前列腺癌干細(xì)胞。
7.權(quán)利要求6的干細(xì)胞，其中所述干細(xì)胞還表達(dá)⑶133和⑶44。
8.權(quán)利要求6或7的干細(xì)胞，其中所述干細(xì)胞還表達(dá)ka-1。
9.權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)的干細(xì)胞，其中所述干細(xì)胞能夠在體內(nèi)模型中產(chǎn)生前列腺癌。
10.分離前列腺干細(xì)胞的方法，所述方法包括下述步驟a.獲得譜系消減的(Lin-)前列腺細(xì)胞群。b.分選所述Lin-細(xì)胞群以獲得表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的細(xì)胞群。
11.權(quán)利要求10的方法，所述方法還包括分選所述Lin-前列腺細(xì)胞群從而獲得表達(dá) Sca-I的細(xì)胞群的步驟。
12.權(quán)利要求10或11的方法，其中使用熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACS)來分選所述細(xì)胞。
13.抑制表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺干細(xì)胞或前列腺癌干細(xì)胞增殖的方法，所述方法包括使所述前列腺干細(xì)胞或前列腺癌干細(xì)胞與治療有效量的CD117拮抗劑接觸。
14.預(yù)防患者中前列腺癌復(fù)發(fā)的方法，所述方法包括a.確定所述患者的前列腺癌是否包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞，和b.如果所述患者的前列腺癌包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞，則向所述患者施用治療有效量的CD117拮抗劑。
15.權(quán)利要求14的方法，所述方法還包括向所述患者施用有效量的CD133拮抗劑或 ⑶44拮抗劑。
16.選擇用CD117拮抗劑進(jìn)行治療的前列腺癌患者的方法，所述方法包括a.確定所述患者是否具有包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞的前列腺癌，和b.如果所述患者具有包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞的前列腺癌，則選擇所述患者用CD117拮抗劑進(jìn)行治療。
17.治療患者中的前列腺癌的方法，所述方法包括a.確定所述患者是否具有包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞的前列腺癌，和b.如果所述患者具有包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞的前列腺癌，則向所述患者施用治療有效量的CD117拮抗劑。
18.權(quán)利要求17的方法，所述方法還包括向所述患者施用有效量的CD133拮抗劑或 ⑶44拮抗劑。
19.權(quán)利要求16，17或18的方法，其中所述患者已經(jīng)具有所述前列腺癌的復(fù)發(fā)。
20.選擇前列腺癌患者用CD117拮抗劑進(jìn)行輔助治療的方法，所述方法包括a.確定所述患者的前列腺癌是否包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞，和b.如果所述患者的前列腺癌包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞，選擇所述患者用⑶117拮抗劑進(jìn)行輔助治療。
21.向治療前列腺癌的患者提供輔助療法的方法，所述方法包括a.確定所述患者的前列腺癌是否包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞，和b.如果所述患者的前列腺癌包含表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺細(xì)胞，則向所述患者施用治療有效量的⑶117拮抗劑。
22.權(quán)利要求21的方法，所述方法還包括向所述患者施用有效量的CD133拮抗劑或 ⑶44拮抗劑。
23.權(quán)利要求13-22中任一項(xiàng)的方法，其中所述⑶117拮抗劑是抗-⑶117抗體。
24.權(quán)利要求13-22中任一項(xiàng)的方法，其中所述⑶117拮抗劑是小分子。
25.權(quán)利要求對(duì)的方法，其中所述CD117拮抗劑是甲磺酸伊馬替尼或馬來酸舒尼替尼。
26.促進(jìn)前列腺組織生長(zhǎng)或修復(fù)的方法，所述方法包括在需要前列腺組織生長(zhǎng)或修復(fù)的患者中植入表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺干細(xì)胞。
27.權(quán)利要求沈的方法，其中所述患者具有不完全的前列腺，并且將所述干細(xì)胞植入所述不完全的前列腺。
28.促進(jìn)前列腺生長(zhǎng)的方法，所述方法包括在產(chǎn)生功能性前列腺的條件下，在哺乳動(dòng)物宿主中植入表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺干細(xì)胞。
29.權(quán)利要求觀的方法，其中將所述干細(xì)胞植入所述宿主的腎被膜下。
30.權(quán)利要求觀或四的方法，其中所述宿主是豬。
31.向需要其的患者提供功能性前列腺的方法，所述方法包括a.在產(chǎn)生功能性前列腺的條件下，在哺乳動(dòng)物宿主中植入表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的人前列腺干細(xì)胞；和b.收集所述前列腺。
32.權(quán)利要求31的方法，其中將所述收集的前列腺移植到需要功能性前列腺的人患者中。
33.篩選抑制前列腺癌干細(xì)胞的增殖的化合物的方法，所述方法包括a.使表達(dá)⑶117，⑶133和⑶44的前列腺癌干細(xì)胞與測(cè)試化合物接觸，和b.檢測(cè)所述測(cè)試化合物是否抑制所述細(xì)胞的增殖。
全文摘要
公開了前列腺干細(xì)胞和前列腺癌干細(xì)胞以及它們?cè)谥委熐傲邢侔┖驮偕傲邢俳M織中的應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07K14/47GK102203131SQ200980142193
公開日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2009年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月22日
發(fā)明者凱文·G·萊昂, 萊薩·約翰遜, 高偉強(qiáng) 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司