專利名稱：4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸及其酯類衍生物的用途及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新有機(jī)化合物、這類化合物的用途及制備方法。更確切講是一種4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸及其酯類的化合物，以及這種化合物的用途和制備方法。
背景技術(shù)：
癲癇(epilepsy)是一組由不同病因所引起，腦部神經(jīng)元高度同步化，且常具自發(fā)性的異常放電所致，以發(fā)作性、短暫性、重復(fù)性及通常為刻板性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失調(diào)為特征的綜合癥。據(jù)世界衛(wèi)生組織公布，目前，全球約有3000多萬(wàn)癲癇患者，我國(guó)就有600 700萬(wàn)，其中以兒童和青少年居多。傳統(tǒng)的抗癲癇藥物主要包括苯妥英鈉(Phenytion)、撲米酮(Primidone)、卡馬西平(Carbamazepine)、乙琥胺(Ethosuximide)、丙戊酸鈉(Valproicacid)、苯巴比妥(Phenobarabital)六種，它們?cè)谥委煱d癇方面得到了廣泛的應(yīng)用，但傳統(tǒng)抗癲癇藥具有嚴(yán)重的缺陷，如存在嚴(yán)重的不良反應(yīng)、毒副作用較大、個(gè)體差異性大、治療范圍較窄、易產(chǎn)生耐受性等[1]，故逐漸被臨床所淘汰。20世紀(jì)90年代，隨著病理、生理及藥理知識(shí)的不斷完善，對(duì)癲癇發(fā)作的神經(jīng)生物化學(xué)機(jī)制有了更深的認(rèn)識(shí)，合成了許多新的抗癲癇藥物。目前，國(guó)內(nèi)外已批準(zhǔn)應(yīng)用于臨床的新型抗癲癇藥物包括唑尼沙胺(Zonisamide)、奧卡西平(Oxacarbar-mazepine)、拉莫三嗪(Lamotrigine)、托吡酯(Topiramate)、噻加賓(Tiagbine)、氨己烯酸(Vigabatrin)、加巴噴丁(Gabapentin)、非氨酯(Felbamate)等八種^。雖然新型抗癲癇藥物部分地改善了傳統(tǒng)的抗癲癇藥物的缺陷，但大多數(shù)新藥仍具有特殊的不良反應(yīng)，如認(rèn)識(shí)功能障礙、急性眼部癥狀、嚴(yán)重的過敏反應(yīng)等，參見鄭其萍,劉軍."抗癲癇藥物的臨床應(yīng)用進(jìn)展"[J].^"秀導(dǎo)/《2000，19(4),359-360.，湯亞南"兒童癲癇綜合癥藥物治療的新進(jìn)展"[J].廈夕/度學(xué)乂Z辨,眾教,2000,27(26),302-304.，于新,曲軍,編譯."抗癲癇藥噻加賓"[J].房W度夯合成藥f眾秀虔份妙、欽1999,20(2),108-110.。因此，研究具有抗癇作用廣，毒副作用輕，不良反應(yīng)少的新型AEDs是擺在藥物化學(xué)工作者面前亟需解決的問題之一。
研究表明Y-氨基丁酸是一種神經(jīng)刺激后突觸釋放的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，研究顯示，腦中Y-氨基丁酸濃度降低時(shí)難以控制癲癇，在對(duì)已知的抗癲癇藥物如丙戊酸鈉、巴比妥類藥物進(jìn)一步研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，它們都有抑制，氨基丁酸的降解或促進(jìn)其合成，直接增加腦內(nèi)Y-氨基丁酸濃度的作用，從而確定了尋找新型抗癲癇藥的方向，參見林苗，朱珠."新型抗癲癇藥的安全性評(píng)價(jià)"[J].秀激不虔^^^夯,武2006，8(2)，81-87.。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一類新的化合物，同時(shí)提供這種化合物的用途及其制備方法。
本發(fā)明提供的化合物是4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸及其酯類衍生物，本
發(fā)明的化合物可用于制備抗癲癇藥物。
本發(fā)明的化合物結(jié)構(gòu)式如下
式中的取代基R為H、 C2H5、 CH(CH3)2、 "-C4H9、 C6H 、 CH2C6H5、CH2C6H4OOCH3) 、 CH2C6H4(w-OCH3) 、 CH2C6H4(p-OCH3) 、 CH2C6H4(0-C1)、CH2C6H4(附-C1)或CH2C6H4(p-Cl)中的任一種。
本發(fā)明的化合物——4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸及其酯類衍生物的制備方法是
以吡咯烷酮鈉鹽為原料，在TEBA催化存在下，與2-乙酰氧基苯甲酰氯反應(yīng)得到2-乙酰氧基苯甲酰-吡咯烷酮，然后在HC1和Pt02存在下開環(huán)得4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸；
或者，以y-氨基丁酸為原料，以p-TsOH為催化劑，甲苯為夾帶劑，將y-氨基丁酸和相應(yīng)的醇反應(yīng)制成Y-氨基丁酸酯對(duì)甲基苯磺酸鹽；然后以TEA為縛酸劑與2-乙酰氧基苯甲酰氯反應(yīng)得4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸酯，再經(jīng)乙酰氯酰化得相應(yīng)的4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸酯。
本發(fā)明的化合物優(yōu)選的制備方法是
在反應(yīng)容器內(nèi)加入0.05mol吡咯烷酮鈉鹽甲苯溶液65mL，攪拌，控制溫度為10°C以下加入0.005mol TEBA，點(diǎn)滴0.05mol 2-乙酰氧基苯甲酰氯的無(wú)水甲苯溶液50mL， 20分鐘內(nèi)加完，于室溫下反應(yīng)0.5h，再于5(TC攪拌反應(yīng)3h，待反應(yīng)完全，加入冷水100mL，分別用飽和碳酸氫鈉20mL、 20mL、 10mL洗滌甲苯層，后用50mL蒸餾水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥過夜。減壓回收甲苯，殘留物用無(wú)水乙醇結(jié)晶，即得白色片狀晶體10.1g2-乙酰氧基苯甲酰-卩比咯垸酮。然后將25mmo1 2-乙酰氧基苯甲酰-吡咯烷酮溶解于80mLmol丄"HCl中，加入12.5mmolPt02， 6(TC下加熱回流12h，待反應(yīng)完全，室溫冷卻，加30mL水洗兩次，鹽酸調(diào)PH為3 5，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)層，加入無(wú)水硫酸鈉干燥過夜，減壓除去乙酸乙酯得白色針狀固體，用水洗滌、70%乙醇重結(jié)晶，得白色針狀固體4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸；或者，在反應(yīng)容器內(nèi)加入20mmo1的，氨基丁酸，22.88mmo1的對(duì)甲基苯磺 酸水合物，25mmol25mmo1的甲醇或乙醇或異丙醇或正丁醇或環(huán)己醇或苯甲醇或 2-甲氧基苯甲醇或3-甲氧基苯甲醇或4-甲氧基苯甲醇或2-氯苯甲醇或3-氯苯甲 醇或4-氯苯甲醇，以及25mL甲苯，加熱回流4 8h，以甲苯為夾帶劑除去反應(yīng) 體系中生成的水，反應(yīng)完畢后減壓除去過量醇、甲苯，加入100mL的無(wú)水乙醚
冷藏放置過夜，得白色固體，用無(wú)水乙醇/乙醚重結(jié)晶得Y-氨基丁酸酯對(duì)甲苯磺 酸鹽。20mmo1 Y-氨基丁酸酯對(duì)甲苯磺酸鹽加入裝有60mL 二氯甲烷的反應(yīng)容器 中，將溶有22mmo1的2-(乙酰氧基)苯甲酰氯8mL的二氯甲烷和15mL三乙胺 分別點(diǎn)滴加入其中，反應(yīng)體系置于60。C油浴中回流18 24h，反應(yīng)完成后停止 加熱，室溫冷卻，分別用碳酸氫鈉水溶液、水洗滌有機(jī)層，有機(jī)相內(nèi)加入適量 活性碳煮沸10min脫色，無(wú)水硫酸鎂干燥過夜，減壓除去二氯甲烷得油狀物， 經(jīng)層析分離，收集相應(yīng)組分，減壓回收溶劑得相應(yīng)的油狀物4-(2-羥基苯甲酰氨 基)丁酸酯，將4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸酯10.6mmo1溶解于盛有50mL 二氯甲 垸的反應(yīng)容器中，緩慢攪拌加入5mL三乙胺，置反應(yīng)于冰-水浴中保持10min， 將溶有1.5mL乙酰氯的二氯甲垸溶液5mL緩慢點(diǎn)滴加入，移去冰水浴，反應(yīng)逐 漸恢復(fù)至室溫，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢后，加水20mL猝滅反應(yīng)，分層、有機(jī)層水 洗、合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥過夜，減壓除去二氯甲烷，得相應(yīng)的4-(2-乙 酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯類衍生物。
經(jīng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明的化合物有抗癲癇作用，而且其副作用較小。本發(fā) 明4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯類衍生物的制備方法有如下優(yōu)點(diǎn)
1、 成鹽反應(yīng)完全，副產(chǎn)物少，產(chǎn)品收率高。
2、 生成的鹽穩(wěn)定性好，而且純化容易。
3、 在酸性條件下，酯化反應(yīng)完全，生成的酯穩(wěn)定性高。
圖1為4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯的構(gòu)效關(guān)系，圖中曲線x為表安全 指數(shù)，曲線A為半數(shù)致死量，曲線*為脂水分配系數(shù)，曲線※為半數(shù)有效量。
具體實(shí)施例方式
以下提供本發(fā)明的實(shí)施例。
本發(fā)明的化合物制備方法是
以吡咯烷酮鈉鹽為原料，在TEBA催化存在下，與2-乙酰氧基苯甲酰氯反 應(yīng)得到2-乙酰氧基苯甲酰-卩比咯烷酮。在HC1和Pt02存在下開環(huán)得4-(-2-乙酰氧 基苯甲酰)氨基丁酸，其反應(yīng)路線如式2;
或者，是以Y-氨基丁酸為原料，以p-TsOH為催化劑，甲苯為夾帶劑，將" 氨基丁酸和相應(yīng)的醇反應(yīng)制成Y-氨基丁酸酯對(duì)甲基苯磺酸鹽；然后以TEA為縛酸劑與2-乙酰氧基苯甲酰氯反應(yīng)得4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸酯，再經(jīng)乙酰氯酰 化得相應(yīng)的4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸酯類衍生物，其反應(yīng)路線如式3。
「 i CIOC
式2
『Y Cl
2. Et3N
3. CH2C12, 50°C,
4. NaHC03
1. Et3N
2. AcCl a. o'C
3. CH2C12 b.rt
式3
以下是本發(fā)明的化合物的具體制備過程 一、2-(乙酰氧基)苯甲酰氯的制備
在100mL的三頸瓶中加入阿司匹林(9.01g,0.05mo1)，于50。C以下點(diǎn)滴氯化亞 砜(4.00mL)，吡啶(0.02mL)，逐漸升溫至90。C攪拌回流3h。冷卻，9(TC減壓除去 過量的氯化亞砜，冷卻得白色粘稠狀物(9.43g)，收率90%，置干燥器中密封待用。 以上制備過程可參見
COOH
I
(CH2)3 I
NH2
o
/
o=co=o[1〗Paris, G Y, Garmaise， D L, Cimon, D G, et al. Glycerides as prodrugs. Synthesis and antiin flammatory activity of 1，3-bis(alkanoyl)隱2隱(0-acety lsalicyloyl) glycerides (aspirin triglycerides)[J]j;7kfe d C/z亂1979,22(6),683-687.; Chatterje R M, Das K R, Dep C, et al. Synthesis of 3-substituted 4-hydroxy coumarin[J]. t/ow/Tw/ o/Z/ze /"W她'o" o/C7ze附/她(7Wa人1982,54(3)， 113-115.) 二、 4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸(l)的合成
A. 甲醇鈉的制備
將新蒸甲苯和金屬鈉混合，置裝有回流冷凝管、攪拌器的三口瓶中，于N2 保護(hù)下加熱，快速攪拌至金屬鈉完全融為細(xì)小鈉顆粒，繼續(xù)攪拌直至冷卻，即 得鈉砂；將鈉砂移出甲苯置于裝有回流冷凝管的圓底燒瓶，攪拌，加入無(wú)水甲 醇。待反應(yīng)完全，減壓除去甲醇及甲苯，即得白色甲醇鈉固體。
B. 吡咯垸酮鈉鹽的制備
甲醇鈉10.8g(0.2mol)懸浮于270mL無(wú)水甲苯中，加吡咯垸酮25.5g(0.3mo1)， 緩慢加熱至100 105°C，攪拌3小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束，蒸出甲醇-甲苯混合物16mL， 冷卻至室溫，即得吡咯烷酮鈉鹽，密封備用。
C. 2-乙酰氧基苯甲酰-吡咯烷酮的制備 吡咯烷酮鈉鹽的甲苯溶液65mL(5.4g， 0.05mol)加入250mL三口瓶中，加入
35mL無(wú)水甲苯，攪拌，控制溫度為1(TC下加入TEBAl.lg(0.005mo1)，點(diǎn)滴2-乙酰氧基苯甲酰氯10.0g(0.05mol)的無(wú)水甲苯溶液50mL， 20分鐘內(nèi)加完，于室 溫下反應(yīng)0.5h，再于5(TC攪拌反應(yīng)3h， TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)，待反應(yīng)完全，加入冷水 100mL，分別用飽和碳酸氫鈉20mL、 20mL、 10mL洗滌甲苯層，后用50mL蒸 餾水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥過夜。減壓回收甲苯，殘留物用無(wú)水乙醇結(jié)晶， 即得白色片狀晶體10.1 g，收率81.7%。 mp:163 165。C。 Rf0.67(展開劑石油 醚乙酸乙酯=4:1)。 IR(KBr)v/cm": 3202(-NH-)， 1677(-NH-C=0); ^-NMR (300MHz, CDC13)5: 2.06(t， 2H， J=7.2Hz， H4)， 2.17 (s， 3H， -CH3)， 2.36 (t， 2H， J:8.1Hz， H3)， 3.87(t， 2H， J二7.2Hz， H5)， 7.09 7.47 (m， 4H， J=1.2Hz， /=6.0Hz， >7.5Hz， /=9.3Hz， Ar); 13C-NMR(75MHz， CDC13)S: 179.7(C2)， 177.6 (N-￡=0)， 172.1(CH3-￡=0)， 161.6、 134.1、 125.4、 118.5、 118.4和114.1 (Ar)， 38.6 (C5)， 31.8 (C3)， 20.7 (-CH3)， 17.2 (C4); EI-MS (m/z): 205[M+-42〗，188[M+-59]， 163 [M+-84]。
D. 4-(2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸(l)的制備
將2-乙酰氧基苯甲酰-吡咯烷酮6.181g(25mmol)溶解于80mLmol丄"HCl中， 加入Pt023.42g(12.5mmo1)， 60。C下加熱回流12h，薄層層析法監(jiān)測(cè)反應(yīng)，待反應(yīng) 完全，室溫冷卻，加30mL水洗兩次，鹽酸調(diào)PH為3 5，乙酸乙酯萃取(3x30mL)，合并有機(jī)層，加入無(wú)水硫酸鈉干燥過夜，減壓除去乙酸乙酯得白色針狀固體，
用水(3xl0mL)洗滌、70。/。乙醇-水(v/v)重結(jié)晶、過濾，得白色針狀固體4.775g， 收率72%。 mp:101.2 102.2。C。 Rf0.38(展開劑石油醚乙酸乙酯:冰乙酸 (3:2:0.02)， 254nm紫外檢觀U)。IR(KBr)v(cm"): 3381(-NH)， 3087(畫OH)， 1738(C=0)， 1582 1445(苯環(huán))，1241 1180(C-O); "H-畫R(300MHz， CDC13) 5: 1.95(m， 2H， M6Hz， 《/=6.9Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2.15(s， 3H， 0=C-CH3)， 2.29(t， 2H， 《/=5.4Hz， -CH2-COOH)， 3.48 (m， 2H， 《/=6.0Hz， J=6.6 Hz， -NH-CH2-CH2-CH2-)， 6.77~6.96(m， 2H， 《/=7.5 Hz， >/=8.1 Hz， Ar-H3， H6)， 7.21~ 7.38(m， 2H， 《/=3.9Hz， 《/=9.0 Hz， Ar國(guó)H4， H5)， 9.92(bs， 1H， 一NH-); 13C-NMR (75麗z， CDC13)S: 20.7(-￡H3)， 23.9 (-CH2《H2-CH2-)， 31.6(-￡H2-COOH)， 39.2 (-NH-￡H2-)， 114.2、 118.4、 118.7、 125.6、 132.1禾口 134.1 (Ar)， 161.2 [(-￡=0)-NH-]， 170.2[-O-(￡=O)-]， 177.6(-￡OOH); EI畫MS (m/z): 222 [M""-43]， 220[M+-45]， 178[,87]， 120PVT-145]。
三、"氨基丁酸酯對(duì)甲基苯磺酸鹽的合成通法
于lOOmL的反應(yīng)瓶中加入Y-氨基丁酸2.06g(20mmol)，對(duì)甲基苯磺酸水合物 3.96g(22.88mmo1)， 25mmol的甲醇或乙醇或異丙醇或正丁醇或環(huán)己醇或苯甲醇 或2-甲氧基苯甲醇或3-甲氧基苯甲醇或4-甲氧基苯甲醇或2-氯苯甲醇或3-氯苯 甲醇或4-氯苯甲醇，以及甲苯25mL，加熱回流4 8h，以甲苯為夾帶劑除去反 應(yīng)體系中生成的水。完畢，減壓除去過量醇、甲苯。加入無(wú)水乙醚100mL冷藏 放置過夜，得白色固體，無(wú)水乙醇/乙醚重結(jié)晶得精品(見表1)。
_表l y-氨基丁酸酯對(duì)甲基苯磺酸鹽收率和熔點(diǎn)
化合物結(jié)構(gòu)式 質(zhì)量(g)收率(°/。) 熔點(diǎn)('c)<formula>formula see original document page 9</formula>5.883 74.5 123.6 124.8
6.719 85.1 112.9 114.2
6.129 77.6 69.1 70.8
.838 72.9 118.8 121.7
5.947 74.3 75.6 76.3
6,004 75.1 100.1 102.2
四、4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯衍生物的合成通法 §4.1 4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸酯的制備
Y-氨基丁酸酯對(duì)甲苯磺酸鹽20mmo1加入裝有60mL 二氯甲垸的三口瓶中， 將新制的2-(乙酰氧基)苯甲酰氯4.47g(22mmol)溶于8mL 二氯甲烷，點(diǎn)滴加入上 述混懸液，同時(shí)點(diǎn)滴三乙胺15mL，置于6(TC油浴中回流18 24h，并用薄層層 析法(硅膠板、石油醚、乙酸乙酯)監(jiān)測(cè)反應(yīng)，待新斑點(diǎn)無(wú)明顯變化，停止加熱， 室溫冷卻，分別用5。/。的碳酸氫鈉(2x20mL)、水(3x30mL)洗滌有機(jī)層，萃取、分 液，有機(jī)相加入適量活性碳煮沸10min脫色，無(wú)水硫酸鎂干燥過夜，減壓除去 二氯甲垸得油狀物，用少量丙酮溶解，硅膠拌樣，石油醚/乙酸乙酯(2: 1)混 合液作流動(dòng)相柱層析分離，收集第二藍(lán)色組分，減壓回收溶劑得目標(biāo)化合物為
油狀物。根據(jù)上述方法制備的各酯衍生物光譜實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)如下
4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸乙酯(2A)淡黃色油狀物2.844g，收率56.59%。 !H國(guó)NMR(300MHz， CDC13)5: 1.24 (t， 3H， 《/= 6.9Hz， -CH3)， 1.95(m， 2H， J= 6.9Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2,42(t， 2H， -CH2-CH2-CH2-)， 3.46(q， 2H， 《/= 6.9Hz, -CH2-CHrCHr)， 4'12(q， 2H， 《/=6.9Hz， -CH2-CH3)， 6.80 7.51(m， overlapedw池 -NH-， 4H， 《/=1.2Hz， J:5.4Hz， J= 7.2Hz， Ar)， 7.39(bs， overlaped withAr， 1H， -NH-)， H.58(s， 1H， Ar-OH)。4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸異丙酯(3A)淡黃色油狀物2.937g，收率55.35%。 iH隱麗R (400MHz， CDC13)S: 1.22 (d, 6H，聲4.8Hz，隱(CH3)2)， 1.93(t， 2H， /=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2.42(t， 2H， J=4.4Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 3.47(t， 2H， /=4.8Hz， -CH2-CH2—CH2-)， 4.09(m， 1H， J=4.8Hz， -CtHCH3)2)， 6.80 7.52(m， overlaped with-NH-， 4H， 《/=6.4Hz， 《/= 8.0Hz， Ar)， 7.45(bs， overlaped with Ar， 1H， -NH-)， 12.62(s， 1H， Ar-OH)。
4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸正丁酯(4A)淡黃色油狀物3.126g，收率55.96%。 iH-畫R(400顧z， CDC13)S: 0.90 (m， 3H， -CH3)， 1.32(m， 2H， 《/=2.4Hz， /=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-CH3)， L58(m， 2H， 《/=2.4Hz，聲6.4Hz， -CH2-Qi2-CH2-CH3)， 1.95(q， 2H， J=6.8Hz， -CH2-CH2- CH2-)， 2.45(t， 2H， 《/=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 3.49(q， 2H，戶6.4Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 4.06(t， 2H， J= 6.4Hz， -CH2-CH2-CH2-CH3)， 6.80~7.48(m， overlaped with-NH-， 4H， 1.2Hz， 6.8Hz， 7=8.4Hz， Ar)， 7.13 (bs， overlaped with Ar， 1H，國(guó)NH-)， 12.62(s， 1H， Ar-OH)。
4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸環(huán)己酯(5A)淡黃色油狀物3.524g，收率57.70%。 !H-畫R (400MHz， CDC13) & 1.21 1.82 (m，固，H2"-6")， 1.96(m， 2H，^8.4Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2.44(t， 2H，盧8,4Hz， -CH2-CH2-CH2)， 3.49 (m， 2H， 《/=8.4Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 4.75(m， 1H，聲6.0Hz， Hl〃)， 6.81 7.42(m， overlaped w他-NH-， 4H， J=1.6Hz， J:2.8Hz， J= 9.2Hz， Ar)， 7.11(bs， overlaped with Ar， 1H， -NH-)， 6.81~7.42(m， Ar-4H)， 12.48(s， 1H， Ar-OH)。
4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸苯甲酯(6A)淡黃色油狀物3.428g，收率54.69%。 iH-NMR(400顧z， CDC13)S: 1.95(m， 2H，凡4Hz， -CH2-CH2-CHr)， 2.42(t， 2H， 《/=4.4Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 3.46(t， 2H， 《/=4.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 5.08(s， 1H， CH2-Ar)， 6.80 7.39(m， overlaped with-麗-and another Ar， 10H)， 12.23(s， 1H， Ar-OH)。
4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸-(2-甲氧基)苯甲酯(7A)淡黃色油狀物3.867g，收 率59.06%。 iH-NMR (300MHz, CDC13)S: 2.01(m， 2H， J-6.9Hz， J-6.0Hz， -CHr CH2-CHr)， 2.54(t， 2H，盧6.9Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 3.50(q， 2H， 《/=6.0Hz，畫CH2一 CH2-CH2-)， 3.89 (s， 3H， -OCH3)， 5.23(s， 2H， CiL-Ar), 6.80~7.52(m， overlaped with-NH-and another Ar， 9H)， 12.40(s， 1H， Ar畫OH)。
4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸-(3-甲氧基)苯甲酯(8A)淡黃色油狀物3.643g，收 率55.64%。 !H隱醒R (300MHz， CDC13) S: 1.98(m， 2H，聲6.6Hz， -CHr CH2- CHr)， 2.50(t， 2H， 《/=6.6Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 3'48(q， 2H， J-6.6Hz， -CH2-CH2-CHr)， 3.80 (-OCH3)， 5'08(s， 2H， CH2畫Ar)， 6.79 7.39 (m， overlaped with -NH- and another Ar， 9H)， 12.43(s， 1H， Ar-OH)。4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸-(4-甲氧基)苯甲酯(9A)淡黃色油狀物3.587g，收 率54.79%。 'H畫NMR (300MHz， CDC13) S: 1.98(m， 2H， ^6.6Hz， -CH2- CH2-CH2-)， 2.46(q， 2H，聲6.6Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 3.47(q， 2H， 《/=6.3Hz， CH2-CH2-)， 3.82 (-OCH3)， 5.02(s, 2H， CIJ2-Ar)， 6.76 7.41(m， overlaped with-NH畫and another Ar， 9H)， 12.45(s， 1H， Ar-OH)。
4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸-(2-氯)苯甲酯(10A)淡黃色油狀物3.841g，收率 55.22%。 ^-NMR (400MHz， CDC13)S: 2.02(m， 2H， J:6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-， 7=6.0Hz)， 2.55(t， 2H， /=6.8Hz， -CHrCH2-CHz-), 3.51(q， 2H， J:6.0Hz， -CH2 -CH2-CH2-)， 5.23(s， 2H， CH2畫Ar)， 6'82 7.38(m， overlaped with-NH-and another Ar， 9H)， 12.44(s， 1H， Ar-OH)。
4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸-(3-氯)苯甲酯(llA)淡黃色油狀物3.748g，收率 53.88%。H-薩R (400MHz, CDC13) 5: 1.99(m， 2H，聲6.4Hz， J=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2.52(t， 2H，片8Hz， -CH2-CH2-Qi2-)， 3.49(q， 2H， J:6.4Hz， -CH2 ■CH2-CH2-)， 5爭(zhēng)07(s， 2H， CH2-Ar)， 6.81~7.39(m， overlaped with-NH畫and another Ar， 9H)， 12.43(s， 1H， Ar-OH)。
4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸-(4-氯)苯甲酯(12A)淡黃色油狀物3.812g，收率 54.80%。 'H-畫R(400MHz， CDC13) 5: 1.97(m， 2H， /=6.4Hz， /=6.8Hz， -CH2-CH2-CHr)， 2.51(t， 2H， 《/=6.8Hz， -CH2-CH2-Cli2畫)，3.49(q， 2H， J:6.4Hz， -CHz -CH2-CH2-)， 5.07(s， 2H， CHz-Ar)， 6.81~7.39(m， overlaped with-NH-and another Ar， 9H)， 12.44(s， 1H， Ar-OH)。
§4.2 4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯的制備
將4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸酯10.6mmol溶解于盛有50mL 二氯甲烷的三 頸瓶中，緩慢攪拌加入5mL三乙胺，置反應(yīng)于冰-水浴中保持10min，將溶有1.5mL (21.2mmol)乙酰氯的二氯甲烷溶液5mL緩慢點(diǎn)滴加入，移去冰水浴，反應(yīng)逐漸 恢復(fù)至室溫，繼續(xù)攪拌，薄層板監(jiān)測(cè)反應(yīng)，完畢，加水20mL猝滅反應(yīng)，分層、 有機(jī)層水洗(2x30mL)、合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥過夜，減壓除去二氯甲烷， 得4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯類化合物。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸乙酯(2)淡黃色油狀物1.693g，收率54.5%。 IR(KBr)v(cm"): 3326(-NH)， 1735(-C=0)， 1645(-NH-C=0); iH-NMR(300固z， CDC13)S: 1.22 (t， 3H， 《/=6.9Hz，隱CH3)， 1.92(m， 2H，風(fēng)6Hz， J=6.9Hz， -CHrCH2-CH2-)， 2.13(s， 3H， C￡E3-C=0)， 2.25(s， 3H，畫CH3)， 2.42(t， 2H， J=6.9 Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 3.47(m， 2H， 《/=6.6Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 4.09(q， 2H' /=6.9Hz， -CIi2-CH3)， 6.77~7.53(m， 4H， overlaped with-NH， J=1.8Hz， J=6.9Hz， 7=8.4Hz， Ar)， 7.15(bs， 1H， overlaped with Ar， -NH-); 13C-畫R (75MHz,CDC13)S: 13.8(-CH2-￡H3)， 21.6(-￡H3)， 23.9 (-CH2《H2-CH2-)， 31.6 (-CH2-CH2 -￡H2-)， 39.0(-￡H2-CH2-CH2-)， 60.4 (-￡H2-CH3)， 114.2、 117.9、 118.4、 119.5、 125.7、 133.7 (Ar)， 160.9 (-NH-￡=0)， 169.9 (CH3《=0)， 173.6 (-CH2-Q(=0)-0); EI-MS (m/z): 293[M]+， 294 [M+l]+， 121[M+-172]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸異丙酯(3)淡黃色油狀物1.562g，收率 47.9%。 IR(KBr)v(cm"): 3376(畫NH)， 1703(-C=O)， 1643(-NH-C=0); ^-NMR (400MHz, CDC13)5: 1.23(d， 6H， 《/=6.4Hz， -(CH3)2), L96(t， 2H， 《/=6.4Hz， -CHrCH2-CH2-)， 2.17(s， 3H， -CH3)， 2.44(m， 2H， 《/=6.4Hz， 《/=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 3.50(t， 2H， J:6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 5.01(m，1H， 《/=6.4Hz， -CH-(CH3)2)， 6.84~7.44(m， 4H， overlaped with -NH， >/=1.2 Hz， ^^2.0 Hz， 《/=5.2Hz， 7=7.2Hz， Ar)， 7.35(bs， 1H， overlaped w池Ar，畫NH-); 13C-NMR (75MHz, CDC13)S: 21.7 (-￡H3)，23.8 (-CH-(￡H3)2)， 28.4 (-CH2《H2-CH2-)， 32.5 (-CH2-CH2-￡HrC=0)， 39.6(-NH-￡H2-CH2-CH2-)， 68.3 (-￡H-(CH3)2)， 114.2、 118.4、 118.6、 125.5、 132.3 禾口 134.0 (Ar)， 161.5 (-麗-￡=0)， 170.1 (CH3-￡=0)， 173.7 (-CH2-C(=0)); EI-MS (m/z): 307[M]+， 308[M+l]+， 121 [W-172]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸正丁酯(4)淡黃色油狀物L(fēng)627g，收率 47.8%。 IR(KBr)v(cm"): 3386(-NH)， 1713(-C=0)， 1659(-NH-C=0); 'H陽(yáng)NMR (400MHz， CDC13)S: 0.90(t， 3H， J=7.2Hz， -CH2-CH2-CH2-CtJ3)， 1.33(m， 2H， J=5.2Hz， J=7.2Hz， -CH2-CH2-CH2-CH3)， L58(m， 2H，聲5.2Hz，風(fēng)4Hz， -CH2-CH2-CH2-CH3)， 1.95 (q， 2H， ^6.4Hz， /=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2.11(s， 3H， -CH3)， 2'45(t， 2H， ^6.8Hz， -CHrCH2-CIi2-C=0)， 3.49(q， 2H，盧6.4Hz， -NH-CH2-CH2-CH2-)， 4.06(t， 1H， >6.4Hz， -0-CH2-C3H7)， 6.80~ 7.48(m， 4H， overlaped with-麗，J-0.8Hz， 《/=1.6Hz， 《/=6.8Hz，聲8.4Hz， Ar)， 7'40(bs， 1H， overlaped with Ar， -NH畫)；13C-NMR (75MHz, CDC13)S: 13.0 (-(CH2)3-￡H3)， 20.4(-CH2-CHr￡H2-CH3)， 22.7 (0=C-￡H3)， 23.8 (-CH2-￡H2-CH2-C=0)， 31.4(-CHr^H2-CH2-CH3)， 33.9(-CHrCH2-￡H2-C=0)， 40.8 (-NH- ￡H2-CH2-CH2-)， 63.6(-0-￡H2-CH2-CH2-CH3)， 114.1、 118.5、 118.8、 126.8、 133.6禾口 137.3 (Ar)， 167.9 (-麗-￡=0)， 170.3 (CH3-￡=0)， 173.6 (-CH2-C(=0)-0); EI-MS (m/z): 321[M]+， 294[M+l]+， 121 [M+-172]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸環(huán)己酯(5)淡黃色油狀物1.635g，收率 44.4%。 IRCKBrXcm-1): 3378(-NH)， 1709(-C=O)， 1641(-NH-C=0); ^-NMR (400函z， CDC13)S: 1.26 1.52(m， 8H， H2， H3， H5， H6 of cyclohexanyl)， 1.70(t， 2H， H4 of cyclohexanyl), L80(m， 2H， -CH2-CH2-CH2-)， 2'23(s， 3H， -CH3)， 2.42(t， 2H， -CH2-CH2-CH2—C=0)， 3.28(t， 2H， -NH-CH2-CH2-CH2-)，4.73(t， 1H， HI ofcyclohexanyl), 6.84~7.42(m， 4H， overlaped with國(guó)NH， 《/=7.2Hz， Ar)， 7'27(bs， 1H， overlaped with Ar，畫麗-);13C-畫R (75MHz, CDC13)& 23.7(-0=C-OH3)， 23.8 (C3， C5 of cyclohexanyl)， 25.2 (C4 of cyclohexanyl)， 29.7(-CH2-￡H2-CH2-)， 31.5 (C2， C6 ofcyclohexanyl), 32.6 (0=C-￡H2-CH2-CH2-)， 39.6 (畫麗《H2隱CH2-CH2-)， 73.3 (CI ofcyclohexanyl), 114.2、 118.5、 118.6、 125.5、 133.3和134.0 (Ar)， 161.6(-NH-￡=0)， 170.1 (CH3-￡=0)， 173.7(-￡(=0)-O); EI-MS (m/z): 347 [M]+， 348[M+l]+， 121 [M+-172]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氮基)丁酸苯甲酯(6)淡黃色油狀物1.524g，收率 40,4%。 IR(KBr)v(cm"): 3316(-NH)， 1741(-C=0)， 1635(-NH-C=0); !H-畫R (400MHz, CDC13)5: 1.97(m， 2H， ^6.4Hz， 《/=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2.17(s， 3H， -CH3)， 2.46(t， 2H，風(fēng)8Hz， -CH2-CH2-CH2-C=0)， 3.50(q， 2H， 《/=6.4Hz， -NH-CH2-CH2-CH2-)， 5.34(s， 1H， -CH2-Ar)， 6.82 6.97(m， 4H， 《/=7.2Hz， ^8.0Hz， overlaped with-麗，Ar)， 7.18~7.44(m， 4H， J=7.6Hz， J^8.0Hz， overlaped with -NH， Ar)， 7.18(bs， 1H， overlaped with Ar， -NH-); 13C-畫R (75MHz, CDC13)S: 20.1(-￡H3)， 23.9(-CH2-￡H2-CH2-)， 32.2(-CH2-CH2-￡H2-NH-)， 38.9 (0=C-￡H2-CH2-CH2-)， 68.8 (-￡H2-ph)， 128.9 (C2， C6ofph)， 129.8 (C3， C5 ofph)， 118.6、 120.4、 120.6、 122.4、 125.7、 127.7、 133.9和135.4(Ar and C4 of ph)， 161.6 (-麗-￡=0)， 169.9 (CHr￡=0)， 173.0 (-CH2-￡_( = O)-O); EI-MS (m/z): 355 [M]+， 356[M+l]+， 121 []Vf-172]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸-(2-甲氧萄苯甲酯(7)淡黃色油狀物L(fēng)793g， 收率43.9%。 IR(KBr)v(cm"): 3314(-NH)， 1734(-C=0)， 1642(-NH-C=0); iH-NMR (400MHz, CDC13)S: L98(q， 2H， J-6.0Hz， 《/=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2,17(s， 3H， -CH3)， 2.5l(t， 2H， /:6.8Hz， -CHrCH2-CH2-C=0)， 3.47(q， 2H， 《/=6.0Hz， -NH-CH2-CH2-CH2-)， 3.80(-OCH3)， 5.08(s， 2H， -CH2-Ar)， 6.79~6.97(m， 4H， J:2.0Hz， J:4.8Hz， J=7.2Hz， ^^8.4Hz， overlaped with-NH， Ar)， 7.23~7.40(m， 4H， 《/=1.6Hz， 《/=6.0Hz， 《/=7.2Hz， J=8.4Hz， overlaped with-NH， Ar)， 7.20(bs， 1H， overlaped w他Ar， -NH畫)；13C-NMR (75MHz, CDC13)S: 21.0 (0=C￡H3)， 23.9 (-CHr￡H2-CH2-)， 31.9 (-CH2-CH2-￡H2-C=0)， 39.3(-NH-￡H2- CH2-CH2-)， 55.3(-0￡H3)， 62.2(-￡H2-Ar)， 110.1、 110.5、 118.3、 118.6、 120.4、 120.6、 123.7、 125.7、 128.7、 128.9、 129.8和133.9 (2Ar)， 161.5 (-NH-￡=〇)，170.1 (CHr￡=0)， 174.0 (-CH2-CX=0)-0); EI-MS (m/z): 385[M]+， 386[M+l]+， 121[M+-172]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸-(,甲氧基)苯甲酯(8)淡黃色油狀物1.861g， 收率45.6%。 IR(KBr)v(cm"): 3314(-NH)， 1734(-C=0)， 1642(-NH-C=0); !H-NMR (400MHz， CDC13)S:化畫R(400MHz， CDC13)S: l,99(m， 2H，聲6.8Hz，-CH2-CH2- CH2-)， 2.17(s， 3H，畫CH3)， 2.51(t， 2H， J-6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-C=0)， 3.48(q， 2H， -NH-CIL-CH2-CH2-)， 3.81 (國(guó)OCH3)， 5.12(s， 2H，畫CH2隱Ar)， 6.81~7.04(m， 4H， 《/=3.2Hz，聲4.4Hz， ^7.2Hz， J=8.0Hz， overlaped w他誦NH， Ar)， 7.34 7.40(m， 4H， 《/=1.6Hz， J=2.8Hz， J=5.2Hz， J=7.2Hz， overlaped with -NH， Ar)， 7.40(bs， 1H， overlaped with Ar， -NH國(guó))；13C-麗R (75MHz, CDC13)S: 21.0(-￡H3)， 23.9(-CH2-￡H2-CH2-)， 31.9 (-CH2-CHr￡H2-C=0)， 39.4 (-NH-￡H2-CH2-CH2-)， 55.2(-0《H3)， 66.5 (-￡H2-Ar)， 112.2、 113.2、 113.7、 118.4、 118.6、 119.0、 120.3、 125.5、 129.5、 129.6、 134.1和136.9 (2Ar)， 161.5 (-NH-￡=0)， 170.1 (CH3《=0)， 173.8 (-CH2-C_(=0)-0); EI-MS (m/z): 385[M]+， 386[M+l]+， m[MM72]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸-(4-甲氧基)苯甲酯(9)淡黃色油狀物L(fēng)952g， 收率47.8%。 IR(KBr)v(cm"): 3314(-NH)， 1734(-C=0)， 1642(-NH-C=0); 'H-薩R (400MHz， CDC13)5: 1.97(m， 2H， J:6.0Hz， 《/=7.2Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2.18(s， 3H， 0=C-CH3)， 2'51(t， 2H， 《/=7.2Hz， -CH2-CH2- CH2-C=0)， 3.49(q， 2H， J^6.0Hz， -NH-CH2-CH2-CH2-)， 3.81(-OCH3)， 5.12(s， 2H， -CIL-Ar), 6.81 7.04(m， 4H， 7=7.6Hz， J-8.8Hz， overlaped w他-NH， Ar)， 7.26~7.40(m， 4H， 《/=3.2Hz， /=4.8Hz， /=8.8Hz， overlaped with-NH， Ar)， 7.30(bs， 1H， overlaped with Ar， -NH-); 13C-NMR(75MHz， CDC13)5: 22.3 (0=C-￡H3)， 23.9(-CH2-OH2-CH2-)， 31.7(-CHr CH2-￡H2-C=0)， 39.1 (-NH《H2-CH2- CH2-)， 54.9 (-0￡H3)， 60.5 (-￡H2 -Ar)， 113.5、 113.6、 113.7、 114.2、 114.2、 117.9、 118.4、 125.8、 129.4和133.7 (2Ar)， 161.0 (-麗-￡=0)， 169.9 (CHr￡=0)， 173.7(-CHr￡_(=0》；EI隱MS (m/z): 385[M]+， 386[M+1]+, 121[M+-172]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸-(2-氯)苯甲酯(10)淡黃色油狀物1.846g，收 率44.7%。 IR(KBr)v(cm"): 3378(陽(yáng)NH)， 1702(-C=O)， 1644(-NH-C=0); !H-NMR (400MHz， CDC13)S: 2.03(q， 2H， /=6.0Hz， 《/=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2.17(s， 3H， OC-CH3)， 2.55(t， 2H， J=6.8Hz， -CH2-CH2- CH2-C=0)， 3.52(q， 2H， 《/=6.0Hz， -NH-CH2-CHrCH2-)， 5.23(s， 2H，隱CH2畫Ar)， 6.82~6.98(m， 4H， 《/=7.2Hz，風(fēng)OHz， overlaped with -麗，Ar)， 7.24 7.38(m， 4H， 《/=2.4Hz， J=5.2Hz，聲6.4Hz， overlaped with畫NH， Ar)， 7.24(bs， 1H， overlaped with Ar，畫NH-); 13C-NMR (75MHz, CDC13)S: 23.9 (-￡H3)， 29. 7(-CH2-￡H2- CH2-)， 31.9 (-CH2- CH2-￡H2-)， 39.4 (-￡H2-CH2-CH2-)， 64.1(-￡H2)， 117.0、 118.5、 118.6、 125.4、 126.9、 129.6、 129.7、 130.0、 134.1、 134.2、 136.4和137.5 (2Ar)， 161.6 (-麗畫￡=0)， 170.1 (CH3-￡=0)， 173.7 (-CH2-￡(=0)-0); EI-MS (m/z): 390 [M]+， 391 [M+l]+， 121[M+-172]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸-C -氯)苯甲酯(11)淡黃色油狀物1.924g，收率46.6%。 IR(KBr)v(cm"): 3378(-NH)， 1702(-C=O)， 1644(-NH-C=0);化畫R (400MHz， CDC13)S: 1.97(m， 2H， J:6.4Hz， J=6.8Hz， -CH2-CH2-CH2-)， 2.16(s， 3H， -CH3)， 2.52(t， 2H，風(fēng)8Hz， -CH2-CH2-CHs-C,, 3.49(q， 2H，聲6.4Hz， -NH-CH2-CH2-CH2-)， 5.07(s， 2H， -CH2 -Ar)， 6.81~7.20(m， 4H， J=6.0Hz， J=7.6Hz， /=8.4Hz， overlaped wMi-麗，Ar)， 7.24~7.39(m， 4H， /=6.0Hz， 《/=7.6Hz， overlaped with -NH， Ar)， 7.19(bs， 1H， overlaped with Ar， -NH-); 13C-NMR (75MHz, CDC13)S: 23.9(-￡H3)， 29.6(-CH2《H2-CH2-)， 31.9 (-CH2-CH2-￡H2-C=0)， 39.3 (-NH-￡H2 -CH2-CH2-)， 65.7(-￡H2-Ar)， 114.1、 118.5、 118.5、 118.6、 125.4、 126.1、 128.1、 128.4、 129.9、 134.1、 134.4和137.5 (2Ar)， 161.5 (-NH-￡=0)， 170.1 (CHr￡=0)， 173.6 (-CH2-￡(=0)-0); EI-MS(m/z): 390 [M]+， 391 [M+l]+， 121[M+-172]。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨萄丁酸-(一氯)苯甲酯(12)淡黃色油狀物2.121g，收 率51.3%。 IR(KBr)v(cm"): 3378(-NH)， 1702(-C=O)， 1644(-NH-C=0); !H-NMR (400MHz， CDC13)S: 2.01(m， 2H, /=6.0Hz， J=6.4Hz， -CH2-Qi2-CH2-)， 2.18(s， 3H，隱CH3)， 2.50(q， 2H， /=6.4Hz， -CH2-CH2-CH2-C=0)， 3.50(q， 2H， 《/=6.0Hz， -NH-CHs- CH2-CH2-)， 5.07(s， 2H， -CHrAr), 6.81~7.27(m， 4H， J=8.0Hz， 《/=8.8Hz， overlaped w池國(guó)NH， Ar)， 7.30~7.40(m， 4H， 《/=1.2Hz， /=2.4Hz， J-7.2Hz， ^^7.6Hz， overlaped with -NH， Ar)， 7'30(bs， 1H， overlaped with Ar， -NH隱)；13C-NMR (75MHz, CDC13)S: 23.7(-￡H3)， 29.6(-CH2-￡H2-CH2-)， 32.1 (-CH2-CH2-￡H2-CO)， 39.3 (-NH-￡H2-CH2-CH2-)， 65.8(-￡H2-Ar)， 118.5、 119.6、 125.4、 126.1、 128.1、 128.5、 129.8、 134.1、 135.4和138.4 (2Ar)， 163.5 (-NH-￡=0)， 171.6 (CH3-=0)， 173.1(-CH2-￡(=0)-0); EI-MS(m/z): 390 [M]+， 391 [M+l]+， 121 [1Vf-172]。
五、抗癲癇活性評(píng)價(jià)
1實(shí)驗(yàn)材料
昆明種小鼠，體重在20 25克，雌雄兼用，購(gòu)于蘭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。 實(shí)驗(yàn)前一周飼養(yǎng)于20 25"環(huán)境中，相對(duì)濕度為35 45%，除實(shí)驗(yàn)時(shí)間外動(dòng)物 可以自由覓食和飲水。lmL注射器、電子秤，所有受試化合物均溶解于含6%聚 乙二醇400生理鹽水中，腹腔注射給藥。
4-AP(北京百靈威化學(xué)試劑公司)，用含6%聚乙二醇400生理鹽水溶解，濃 度為0.06%;丙戊酸鈉(湖南湘中制藥有限公司)，用含6%聚乙二醇400生理鹽 水溶解，濃度為0.5%。
2藥理模型選擇
較為成熟的癲癇模型為"點(diǎn)燃，，模型(kinding model),其"點(diǎn)燃"方式包括兩類 即最大電驚厥點(diǎn)燃法(MES)和化學(xué)點(diǎn)燃法(CES)。 CES法是目前最為常用的癲癇 模型方法，常用藥物有印防己毒(PTX)、青霉素、美解眠、戊四氮(PTZ)、海人酸、Li-Pilocarpine及4-AP等。4-AP點(diǎn)燃法雖不常用，但起效很明顯， 一般 在給藥后10 15min后，動(dòng)物出現(xiàn)明顯的癲癇癥狀，系急性癲癇點(diǎn)燃法。根據(jù) 給藥量的不同，動(dòng)物出現(xiàn)的行為差別較為明顯，便于實(shí)驗(yàn)觀察，而且這種癲癇 發(fā)作較為持久， 一般會(huì)持續(xù)30 40min，可自行消失，造模成功率可達(dá)95%。本 實(shí)驗(yàn)采用4-AP點(diǎn)燃法造模。 3實(shí)驗(yàn)方法
模型建立[23-25]:成年昆明種小鼠，體重20 25g。按7mg.kg"劑量腹腔注射 4-AP，經(jīng)10 15min觀察，有95%小鼠出現(xiàn)呼吸加粗，活動(dòng)增多，面部抽搐伴 全身性陣攣，發(fā)出吱吱叫聲，并出現(xiàn)追逐攻擊行為，豎立對(duì)峙，相互撕咬，陣 發(fā)性痙攣，后腿僵直伴跌倒癥狀，這種行為在給藥后持續(xù)約30 40min后逐漸 消失，表明致癇模型成功，選擇造模成功的小鼠用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物癇性發(fā)作 分級(jí)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)采用Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)
0級(jí)無(wú)抽搐發(fā)作； I級(jí)，面部抽搐和孤立性肌陣攣；
II級(jí)，全身性陣攣抽搐；
in級(jí)，全身性陣攣抽搐，伴站立；
IV級(jí)；全身性陣攣抽搐，伴站立和跌倒；
V級(jí)；同IV級(jí)反復(fù)性發(fā)作呈SE或抽搐致死。持續(xù)出現(xiàn)V級(jí)者判定為小鼠癲 癇持續(xù)狀態(tài)。
癲癇輕度發(fā)作表現(xiàn)ni級(jí)或III級(jí)以下；而重度發(fā)作表現(xiàn)IV級(jí)或V級(jí)。 給藥方法空白對(duì)照組，按20mL.kg"腹腔注射生理鹽水；模型對(duì)照組，按
7mg.kg—1劑量腹腔注射含6%聚乙二醇400的4-AP生理鹽水溶液；給藥組，按 20 mL.kg"腹腔注射含6%聚乙二醇400的不同化合物生理鹽水溶液和7mg.kg—1 劑量腹腔注射含6%聚乙二醇400的4-AP生理鹽水溶液；陽(yáng)性對(duì)照組，按20 mL,kg"腹腔注射含6。/。聚乙二醇400的丙戊酸鈉生理鹽水溶液和7mg.kg"劑量腹 腔注射含6%聚乙二醇400的4-AP生理鹽水溶液。 4初步活性篩選
抗癲癇藥理實(shí)驗(yàn)采用美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生院的抗癲癇藥開發(fā)流程[27_28]，先進(jìn)行初 步活性篩選，對(duì)活性較好的化合物再進(jìn)行進(jìn)一步活性試驗(yàn)，測(cè)定化合物的EDso。
初步活性篩選選擇造模成功的小鼠216只，雌雄各半，隨機(jī)分為36組， 每組6只小鼠，其中空白對(duì)照組、模型對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組各1組，給藥組33 組。每個(gè)化合物選定三個(gè)劑量組(SOmg.kg-1、 160 mg.kg"、 SWmg'kg-1),分別腹 腔給受試化合物，待20min后，再腹腔注射4-AP，觀察小鼠的行為變化，測(cè)試 化合物的抗癲癇活性(見表2)。
17表2 4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯類衍生物的初步藥理實(shí)驗(yàn)
給藥劑量(mg'kg—
化合物
80 160 240
16(-)0%2(+)、 4(-)33%4(+)、 2(-)67%
26(-)0%6(-)0%6(-)0%
6(-)0%6(-)0%6(-)0%
46(-)0%6(-)0%6(-)0%
6(-)0%3(+)、 3(-)50%5(+)、 l(-)83%
66(-)0%3(+)、 3(-)50%4(+)、 2(-)67%
7~96(-)0%K+)、 5(-)17%4(+)、 2(-)67%
10~126(-)0%4(+)、 2(-)67%6(+)100%
丙戊酸鈉6(-)0%5(+)、 l(-)83%6(+)100%
注n(+)表示在該給藥劑量的陽(yáng)性動(dòng)物數(shù)；n(-)表示陰性動(dòng)物數(shù)，％表示有效率。
如表2:初步活性評(píng)價(jià)表明，12個(gè)化合物中1、 5 12等9個(gè)化合物有活性， 并存在一定的量效關(guān)系。將初步活性評(píng)價(jià)較好的9個(gè)化合物進(jìn)行進(jìn)一步活性評(píng) 價(jià)，并將ED, LDso單位由mg.kg"換算為mmoi.kg'1，探討構(gòu)效關(guān)系并評(píng)價(jià)其 抗癲癇活性(見表3)。 9個(gè)化合物的抗癲癇作用比經(jīng)典抗癲癇藥物丙戊酸鈉強(qiáng) 0.4 1.6倍。其中化合物10-12的EDso最小，說明活性最強(qiáng)，比丙戊酸鈉強(qiáng)1.6 倍；TI最大，安全性最好，安全指數(shù)與丙戊酸鈉相當(dāng)。化合物7-9活性較小， 但LDso最小，表明毒性最大。 5 ED50和LDso的測(cè)定
通過初步活性篩選，對(duì)抗癲癇作用有效的化合物進(jìn)行進(jìn)一步活性試驗(yàn)，按 改良寇氏(Karber)法測(cè)定各化合物的ED^和LD5Q，定量評(píng)價(jià)所合成的化合物的
抗癲癇活性。結(jié)果見(表3)。
表3 4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯的EDso和LD鄰測(cè)定結(jié)果_
化合物編號(hào) logP ED5q (mmol.kg-1) LD5Q (mmol.kg-') TI
1 0.600.7242 1.5743 2.17
5 2.410.4660 1.2156 2.61
6 2.600.4657 1.3016 2.79
7 2.470.4901 1.1466 2.34
8 2.470.4901 U466 2.34
9 2.470.4901 U466 2.34103.150.39641.27073.21
n3.150.39641.27073.21
123.150.39641.27073.21
丙戊酸鈉2.581.04373.67553.52
化合物的脂水分配系數(shù)logP與其藥代動(dòng)力學(xué)特性密切關(guān)系，通過 chemoffice8.0計(jì)算可知目標(biāo)化合物的logP。 logP與生物學(xué)評(píng)價(jià)指標(biāo)ED5Q、 LD50 和TI關(guān)系如圖1。結(jié)果表明logP與該類化合物的活性ED5Q、 IX^和TI存在明 顯相關(guān)性，尤其是安全指數(shù)TI與logP存在明顯平行關(guān)系，提示該類化合物穿過 BBB的能力是發(fā)揮療效的關(guān)鍵影響因素之一。
本發(fā)明的4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯的構(gòu)效關(guān)系參見圖1，
芳環(huán)引入甲氧基供電子基團(tuán)，抗癲癇活性降低，表明苯環(huán)引入供電子基團(tuán)， 抗癲癇作用降低，毒性反而增大。苯環(huán)引入吸電子基團(tuán)(如氯原子)，抗癲癇作用 增強(qiáng)，毒性卻降低。
4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸化合物1作為先導(dǎo)化合物其抗癲癇活性僅為 丙戊酸鈉1.4倍，較差，其安全性也較差，而通過對(duì)其羧基進(jìn)行酯化修飾，可以 明顯提高抗癲癇活性和安全性。因此，可以設(shè)想以此為母核還可以做更多的結(jié) 構(gòu)修飾來尋找活性更高、毒性更小的化合物。
綜上所述具有4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸結(jié)構(gòu)的酯類的部分化合物對(duì) 4-AP致癇小鼠具有較好的治療作用。構(gòu)效關(guān)系表明在酯末端結(jié)構(gòu)中引入大基 團(tuán)酯結(jié)構(gòu)有利于發(fā)揮活性，其中以芐酯和環(huán)己酯為較好；苯環(huán)結(jié)構(gòu)中引入吸電 子原子或原子團(tuán)可使化合物的活性增大、毒性降低；供電子基團(tuán)可降低化合物 活性、毒性也增大；此外該類化合物的logP與其抗癲癇活性及安全性緊密相關(guān)。
19
權(quán)利要求
1、如下式的4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸及其酯類衍生物。其中的取代基R為H、C2H5、CH(CH3)2、n-C4H9、C6H11、CH2C6H5、CH2C6H4(O-OCH3)、CH2C6H4(m-OCH3)、CH2C6H4(p-OCH3)、CH2C6H4(O-Cl)、CH2C6H4(m-Cl)或CH2C6H4(p-Cl)中的任一種。
2、 權(quán)利要求1所述的4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸及其酯類衍生物在制備抗癲癇藥物中的應(yīng)用。
3、 權(quán)利要求l所述的4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸酯類衍生物的制備方法，其特征是以Y-氨基丁酸為原料，以；7-TsOH為催化劑，甲苯為夾帶劑，將Y-氨基丁酸和相應(yīng)的醇反應(yīng)制成Y-氨基丁酸酯對(duì)甲基苯磺酸鹽;然后以TEA為縛酸劑與2-乙酰氧基苯甲酰氯反應(yīng)得4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸酯，再經(jīng)乙酰氯酰化得目標(biāo)化合物。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征是在反應(yīng)容器內(nèi)加入20mmd的？氨基丁酸，22.88mmo1的對(duì)甲基苯磺酸水合物，25mmo1的甲醇或乙醇或異丙醇或正丁醇或環(huán)己醇或苯甲醇或2-甲氧基苯甲醇或3-甲氧基苯甲醇或4-甲氧基苯甲醇或2-氯苯甲醇或3-氯苯甲醇或4-氯苯甲醇，以及25mL的甲苯，加熱回流4 8h，以甲苯為夾帶劑除去反應(yīng)體系中生成的水，反應(yīng)完畢后減壓除去過量醇、甲苯，加入100mL的無(wú)水乙醚冷藏放置過夜，得白色固體，用無(wú)水乙醇/乙醚重結(jié)晶得Y-氨基丁酸酯對(duì)甲苯磺酸鹽。20mmo1 氨基丁酸酯對(duì)甲苯磺酸鹽加入裝有60mL二氯甲烷的反應(yīng)容器中，將溶有22mmo1的2-(乙酰氧基)苯甲酰氯8mL的二氯甲烷和15mL三乙胺分別點(diǎn)滴加入其中，反應(yīng)體系置于6(TC油浴中回流18 24h，反應(yīng)完成后停止加熱，室溫冷卻，分別用碳酸氫鈉水溶液、水洗滌有機(jī)層，有機(jī)相內(nèi)加入適量活性碳煮沸10min脫色，無(wú)水硫酸鎂干燥過夜，減壓除去二氯甲烷得油狀物，經(jīng)層析分離，收集相應(yīng)組分，減壓回收溶劑得相應(yīng)的油狀物4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸酯，將4-(2-羥基苯甲酰氨基)丁酸酯10.6mmo1溶解于盛有50mL 二氯甲垸的反應(yīng)容器中，緩慢攪拌加入5mL三乙胺，置反應(yīng)于冰-水浴中保持10min，將溶有1.5mL乙酰氯的二氯甲垸溶液5mL緩慢點(diǎn)滴加入，移去冰水浴，反應(yīng)逐漸恢復(fù)至室溫，繼續(xù)攪拌至反應(yīng)完畢后，加水20mL猝滅反應(yīng)，分層、有機(jī)層水洗、合并有機(jī)層，無(wú)水硫酸鈉干燥過夜，減壓除去二氯甲烷，得相應(yīng)的4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸酯類衍生物。
5、 權(quán)利要求l所述的4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸的制備方法，其特征是以吡咯烷酮鈉鹽為原料，在TEBA催化存在下，與2-乙酰氧基苯甲酰氯反應(yīng)得到2-乙酰氧基苯甲酰-吡咯烷酮，然后在HC1和Pt02存在下開環(huán)得4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征是在反應(yīng)容器內(nèi)加入0. 05mol吡咯烷酮鈉鹽甲苯溶液65mL，攪拌，控制溫度為l(TC以下加入O. 005mol TEBA，點(diǎn)滴0. 05mol 2-乙酰氧基苯甲酰氯的無(wú)水甲苯溶液50mL， 20分鐘內(nèi)加完，于室溫下反應(yīng)0.5h，再于5(TC攪拌反應(yīng)3h，待反應(yīng)完全，加入冷水100mL，分別用飽和碳酸氫鈉20mL、 20mL、 10mL洗滌甲苯層，后用50mL蒸餾水洗至中性，無(wú)水硫酸鎂干燥過夜。減壓回收甲苯，殘留物用無(wú)水乙醇結(jié)晶，即得白色片狀晶體IO. lg 2-乙酰氧基苯甲酰-吡咯垸酮。然后將25mmo1 2-乙酰氧基苯甲酰-吡咯烷酮溶解于80mLmol.L—'HC1中，加入12. 5隱0詣2， 6(TC下加熱回流12h，待反應(yīng)完全，室溫冷卻，加30mL水洗兩次，鹽酸調(diào)ra為3 5，乙酸乙酯萃取，合并有機(jī)層，加入無(wú)水硫酸鈉干燥過夜，減壓除去乙酸乙酯得白色針狀固體，用水洗滌、70%乙醇重結(jié)晶，得白色針狀固體4-(2-乙酰氧基苯甲酰氨基)丁酸。
全文摘要
本發(fā)明公開一類新化合物，以及這種化合物的用途和制備方法，本發(fā)明的化合物是4-(-2-乙酰氧基苯甲酰)氨基丁酸及其酯類的化合物，這類化合物可在制備抗癲癇藥物中應(yīng)用。
文檔編號(hào)C07C235/60GK101544579SQ200910141219
公開日2009年9月30日 申請(qǐng)日期2009年5月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月7日
發(fā)明者劉文虎, 沖 李, 殿 賀, 忠 賈 申請(qǐng)人:蘭州大學(xué)