專利名稱：落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物、制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物，特別涉及落葉松樹(shù)脂醇及其與單糖、多糖 的衍生物。本發(fā)明還涉及所述落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物的制備方法和用途。
背景技術(shù)：
板蘭根為十字花科植物落藍(lán)IsatLindlgotic。Fort的干燥根，具有清熱解毒，涼 血利咽作用。臨床上廣泛應(yīng)用于治療流感，帶狀疤疹、腮腺炎等病毒性疾病。有關(guān)板蘭根抗 病毒有效部位的研究已有許多報(bào)道，抗病毒有效物質(zhì)種類較多，我們的研究工作進(jìn)一步證 實(shí)板蘭根抗病毒有效部位主要與含有氨基酸或小肽的化合物有關(guān)?？滤_奇病毒B3(CVB3) 是正鏈RNA病毒，屬于小RNA病毒科，腸道病毒屬?？滤_奇病毒是病毒性心肌炎的主要病原 體，約50%病毒性心肌炎系CVB3所致，直接影響該病的預(yù)后。目前，常用的抗病毒藥物病毒 唑?qū)俸塑疹愃莆?，毒性較大，且具有致畸作用。因此，尋找更加安全有效的抗CVB3藥物勢(shì)在 必行。南板藍(lán)根是我國(guó)傳統(tǒng)中藥的重要組成，南板藍(lán)根是產(chǎn)于我國(guó)熱帶地區(qū)的中藥材。作 者以廣東省產(chǎn)的南板藍(lán)根為主，以HeLa細(xì)胞為體外篩選模型，對(duì)其有效部位抗CVB3活性進(jìn) 行研究，為篩選新的抗病毒藥物提供理論依據(jù)。板藍(lán)根臨床上廣泛用于治療病毒和細(xì)菌感染性疾病。一些體內(nèi)和體外的實(shí)驗(yàn)研究 均證實(shí)了板藍(lán)根的抗流感病毒活性。以雞胚法考察15個(gè)種質(zhì)的板藍(lán)根對(duì)甲型流感病毒的 抑制作用，血凝滴度顯示板藍(lán)根的水提醇沉淀對(duì)病毒的直接作用、治療作用、預(yù)防作用的有 效率分別為100%、60%、70給引本研究也顯示了板藍(lán)根抗流感病毒作用，在板藍(lán)根的直接 作用、預(yù)防作用和治療作用下，流感病毒感染力分別下降200倍、1000倍和100倍(TCID。分 別降低2. 51og、3. 01og、2. Olog)，明顯降低流感病毒體外增殖能力。采用血凝抑制試驗(yàn)方 法，考察板藍(lán)根凝集素效價(jià)與抑制流感病毒作用的關(guān)系，認(rèn)為板藍(lán)根凝集素的抗病毒功效 與其血凝活性呈正相關(guān)，板藍(lán)根凝集素具有血凝活性。在對(duì)板藍(lán)根凝集素粗提液抗流感病 毒的研究中發(fā)現(xiàn)，板藍(lán)根凝集素對(duì)流感病毒具有顯著的直接殺滅作用和預(yù)防作用及良好的 治療作用，而且抑制流感病毒的效果與板藍(lán)根凝集素血凝活性的高低有關(guān)。經(jīng)研究表明，從板藍(lán)根中分離得到的木脂素總苷l(shuí)ignan-sides是抑制流感病毒 的有效成分，其中代表成分為落葉松樹(shù)脂醇-二-吡喃葡萄糖苷clemastanin B，其分子結(jié)
構(gòu)如下
權(quán)利要求
一種落葉松樹(shù)脂醇(lariciresinol)及其衍生物，其特征在于，是具有苯環(huán)和四氫呋喃環(huán)的木脂素類化合物以及其與單糖或多糖的酯化物，其分子結(jié)構(gòu)的通式如下其中，R1為羥基、羥基與單糖的酯化物、羥基與多糖的酯化物。F2009100565716C0000011.tif
2.如權(quán)利要求1所述的落葉松樹(shù)脂醇衍生物，其特征在于，所述Rl為羥基與唾液酸 C11H19N09的酯化物，所述落葉松樹(shù)脂醇衍生物的分子結(jié)構(gòu)如下
3.如權(quán)利要求1所述的落葉松樹(shù)脂醇衍生物，其特征在于，所述Rl為羥基與唾液酸 α -2,3-半乳糖C18H31N014的酯化物，所述落葉松樹(shù)脂醇衍生物的分子結(jié)構(gòu)如下
4.如權(quán)利要求1所述的落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物的制備方法，其特征在于，包含以下步驟步驟1 提取將板藍(lán)根藥材粗粉采用95%乙醇加熱回流提取1 3次，得到乙醇提取液和殘留物，合 并所得各乙醇提取液，將其加熱減壓回收溶劑至殘留物為浸膏狀，得到總提取物浸膏； 步驟2 溶劑處理將所得浸膏與水混合，并加熱攪拌，采用等體積氯仿萃取所得混合液1 4次得到水 層，隨后采用等體積乙酸乙酯萃取所得水層1 4次，合并乙酸乙酯萃取液，將所得溶液減 壓回收溶劑至干，隨后將所得殘留物溶于95%乙醇，并將所得溶液加熱減壓濃縮至其中乙 醇含量不高于50%，得到殘留物的乙醇溶液； 步驟3 大孔樹(shù)脂處理將所得的殘留物的乙醇溶液加入大孔樹(shù)脂柱中，采用10%乙醇溶液和30%乙醇溶液 沖洗到無(wú)色，隨后采用95%乙醇沖洗，收集流出液，并將其加熱回流減壓回收溶劑至干，得 到固體殘留物；步驟4:重結(jié)晶將所得固體殘留物溶于甲醇和丙酮的混合溶液，隨后將所得溶液加熱減壓濃縮，將所 得濃縮物靜置析晶，得到黃色針狀晶體，將所得晶體采用甲醇、水反復(fù)重結(jié)晶2 4次，得到 中間產(chǎn)物落葉松樹(shù)脂醇-二-吡喃葡萄糖苷； 步驟5 水解將所得中間產(chǎn)物溶于HCL溶液，并加熱回流攪拌反應(yīng)，隨后趁熱抽濾，并將所得濾 液靜置冷卻，隨后采用乙醚萃取1 3次，合并乙醚層并將其加熱至減壓濃縮至干，得到落 葉松樹(shù)脂醇的粗產(chǎn)品； 步驟6:重結(jié)晶將所得粗產(chǎn)品溶于乙酸乙酯，隨后將所得溶液靜置析晶，重復(fù)上述溶解析晶過(guò)程處理 2 3次，析出白色針狀晶體，得到落葉松樹(shù)脂醇。
5.如權(quán)利要求4所述的落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物的制備方法，其特征在于，所述步驟 1、步驟2分別進(jìn)一步包括以下步驟步驟1. 1 按料液體積比1 3 1 9，將20目 50目的板藍(lán)根藥材粗粉與95%乙 醇混合，將所得混合液在加熱至80°C 90°C回流2小時(shí)，過(guò)濾得到乙醇提取液和殘留物， 向所得殘留物中加入與之前所加95%乙醇體積相等的95%乙醇，將所得混合液在80°C 90°C下加熱回流2小時(shí)，過(guò)濾再次得到乙醇提取液和殘留物；步驟1. 2 合并所得乙醇提取液，并將其加熱至55°C 65°C減壓回收溶劑至殘留物為 浸膏狀，得到總提取物浸膏；步驟2.1:按照體積比1 8 1 10，將所得浸膏與水混合，并將所得混合液加熱至 60°C 80°C攪拌15 25分鐘，采用等體積氯仿萃取所得混合液1 4次，得到氯仿萃取過(guò) 的水層，隨后采用等體積乙酸乙酯萃取所得水層1 4次，合并乙酸乙酯萃取液并采用無(wú)水 硫酸鈉脫水，得到溶液；步驟2. 2:將所得溶液在30°C 40°C下減壓回收溶劑至干，并按照料液體積比1 4 1 6將所得殘留物溶于30°C 40°C的95%乙醇中，將所得溶液加熱至40°C 50°C減壓 濃縮至所得溶液中乙醇含量不高于50%，得到殘留物的乙醇溶液。
6.如權(quán)利要求4所述的落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物的制備方法，其特征在于，所述步驟 3、步驟4分別進(jìn)一步包括以下步驟步驟3. 1 將所得的殘留物的乙醇溶液加入大孔樹(shù)脂柱中，采用10%乙醇溶液和30% 乙醇溶液沖洗到無(wú)色，隨后采用95%乙醇沖洗，收集流出液；步驟3. 2 將所得流出液加熱回流至40°C 50°C減壓回收溶劑至干，得到固體殘留物；步驟4. 1 將所得固體殘留物溶于溫度為30°C 40°C的甲醇和丙酮的混合溶液； 所述固體殘留物與甲醇和丙酮的混合溶液的料液體積比為14 16; 所述甲醇和丙酮的混合溶液中，甲醇和丙酮的體積比為1 1 1 2; 步驟4. 2 將所得溶液加熱至30°C 40°C減壓濃縮至原先體積的1/5，將所得濃縮物 在-23°C _13°C條件下靜置12 24小時(shí)，析出黃色針狀晶體，濾出晶體；步驟4. 3 將所得晶體在室溫條件下采用甲醇、水反復(fù)重結(jié)晶2 4次，得到中間產(chǎn)物 落葉松樹(shù)脂醇-二-吡喃葡萄糖苷；所述甲醇、水反復(fù)重結(jié)晶過(guò)程是在3V 7°C條件下自然析晶。
7.如權(quán)利要求4所述的落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物的制備方法，其特征在于，所述步驟 5、步驟6分別進(jìn)一步包括以下步驟步驟5. 1 將0. 8 1. 2g所得中間產(chǎn)物溶于45 55mL 1 % HCL溶液，并將所得溶液加 熱回流至60V 80°C攪拌反應(yīng)6 10小時(shí)，趁熱抽濾；步驟5. 2 將所得濾液在室溫下靜置冷卻0. 5 1小時(shí)，采用45 55mL乙醚萃取1 3次，合并所得乙醚層并將其加熱至40°C 50°C減壓濃縮至干，得到落葉松樹(shù)脂醇的粗產(chǎn)品；步驟6. 1 將所得粗產(chǎn)品與15 25mL乙酸乙酯混合，并將所得混合液加熱至35°C 40°C溶解，隨后將所得溶液在_23°C -13°C條件下靜置析晶，得到析出物步驟6. 2 采用步驟6. 1的過(guò)程處理所得析出物2 3次，析出白色針狀晶體，得到落 葉松樹(shù)脂醇。
8.如權(quán)利要求4所述的落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物的制備方法，其特征在于，進(jìn)一步包 含步驟7衍生化，所述步驟7包括以下步驟步驟7. 1 將0. 15 0. 25g唾液酸C11H19N09溶于20 30ml 二氯甲烷，隨后在室溫 下依次加入0. 8 1. 2g所得落葉松樹(shù)脂醇和40 60mg 二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)；步驟7. 2 將所得溶液在室溫條件下攪拌8 12小時(shí)，隨后加入等體積的水稀釋，并采 用等體積的二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相并采用飽和食鹽水洗滌、無(wú)水硫酸鈉干燥；步驟7. 3 將所得溶液加熱回流至35°C 45°C減壓蒸餾，除去溶劑，得到落葉松樹(shù)脂醇 與唾液酸的酯化物。
9.如權(quán)利要求4所述的落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物的制備方法，其特征在于，進(jìn)一步包 含步驟7衍生化，所述步驟7包括以下步驟步驟7. 1 將0. 15 0. 25g唾液酸0 2，3-半乳糖(18!131吣14溶于20-301111 二氯甲 烷，隨后在室溫下依次加入0. 8 1. 2g所得落葉松樹(shù)脂醇和40 60mg 二環(huán)己基碳二亞胺 (DCC)；步驟7. 2 將所得溶液在室溫條件下攪拌8 12小時(shí)，隨后加入等體積的水稀釋，并采用等體積的二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相并采用飽和食鹽水洗滌、無(wú)水硫酸鈉干燥；步驟7. 3 將所得溶液加熱回流至35°C 45°C減壓蒸餾，除去溶劑，得到落葉松樹(shù)脂醇 與唾液酸α 2，3_半乳糖的酯化物。
10.如權(quán)利要求1所述的落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物在抗病毒中的應(yīng)用，特別是在抗流 感病毒中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物、制備方法和在抗病毒中的應(yīng)用。所述落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物，其是具有苯環(huán)和四氫呋喃環(huán)的木脂素類化合物以及其與單糖或多糖的酯化物，其分子結(jié)構(gòu)的通式如下其中，R1為羥基、羥基與單糖或多糖的酯化物。本發(fā)明所公開(kāi)的制備方法是采用多級(jí)萃取和樹(shù)脂樹(shù)立的方法，提取板藍(lán)根中的落葉松樹(shù)脂醇-二-吡喃葡萄糖苷，隨后在酸性條件下，將經(jīng)過(guò)重結(jié)晶處理后的落葉松樹(shù)脂醇-二-吡喃葡萄糖苷進(jìn)行水解，從而制備得到本發(fā)明所公開(kāi)的落葉松樹(shù)脂醇。隨后在二氯甲烷和二環(huán)己基碳二亞胺存在的條件下，將經(jīng)過(guò)重結(jié)晶提純的落葉松樹(shù)脂醇與單糖或多糖進(jìn)行衍生化反應(yīng)，從而制備得到本發(fā)明所公開(kāi)的落葉松樹(shù)脂醇及其衍生物。
文檔編號(hào)C07D307/20GK101993424SQ20091005657
公開(kāi)日2011年3月30日 申請(qǐng)日期2009年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月18日
發(fā)明者李云森, 程萍, 陳子珺, 雷啟福 申請(qǐng)人:上海金昊藥業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司