專利名稱：一種提取橙皮苷與柚皮苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及提取橙皮苷與柚皮苷的方法，具體涉及一種利 用微波輔助萃取技術(shù)提取橙皮苷與柚皮苷的方法。
技術(shù)背景橙皮苷(Hesperidin)是從枳實中提取的一種原料藥，屬維生素類藥，可 以降低毛細血管的脆性及通透性，用于高血壓病及毛細血管出血性疾患的輔助 治療，對毛細血管抵抗力降低有改善作用(增強維生素C的作用)，具有抗炎、 抗病毒作用，是治療高血壓和心肌梗塞的藥物，醫(yī)藥工業(yè)中用作制藥的原料， 是中成藥脈通的主要組成之一；柚皮苷(Naringin)是一種雙氫黃酮類化合物。 柚皮苷顯示多種生物學(xué)活性和藥理作用，具有抗菌、抗炎、抗癌、解痙和利膽 作用，也可用作食品中的香料添加劑。流行病學(xué)研究表明經(jīng)常食用柚類能起到 良好—的保護血管、預(yù)防冠心病的作用。已知橙皮苷存在于多種植物中，在蕓香科柑桔屬植物的果皮中(中藥陳皮) 含量尤其豐富，具有理氣健脾、祛濕化痰的功效，中醫(yī)常用于治療胸脘脹滿、 食少吐瀉、咳嗽痰多等病癥；柚皮苷主要存在于蕓香科植物葡萄柚、從柚、胡 柚的果實中，也是中草藥骨碎補、枳實、枳殼、橘紅的主要有效成分。目前市 場上果汁種類多達幾百種，其中大部分為橙汁類飲品。本領(lǐng)域判斷橙汁飲品優(yōu) 劣的主要標準之一即其鮮橙汁的含量，判斷柚子汁飲品優(yōu)劣的主要標準之一即 其鮮柚汁的含量。因此，橙皮苷與柚皮苷的提取分析可用于評價果汁、新鮮橙 柚類水果及中藥的質(zhì)量。微波輔助萃取(MAE)是以微波能來提取植物中的可溶性材料的技術(shù)，主要 在有機溶劑中進行。微波具有很強的穿透力，可以在物料內(nèi)外同時均勻、迅速 地加熱能使細胞破裂，胞內(nèi)有效成分自由流出，傳遞到周圍介質(zhì)被溶解。與傳 統(tǒng)提取技術(shù)相比，MAE具有提取率高、提取時間短、樣品用量少等優(yōu)點。目前，已有報道的用于提取橙皮苷和柚皮苷的方法僅為有機溶劑提取法或 超聲提取法，所述方法存在如下缺陷有機溶劑用量大、耗時長、提取效率低，單純使用所述方法難以將果汁、水果或中藥中的橙皮苷與柚皮苷提取完全，不 利于進一步的含量分析與測定。因此本領(lǐng)域需要建立一個快速，簡單，高效、 可靠的提取方法，便于對不同介質(zhì)中橙皮苷與柚皮苷的含量進行分離分析。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種橙皮苷與柚皮苷的提取方 法，涉及從固態(tài)或半固態(tài)或液態(tài)待測樣品中提取橙皮苷與柚皮苷的方法。尤其是從果fK—新鮮水果的果皮、果肉和中藥中提取橙皮苷與柚皮苷的方法。本方法采用微波輔助萃取技術(shù)提取果汁、新鮮水果的果皮、果肉或中藥中的橙皮苷與柚皮苷，簡便，快速，樣品用量少，萃取效率高，重現(xiàn)性好，回收率高。 本方法與高效液相色譜結(jié)合，可準確測定橙皮苷與柚皮苷的含量，從一定角度評價果汁、水果和中藥的質(zhì)量。本發(fā)明所述的橙皮苷與柚皮苷具有圖i的結(jié)構(gòu)式。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)將樣品用粉碎機攪碎，定量取樣品，放入反應(yīng)器中，加入提取溶劑后，將反 應(yīng)器放置于微波輔助萃取裝置中，選定提取溶劑、微波功率和萃取時間后，利用MAE—i取樣品中的橙皮苷和柚皮苷，萃取后離心，取出上清液。本發(fā)明方法所述的提取溶劑是水與有機溶劑組成的混合溶劑，其中水有機 溶劑的比例范圍為80: 20~20: 80。所述的有機溶劑選自二甲亞砜、甲醇、乙醇、或乙腈。本發(fā)明方法根據(jù)所測品的不同，采用相應(yīng)的提取溶劑的用量(體積重量比或體積體積比)當樣品為固態(tài)或半固態(tài)，如中藥、水果果皮或果肉時，提取溶劑的用量(mL)是樣品量(g)的5-20倍；當樣品為液態(tài)，如果汁時，提取溶劑的用量 (mL)是樣品量(mL)的2-10倍。本發(fā)明所述的微波輔助萃取(MAE)提取效率的影響因素有提取溶劑的種 類、岳，只，微波功率及微波時間。本發(fā)明上述提取橙皮苷與柚皮苷成分的方法中，使用的微波功率為100 1000瓦。本發(fā)明上述提取橙皮苷與柚皮苷成分的方法中，使用的萃取時間為1 10分鐘。本發(fā)明通過下述試驗進行影響因素的篩選確定，1) 提取溶劑種類的選擇由于水是微波萃取中最佳的微波吸收劑，因此在提取溶劑種類優(yōu)化的過程 中，本發(fā)明選用有機溶劑與水的混合溶劑。本方法分別選用了50%的甲醇水溶液， 40%、 50%、 55%、 60。/。的DMSO水溶液作為提取溶劑，在其他實驗條件相同的 情況下，提取并分析樣品中橙皮苷的含量，結(jié)果表明，DMSO水溶液作為溶劑時 的提敢—率遠遠大于甲醇水溶液，其中，50。/。的DMSO水溶液提取率優(yōu)于40。/。、 55% 和60% (圖2)，本發(fā)明的提取溶劑優(yōu)選50。/。DMSO水溶液。2) 提取溶劑量的選擇提取中藥中橙皮苷，稱取樣品量約lg置于反應(yīng)器，分別使用5ml， 10ml， 20ml 的50。/。DMSO水溶液進行微波提取，結(jié)果表明，5ml與10ml的提取溶劑的提取率 無明顯區(qū)別，其中采用5ml溶劑時，出現(xiàn)部分樣品變焦結(jié)塊；20ml的溶劑進行微 波時會出現(xiàn)溶液沖出冷凝管的現(xiàn)象，優(yōu)選提取溶劑量為10ml，為樣品量的10倍；提取果肉和果皮中橙皮苷與柚皮苷，稱取約lg果肉或果皮置于反應(yīng)器，結(jié)果 表明，優(yōu)選的提取溶劑的量為5mL，是樣品量的5倍；提取果汁中橙皮苷與柚皮苷，量取lmL樣品置于反應(yīng)器，結(jié)果表明，優(yōu)選的 提取溶劑的量為5mL，是樣品量的5倍。3) 微波功率與微波時間的選擇上述提取中藥中橙皮苷的結(jié)果表明，優(yōu)選的提取條件是提取功率400W， 提取時間3分鐘；上述提取果汁、果肉或果皮中橙皮苷與柚皮苷的結(jié)果表明，優(yōu)選的提取條件是提取功率500W，提取時間3分鐘；分別比較了微波輔助萃取和超聲處理提取果汁和中藥樣品后，用HPLC測定 的橙皮苷的含量，結(jié)果表明，通過微波輔助萃取所提取得到橙皮苷的含量遠遠高 于超聲提取法(圖3)，證明微波萃取提取率高，且所需時間短，優(yōu)勢明顯。本發(fā)明提取橙皮苷與柚皮苷成分的方法簡便、準確、可靠，快速，樣品用量 少，萃取效率高，萃取時間短，重現(xiàn)性好，回收率高。本法與高效液相色譜結(jié)合， 可用于準確測定果汁、水果和中藥中橙皮苷與柚皮苷的含量，從一定角度評價它們的質(zhì)量。


圖1為橙皮苷與柚皮苷的結(jié)構(gòu)式。圖2為不同提取溶劑條件下，橙皮苷的提取量差異圖，其中，50%的DMSO水溶液作為提取溶劑，其提取率優(yōu)于40%、 55%和60%。圖3為超聲提取法與微波萃取法提取果汁中橙皮苷含量的比較圖，其中，通過微波輔助萃取所提取得到橙皮苷的含量遠遠高于超聲提取法。圖4為不同品牌果汁中橙皮苷的含量差異圖，其—中，農(nóng)夫果園牌果汁中橙皮苷的含量最高，約為0.4mg/ml，說明其原料 鮮橙汁的含量最高。圖5為不同品牌果汁中柚皮苷的含量差異圖，其中，味全牌柚子汁中柚皮苷的含量高于美麗果牌，約為0.065mg/ml，其 原料鮮柚汁的含量更高。
具體實施方式
實施例1MAE-HPLC分析不同品牌橙汁中橙皮苷的含量 儀器與材料儀器島津CL-10型液相色譜儀，包括SPD-10A紫外檢測器以及CTO-10A 柱溫箱，2(HiL手動進樣系統(tǒng)，色譜工作站，LWMC-205型可調(diào)功率微波化學(xué)反 應(yīng)器，Millipore Direct-Q純凈水發(fā)生器。材料各品牌橙汁飲品。甲醇(Merck，色譜純)，三氟乙酸和二甲亞砜均 為分析純，去離子純水由Millipore Direct-Q純凈水發(fā)生器制得，橙皮苷標準品來 源于中國藥品生物制品檢定所。樣品前處理各取lml果汁于50ml圓底燒瓶中，加入5ml50。/。DMSO水溶液，振搖，在 功率為500W的條件下，微波萃取3分鐘后，離心取上清液過濾稀釋后進樣，得 測定結(jié)果，顯示農(nóng)夫果園牌果汁中橙皮苷的含量最高，約為0.4mg/ml，說明 其原料鮮橙汁的含量最高(圖4)。加樣回收率精密吸取果汁lml，分別精密加入一定濃度的質(zhì)控標準溶液，然后按照樣品 制備方法進行微波萃取，取濾液稀釋后進樣進行HPLC分析，平均回收率分別為 (99.81 ±1. 56)o/。 (n=3)。重復(fù)性實驗-精密吸取果汁lml，按照樣品制備方法進行微波萃取，取濾液稀釋后進樣進 行HPLC分析，重復(fù)測定三次，RSD為3. 15%。實施例2 MAE-HPLC分析西柚汁中橙皮苷與柚皮苷的含量 儀器與材料儀器島津CL-10型液相色譜儀，包括SPD-10A紫外檢測器以及CTO-10A 柱溫箱，20pL手動進樣系統(tǒng)，色譜工作站，LWMC-205型可調(diào)功率微波化學(xué)反 應(yīng)器，Millipore Direct-Q純凈水發(fā)生器。材料2種品牌的西柚橙汁混合飲品。甲醇(Merck，色譜純)，三氟乙酸和 二甲亞砜均為分析純，去離子純水由MilliporeDirect-Q純凈水發(fā)生器制得，橙皮 苷標準品來源于中國藥品生物制品檢定所。樣品前處理各取lml果汁于50ml圓底燒瓶中，加入5ml 50%DMSO水溶液，振搖。在 功率為500W的條件下，微波萃取3分鐘后，離心取上清液過濾稀釋后進樣，得 測定結(jié)果，顯示，味全牌柚子汁中柚皮苷的含量高于美麗果牌，約為0.065mg/ml， 其原料鮮柚汁的含量更高(圖5)。實施例3 MAE分析中藥材陳皮中橙皮苷含量 儀器與材料儀器島津CL-10型液相色譜儀，包括SPD-10A紫外檢測器以及CTO-10A 柱溫箱，20pL手動進樣系統(tǒng)，色譜工作站，LWMC-205型可調(diào)功率微波化學(xué)反 應(yīng)器，MilliporeDirect-Q純凈水發(fā)生器。材料中藥陳皮(出產(chǎn)地上海)，甲醇(Merck，色譜純)，三氟乙酸和二 甲亞砜均為分析純，去離子純水由Millipore Direct-Q純凈水發(fā)生器制得，橙皮苷 標準品來源于中國藥品生物制品檢定所(純度>99%)。樣品前處理精密稱取陳皮粉末約lg，置50ml圓底燒瓶中，加10ml50。/。DMSO水溶液，微 波輔助萃取(功率400W) 3min，放冷，高速離心(10000rpm)10min，取上清液過濾， 稀釋后取2(Hil進樣。加樣回收率精密稱取陳皮樣品約1.00g,分別精密加入100pL濃度為14ng/ml質(zhì)控標準溶 液，然后按照樣品制備方法進行微波萃取，取濾液稀釋后進樣進行HPLC分析， 平均回收率分別為(101.68±0. 21)%(n=3)。重復(fù)性和樣品測定結(jié)果精密稱取陳皮樣品約1.00g，按照樣品制備方法進行微波萃取，取濾液稀釋 后進袖進行HPLC分析，重復(fù)測定三次，中藥陳皮中橙皮苷的含量為(54.10± 1.17)mg/g， RSD為2. 16%。與文獻報道的中藥陳皮中橙皮苷含量相近(文獻中為 4%左右)，結(jié)果可靠。
權(quán)利要求
1. 一種提取橙皮苷與柚皮苷的方法，其特征在于通過下述步驟1)取待測樣品，加入提取溶劑，所述的提取溶劑是水與有機溶劑組成的混合溶劑，其中，水與有機溶劑的比例為80∶20～20∶80；2)放置于微波輔助萃取裝置中進行微波萃取，其中，微波功率為100～1000瓦，萃取時間為1～10分鐘；3)提取后離心，取出上清液。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的橙皮苷與柚皮苷的提取方法，其特征在于所述步驟l的有機溶劑選自二甲亞砜、甲醇、乙醇或乙腈。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的橙皮苷與柚皮苷的提取方法，其特征是所述的提 取溶劑是50%的二甲亞砜水溶液。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的橙皮苷與柚皮苷的提取方法，其特征是所述待測 樣品為固態(tài)或半固態(tài)或液態(tài)，所述固態(tài)或半固態(tài)樣品的提取溶劑用量為樣品量的 5-20倍7所述液態(tài)樣品的提取溶劑的用量為樣品量)的2-10倍。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的橙皮苷與柚皮苷的提取方法，其特征是所述固態(tài) 或半固態(tài)樣品選自中藥、水果果皮或果肉；所述液態(tài)樣品選自果汁。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的橙皮苷與柚皮苷的提取方法，其特征是所述中藥 樣品的提取條件是提取功率400W，提取時間3分鐘。
7、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的橙皮苷與柚皮苷的提取方法，其特征在于所述 果汁、果肉和果皮的提取條件是提取功率500W，提取時間3分鐘。
全文摘要
本發(fā)明屬分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種提取化合物橙皮苷與柚皮苷的方法。該方法采用微波輔助萃取技術(shù)(MAE)，定量取樣品，以水與有機溶劑的混合溶劑為提取溶劑，置于微波輔助萃取裝置中，選定提取溶劑、微波功率和萃取時間后，利用MAE提取樣品中的橙皮苷和柚皮苷，萃取后離心，取上清液稀釋后用高效液相色譜分析測定橙皮苷與柚皮苷的含量。本方法簡便，快速，樣品用量少，萃取效率高，重現(xiàn)性好，回收率高。本法與高效液相色譜結(jié)合，可用于準確測定果汁、新鮮水果和中藥中橙皮苷與柚皮苷的含量，并評價其質(zhì)量。
文檔編號C07H17/00GK101265283SQ200810036498
公開日2008年9月17日 申請日期2008年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月22日
發(fā)明者干志彬, 李曉雯, 段更利, 郁穎佳 申請人:復(fù)旦大學(xué)