以樹突狀細(xì)胞相關(guān)c型植物凝集素?1為靶點(diǎn)的抗抑郁癥藥物及其篩選方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種抗抑郁癥藥物，其特征在于，其藥效成分以樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素?1為靶點(diǎn)，且通過(guò)結(jié)合、激活和/或上調(diào)表達(dá)樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素?1起到抗抑郁作用。是一個(gè)新的治療性藥物設(shè)計(jì)靶點(diǎn)，將有望推動(dòng)以激活Dectin?1受體的成分為基礎(chǔ)的抗抑郁藥物篩選。
【專利說(shuō)明】
以樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1為靶點(diǎn)的抗抑郁癥藥物及其篩選方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉以樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1為靶點(diǎn)的抗抑郁癥藥物及其篩選方法。
【背景技術(shù)】
[0002]抑郁癥已成為現(xiàn)代社會(huì)的常見(jiàn)病和多發(fā)病，其發(fā)病率還在不斷升高。病癥以情緒低落、興趣減退、思維遲緩、以及言語(yǔ)與動(dòng)作減少為特征，重癥抑郁有厭世或自殺的念頭。這類疾病對(duì)患者及其家屬造成的痛苦，以及對(duì)社會(huì)造成的損失，是許多其他疾病所無(wú)法比擬的。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)發(fā)表的報(bào)告，情感障礙目前已成為世界第四大疾患，全球的抑郁癥患者已達(dá)3.4億人。目前抑郁癥在中國(guó)發(fā)病率大約為4% ο中國(guó)至少有2600萬(wàn)人患有抑郁癥，抑郁癥在中國(guó)造成的總經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)達(dá)到622億元人民幣。美國(guó)估計(jì)有1700萬(wàn)人患有抑郁癥，300萬(wàn)人患躁郁癥，每年治療情感障礙的費(fèi)用高達(dá)440億美元(冠心病為430億美元)。在過(guò)去對(duì)情感障礙研究的40年中，特別引人注目的是其發(fā)病率和死亡率高，據(jù)報(bào)道自殺率高達(dá)10%以上，中國(guó)每年有25萬(wàn)人自殺。
[0003]目前主要使用的藥物是五羥色胺再攝取抑制劑等，使用這類藥物起效慢，作用譜窄，副作用大，停藥后易復(fù)發(fā)。目前，抗抑郁治療領(lǐng)域急需起效快，副作用小，更為有效，作用靶點(diǎn)明確的治療藥物。
[0004]目前的抗抑郁藥物及其弱點(diǎn):當(dāng)前的抗抑郁藥大致可分為三類:即單胺氧化酶抑制劑、三環(huán)類抗抑郁劑及雜環(huán)類抗抑郁劑?，F(xiàn)有的抗抑郁藥物遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足病人的需求，其不足之處大主要集中表現(xiàn)為起效慢、抗抑郁譜窄、副作用大、易復(fù)發(fā)等。開發(fā)起效快、抗抑郁譜廣泛、毒副作用較小、作用靶點(diǎn)明確的新藥，在這個(gè)領(lǐng)域是非常迫切的需要，將帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)回報(bào)。
[0005]Dectin-1是一種新的非Toll樣模式識(shí)別受體(PRR)。最初研究認(rèn)為，Dectin-1是樹突狀細(xì)胞(DC)表面表達(dá)的特異性受體，故將其命名為樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素。但后來(lái)發(fā)現(xiàn)除樹突狀細(xì)胞外，Dectin-1是作為β-葡聚糖的主要受體廣泛分布在小膠質(zhì)細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞及中性粒細(xì)胞等，在機(jī)體抵御真菌感染中發(fā)揮著重要作用。
[0006]Dectin-1屬于Π型跨膜受體，是C型植物凝集素家族的一員，與其家族成員有著相似的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，膜外通過(guò)短臂連接糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域(CRD)，但缺少典型C型植物凝集素樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合Ca離子的氨基酸殘基，因此Dectin-1結(jié)合配體時(shí)不依賴Ca離子。Kato等發(fā)現(xiàn)人和小鼠Dectin-1的mRNA可選擇性連接并產(chǎn)生不同的亞型，其中人和鼠的Α、Β亞型在結(jié)構(gòu)上有很大的相似性，這些亞基之間不同點(diǎn)之一是N端連接的糖基化序列的數(shù)量和位置不同，該序列對(duì)Dectin-1識(shí)別真菌以及下游NF-kB的活化是非常重要的。
[0007]研究表明Dectin-1可識(shí)別的糖類配體是β-葡聚糖。β-葡聚糖占真菌細(xì)胞壁成分的50%左右，可誘導(dǎo)吞噬細(xì)胞的吞噬功能，介導(dǎo)炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子及趨化因子的分泌、活性氧中間產(chǎn)物的合成，因而長(zhǎng)期以來(lái)被人們作為抗感染及抗腫瘤藥物。運(yùn)用特異性拮抗劑和阻斷性單克隆抗體(2ALL)的研究發(fā)現(xiàn)，Dectin-1是天然免疫細(xì)胞上的主要受體，介導(dǎo)β-葡聚糖生物學(xué)功能。Dectin-1通過(guò)胞膜上表達(dá)的糖識(shí)別結(jié)構(gòu)域可結(jié)合β-l，3連接或β-l，6連接的葡聚糖，在抗真菌感染中，對(duì)白細(xì)胞的活化有協(xié)同刺激作用。根據(jù)目前研究，一些可溶性的葡聚糖、磷酸葡聚糖和昆布多糖是Dectin-1結(jié)合β-葡聚糖的最佳拮抗劑，可有效封閉特定細(xì)胞Dectin-1的活性。此外，Dectin-1通過(guò)Syk依賴的信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)免疫效應(yīng)細(xì)胞生成IL-2、IL-4、IL-1O等重要的抗炎癥因子，可以限制炎癥因子的作用并最終使炎癥反應(yīng)終止，使機(jī)體內(nèi)環(huán)境趨于穩(wěn)定，此外對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分化也可能發(fā)揮重要作用。
[0008]然而截至目前，Dectin-1作為抗抑郁癥藥物的作用靶點(diǎn)，并應(yīng)用于篩選具有潛在抗抑郁癥功效的藥物的用途尚未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明基于上述空白，提供一種以Dectin-1作為抗抑郁癥藥物靶點(diǎn)的藥物篩選方法。
[0010]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
[0011 ] 一種以樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1為靶點(diǎn)的抗抑郁癥藥物，其特征在于，其藥效成分通過(guò)結(jié)合、激活和/或上調(diào)表達(dá)樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1起到抗抑郁作用，并且所述抗抑郁作用能夠被所述樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1的拮抗劑所減弱或終止。
[0012]所述樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1的拮抗劑選自可溶性葡聚糖、磷酸葡聚糖和昆布多糖組成的組。
[0013]所述藥效成分為β-葡聚糖。
[0014]—種篩選以樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1為靶點(diǎn)的抗抑郁癥藥物的方法，其特征在于，包括如下步驟:
[0015]檢測(cè)待選物質(zhì)是否對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或體外小鼠大腦皮層細(xì)胞起抗抑郁作用；
[0016]選出起抗抑郁作用的待選物質(zhì)，并且通過(guò)檢測(cè)選出其抗抑郁作用能夠被所述樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1的拮抗劑所減弱或終阻止的候選物質(zhì)。
[0017]所述樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1的拮抗劑選自可溶性葡聚糖、磷酸葡聚糖和昆布多糖組成的組。
[0018]檢測(cè)待選物質(zhì)是否起抗抑郁作用指檢測(cè)指待選物質(zhì)是否使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抑郁癥行為減輕或消失;優(yōu)選采用小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和/或游泳實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。
[0019]檢測(cè)待選物質(zhì)是否起抗抑郁作用指檢測(cè)所述待選物質(zhì)是否結(jié)合和/或激活實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或體外小鼠大腦皮層細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1。
[0020]檢測(cè)待選物質(zhì)是否起抗抑郁作用指檢測(cè)所述待選物質(zhì)是否上調(diào)表達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或體外小鼠大腦皮層細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1。
[0021]本發(fā)明在研究實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠施用Dectin-1受體可識(shí)別的配體β-葡聚糖類物質(zhì)之后，在動(dòng)物行為絕望抑郁癥模型實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物抑郁癥行為明顯改善(減輕或消失)并且進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物前額葉Dectin-1表達(dá)顯著提高，見(jiàn)圖5和6。而在同時(shí)提供De c t i η-1受體可識(shí)別的配體β-葡聚糖類物質(zhì)和De c t i η-1特異性措抗劑昆布多糖的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，這種抗抗抑郁作用顯著減弱甚至消失(見(jiàn)圖3和4)。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明Dectin-1是抗抑郁癥藥物的一種特異性作用靶點(diǎn)。
[0022]基于上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供一種以Dectin-1為作用靶點(diǎn)的抗抑郁癥藥物及其篩選方法。本發(fā)明提供的以Dectin-1為作用靶點(diǎn)的抗抑郁癥藥物可以通過(guò)Dectin-1的特異性拮抗劑來(lái)驗(yàn)證其抗抑郁癥作用是否是以Dectin-1為作用靶點(diǎn)，其特異性拮抗劑存在時(shí)能減弱或阻斷其抗抑郁作用。
[0023]Dectin-1的特異性拮抗劑目前已知的有可溶性葡聚糖、磷酸葡聚糖和昆布多糖，但本發(fā)明不限于此。
[0024]本發(fā)明的另一方面，基于上述發(fā)現(xiàn)，提供一種篩選以Dectin-1為作用靶點(diǎn)的抗抑郁癥藥物的篩選方法。涉及到檢測(cè)待選物質(zhì)是否起到抗抑郁癥作用，以及檢測(cè)這種抗抑郁作用是否能被Dectin-1特異性拮抗劑減弱或阻斷。其中檢測(cè)待選物質(zhì)是否具有抗抑郁作用，可選地，是指檢測(cè)待選物質(zhì)是否使動(dòng)物的抑郁癥行為減輕或消失?，F(xiàn)有技術(shù)中有成熟可靠的技術(shù)，如小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)、開野實(shí)驗(yàn)和/或游泳實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。
[0025]或可選地，指檢測(cè)所述待選物質(zhì)是否結(jié)合和/或激活實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或體外小鼠大腦皮層細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1。
[0026]或可選地，指檢測(cè)所述待選物質(zhì)是否上調(diào)表達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或體外小鼠大腦皮層細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1 ο現(xiàn)有技術(shù)中有成熟的蛋白表達(dá)檢測(cè)方法，如本發(fā)明中采用的免疫印跡方法。但本發(fā)明不限于此。
【附圖說(shuō)明】
[0027]圖1.灰樹花β-葡聚糖結(jié)構(gòu)式；
[0028]圖2.香菇β_葡聚糖結(jié)構(gòu)式；
[0029]圖3.Dectin-1受體的特異性拮抗劑昆布多糖處理2小時(shí)后，懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
[0030]豎坐標(biāo):懸尾實(shí)驗(yàn)小鼠不動(dòng)時(shí)間(秒)；
[0031 ] 橫坐標(biāo):從左到右依次為:0.9%生理鹽水+0.9 %生理鹽水組；昆布多糖+0.9 %生理鹽水組；昆布多糖+灰樹花葡聚糖組;0.9 %生理鹽水+灰樹花β_葡聚糖組。
[0032]圖4.Dectin-1受體的特異性拮抗劑昆布多糖處理2小時(shí)后，測(cè)試懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
[0033]豎坐標(biāo):懸尾實(shí)驗(yàn)小鼠不動(dòng)時(shí)間(秒)；
[0034]橫坐標(biāo):從左到右依次為:0.9%生理鹽水+0.9 %生理鹽水組；昆布多糖+0.9 %生理鹽水組；
[0035]昆布多糖+香菇β-葡聚糖組;0.9%生理鹽水+香菇β_葡聚糖組。
[0036]圖5.灰樹花β-葡聚糖處理5天后上調(diào)了前額葉Dectin-1表達(dá):
[0037]豎坐標(biāo):Dectin_l蛋白表達(dá)(％對(duì)照)
[0038]橫坐標(biāo):從左到右依次為:0.9%生理鹽水;丙咪嗪；灰樹花β_葡聚糖(5mg/kg);灰樹
[0039]花β-葡聚糖(8mg/kg);灰樹花β_葡聚糖(12.5mg/kg)
[0040]圖6.香菇β-葡聚糖處理5天后上調(diào)了前額葉Dectin-1表達(dá):
[0041 ] 豎坐標(biāo):Dectin_l蛋白表達(dá)(％對(duì)照)
[0042]橫坐標(biāo):從左到右依次為:0.9%生理鹽水;丙咪嗪；香菇β_葡聚糖(5mg/kg);香菇β-葡聚糖(12.5mg/kg);香燕0_葡聚糖(20mg/kg)具體實(shí)施方案
[0043]以下實(shí)施例僅用于詳細(xì)說(shuō)明和證明本發(fā)明所發(fā)現(xiàn)的Dectin-1可作為抗抑郁癥藥物的靶點(diǎn)，不作為對(duì)本發(fā)明的范圍限制。如無(wú)特別說(shuō)明，以下實(shí)施例中進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)均采用的本領(lǐng)域的常規(guī)方法，所用試劑和耗材均可商購(gòu)獲得。
[0044]實(shí)施例1
[0045]以Dectin-1激活成分:灰樹花β_葡聚糖和香菇β_葡聚糖，通過(guò)激活其受體Dectin-1的抗抑郁樣行為能被Dectin-1受體的特異性拮抗劑昆布多糖所阻斷的實(shí)驗(yàn)過(guò)程為例:
[0046]實(shí)驗(yàn)材料與方法
[0047]一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物詳細(xì)信息
[0048]1.動(dòng)物品種品系:小鼠，CD-1 (ICR)
[0049]2.等級(jí):SPF 級(jí)
[0050]3.動(dòng)物規(guī)格:購(gòu)買初始周齡和體重(6周齡:22-25g)
[0051 ]正式試驗(yàn)周齡和體重(7周齡:30_37g)
[0052]4.性別:雄性
[0053]5.質(zhì)量檢測(cè)單位:北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司
[0054]6.用途:科學(xué)研究
[0055]7.出售單位:北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司
[0056]8.許可證號(hào):SCXK(京)2012—0001
[0057]二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備
[0058]1.所有動(dòng)物的飼養(yǎng)、使用和處理都得到了云南大學(xué)醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。[0059 ]2.每籠4只小鼠飼養(yǎng)，飲水和取食自由。
[0060]3.小鼠飲用蒸餾水(實(shí)驗(yàn)室設(shè)備自制)，小鼠食用的飼料來(lái)自于昆明醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部。
[0061 ]4.每天12小時(shí)的Light/dark循環(huán)，早上9:00開燈，晚上21:00關(guān)燈。
[0062]5.室溫22±1。(:飼養(yǎng)。
[0063]6.每隔兩天給小鼠更換墊料，讓小鼠有一個(gè)舒適的居住環(huán)境。
[0064]7.小鼠在新的飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)一周后開始正式實(shí)驗(yàn)。
[0065]三、灰樹花β-葡聚糖、香菇β-葡聚糖和昆布多糖詳細(xì)信息
[0066]1.灰樹花β-葡聚糖:購(gòu)買于美國(guó)麥克健康食品公司
[0067]2.香菇β_葡聚糖:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
[0068]3.昆布多糖:美國(guó)Sigma公司
[0069]四、實(shí)驗(yàn)不同處理組設(shè)置如下，每組有12只小鼠:
[0070]1.灰樹花β-葡聚糖
[0071](1)0.9%生理鹽水+0.9%生理鹽水組
[0072](2)昆布多糖+0.9%生理鹽水組
[0073](3)昆布多糖+灰樹花β-葡聚糖組
[0074](4)0.9%生理鹽水+灰樹花β-葡聚糖組
[0075]2.香菇β_葡聚糖
[0076](I )0.9%生理鹽水+0.9%生理鹽水組
[0077](2)昆布多糖+0.9%生理鹽水組
[0078](3)昆布多糖+香菇β-葡聚糖組
[0079](4)0.9%生理鹽水+香菇β-葡聚糖組
[0080]五、行為學(xué)實(shí)驗(yàn)和蛋白實(shí)驗(yàn)操作:
[0081 ] 1.小鼠在動(dòng)物房適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境一周后開始實(shí)驗(yàn)；
[0082]2.每天都在上午10:00時(shí)開始小鼠稱重和注射；
[0083]3.藥物處理I小時(shí)或2小時(shí)后進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)，連續(xù)注射5天后，檢測(cè)小鼠前額葉中Dectin-1的表達(dá)水平。
[0084]4.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0085](I)灰樹花β-葡聚糖
[0086]0.9%生理鹽水+0.9 %生理鹽水組:第一個(gè)60分鐘前腹腔注射0.9 %生理鹽水，第二個(gè)60分鐘前再次腹腔注射0.9 %生理鹽水。
[0087]昆布多糖+0.9%生理鹽水組:第一個(gè)60分鐘前腹腔注射昆布多糖(10mg/kg)，第二個(gè)60分鐘前再次腹腔注射0.9 %生理鹽水
[0088]昆布多糖+灰樹花β-葡聚糖組:第一個(gè)60分鐘前腹腔注射昆布多糖(10mg/kg)，第二個(gè)60分鐘前再次腹腔注射灰樹花β-葡聚糖(12.5mg/kg)。
[0089]0.9%生理鹽水+灰樹花β_葡聚糖組:第一個(gè)60分鐘前腹腔注射0.9 %生理鹽水，第二個(gè)60分鐘前再次腹腔注射灰樹花β-葡聚糖(12.5mg/kg)。
[0090](2)香菇β-葡聚糖
[0091 ] 0.9%生理鹽水+0.9 %生理鹽水組:第一個(gè)60分鐘前腹腔注射0.9 %生理鹽水，第二個(gè)60分鐘前再次腹腔注射0.9 %生理鹽水。
[0092]昆布多糖+0.9%生理鹽水組:第一個(gè)60分鐘前腹腔注射昆布多糖(10mg/kg)，第二個(gè)60分鐘前再次腹腔注射0.9 %生理鹽水
[0093]昆布多糖+香菇β-葡聚糖組:第一個(gè)60分鐘前腹腔注射昆布多糖(10mg/kg)，第二個(gè)60分鐘前再次腹腔注射香菇β-葡聚糖(20mg/kg)。
[0094]0.9%生理鹽水+香菇β_葡聚糖組:第一個(gè)60分鐘前腹腔注射0.9 %生理鹽水，第二個(gè)60分鐘前再次腹腔注射香菇β-葡聚糖(20mg/kg)。
[0095]5.懸尾實(shí)驗(yàn)條件:室溫:22 ± 1°C、濕度:55 ± 10 %。
[0096]小鼠懸尾試驗(yàn)，它是常用的動(dòng)物行為絕望抑郁癥模型實(shí)驗(yàn)，能較好保證篩選結(jié)果的可靠性。小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)是小鼠在懸尾狀態(tài)下不再掙扎，呈現(xiàn)特有的安靜不動(dòng)狀態(tài)，抗抑郁藥可明顯縮短不動(dòng)狀態(tài)的持續(xù)時(shí)間。測(cè)試時(shí)，將小鼠尾部用夾子固定、倒懸。勿使小鼠尾部扭曲折疊。計(jì)錄不動(dòng)時(shí)間。不動(dòng)指標(biāo)為:“動(dòng)物除呼吸外所有肢體均不動(dòng)”。懸尾試驗(yàn)對(duì)各種抗抑郁藥均很敏感，而且避免了游泳試驗(yàn)中溫度和動(dòng)物運(yùn)動(dòng)功能障礙的干擾，因而在用一些鼠種篩選抗抑郁藥物時(shí)，可以有效地驗(yàn)證和補(bǔ)充強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
[0097]6.免疫印跡方法檢測(cè)前額葉中Dectin-1表達(dá)，過(guò)程如下:
[0098](I)在冰上用RIPA裂解液裂解研磨(緊件研磨12次，松件研磨12次)后的小鼠腦前額葉組織長(zhǎng)達(dá)半小時(shí)；
[0099](2)在4°C離心機(jī)上12000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘；
[0100](3)通過(guò)BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度；
[0101](4)蛋白變性后進(jìn)行電泳和轉(zhuǎn)膜；
[0102](5)通過(guò)Dectin-1抗體孵育后采用化學(xué)發(fā)光來(lái)成像。
[0103]六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
[0104](I)灰樹花β-葡聚糖通過(guò)激活其受體Dectin-1的抗抑郁行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:Dectin-1受體的特異性拮抗劑昆布多糖能夠阻斷灰樹花葡聚糖的快速抗抑郁效果，如圖3所示。
[0105]灰樹花β-葡聚糖懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析:Dectin-1受體的特異性拮抗劑昆布多糖預(yù)先處理60分鐘后，再用灰樹花β-葡聚糖處理60分鐘，懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Dectin-1受體的特異性拮抗劑昆布多糖幾乎完全阻斷了灰樹花葡聚糖的快速抗抑郁效果(0.9%生理鹽水:115.20±7.67秒；昆布多糖:108.10±9.37秒；昆布多糖+灰樹花β-葡聚糖:103.50± 13.65秒;灰樹花β-葡聚糖:59.06±9.16秒)(八從^，卩(3，44)=7.479，？〈0.001)。(如圖3所示)
[0106](2)香燕0_葡聚糖通過(guò)激活其受體Dectin-1的抗抑郁行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:Dectin-1受體的特異性拮抗劑昆布多糖能夠阻斷香菇葡聚糖的快速抗抑郁效果，如圖4所示。
[0107]香菇β-葡聚糖懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析:Dectin-1受體的特異性拮抗劑昆布多糖預(yù)先處理60分鐘后，再用香菇β-葡聚糖處理60分鐘，懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Dectin-1受體的特異性拮抗劑昆布多糖幾乎完全阻斷了香菇葡聚糖的快速抗抑郁效果(0.9%生理鹽水:115.20土7.69秒；昆布多糖:108.10 ± 9.37秒；昆布多糖+香菇β_葡聚糖:108.70 ± 11.12秒;香菇β-葡聚糖:64.30±10.42秒)(八從^八，卩(3，44)=4.945，？〈0.01)。(如圖4所示)
[0?08] (3)灰樹花β-葡聚糖處理5天后，前額葉中Dect in-Ι蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:灰樹花β-葡聚糖上調(diào)前額葉中Dectin-1表達(dá)，如圖5所示。
[0109]灰樹花β-葡聚糖處理5天后，前額葉Dectin-1表達(dá)結(jié)果分析:灰樹花β_葡聚糖連續(xù)處理小鼠5天后，采用免疫印跡方法來(lái)檢測(cè)前額葉中Dectin-1表達(dá)，蛋白結(jié)果表明灰樹花β-葡聚糖上調(diào)前額葉中Dectin-1表達(dá)(灰樹花β-葡聚糖(5mg/kg): 182.40 ± 14.10%，灰樹花葡聚糖(8mg/kg):202.40± 14.65%和灰樹花β_葡聚糖(12.5mg/kg): 171.60± 19.55% )(AN0VA，F(xiàn)(4，35)=8.670，p〈0.001)。(如圖5所示)
[OiM O] (4)香燕0_葡聚糖處理5天后前額葉中Dectin-1蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)結(jié)果:香燕0_葡聚糖上調(diào)前額葉中Dectin-1表達(dá)，如圖6所示。
[O111 ] 香燕0_葡聚糖處理5天后，前額葉中Dectin-1表達(dá)結(jié)果分析:香燕0_葡聚糖連續(xù)處理小鼠5天后，采用免疫印跡方法來(lái)檢測(cè)前額葉中Dectin-1表達(dá)，蛋白結(jié)果表明香菇β-葡聚糖上調(diào)前額葉中Dectin-1表達(dá)(香燕β-葡聚糖(12.5mg/kg): 153.9± 11.95%和香燕β-葡聚糖(2011^/1^):157.4±8.94%)(八從^八，卩(4，35)=5.339，？〈0.01)。(如圖6所示)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種抗抑郁癥藥物，其特征在于，其藥效成分以樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1為靶點(diǎn)，且通過(guò)結(jié)合、激活和/或上調(diào)表達(dá)樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1起到抗抑郁作用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗抑郁癥藥物，所述抗抑郁作用能夠被所述樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1的拮抗劑所減弱或終止。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗抑郁癥藥物，其特征在于:所述樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1的拮抗劑選自可溶性葡聚糖、磷酸葡聚糖和昆布多糖組成的組。4.根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的抗抑郁癥藥物，其特征在于，所述藥效成分為葡聚糖。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的抗抑郁癥藥物，其特征在于，所述藥效成分為灰樹花β-葡聚糖和/或香菇葡聚糖。6.—種篩選以樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1為靶點(diǎn)的抗抑郁癥藥物的方法，其特征在于，包括如下步驟: 檢測(cè)待選物質(zhì)是否對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或體外小鼠大腦皮層細(xì)胞起抗抑郁作用； 選出起抗抑郁作用的待選物質(zhì)，并且通過(guò)檢測(cè)選出其抗抑郁作用能夠被所述樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1的拮抗劑所減弱或終阻止的候選物質(zhì)。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1的拮抗劑選自可溶性葡聚糖、磷酸葡聚糖和昆布多糖組成的組。8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，檢測(cè)待選物質(zhì)是否起抗抑郁作用指檢測(cè)指待選物質(zhì)是否使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抑郁癥行為減輕或消失;優(yōu)選采用小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)和/或游泳實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)。9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，檢測(cè)待選物質(zhì)是否起抗抑郁作用指檢測(cè)所述待選物質(zhì)是否結(jié)合和/或激活實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或體外小鼠大腦皮層細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素-1。10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，檢測(cè)待選物質(zhì)是否起抗抑郁作用指檢測(cè)所述待選物質(zhì)是否上調(diào)表達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或體外小鼠大腦皮層細(xì)胞的樹突狀細(xì)胞相關(guān)C型植物凝集素_1。
【文檔編號(hào)】A61K31/715GK106038582SQ201610329215
【公開日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年5月18日
【發(fā)明人】杜靜, 保紅坤, 肖春杰
【申請(qǐng)人】云南大學(xué)