化妝品的選擇方法
【專利摘要】本發(fā)明的課題在于提供給粗糙肌膚或潛在的粗糙肌膚或者敏感性肌膚的人選擇適當(dāng)?shù)幕瘖y品的方法。在給粗糙肌膚選擇化妝品時(shí)，在測定皮膚角質(zhì)層的半乳糖凝集素-7的表達(dá)量而半乳糖凝集素-7表達(dá)量高的情況下，選擇配合了具有降低半乳糖凝集素-7的效果的成分的化妝品。
【專利說明】化妝品的選擇方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及化妝品的選擇方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 人類皮膚時(shí)常與外界接觸，并受到各種刺激。其刺激的代表性例子為紫外線。紫 外線即使在未在外觀上給肌膚造成太大變化的情況下，仍會誘發(fā)皮膚細(xì)胞的DNA斷裂或膠 原蛋白的變性等，而成為皮膚老化的原因。紫外線經(jīng)常持續(xù)性地對肌膚造成應(yīng)激。此外，對 女性而言，洗臉、化妝等日常行為也會對皮膚造成刺激，這些刺激會作為潛在的應(yīng)激而蓄積 于肌膚。而且，對于這些刺激（應(yīng)激）的抵抗力若因某種原因而減少，即認(rèn)為是潛在的粗糙 肌膚或敏感性肌膚。這樣皮膚的外界刺激蓄積時(shí)則成為被認(rèn)為是肌膚粗糙的肌膚狀態(tài)。肌 膚粗糙呈現(xiàn)暫時(shí)的狀態(tài)，但其持續(xù)的狀態(tài)就稱為"粗糙肌膚"。
[0003] "粗糙肌膚"是干燥且毛糙的皮膚狀態(tài)的總稱，其最顯著的臨床表現(xiàn)為鱗屑。已知 在這樣的粗糙肌膚狀態(tài)與皮膚的屏障功能之間存在密切的關(guān)系，粗糙肌膚越嚴(yán)重作為屏障 功能的客觀指標(biāo)的經(jīng)皮水分流失（以下，稱為TEWL)越高，作為因物理?化學(xué)因素產(chǎn)生的 肌膚粗糙狀態(tài)的指標(biāo)來測定TEWL(非專利文獻(xiàn)1 :日皮會志、第92卷、第1001頁-1003頁、 1982 年）。
[0004] 認(rèn)為如前所述的紫外線、化學(xué)物質(zhì)或其它各種各樣的刺激會對皮膚內(nèi)部環(huán)境帶來 影響，阻礙表皮的屏障功能的結(jié)果會產(chǎn)生該粗糙肌膚。皮膚呈現(xiàn)上述情況時(shí)，在皮膚內(nèi)部 會產(chǎn)生對細(xì)胞的增殖?分化帶來影響的前列腺素、細(xì)胞因子濃度的上升（非專利文獻(xiàn)2 : JOURNALOFINVESTIGATIVEDERMATOLOGY、第 81 卷、第 519-523 頁、1983)、核酸（DNA)合成 功能的允進(jìn)（非專利文獻(xiàn) 3JournalofClinicalInvestigation、第 87 卷、第 1668-1673 頁、1991)、與屏障功能存在密切的關(guān)系的TEWL的上升（非專利文獻(xiàn)4JounalofLipid Research、第26卷、第418頁-427頁、1985年及該第30卷、第323頁-333頁、1989年）等 的變化。然而，關(guān)于上述現(xiàn)象的相關(guān)性的報(bào)道很少，其詳細(xì)的機(jī)制并不明確。因此，迄今為 止粗糙肌膚的指標(biāo)依靠本人的陳述、肉眼所見而沒有明確的指標(biāo)。
[0005] 此外，也存在潛在的粗糙肌膚的人，但肉眼檢測出這樣潛在的粗糙肌膚存在困難。 此外，也存在將包含潛在的粗糙肌膚的肌質(zhì)稱為敏感性肌膚的情況。
[0006] 呈現(xiàn)粗糙肌膚或者潛在的粗糙肌膚的人在選擇化妝品時(shí)需要細(xì)心的注意。原因是 粗糙肌膚的皮膚經(jīng)常發(fā)生因化妝品而其狀態(tài)進(jìn)一步惡化。因此，需要注意以下事項(xiàng)，即盡可 能選擇低刺激性的化妝品，通過使用低刺激的化妝品，防止肌膚粗糙的發(fā)展、潛在的粗糙肌 膚向粗糙肌膚的惡化。
[0007] 然而，迄今為止的現(xiàn)實(shí)是，粗糙肌膚的人或意識到潛在的粗糙肌膚或敏感性肌膚 的人選擇化妝品的基準(zhǔn)如上所述僅有選擇使用時(shí)的刺激少的化妝品的對策。因此，通常在 選擇化妝品時(shí)為如下方法，即化妝品的購買者與銷售者面對面來傾訴肌膚狀態(tài)，對此銷售 者或咨詢師根據(jù)自己的經(jīng)驗(yàn)和積累的化妝品信息，選擇其認(rèn)為適于肌膚的化妝品。
[0008] 近年來給肌膚帶來應(yīng)激的研究取得很大進(jìn)展，鑒定出了成為應(yīng)激的指標(biāo)的蛋白 質(zhì)、基因。作為此種蛋白質(zhì)，半乳糖凝集素受到關(guān)注。
[0009] 半乳糖凝集素是指能夠識別、鍵合半乳糖（P-半乳糖苷結(jié)構(gòu)）或者交聯(lián)各個(gè)糖鏈 的蛋白質(zhì)的總稱。已知其與發(fā)育、分化、形態(tài)形成、腫瘤轉(zhuǎn)移、細(xì)胞凋亡（細(xì)胞死）等生命現(xiàn) 象有關(guān)。目前，作為哺乳類的半乳糖凝集素，已知有半乳糖凝集素-1到-15的15種。在人 的情況下，沒有相當(dāng)于-5, _6, -14, -15的半乳糖凝集素，目前有10種但今后有進(jìn)一步增加 的可能性。特別是半乳糖凝集素-7作為皮膚應(yīng)激的指標(biāo)而受到關(guān)注。
[0010] 半乳糖凝集素-7在哺乳動物的復(fù)層上皮中檢測出，在角質(zhì)形成細(xì)胞中從基底層 到角質(zhì)層中檢測出。在專利文獻(xiàn)1(日本特開2006-182744號公報(bào)）中，公開了半乳糖凝集 素-7表達(dá)促進(jìn)物質(zhì)的篩選方法及通過涂布配合了半乳糖凝集素-7成分的組合物而起到保 濕作用、皮膚癥狀改善作用。進(jìn)而，在專利文獻(xiàn)2(日本特開平9-216833號公報(bào)）中，公開 了包含半乳糖凝集素的1種或2種以上的外用劑具有預(yù)防、改善皮膚皺紋、彈力低下等老化 癥狀及創(chuàng)傷治愈效果。
[0011] 本
【發(fā)明者】發(fā)現(xiàn)半乳糖凝集素_7可成為粗糙肌膚的客觀指標(biāo)，從而提出了專利申 請。
[0012] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0013] 專利文獻(xiàn)
[0014] 專利文獻(xiàn)1日本特開2006-182744號公報(bào)
[0015] 專利文獻(xiàn)2日本特開平9-216833號公報(bào)
[0016] 非專利文獻(xiàn)
[0017] 非專利文獻(xiàn)1日皮會志、第92卷、第1001頁-1003頁、1982年
[0018]非專利文獻(xiàn) 2J.Invest.Dermatol、Vol. 81、519-523、1983
[0019]非專利文獻(xiàn) 3JournalofClinicalInvestigation、Vol. 87、1668-1673、1991
[0020] 非專利文獻(xiàn) 4J.Lipid.Res.、Vol. 26、418-427、1985


【發(fā)明內(nèi)容】

[0021] 本發(fā)明的課題在于提供給粗糙肌膚或潛在的粗糙肌膚或者敏感性肌膚的人選擇 適當(dāng)?shù)幕瘖y品的方法。
[0022] 本發(fā)明由以下內(nèi)容構(gòu)成。
[0023] (1)-種選擇化妝品的方法，其特征在于，在給粗糙肌膚選擇化妝品時(shí)，在測定皮 膚角質(zhì)層的半乳糖凝集素-7的表達(dá)量而半乳糖凝集素_7表達(dá)量高的情況下，選擇配合了 具有降低半乳糖凝集素_7的效果的成分的化妝品。
[0024] (2)根據(jù)⑴所述的選擇化妝品的方法，其特征在于，測定皮膚角質(zhì)層的半乳糖凝 集素-7的表達(dá)量的方法通過酶聯(lián)免疫分析法進(jìn)行。
[0025] (3)根據(jù)⑴或⑵所述的化妝品的選擇方法，其特征在于，具有降低半乳糖凝集 素_7的效果的成分為通過下述方法而選擇的成分，即使受試物質(zhì)接觸人三維培養(yǎng)表皮模 型，在所述模型細(xì)胞中的半乳糖凝集素-7的量比不接觸受試物質(zhì)的所述模型細(xì)胞中的半 乳糖凝集素-7的量少的情況下，判斷為受試物質(zhì)具有降低半乳糖凝集素_7的效果。
[0026] (4)根據(jù)⑴或⑵所述的化妝品的選擇方法，其特征在于，具有降低半乳糖凝集 素-7的效果的成分為白柳提取物、狗薔薇提取物、半乳糖、神經(jīng)酰胺2與神經(jīng)酰胺5的混合 物中的任一種。
[0027] (5) -種方法，其特征在于，對比顧客皮膚的半乳糖凝集素-7量測定信息與化妝 品中的半乳糖凝集素-7抑制成分的含有信息，選擇含有適于顧客的半乳糖凝集素-7濃度 的半乳糖凝集素抑制成分的化妝品。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明，可使訴苦具有粗糙肌膚的人以皮膚的半乳糖凝集素_7量為指標(biāo)來 選擇適當(dāng)?shù)幕瘖y品。由于半乳糖凝集素-7的測定可通過膠帶剝離法等簡便的操作方法來 采集評價(jià)試樣，且由于負(fù)擔(dān)少、無論誰測定均可得到相同的結(jié)果，所以不需要像以往那樣通 過與專家面談的方式進(jìn)行咨詢。
[0029] 進(jìn)而，只要預(yù)先將顧客的皮膚半乳糖凝集素-7濃度制作成數(shù)據(jù)庫并保有，通過與 其他途徑制作的化妝品中的半乳糖凝集素-7抑制成分的種類、含量、抑制效果數(shù)據(jù)進(jìn)行對 t匕，則化妝品銷售員瞬間就可選擇出適于顧客的粗糙肌膚用化妝品。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0030] 圖1為測定人不同部位的半乳糖凝集素_7的表達(dá)量的圖。
[0031] 圖2為測定由SDS制作的強(qiáng)制粗糙肌膚模型的半乳糖凝集素-7的表達(dá)量的圖。
[0032] 圖3為測定由丙酮制作的強(qiáng)制粗糙肌膚模型的半乳糖凝集素-7的表達(dá)量的圖。
[0033] 圖4為608名受試者的半乳糖凝集素-7表達(dá)量與出現(xiàn)頻率的圖。
[0034] 圖5為確認(rèn)半乳糖凝集素-7與經(jīng)皮水分流失（TEWL)的相關(guān)性的圖。
[0035] 圖6為表示白柳與狗薔薇的提取物在使用人三維培養(yǎng)表皮模型的試驗(yàn)中降低 TEWL的圖。
[0036] 圖7為表示白柳與狗薔薇的提取物在使用人三維培養(yǎng)表皮模型的試驗(yàn)中降低半 乳糖凝集素-7的產(chǎn)生的圖。
[0037] 圖8為表示半乳糖在使用人三維培養(yǎng)表皮模型的試驗(yàn)中降低TEWL的圖。
[0038] 圖9為表示半乳糖在使用人三維培養(yǎng)表皮模型的試驗(yàn)中抑制半乳糖凝集素-7的 產(chǎn)生的圖。
[0039] 圖10為表示乳鐵蛋白在使用人三維培養(yǎng)表皮模型的試驗(yàn)中沒有抑制半乳糖凝集 素-7的產(chǎn)生的圖。
[0040] 圖11為表示神經(jīng)酰胺2與神經(jīng)酰胺5在使用人三維培養(yǎng)表皮模型的試驗(yàn)中降低 TEWL的圖。
[0041] 圖12為表示神經(jīng)酰胺2與神經(jīng)酰胺5在使用人三維培養(yǎng)表皮模型的試驗(yàn)中抑制 半乳糖凝集素-7的產(chǎn)生的圖。

【具體實(shí)施方式】
[0042] 以下，關(guān)于本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。
[0043] 本發(fā)明的化妝品的選擇方法以皮膚角質(zhì)層中的半乳糖凝集素_7的表達(dá)量為指 標(biāo)。
[0044] 只要是可取得角質(zhì)層的部分，本發(fā)明中的半乳糖凝集素測定部位可為任意部位。 且，從化妝品選擇的目的出發(fā)，作為主要部位優(yōu)選將面部、頸部、上臂部等日常暴露于外界 的機(jī)會多的部位作為測定對象。此外，角質(zhì)層的采集優(yōu)選膠帶剝離、刮擦等可簡便地得到角 質(zhì)層的方法。
[0045] 采集的各試樣的半乳糖凝集素_7的表達(dá)量可通過以往已知的方法進(jìn)行測 定。例如，可使用依據(jù)與抗半乳糖凝集素-7抗體的反應(yīng)的酶聯(lián)免疫分析法（enzyme immunoassay)、放身寸免疫分析法（radioimmunoassay)、蛋白質(zhì)印跡法（westernblotting method)等的方法。該測定手段已有市售，作為代表性的半乳糖凝集素-7的酶聯(lián)免疫分析 法試劑盒，可例不艾博抗公司（Abeam)制的Galeectin7HumanELISAKit、R&Dsystems公司 制的ELISAKit。
[0046] 從各試樣中將半乳糖凝集素-7經(jīng)過其自身已知的生物化學(xué)方法，例如凍融法、超 聲波破碎法、均質(zhì)法等來制備可溶性組分。提取后，迅速地進(jìn)行測定。
[0047] 作為蓄積了來自外界應(yīng)激的肌膚的粗糙肌膚或敏感性肌膚與健康肌膚相比角質(zhì) 層的半乳糖凝集素-7表達(dá)量顯著高，因此，以角質(zhì)層中的半乳糖凝集素_7表達(dá)量的多少作 為指標(biāo)，即可簡便地判斷粗糙肌膚的程度或是否為潛在的粗糙肌膚或者敏感性肌膚。本發(fā) 明所使用的角質(zhì)層可使用膠帶剝離法等通過角質(zhì)膠帶而僅采集角質(zhì)層的表層部分的簡單 方法來進(jìn)行采集。此外，本發(fā)明可在不對皮膚造成紫外線或化學(xué)物質(zhì)等刺激下測定半乳糖 凝集素-7的表達(dá)量，因此，可不對使用者造成負(fù)擔(dān)來評價(jià)使用者的粗糙肌膚的程度，根據(jù) 該結(jié)果可選擇適當(dāng)?shù)幕瘖y品。
[0048] 本發(fā)明的方法由下述工序構(gòu)成：采集工序，采集角質(zhì)層；測定工序，測定所述采集 工序采集的角質(zhì)層中的半乳糖凝集素_7的表達(dá)量；和選擇工序，根據(jù)所述測定工序測定的 半乳糖凝集素-7的表達(dá)量來選擇化妝品。
[0049] 首先，將測定的半乳糖凝集素_7表達(dá)量與健康肌膚的角質(zhì)層中的半乳糖凝集 素-7表達(dá)量進(jìn)行對比。此外，也可測定受試者的某一評價(jià)對象部位的角質(zhì)層中的半乳糖凝 集素-7表達(dá)量，并將所測定的半乳糖凝集素_7表達(dá)量與具有健康肌膚的人的同一評價(jià)對 象部位的角質(zhì)層中的半乳糖凝集素-7表達(dá)量進(jìn)行對比。具有健康肌膚的人的角質(zhì)層的半 乳糖凝集素-7表達(dá)量通過使用來自多名具有健康肌膚的人的數(shù)據(jù)的平均值，可進(jìn)行更為 客觀的評價(jià)。具體而言，從隨機(jī)抽取的受試者的半乳糖凝集素-7的表達(dá)量分布可設(shè)定健康 肌膚的分布。
[0050] 如此對比后的結(jié)果，當(dāng)所測定的半乳糖凝集素-7表達(dá)量顯著大于健康肌膚的半 乳糖凝集素-7表達(dá)量時(shí)，即可評價(jià)為應(yīng)激的蓄積大，并且可評價(jià)為粗糙肌膚或潛在的粗糙 肌膚或者敏感性肌膚的可能性高。
[0051] 此外，當(dāng)受試者的某一評價(jià)對象部位的角質(zhì)層中的半乳糖凝集素_7表達(dá)量顯著 地大于具有健康肌膚的人的同一評價(jià)對象部位的角質(zhì)層中的半乳糖凝集素-7表達(dá)量時(shí)， 也評價(jià)為應(yīng)激的蓄積大。此外，當(dāng)該數(shù)值顯著高時(shí)，判斷為粗糙肌膚或潛在的粗糙肌膚或者 敏感性肌膚。
[0052] 評價(jià)為粗糙肌膚的情況下，作為化妝品，選擇對應(yīng)于皮膚的半乳糖凝集素-7量的 含有改善肌膚粗糙、降低半乳糖凝集素-7產(chǎn)生的成分的化妝品。然而，已知含有降低半乳 糖凝集素-7產(chǎn)生的成分的化妝品并不明確。因此，預(yù)先需要明確用于化妝品的成分是否能 夠降低皮膚的半乳糖凝集素-7的產(chǎn)生。此種成分通過使用人三維培養(yǎng)表皮模型的篩選來 進(jìn)行選擇。
[0053] 在選擇降低半乳糖凝集素-7產(chǎn)生的成分時(shí)的篩選方法中所使用的人三維培養(yǎng)表 皮模型是指"培養(yǎng)下維持的表皮組織"，為一邊將從人皮膚采集的皮膚組織或?qū)⑴咛ジ杉?xì)胞 或成體干細(xì)胞在試管內(nèi)分化所得到的皮膚組織維持為復(fù)層結(jié)構(gòu)一邊在試管內(nèi)培養(yǎng)的組織。 特別是關(guān)于來自人時(shí)，可使用LabCyte EPI-MODEL (Japan Tissue Engineering Co.，Ltd.)或 者EPI?模型24那樣可買到的人三維培養(yǎng)表皮模型產(chǎn)品。
[0054] 使受試物質(zhì)接觸人三維培養(yǎng)表皮模型時(shí)，在人三維培養(yǎng)表皮模型所配備的培養(yǎng)杯 中添加用PBS等緩沖液等以任意濃度溶解的受試物質(zhì)后進(jìn)行孵育，接著測定半乳糖凝集 素-7并評價(jià)其作用。
[0055] 在實(shí)施使用人三維培養(yǎng)表皮模型的試驗(yàn)時(shí)，當(dāng)預(yù)先添加可確認(rèn)使人細(xì)胞的半乳糖 凝集素-7增加的成分，可易于檢測出使成為目標(biāo)受試物質(zhì)的半乳糖凝集素-7的產(chǎn)生降低 的效果。作為此種物質(zhì)，可例示表面活性劑。特別優(yōu)選十二烷基硫酸鈉（以下，記載為SDS)。
[0056] 將SDS等使半乳糖凝集素-7增加的成分添加到人三維培養(yǎng)表皮模型中時(shí)，在人三 維培養(yǎng)表皮模型中將受試物質(zhì)與SDS等使半乳糖凝集素-7增加的成分同時(shí)添加進(jìn)行培養(yǎng)， 并測定細(xì)胞中的半乳糖凝集素-7的量。
[0057] 三維培養(yǎng)表皮模型細(xì)胞中的半乳糖凝集素-7的量可通過以往已知的方法進(jìn)行測 定。例如，可使用根據(jù)與抗半乳糖凝集素-7抗體的反應(yīng)的酶聯(lián)免疫分析法、放射免疫分析 法、蛋白質(zhì)印跡法等的方法。該測定手段已有市售。作為代表性的半乳糖凝集素-7的酶 聯(lián)免疫分析試劑盒，可例不HumanGalectin_7DuoSetEconomyPack(R&DSystemsInc.)、艾 博抗公司制的GaleeCtin7HumanELISAKit。從三維培養(yǎng)表皮模型細(xì)胞中提取半乳糖凝集 素-7時(shí)，可經(jīng)過其自身已知的生物化學(xué)方法，例如凍融法、超聲波破碎法、均質(zhì)法等來制備 可溶性組分。提取后，迅速測定半乳糖凝集素-7。
[0058] 這樣含有可確認(rèn)降低半乳糖凝集素-7的成分的化妝品可選擇作為適于訴苦粗糙 肌膚的人的化妝品。
[0059] 在下述實(shí)施例中，在配合到化妝品的成分中，作為通過上述篩選可確認(rèn)降低半乳 糖凝集素產(chǎn)生的物質(zhì)，可例示半乳糖、白柳提取物、狗薔薇提取物。
[0060] 關(guān)于配合到化妝品中的成分來實(shí)施該試驗(yàn)，只要預(yù)先積累所得到的信息，在選擇 訴苦粗糙肌膚的人的化妝品時(shí)，通過與皮膚的半乳糖凝集素-7量進(jìn)行對比，即可選擇適當(dāng) 的化妝品。
[0061] 以下，關(guān)于具體的實(shí)施例進(jìn)行說明，但本發(fā)明不限定于下述的實(shí)施例。 實(shí)施例
[0062] 1.人不同部位的半乳糖凝集素_7的表達(dá)量的測定
[0063] <受試者>
[0064] 從具有健康肌膚的35名男女（包括具有特應(yīng)性皮炎（AD)既往史的人）的臉頰、 前臂內(nèi)側(cè)部、臀部采集樣品。
[0065] <角質(zhì)層樣品提取方法、蛋白定量>
[0066] 在受試者的臉頰、臂、臀部貼上角質(zhì)層測試片（ASAHIBI0MED公司）來采集角質(zhì) 層。從角質(zhì)層測試片用珠磨法（在容器中加入受試物、直徑約2mm的玻璃珠與提取液進(jìn)行 振蕩提取的方法）使用500y1的T-PER提取緩沖液（TissueProteinExtractionReagent ThermoScientific制（product#78510)來進(jìn)行角質(zhì)層蛋白質(zhì)的提取。各樣品的蛋白質(zhì)量通 過Pierce BCA protein Assay Kit (Thermo Scientific#23225)進(jìn)行測定。測定為在IOiiI所述角質(zhì)層蛋白質(zhì)提取液中加入200 iiIPierce BCA protein Assay Kit的反應(yīng)試劑液，在 60°C孵育30分鐘后，測定562nm處的吸光度。同時(shí)，用BSA制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，從吸光度的值計(jì) 算蛋白質(zhì)量。
[0067] <角質(zhì)層中的半乳糖凝集素_7的測定>
[0068] 同樣地將從膠帶提取的角質(zhì)層蛋白質(zhì)提取液使用R&Dsystems的ELISA試劑盒 (galectin-7 :DY1339E)來測定半乳糖凝集素-7的表達(dá)量。首先，在costar制的96孔板 #3590中將成為初次抗體的固相化抗體用試劑盒指定的濃度在20°C過夜進(jìn)行固相化。接 著，用1 %BSA在37 °C下放置1小時(shí)來封閉培養(yǎng)板，并用0. 01 %Tween-PBS洗凈培養(yǎng)板 后，將各1〇〇y1成為標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)品及樣品進(jìn)彳丁加樣，在25C鮮育2小時(shí)。用0. 01 % Tween-PBS洗凈培養(yǎng)板后，將2次抗體用試劑盒指定濃度在25°C下孵育2小時(shí)。進(jìn)而，用 0. 01%Tween-PBS洗凈培養(yǎng)板后，將Str印tavidin-HRP用試劑盒指定濃度在25°C下孵育 30分鐘。最后，用0. 01%Tween-PBS洗凈培養(yǎng)板后，按照IOOii1/well加入作為顯色基質(zhì) 的TMBsolution(Promega，G7431))，經(jīng)過試劑盒指定的時(shí)間后，加入100ill終止液（0? 5M 硫酸），測定450nm處的吸光度來計(jì)算表達(dá)量。
[0069] < 結(jié)果 >
[0070] 測定結(jié)果如圖1所示。
[0071]由圖1可知，可確認(rèn)日常遭受外界刺激的臉頰與所謂粗糙肌膚通常不出現(xiàn)的臂、 臀部（屁股）相比，半乳糖凝集素-7的表達(dá)量顯著高。該試驗(yàn)結(jié)果表明作為粗糙肌膚指標(biāo) 的半乳糖凝集素-7有用。
[0072] 2.人造粗糙肌膚模型中的半乳糖凝集素-7表達(dá)量的變化
[0073] 將14名具有健康肌膚的女性作為受試者實(shí)施試驗(yàn)。
[0074] <由SDS進(jìn)行的粗糙肌膚模型制作>
[0075] 在左前臂內(nèi)側(cè)部放上表面活性劑（十二烷基硫酸鈉，以下稱為SDS) 10 %溶液的2 次按壓量并來回涂布1〇〇次。噴灑熱水（35°C、1L)來沖洗表面活性劑。此外，作為對照在 右前臂內(nèi)側(cè)部也噴灑熱水（35°C、1L)。該操作1天進(jìn)行4次，1次操作以間隔1小時(shí)以上的 狀態(tài)重復(fù)進(jìn)行。上述操作持續(xù)2天來人工制作粗糙肌膚模型。
[0076]〈角質(zhì)采集〉
[0077] 在深度方向分別采集4張未實(shí)施SDS洗凈及實(shí)施SDS洗凈的各個(gè)部分的角質(zhì)層。 采集角質(zhì)層的日期為在洗凈前與洗凈后第4、8、12天采集。
[0078] <角質(zhì)層樣品提取、蛋白定量、半乳糖凝集素-7的測定>
[0079] 與上述1?的方法同樣地進(jìn)行測定。
[0080] < 結(jié)果 >
[0081] 受試者的個(gè)別測定結(jié)果如圖2所示。可確認(rèn)粗糙肌膚制作處理后第8?12天半 乳糖凝集素-7的測定結(jié)果顯著上升。
[0082] <由丙酮進(jìn)行的粗糙肌膚模型制作>
[0083] 將3名具有健康肌膚的女性作為受試者實(shí)施試驗(yàn)。
[0084] 將上下開口的玻璃制漏斗（直徑3cm)用橡膠帶固定，并將丙酮（WAK0特級）/乙 醚（WAK0特級）等量混合液用移液器向漏斗內(nèi)注入2ml，在振動器上放上雙臂處理20分鐘。
[0085] 接著，用滴液吸移管除去漏斗內(nèi)的丙酮/乙醚混合液后，注入自來水，并在振動器 上放上雙臂處理5分鐘（脫脂處理）。第二天，在同一部分進(jìn)行同樣操作再次進(jìn)行脫脂處 理，制作干燥皮膚。此外，將僅用自來水處理的部位作為對照。
[0086]〈角質(zhì)采集〉
[0087] 在深度方向分別采集4張未實(shí)施丙酮處理及實(shí)施丙酮處理部位的角質(zhì)層。采集日 期為在丙酮處理前一天與丙酮處理后第1、5、8、12、16、20天采集。
[0088] <角質(zhì)層樣品提取、蛋白定量、半乳糖凝集素-7的測定>
[0089] 與上述1的試驗(yàn)方法同樣地進(jìn)行操作。
[0090] < 結(jié)果 >
[0091] 受試者的個(gè)別測定結(jié)果如圖3所示?？纱_認(rèn)粗糙肌膚制作處理后第8?12天半 乳糖凝集素-7的測定結(jié)果顯著上升。
[0092] 從以上的粗糙肌膚模型制作試驗(yàn)的結(jié)果可確認(rèn)伴隨粗糙肌膚的發(fā)生，半乳糖凝集 素-7也上升。
[0093] 3.健康肌膚的人的半乳糖凝集素-7的測定
[0094] <受試者>
[0095] 采集608名具有健康肌膚的男女（包含具有特應(yīng)性皮炎既往史的人）的臉頰樣品 并確認(rèn)半乳糖凝集素-7的分布。此外，關(guān)于其中35名的受試者，測定作為以往粗糙肌膚的 評價(jià)指標(biāo)的經(jīng)皮水分流失（TEWL)，并確認(rèn)與半乳糖凝集素-7的測定結(jié)果有無相關(guān)關(guān)系。 [0096] <角質(zhì)層樣品提取方法、蛋白定量>
[0097]與上述1.同樣，在受試者的臉頰貼上角質(zhì)層測試片（ASAHIBI0MED公司）來采集 角質(zhì)層。
[0098] <角質(zhì)層中的半乳糖凝集素_7的測定>
[0099] 與上述1.同樣，將從膠帶提取的角質(zhì)層蛋白質(zhì)提取液使用R&Dsystems的ELISA 試劑盒（galectin-7 :DY1339E，）來測定galectin-7 的表達(dá)量。
[0100] <經(jīng)皮水分流失（TEWL(transepidermalwaterloss)值>
[0101] TEWL使用Keystone公司的Delfin將分別測定2次的平均值用于解析。
[0102] < 結(jié)果 >
[0103] 608名的半乳糖凝集素-7測定結(jié)果如表1及圖4所示。
[0104] 表 1
[0105]

【權(quán)利要求】
1. 一種選擇化妝品的方法，其特征在于， 在給粗趟肌膚選擇化妝品時(shí)，在測定皮膚角質(zhì)層的半乳糖凝集素-7的表達(dá)量而半乳 糖凝集素-7表達(dá)量高的情況下，選擇配合了具有降低半乳糖凝集素-7的效果的成分的化 妝品。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的選擇化妝品的方法，其特征在于， 測定皮膚角質(zhì)層的半乳糖凝集素-7的表達(dá)量的方法通過酶聯(lián)免疫分析法進(jìn)行。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的化妝品的選擇方法，其特征在于， 具有降低半乳糖凝集素-7的效果的成分為通過下述方法而選擇的成分，即使受試物 質(zhì)接觸人H維培養(yǎng)表皮模型，在所述模型細(xì)胞中的半乳糖凝集素-7的量比不接觸受試物 質(zhì)的所述模型細(xì)胞中的半乳糖凝集素-7的量少的情況下，判斷為受試物質(zhì)具有降低半乳 糖凝集素-7的效果。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的化妝品的選擇方法，其特征在于， 具有降低半乳糖凝集素-7的效果的成分為白柳提取物、狗醫(yī)薇提取物、半乳糖、神經(jīng) 醜胺2與神經(jīng)醜胺5的混合物中的任一種。
5. -種方法，其特征在于， 對比顧客皮膚的半乳糖凝集素-7量的測定信息與化妝品中的半乳糖凝集素-7抑制成 分的含有信息，選擇含有適于顧客的半乳糖凝集素-7濃度的半乳糖凝集素抑制成分的化 妝品。
【文檔編號】G01N33/66GK104345146SQ201410256890
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2014年6月10日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月25日
【發(fā)明者】安田知永, 禹幸玉, 金辰也 申請人:株式會社芳珂