包含噻吩并三唑并二氮雜卓化合物的藥物制劑的制作方法
【專利摘要】一種治療淋巴細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、BCR?ABL陽性急性淋巴細(xì)胞性白血病或CD34陽性急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用藥學(xué)可接受的量的組合物的步驟，該組合物包含由下式(1)表示的作為固體分散體的噻吩并三唑并二氮雜卓化合物、其可藥用的鹽、或其水合物；以及可藥用的聚合物：其中X為鹵素，R1為C1-C4烷基；R2為C1-C4烷基、a為1至4的整數(shù)；R3為C1-C4烷基、C1-C4羥烷基、C1-C4烷氧基、任選地具有取代基的苯基、或任選地具有取代基的雜芳基。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述可藥用的聚合物為HPMCAS。
【專利說明】包含喔吩并Ξ性并二氮雜卓化合物的藥物制劑
[0001] 相關(guān)專利申請的交叉引用
[0002] 本專利申請要求2013年8月1日提交的美國臨時(shí)申請No. 61/861，291、w及2013年8 月7日提交的美國臨時(shí)申請No.61/863,118的優(yōu)先權(quán)，所有運(yùn)些申請的全文均W引用的方式 并入本文。
[0003] 序列表
[0004] 計(jì)算機(jī)可讀的核巧酸/氨基酸序列表的全文通過引用的方式并入本文，該序列表 與本文同時(shí)提交并且標(biāo)識(shí)如下：于2014年7月22日創(chuàng)建的名為吁ilename. txt"的XXX字節(jié)的 ASCII (Text)文件。
技術(shù)領(lǐng)域
[0005] 在一些方面，本發(fā)明設(shè)及藥物組合物W及利用運(yùn)些藥物組合物治療白血病的方 法。更具體而言，本發(fā)明設(shè)及含有嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓(thienot;riazolodiaz邱ine)化合 物的分散體的組合物W及治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病和/或CD34陽性急性骨 髓性白血病的方法，所述嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物具有改善的溶解度和生物利用度。
【背景技術(shù)】
[0006] 下文所述的式（1)的化合物已經(jīng)顯示出可抑制乙酷化的組蛋白H4與包含串聯(lián)的漠 結(jié)構(gòu)域(BRD)的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子家族(稱為BET (漠結(jié)構(gòu)域和額外末端)蛋白質(zhì)，包括服D2、BRD3和 BRD4)的結(jié)合。參見美國專利申請公開No. 2010/0286127 A1，其全文W引用的方式并入本 文。Deni S , G . V .在文南犬"Bromodomain coactivators in cancer,obesity, type 2diabetes,and inflammation,"Discov Med 2010;10:489-499(該文獻(xiàn)的全部內(nèi)容W引用 方式并入本文）中報(bào)道了如下內(nèi)容:BET蛋白質(zhì)作為增殖和分化的主要的表觀遺傳調(diào)節(jié)子而 出現(xiàn)，并且還與傾向于血脂異?；蛑旧刹划?dāng)調(diào)節(jié)、屯、血管病和2型糖尿病的升高的炎癥 性質(zhì)和風(fēng)險(xiǎn)、W及自體免疫疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡)的易感性增加有 關(guān)。因此，式(II)所示的化合物可W用于治療多種癌癥、屯、血管疾病、2型糖尿病和自體免疫 失調(diào)(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和系統(tǒng)性紅斑狼瘡）。
[0007] 下文所述的式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物表現(xiàn)出與廣泛施用和制備蓋倫 組合物有關(guān)的非常特有的困難，尤其包括藥物生物利用度W及患者間和患者內(nèi)的劑量應(yīng)答 的差異性的特定問題，由此迫切需要針對嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓的幾乎不溶于水的性質(zhì)而 開發(fā)非常規(guī)的劑型。
[000引之前，如美國專利申請公開No.20090012064 A1中所報(bào)告(該文獻(xiàn)的全部內(nèi)容W引 用方式并入本文），已經(jīng)發(fā)現(xiàn)式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物可W使用載體丙締酸乙 醋-甲基丙締酸甲醋-Ξ甲基錠乙基甲基丙締酸醋氯化物（trimethylammonioethyl methac巧late chloride)的共聚物(；EiKlragit RS，由Rohm公司生產(chǎn)）來配制，從而提供在下 部腸道優(yōu)先釋放藥物組分W用于治療炎性腸病(例如潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病）的口服制 劑。通過多種實(shí)驗(yàn)(包含動(dòng)物測試），發(fā)現(xiàn)就炎性腸病而言，與式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜 卓化合物由胃腸道被吸收至循環(huán)中相比，式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物在病變部 位的釋放及其對炎性病變的直接作用更為重要。但是，對于許多其他的病癥而言，則要求將 式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物由胃腸道高度吸收至循環(huán)中。因此，需要可W使式 (1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物由胃腸道高度吸收至循環(huán)中的式（1)的嚷吩并Ξ挫并 二氮雜卓化合物的制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療急性淋己細(xì)胞性白血病的方法，包括 向患者施用藥學(xué)可接受的量的組合物，該組合物包含嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、或其 可藥用的鹽、或其水合物或溶劑化物，所述嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物由下式(1)表示：
[0010]
[0011] 其中Ri為具有1至4個(gè)碳的烷基;R2為氨原子、面素原子、或任選地被面素原子或徑 基取代的具有1至4個(gè)碳的烷基;R3為面素原子;任選地被面素原子、具有1至4個(gè)碳的烷基、 具有1至4個(gè)碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一NRs--(C此)m-R6,其中Rs為氨原子、或具有1 至4個(gè)碳的烷基，m為0至4的整數(shù)，并且R6為任選地被面素原子取代的苯基或化晚基；或一 NR7--C0-(CH2)n-R8,其中化為氨原子或具有1至4個(gè)碳的烷基，η為0至2的整數(shù)，并且R功任 選地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4為一(C出)a-C0-ΝΗ-R9,其中a為1至4的整 數(shù)，并且R9為具有1至4個(gè)碳的烷基;具有1至4個(gè)碳的徑烷基;具有1至4個(gè)碳的烷氧基;或任 選地被具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1至4個(gè)碳的烷氧基、氨基或徑基取代的苯基或化晚基； 或一(師)廣COORio,其中b為1至4的整數(shù)，并且Rio為具有1至4個(gè)碳的烷基;其中所述嚷吩并 Ξ挫并二氮雜卓化合物形成含有無定形嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物W及可藥用的聚合 物的固體分散體，其中所述固體分散體展現(xiàn)出基本不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X射線粉末衍射圖案。在一個(gè)運(yùn)樣的實(shí)施方案中，所述 可藥用的聚合物為醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋，其中嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與 醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS)的重量比為1:3至1: 1。
[0012] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物獨(dú)立地選 自由W下化合物構(gòu)成的組：（i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲基-6H-嚷吩并[3,2-門 [1，2,4]Ξ挫并-[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基]-Ν-(4-^苯基）乙酷胺或其二水合物；（ii) (S)-{4-(3'-氯基聯(lián)苯-4-基）-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-a] [1，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；（iii)(S)-{2,3,9-S甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩 并[3,2-f][l，2,4]S挫并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；W及（iv)(S)-{2,3,9- Ξ甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基）苯基]-6H-嚷吩并[3,2-f-][l，2,4]S挫并[4,3-a][l， 4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋。
[0013] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物為(S)-2-(4-(4-氯代苯 基）-2,3,9-ミ甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]ミ挫并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基）-N- (4-?苯基）乙酷胺二水合物。
[0014] 在又一個(gè)實(shí)施方案中，所述固體分散體表現(xiàn)出約130°C至約140°C的單一的玻璃化 轉(zhuǎn)變溫度(Tg)拐點(diǎn)。
[0015] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開還提供了一種治療急性骨髓性白血病的方法，包括向 患者施用藥學(xué)可接受的量的組合物的步驟，所述組合物包含嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合 物、或其可藥用的鹽、或其水合物或溶劑化物，所述嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物由下式 (1)表示：
[0016]
[0017] 其中Ri為具有1至4個(gè)碳的烷基;R2為氨原子、面素原子、或任選地被面素原子或徑 基取代的具有1至4個(gè)碳的烷基;R3為面素原子;任選地被面素原子、具有1至4個(gè)碳的烷基、 具有1至4個(gè)碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一脆一 (C此)m-R6，其中Rs為氨原子、或具有1 至4個(gè)碳的烷基，m為0至4的整數(shù)，并且R6為任選地被面素原子取代的苯基或化晚基；或-- NR7--C0--(C出)η-Rs，其中化為氨原子或具有1至4個(gè)碳的烷基，η為0至2的整數(shù)，并且R8為任 選地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4為一(C出)a-C0-ΝΗ-R9,其中a為1至4的整 數(shù)，并且R9為具有1至4個(gè)碳的烷基;具有1至4個(gè)碳的徑烷基;具有1至4個(gè)碳的烷氧基;或任 選地被具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1至4個(gè)碳的烷氧基、氨基或徑基取代的苯基或化晚基； 或--(C出)b-COORio，其中b為1至4的整數(shù)，并且Rio為具有1至4個(gè)碳的烷基;其中所述嚷吩并 Ξ挫并二氮雜卓化合物形成含有無定形嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物W及可藥用的聚合 物的固體分散體，其中所述固體分散體展現(xiàn)出基本不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X射線粉末衍射圖案。在一個(gè)運(yùn)樣的實(shí)施方案中，所述 可藥用的聚合物為醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋，其中嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與 醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS)的重量比為1:3至1: 1。
[0018] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物獨(dú)立地選 自由W下化合物構(gòu)成的組：（i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲基-6H-嚷吩并[3,2-門 [1，2,4]Ξ挫并-[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基]-Ν-(4-^苯基）乙酷胺或其二水合物；（ii) (S)-{4-(3'-氯基聯(lián)苯-4-基）-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-a] [1，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；（iii)(S)-{2,3,9-S甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩 并[3,2-f][l，2,4]S挫并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；W及（iv)(S)-{2,3,9- Ξ甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基）苯基]-6H-嚷吩并[3,2-f-][l，2,4]S挫并[4,3-a][l， 4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋。
[0019] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物為(S)-2-(4-(4-氯代苯 基）-2,3,9-ミ甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]ミ挫并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基）-N- (4-?苯基）乙酷胺二水合物。
[0020] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述固體分散體展現(xiàn)出基本不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷 吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X射線粉末衍射圖案。在又一個(gè)實(shí)施方案中，所 述固體分散體表現(xiàn)出約130°C至約140°C的單一的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)拐點(diǎn)。
[0021] 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病的方法， 包括向患者施用藥學(xué)可接受的量的組合物的步驟，所述組合物包含嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 化合物。在所述治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中， 所述嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物由下式(1)的結(jié)構(gòu)表示：
[0022]
[0023] 其中Ri為具有1至4個(gè)碳的烷基;R2為氨原子、面素原子、或任選地被面素原子或徑 基取代的具有1至4個(gè)碳的烷基;R3為面素原子;任選地被面素原子、具有1至4個(gè)碳的烷基、 具有1至4個(gè)碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一NRs--(C此)m-R6,其中Rs為氨原子、或具有1 至4個(gè)碳的烷基，m為0至4的整數(shù)，并且R6為任選地被面素原子取代的苯基或化晚基；或一 NR7--C0-(CH2)n-R8,其中化為氨原子或具有1至4個(gè)碳的烷基，η為0至2的整數(shù)，并且R功任 選地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4為一(C出)a-C0-ΝΗ-R9,其中a為1至4的整 數(shù)，并且R9為具有1至4個(gè)碳的烷基;具有1至4個(gè)碳的徑烷基;具有1至4個(gè)碳的烷氧基;或任 選地被具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1至4個(gè)碳的烷氧基、氨基或徑基取代的苯基或化晚基； 或--(C此)b--COORio,其中b為1至4的整數(shù)，并且Rio為具有1至4個(gè)碳的烷基?；蚱淇伤幱玫?鹽、或其水合物或溶劑化物。
[0024] 在治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所 述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物獨(dú)立地選自由W下化合物構(gòu)成的組：
[00 巧]Q)(s)-2-[4-(4-氯代苯基）-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并- [4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基]-N-(4-?苯基)乙酷胺或其二水合物；
[00%] Qi)(s)-{4-(3'-氯基聯(lián)苯-4-基)-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-曰][1，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；
[0027] Qii)(s)-{2,3,9-S 甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫 并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；W及
[002引 Qv)(S)-{2,3,9-S甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基)苯基]-6H-嚷吩并[3,2-f-] [1，2,4]^挫并[4,3-曰][1，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋。
[0029] 在治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所 述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物為（S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲 基-6Η-嚷吩并[3，2-f ] [ 1，2，4];挫并[4，3-a] [ 1，4]二氮雜卓-6-基)-Ν-(4-^苯基）乙酷胺 二水合物。
[0030] 在治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所 述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物形成固體分散體，其中所述固體分散體包 含無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、和其可藥用的鹽、或其水合物；W 及可藥用的聚合物。
[0031] 在治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所 述由式（1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物形成固體分散體，其中所述固體分散體包 含無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、和其可藥用的鹽、或其水合物；W 及可藥用的聚合物，其中所述可藥用的聚合物為醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋，其中嚷吩 并S挫并二氮雜卓化合物與醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS)的重量比為1:3至1:1。
[0032] 在治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所 述包含式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物的固體分散體表現(xiàn)出約130°C至約14(TC的 單一的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)拐點(diǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述固體分散體展現(xiàn)出基本不存在 與結(jié)晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X射線粉末衍射圖案。
[0033] 在另一方面，本發(fā)明提供了一種治療CD34陽性急性骨髓性白血病的方法。在治療 CD34陽性急性骨髓性白血病的方法的一些示例性實(shí)施方案中，所述方法包括向患者施用藥 學(xué)可接受的量的包含嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物的組合物。在治療CD34陽性急性骨髓性 白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述方法包括向患者施用藥學(xué)可接受的量的組合 物，該組合物包含:嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、或其可藥用的鹽、或其水合物或溶劑化 物，所述嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物具有式(1)所示的結(jié)構(gòu)：
[0034]
[0035] 其中Ri為具有1至4個(gè)碳的烷基;R2為氨原子、面素原子、或任選地被面素原子或徑 基取代的具有1至4個(gè)碳的烷基;R3為面素原子;任選地被面素原子、具有1至4個(gè)碳的烷基、 具有1至4個(gè)碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一脆一 (C此)m-R6，其中Rs為氨原子、或具有1 至4個(gè)碳的烷基，m為0至4的整數(shù)，并且R6為任選地被面素原子取代的苯基或化晚基；或-- NR7--C0--(C出)η-Rs，其中化為氨原子或具有1至4個(gè)碳的烷基，η為0至2的整數(shù)，并且R8為任 選地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4為一(C出)a-C0-ΝΗ-R9,其中a為1至4的整 數(shù)，并且R9為具有1至4個(gè)碳的烷基;具有1至4個(gè)碳的徑烷基;具有1至4個(gè)碳的烷氧基;或任 選地被具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1至4個(gè)碳的烷氧基、氨基或徑基取代的苯基或化晚基； 或--(C出)b-COORio，其中b為1至4的整數(shù)，并且Rio為具有1至4個(gè)碳的烷基。
[0036] 在治療CDW陽性急性骨髓性白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述由式 (1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物獨(dú)立地選自由W下化合物構(gòu)成的組：
[0037] Q) (s)-2-[4-(4-氯代苯基）-2，3，9-Ξ甲基-6H-嚷吩并[3，2-f ] [ 1，2，4]Ξ挫并- [4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基]-N-(4-?苯基)乙酷胺或其二水合物；
[003引 Qi)(s)-{4-(3'-氯基聯(lián)苯-4-基）-2,3,9-Ξ 甲基-6Η-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-曰][1，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；
[0039] Qii)(s)-{2,3,9-S 甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫 并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；W及
[0040] Qv)(S)-{2,3,9-S 甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基)苯基]-6H-嚷吩并[3,2-f-] [1，2,4]^挫并[4,3-曰][1，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋。
[0041] 在治療CDW陽性急性骨髓性白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述由式 (1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物為(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲基-6H-嚷 吩并[3,2-f][l，2,4]Ξ挫并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基)-N-(4-徑苯基)乙酷胺二水合物。
[0042] 在治療CDW陽性急性骨髓性白血病的方法的一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述由式 (1)表示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物形成固體分散體，其中所述固體分散體包含無定 形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、和其可藥用的鹽、或其水合物；W及可藥 用的聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述固體分散體展現(xiàn)出基本不存在與結(jié)晶的式（1)所示的 嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X射線粉末衍射圖案。
[0043] 在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，治療CD34陽性急性骨髓性白血病的方法包括向患者施 用藥學(xué)可接受的量的無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、及其可藥用的 鹽、或其水合物，其中式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物形成固體分散體，所述固 體分散體包含無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、及其可藥用的鹽、或其 水合物；W及可藥用的聚合物，并且其中所述可藥用的聚合物為醋酸徑丙基甲基纖維素班 巧酸醋，其中嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS)的 重量比為1:3至1:1。
[0044] 在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，治療CD34陽性急性骨髓性白血病的方法包括向患者施 用在可藥用的聚合物中形成固體分散體形式的藥學(xué)可接受的量的無定形的式（1)所示的嚷 吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、及其可藥用的鹽、或其水合物，其中所述固體分散體表現(xiàn)出約 13(TC至約14(TC的單一的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)拐點(diǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述固體分散體 展現(xiàn)出基本不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X 射線粉末衍射圖案。
【附圖說明】
[0045] 參照示例性實(shí)施方案的附圖來閱讀時(shí)，將會(huì)更好的理解前面的發(fā)明概述W及下面 的對本發(fā)明的包含嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓制劑的藥物組合物和方法的實(shí)施方案的詳述。但 是，應(yīng)該理解的是本發(fā)明不限于所示的精確設(shè)置和手段。
[0046] 在附圖中：
[0047] 圖1A示出了包含固體分散體的比較制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含 25%的化合物（1-1)和化化agit L100-55。
[0048] 圖1B示出了包含固體分散體的比較制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包含 50%的化合物（1-1)和化化agit L100-55。
[0049] 圖1C示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包 含25%的化合物（1-1)和聚乙締化咯燒酬(PVP)。
[0050] 圖1D示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包 含50 %的化合物(1 -1)和PVP。
[0051] 圖1E示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包 含25%的化合物（1-1)和PVP-乙酸乙締醋(PVP-VA)。
[0052] 圖1F示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包 含50%的化合物(1-1)和和?￥?-￥八。
[0053] 圖1G示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包 含25%的化合物(1-1)和醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS-M)。
[0054] 圖1H示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包 含50 %的化合物(1-1)和HPMCAS-M。
[0055] 圖II示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包 含25 %的化合物(1-1)和徑丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸醋化PMCP-HP55)。
[0056] 圖1J示出了包含固體分散體的示例性制劑的溶解情況，其中所述的固體分散體包 含50 %的化合物(1-1)和HMCP-HP55。
[0057] 圖2A示出了示例性制劑的體內(nèi)篩選結(jié)果，該示例性制劑包含25%化合物（1-1)和 PVP的固體分散體。
[0058] 圖2B示出了示例性制劑的體內(nèi)篩選結(jié)果，該示例性制劑包含25%化合物（1-1)和 HPMCAS-M的固體分散體。
[0059] 圖2C示出了示例性制劑的體內(nèi)篩選結(jié)果，該示例性制劑包含50%化合物（1-1)和 HPMCAS-M的固體分散體。
[0060] 圖3示出了化合物(1-1)的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜。
[0061] 圖4A示出了在環(huán)境條件下平衡的25%化合物（1-1)和PVP的固體分散體的修正的 差示掃描量熱軌跡。
[0062] 圖4B示出了在環(huán)境條件下平衡的25%化合物（1-1)和HPMCAS-M的固體分散體的修 正的差示掃描量熱軌跡。
[0063] 圖4C示出了在環(huán)境條件下平衡的50 %化合物（1-1)和HPMCAS-M的固體分散體的修 正的差示掃描量熱軌跡。
[0064] 圖5示出了 25 %化合物（1-1)和PVP或HPMCAS-M的固體分散體、W及50 %化合物（1- 1)和HPMCAS-MG的固體分散體的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)對相對濕度(RH)的圖。
[0065] 圖6示出了在75%相對濕度下平衡的25%化合物（1-1)和PVP的固體分散體的修正 的差示掃描量熱軌跡。
[0066] 圖7A和7B示出了 Img/kg靜脈定量給藥后的化合物（1-1)(實(shí)屯、矩形）、3mg/kg 口服 定量給藥的25 %化合物（1-1): PVP(空屯、圓圈）、3mg/kg 口服定量給藥的25 %化合物（1 -1): HPMCAS-MG (空屯、Ξ角形)和3mg/kg 口服定量給藥的50 %化合物（1 -1): HPMCAS-MG (空屯、倒Ξ 角）的血漿濃度對時(shí)間的曲線。插圖描繪了在半對數(shù)標(biāo)度上繪制的相同的數(shù)據(jù)。
[0067] 圖8A和8B示出了化合物（1-1)作為25%化合物（1-1):PVP(空屯、圓圈）、25%化合物 (1 -1): HPMCAS-MG (空屯、Ξ 角形）和50 % 化合物（1 -1): HPMCAS-MG (空屯、倒Ξ 角）在3mg/kg 口 服定量給藥后的血漿濃度對時(shí)間的曲線。插圖描繪了在半對數(shù)標(biāo)度上繪制的相同的數(shù)據(jù)。 [006引圖9示出了在穩(wěn)定性測試時(shí)間為0時(shí)，化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的固體分散體的 X射線粉末衍射圖譜。
[0069] 圖10示出了在40°C和75 %相對濕度的環(huán)境下暴露1個(gè)月后，化合物（1-1)在 HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜。
[0070] 圖11示出了在40°C和75 %相對濕度的環(huán)境下暴露2個(gè)月后，化合物（1-1)在 HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜。
[0071] 圖12示出了在40°C和75 %相對濕度的環(huán)境下暴露3個(gè)月后，化合物（1-1)在 HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜。
[0072] 圖13A-13C示出了化合物（1-1)對AUi田胞系（Jurkat、RS 4-11和T0M-1細(xì)胞)誘導(dǎo) 的調(diào)亡動(dòng)力學(xué)，運(yùn)些細(xì)胞在處理后的不同時(shí)間點(diǎn)收獲。調(diào)亡細(xì)胞定義為膜聯(lián)蛋白V+具有或 不具有PI吸收。X軸示出化合物（1-1)的劑量，Y軸示出調(diào)亡細(xì)胞的百分比。示出了 Ξ個(gè)試驗(yàn) 中的一個(gè)代表性試驗(yàn)。
[0073] 圖14A-14D示出了化合物（1-1)對AML細(xì)胞系化L60、K562、KG巧PKGla細(xì)胞)誘導(dǎo)的 調(diào)亡動(dòng)力學(xué)，運(yùn)些細(xì)胞在處理后的不同時(shí)間點(diǎn)收獲。調(diào)亡細(xì)胞定義為annexin V+具有或不 具有PI吸收。X軸示出化合物（1-1)的劑量，Y軸示出調(diào)亡細(xì)胞的百分比。示出了兩個(gè)試驗(yàn)中 的一個(gè)代表性試驗(yàn)。
[0074] 圖15A-15C示出了化合物（1-1)對A化和AML細(xì)胞系誘導(dǎo)的細(xì)胞周期改變。（A)為未 處理化60和用lOOnM的化合物（1-1)處理24小時(shí)的細(xì)胞的流式細(xì)胞圖譜的代表性柱狀圖。在 細(xì)胞周期分析之前用PI解育細(xì)胞。A化(圖15B)和AML(圖15C)細(xì)胞系的細(xì)胞周期改變。X軸示 出細(xì)胞系，并且Y軸示出細(xì)胞處于細(xì)胞周期時(shí)相的百分比。
[0075] 圖16示出了由較低劑量的化合物（1-1)誘導(dǎo)的調(diào)亡。用lOnM化合物（1-1)解育KG1 細(xì)胞。調(diào)亡細(xì)胞定義為Snnexin V+具有或不具有PI吸收。示出了代表性點(diǎn)圖（PI:化2， Annexin V:FL1)。
[0076] 圖17A-17C示出了白血病細(xì)胞系和患者樣品中的BRD基因表達(dá)。B畑2、BRD3和BRD4 在白血病細(xì)胞系中的表達(dá)水平（圖17A)，A化(圖17B)和AML(圖17C)患者樣品中的表達(dá)水平。 X軸示出細(xì)胞系，Y軸示出相對于ABL的cDNA的量。通過利用磁珠的陽性選擇（positive selection)得到了CD34+細(xì)胞。
[0077] 圖18A和18B示出了通過化合物（1-1)處理，BRD蛋白和c-MYC的下調(diào)。從不同的ALL 和AML細(xì)胞系得到細(xì)胞裂解物和cDNA提取物。通過免疫印跡（圖18A)和QT-PCR(圖17B)研究 蛋白質(zhì)和cDNA水平。
[007引圖19A-19D示出了用化合物（1-1)處理后BRD2、BRD3和B畑4的cDNA動(dòng)力學(xué)。從不同 的A化和AML細(xì)胞系得到cDNA提取物。通過QT-PCR研究表達(dá)水平。
[0079] 圖20示出了化合物（1-1)對原發(fā)性細(xì)胞(primary cell)的影響。通過用抗體標(biāo)記 的磁珠的陽性選擇得到CD34+和CD34-廝血細(xì)胞、W及AML細(xì)胞。用不同劑量的化合物（1-1) 處理細(xì)胞并在24小時(shí)后收獲細(xì)胞。Y軸示出了具有或不具有PI吸收的Annexin V。
[0080] 圖21A-21T示出了短暫暴露于lOnM和lOOnM濃度的化合物（1-1)96小時(shí)后，對A化細(xì) 胞系(Jurkat和RS 4-11)?及AML細(xì)胞系化L60和K562)調(diào)亡的流式細(xì)胞分析。
[0081 ] 圖22A-2化示出了短暫暴露于OnM、lnM和lOnM濃度的化合物（1-1)后，對AML細(xì)胞系 化60的調(diào)亡的流式細(xì)胞分析。
[0082] 圖23A、23B和23C示出了圖22A-2化中的化60細(xì)胞系的調(diào)亡。
[0083] 圖24A和24B示出了化60和K562細(xì)胞系的調(diào)亡。
[0084] 圖25A和25B示出了 KG1和KGla細(xì)胞系的調(diào)亡。
[0085] 圖26A和26B示出了化rkat和RS4-11細(xì)胞系的調(diào)亡。
[00化]圖27示出了T0M1細(xì)胞系的調(diào)亡。
[0087] 圖28為從化rkat細(xì)胞系洗去藥物后的調(diào)亡圖。
[0088] 圖29A和29B為從化60和K562細(xì)胞洗去藥物后的調(diào)亡圖。
[0089] 圖30A和30B為從化rkat和RS4-11細(xì)胞洗去藥物后的調(diào)亡圖。
[0090] 圖31A和31B示出了在Ξ種A化細(xì)胞系（Jurkat、RS 4-11、T0M-1)和四種AML細(xì)胞系 化 L60、Κ562、KG1 和 KGla)中的MTT 檢驗(yàn)。
[0091] 圖32A-32C示出了用化合物（1-1)處理后，AML患者的調(diào)亡情況。
[0092] 圖33A-33G示出了 AML患者的調(diào)亡情況。
[0093] 圖34A和34B示出了 AML患者的調(diào)亡情況。
[0094] 圖35示出了用化合物（1 -1)處理后，在AML和ALL細(xì)胞系中的c-MYC動(dòng)力學(xué)。
[0095] 圖36示出了用化合物（1-1)處理后，在AML和A化細(xì)胞系中的BRD4動(dòng)力學(xué)。
[0096] 圖37示出了用化合物（1-1)處理后，在ML和A化細(xì)胞系中的服D2動(dòng)力學(xué)。
[0097] 圖38示出了用化合物（1-1)處理后，在ML和A化細(xì)胞系中的服D3動(dòng)力學(xué)。
[009引圖39A-39C示出了在AML和A化細(xì)胞系中，由不同劑量的化合物（1-1)誘導(dǎo)的調(diào)亡動(dòng) 力學(xué)。用劑量增加的化合物（1-1)處理72小時(shí)后收獲骨髓和淋己細(xì)胞系。調(diào)亡細(xì)胞定義為 annexin V+具有或不具有PI吸收。X軸示出化合物（1-1)的劑量，Y軸示出調(diào)亡細(xì)胞的百分比。 結(jié)果用平均± SD表示，其來自用化合物（1-1)處理AML和A化細(xì)胞系的Ξ個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的重復(fù)。
[0099] 圖40A-40H示出了在白血病細(xì)胞系中用化合物（1 -1) (0TX015)誘導(dǎo)的細(xì)胞周期改 變。用劑量升高的0TX015處理RS4-11細(xì)胞4她，其流式細(xì)胞圖譜的代表性柱狀圖在圖40A- 40F中示出。在細(xì)胞周期分析之前，將細(xì)胞與PI解育化。圖40G示出在4她時(shí)分析得到的所有 AML和AUi田胞系的細(xì)胞周期改變。X軸示出細(xì)胞系，Y軸示出處于G1和S期的細(xì)胞百分比。結(jié) 果用來自Ξ個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的重復(fù)的平均± SD表示。
[0100] 圖41A和41B示出了在白血病細(xì)胞系中漠結(jié)構(gòu)域的基因表達(dá)，W及由化合物（1-1) (0TX015)的調(diào)節(jié)。用RQ-PCR檢測不同細(xì)胞系表達(dá)的異質(zhì)水平的服D2、B畑3和服D4,其中bcr- aW驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞系BV-173和K562具有最低的基因表達(dá)水平（圖41A)。
[0101] 圖41C-41H示出了分別用250nM和500nM的0TX015處理4化時(shí)，BRD4、BRD2和B畑3的 cDNA水平的調(diào)節(jié)。檢測到在KGUK562和化rkat中B畑3和服D2顯著上調(diào)，在KG1和化60中服D2 增加。在圖41A和41B中示出了白血病細(xì)胞系中BRD4、B畑2和B畑3的基線水平的基因表達(dá)水 平。暴露在250nM和500nM的0TX015 4化后的B畑4(圖41C和41D)、B畑3(圖41E和41F)和B畑2 (圖41G和41H)的基因表達(dá)水平。X軸示出細(xì)胞系，Y軸示出cDNA相對于A化的量。結(jié)果用來自 兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的重復(fù)的平均±SD表示。
[0102] 圖42A-42D示出了 0TX015在所有細(xì)胞系中誘導(dǎo)C-MYC下調(diào)。圖42A和42B示出了不同 白血病細(xì)胞系中C-MYC的基礎(chǔ)基因表達(dá)水平。圖42C和42D示出了用250nM和500nM的0TX015 處理不同白血病細(xì)胞系，并在4她時(shí)用QT-PCR檢測的C-MYC下調(diào)。
[0103] 圖43A-4化示出了 0TX015對B畑4、B畑2和B畑3的蛋白質(zhì)水平W及C-MYC的影響。在 暴露于500nM 0TX015 7化后，在選定的ML細(xì)胞系化60中服D4和B畑3保持未受影響，并且在 24h處理后觀察到C-MYC瞬時(shí)下調(diào)（43A-43C)，而幾乎抗性的AML細(xì)胞系K562在2地暴露后開 始顯示出B畑4、B畑3和C-MYC下調(diào)（圖43D-43F)。對于敏感性A化細(xì)胞系Jurkat在4化和72h 顯示出c-MYC的下調(diào)（圖43G-431)，而在RS4-11中，B畑4、B畑3和c-MYC保持未受影響（圖4JD- 4化）。用500nM的0TX015處理AML細(xì)胞系HL60、K562(圖43A-43C;圖43D-43F)和A1X細(xì)胞系 化rkat和RS4-11(圖43G-43I;圖4JD-43U，并與暴露于相應(yīng)濃度的DMS0的對照比較。在指定 時(shí)間點(diǎn)，提取蛋白質(zhì)，電泳，并用BRD4、BRD3、BRD2或c-MYC抗體進(jìn)行免疫印跡。用ODYSSEY (LiCor)技術(shù)顯示服D4、B畑3、c-MYC和GAPDH的條帶，其允許通過化學(xué)發(fā)光而示出的與GAPDH 或BRD2相關(guān)的蛋白質(zhì)的精確定量。該技術(shù)不允許蛋白質(zhì)定量。示出了Ξ個(gè)實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)代 表性實(shí)驗(yàn)。
[0104] 圖44A-44D示出了0TX015對原發(fā)性患者細(xì)胞(primaiT patient cell)的影響。用 0TX015活體外（ex vi VO)處理來自AML患者的5個(gè)樣品、W及兩個(gè)A化樣品（包括1個(gè)ALL化+ 患者）。圖44D示出了患者的特征。在原發(fā)性患者樣品中，0TX015W35-85%的不同程度誘導(dǎo) 調(diào)亡（圖6)。曲+A化患者似乎具有耐藥性。0TX015在AML和A1X患者的原發(fā)性細(xì)胞中誘導(dǎo)調(diào) 亡。從來自AML和A化患者的骨髓（BM)和外周血（PB)獲得單核細(xì)胞。細(xì)胞暴露于250nM和 5(K)nM的0TX015 72小時(shí)，并通過annexin V和PI染色來評價(jià)調(diào)亡。結(jié)果用來自一個(gè)試驗(yàn)的兩 個(gè)重復(fù)的平均±SD表示。
[0105] 圖45A-4祀示出了患者樣品中的c-MYC在蛋白質(zhì)水平的調(diào)節(jié)。在分別用250nM和 500nM的0TX015活體外處理之后，從患者5的骨髓(BM)細(xì)胞獲得蛋白質(zhì)提取物（圖44D;圖 45A-4加）。在暴露于0TX015 7化后BM細(xì)胞示出了c-MYC的下調(diào)。來自患者5的骨髓細(xì)胞用 250nM和500nM的0TX015處理，并與暴露于相應(yīng)濃度的DMS0的對照比較。在72h后提取蛋白 質(zhì)、電泳并用適當(dāng)?shù)腸-MYC抗體進(jìn)行免疫印跡。條帶用ODYSSEY(LiCor)技術(shù)顯示，其允許與 GAPDH相關(guān)的蛋白質(zhì)的精確定量（圖45A)。在Ξ個(gè)時(shí)間點(diǎn)24、48和72h，通過RQ-PCR示出cMYC 相對于A化的表達(dá)水平（圖45B)。圖45B的結(jié)果W重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均± SD表示。
[0106] 圖46示出了 0TX015的生物學(xué)作用的總結(jié)。
[0107] 圖47A-47D示出了通過RQ-PCR分析所評價(jià)的患者樣品中的BRD2、BRD3和B畑4的基 礎(chǔ)基因表達(dá)。在A化患者中，Ph+A化示出了較低的BRD表達(dá)水平（圖47A和47B;圖47E的患者3 至6)，而在AML患者中，B畑表達(dá)水平更加異質(zhì)化(圖47C和47D)
[0108] 圖47E提供了患者的特征的總結(jié)，運(yùn)些患者的樣品經(jīng)評價(jià)給出圖47A-47D的結(jié)果。
[0109] 發(fā)明詳述
[0110] 現(xiàn)在，下文將參照附圖和實(shí)施例來更全面地描述本發(fā)明的主題，所述附圖和實(shí)施 例示出了代表性的實(shí)施方案。但是，本發(fā)明的主題可不同的形式體現(xiàn)，并且不應(yīng)該解釋 成局限于本發(fā)明列出的實(shí)施方案。提供運(yùn)些實(shí)施方案旨在描述并使本領(lǐng)域的技術(shù)人員能夠 實(shí)施。除非另有說明，否則本發(fā)明所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語都具有所述主題所屬技術(shù)領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員通常所理解的相同的含義。本發(fā)明中所提及的所有公開、專利申請、專利 和其他參考文獻(xiàn)均W引用的方式全文并入本文中。
[0111] 本發(fā)明提供了治療急性淋己細(xì)胞性白血病、急性骨髓性白血病、BCR-ABL陽性急性 淋己細(xì)胞性白血病和CD34陽性急性骨髓性白血病的方法。本文詳細(xì)地描述了本公開的各個(gè) 部分：I.嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物；II.制劑；III.劑型；IV.劑量;V.工藝;和VI.例子。 本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解治療方法的各個(gè)實(shí)施方案包括本文所述的嚷吩并Ξ挫并二氮雜 卓化合物、制劑、劑型、劑量和工藝的多個(gè)實(shí)施方案。
[0112] 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療急性淋己細(xì)胞性白血病的方法，包括向患者 施用藥學(xué)可接受的量的組合物的步驟，所述組合物包含本文所述的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 化合物，其形成含有無定形嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物及其可藥用的鹽或其水合物；W 及可藥用的聚合物的固體分散體。本文中描述了運(yùn)樣的固體分散體的多種實(shí)施方案并且可 W相應(yīng)地應(yīng)用。
[0113] 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用 藥學(xué)可接受的量的組合物的步驟，所述組合物包含本文所述的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合 物，其形成包含無定形嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物及其可藥用的鹽、或其水合物；W及可 藥用的聚合物的固體分散體。本文中描述了運(yùn)樣的固體分散體的多種實(shí)施方案并且可W相 應(yīng)地應(yīng)用。
[0114] 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病的方法， 包括向患者施用藥學(xué)可接受的量的包含本文各個(gè)實(shí)施方案所述的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 化合物的組合物的步驟。在治療BCR-A化陽性急性淋己細(xì)胞性白血病的方法的一些實(shí)施方 案中，本文所述的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物形成含有無定形嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化 合物及其可藥用的鹽、或其水合物W及可藥用的聚合物的固體分散體。本文中描述了運(yùn)樣 的固體分散體的各種實(shí)施方案并且可W相應(yīng)地應(yīng)用。
[0115] 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種治療CD34陽性急性骨髓性白血病的方法，包括向 患者施用藥學(xué)可接受的量的包含本文各個(gè)實(shí)施方案所述的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物 的組合物的步驟。在治療CD34陽性急性骨髓性白血病的方法的一些實(shí)施方案中，本文所述 的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物形成含有無定形嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物及其可藥 用的鹽、或其水合物W及可藥用的聚合物的固體分散體。本文中描述了運(yùn)樣的固體分散體 的各種實(shí)施方案并且可W相應(yīng)地應(yīng)用。
[0116] I.嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物：
[0117] 在一個(gè)實(shí)施方案中，在本發(fā)明的制劑中使用的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物由式 (1)表示(包括其任意的鹽、異構(gòu)體、對映異構(gòu)體、消旋物、水合物、溶劑化物、代謝物和多型 變體）：
[011 引
[0119] 其中Ri為具有1至4個(gè)碳的烷基;R2為氨原子、面素原子、或任選地被面素原子或徑 基取代的具有1至4個(gè)碳的烷基;R3為面素原子;任選地被面素原子、具有1至4個(gè)碳的烷基、 具有1至4個(gè)碳的烷氧基、或氯基取代的苯基;一NR5--(CH2)m-R6,其中R5為氨原子、或具有1 至4個(gè)碳的烷基，m為0至4的整數(shù)，并且R6為任選地被面素原子取代的苯基或化晚基；或-- NR7--C0--(CH2)n--R8,其中R7為氨原子或具有語4個(gè)碳的烷基，η為0至2的整數(shù)，并且R 8為任 選地被面素原子取代的苯基或化晚基;并且R4為一(C出)a-C0-NH-R9,其中a為1至4的整 數(shù)，并且R9為具有1至4個(gè)碳的烷基;具有1至4個(gè)碳的徑烷基;具有1至4個(gè)碳的烷氧基;或任 選地被具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1至4個(gè)碳的烷氧基、氨基或徑基取代的苯基或化晚基； 或--(CH2)b--C00RW，其中b為語4的整數(shù)，并且Ri嘴具有1至4個(gè)碳的烷基。
[0120] 在一個(gè)實(shí)施方案中，合適的烷基包括含有1個(gè)碳原子至4個(gè)碳原子的線性或支鏈燒 基基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，合適的烷基包括含有1個(gè)碳原子至3個(gè)碳原子的線性或支鏈燒 基基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，合適的烷基包括含有1個(gè)碳原子至2個(gè)碳原子的線性或支鏈燒 基基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，示例性的烷基基團(tuán)包括但不限于甲基、乙基、丙基、異丙基、正 下基、異下基、仲下基、叔下基。在一個(gè)實(shí)施方案中，示例性的烷基基團(tuán)包括但不限于甲基、 乙基、丙基、異丙基、2-甲基-1-丙基和2-甲基-2-丙基。
[0121] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了本發(fā)明所述的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物的 可藥用的的鹽、溶劑化物(包括水合物)和同位素標(biāo)記的形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ 挫并二氮雜卓化合物的可藥用的鹽包括與無機(jī)酸形成的酸加成鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，嚷 吩并Ξ挫并二氮雜卓的可藥用的無機(jī)酸加成鹽包括鹽酸、氨漠酸、氨艦酸、憐酸、偏憐酸、硝 酸和硫酸的鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物的可藥用的鹽包括與有 機(jī)酸形成的酸加成鹽。在一個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化的可藥用的有機(jī)酸加 成鹽包括W下酸的鹽:酒石酸、乙酸、Ξ氣乙酸、巧樣酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸、苯甲酸、甲 酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、馬來酸、班巧酸、精腦硫酸、異硫幾酸（isothionic acid)、粘 酸、龍膽酸、異煙酸、糖二酸、葡萄糖醒酸、慷酸、谷氨酸、抗壞血酸、鄰氨基苯甲酸、水楊酸、 苯乙酸、扁桃酸、撲酸(帕莫酸）、甲燒橫酸、乙燒橫酸、泛酸、硬脂酸、橫胺酸、褐藻酸、半乳糖 醒酸和芳基橫酸(例如苯橫酸和4-甲基苯橫酸）。
[0122] 式（1)表示的典型嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物包括但不限于嚷吩并Ξ挫并二氮 雜卓化合物（1-1)至（1-18)，其列于下表A中。
[0123] 本文將表A的化合物（1-1)稱為0TX-015或Y803。
[0125]
[0124] 表A:本發(fā)明的示例性化合物：
[0126]
[0127]
[012 引
[0129] 在一些實(shí)施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物包括：（i)(S)-2- [4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并-[4,3-a][l，4]二氮雜 卓-6-基]-N-(4-^苯基）乙酷胺或其二水合物；（ii)(S)-{4-(3'-氯基聯(lián)苯-4-基)-2,3,9- Ξ甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S挫并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；（iii) (S)-{2,3,9-S 甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2,4]S 挫并[4,3-a][l， 4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋；W及（iv)(S)-{2,3,9-S甲基-4-[4-(3-苯基丙酷基氨基）苯 基]-6H-嚷吩并[3,2寸-][1，2,4]^挫并[4,3-曰][1，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲醋。
[0130] 在一些實(shí)施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物包括(S)-2-[4- (4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2，-4]Ξ挫并[4,3-a][l，4]二氮雜卓- 6-基]-N-(4-?苯基）乙酷胺二水合物。
[0131] 在一些實(shí)施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物包括(S)-2-[4- (4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ 甲基-6H-嚷吩并[3,2-f][l，2，-4]Ξ挫并[4,3-a][l，4]二氮雜卓- 6-基]-N-(4-?苯基）乙酷胺。
[0132] II.制劑：
[0133] 式（1)所示的化合物在蓋倫組合物的常規(guī)給藥和制備方面表現(xiàn)出非常特有的困 難，特別包括藥物生物利用度W及患者間和患者內(nèi)的劑量應(yīng)答的可變性的特定問題，由此 需要針對幾乎水不溶性的所述化合物開發(fā)非常規(guī)的劑型。
[0134] 之前，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)可W利用載體丙締酸乙醋-甲基丙締酸甲醋甲基錠乙基甲基丙 締酸醋氯化物共聚物巧udragit RS，由Rohm公司制造)將式（1)所示的化合物配置成固體分 散體，從而提供在下腸道中優(yōu)先釋放藥物組分W用于治療炎性腸病(例如潰瘍性結(jié)腸炎和 克羅恩?。┑目诜苿?2009年1月8日公開的美國專利申請20090012064A1)。通過多個(gè)實(shí)驗(yàn) (包括動(dòng)物試驗(yàn)），發(fā)現(xiàn)就炎性腸病而言，藥物在病變部位的釋放及其對炎性病變的直接作 用比其由胃腸道吸收至循環(huán)中更為重要。
[0135] 目前，意外地發(fā)現(xiàn)根據(jù)式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、其可藥用的 鹽、溶劑化物(包含水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體W及同位素標(biāo)記的形式可W使用可藥用的 聚合物而配制成固體分散體，從而提供口服制劑，該口服制劑能夠使藥物組分由胃腸道高 度吸收至循環(huán)中，從而治療炎性腸病W及其他疾病。在狗和人類中的研究證明，與之前研發(fā) 的用于治療炎性腸病的化化agit固體分散體制劑相比，所述運(yùn)些固體分散體具有高的口服 生物利用度。
[0136] 固體分散體為改善水溶性差的藥物的口服生物利用度的一種手段。
[0137] 如本文所用，術(shù)語"固體分散體"是指一組固體產(chǎn)物，其包含至少巧巾不同的成分， 通常為親水性載體和疏水性藥物(根據(jù)式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物）?；谒幬?在分散體內(nèi)的分子排布，可W區(qū)分為6種不同類型的固體分散體。通常，固體分散體分為:簡 單低共烙混合物、固溶體、玻璃溶液和懸浮液、W及結(jié)晶載體中的無定形沉淀。此外，可存在 一些組合，例如在同一樣品中，一些分子可W成簇存在，而一些分子W分子形式分散。
[0138] 在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物可分子形式 分散于無定形顆粒(簇）中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合 物可結(jié)晶顆粒形式分散。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體可W是結(jié)晶的。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，載體可W是無定形的。
[0139] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含固體分散體的藥物組合物，其中所述固體 分散體由W下形成:根據(jù)式（1)的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物 (包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或其同位素標(biāo)記形式；W及可藥用的聚合物。在 一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為醋酸徑丙甲纖維素班巧酸醋（也稱為醋酸徑丙基甲基 纖維素班巧酸醋或HPMCAS)。在一個(gè)實(shí)施方案中，分散體中嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與 醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS)的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少 一部分嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一些實(shí)施方案中，固 體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg在13(TC至 14(TC之間出現(xiàn)。在其他運(yùn)樣的實(shí)施方案中，單一的Tg在約135Γ出現(xiàn)。在一些運(yùn)樣的實(shí)施方 案中，固體分散體在40°C、相對濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，在 固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二 氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。就本申請的目的而言，"基本上不存在"是指在約21°2Θ下，在 無定形暈(amorphous halo)上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物 有關(guān)的衍射線。在一些實(shí)施方案中，醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS)可包括:具有 9 %乙酷基/11 %班巧酷基的Μ級(例如，平均粒徑為如m的HPMCAS(即，HPMCAS-MF，細(xì)粉級)或 平均粒徑為1mm的HPMCAS (即，HPMCAS-MG，顆粒級））；具有12 %乙酷基/6 %班巧酷基的Η級 (例如，平均粒徑為扣m的HPMCAS(即，HPMCAS-HF，細(xì)粉級）或平均粒徑為1mm的HPMCAS(即， HPMCAS-HG，顆粒級））；W及具有8 %乙酷基/15 %班巧酷基的L級（例如，平均粒徑為扣m的 HPMCAS(即，HPMCAS-LF，細(xì)粉級)或平均粒徑為1mm的HPMCAS(即，HPMCAS-LG，顆粒級））。
[0140] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu) 體或同位素標(biāo)記形式在可藥用的聚合物中的固體分散體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚 合物為聚乙締化咯燒酬(也稱為聚維酬或PVP)。在一個(gè)實(shí)施方案中，分散體中嚷吩并Ξ挫并 二氮雜卓化合物與PVP的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并 二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二 氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一些實(shí)施方案中，固體分散體表現(xiàn)出單 一拐點(diǎn)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg在175°C至約185 °C之間出現(xiàn)。 在其他此類的實(shí)施方案中，單一的Tg在約17%~出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散 體在40°C、相對濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，在固體分散體的X 射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物 有關(guān)的衍射線。就本申請的目的而言，"基本上不存在"是指在約21° 2Θ下，在無定形暈 (amorphous halo)上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍 射線。在一些實(shí)施方案中，聚乙締化咯燒酬的分子量可為約2,500(Kollidon飯12PF，重均 分子量在2,000至3,000之間）、約9,000(}<〇川加11必17?。，重均分子量在7,000至11，000之 間）、約25，000 ( Kollido打唆25，重均分子量在28，000至34，000之間）、約50，000 ( Kollidon坂30,重均分子量在44,000至54,000之間）和約1，250,000(賠)化過〇11愈90或 Kol lidoiv友:90F，重均分子量在1，000，000至1，500，000之間）。
[0141] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含無定形形式的式（1)所示的嚷吩并 Ξ挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異 構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式與可藥用的聚合物的固體分散體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚 合物為醋酸徑丙甲纖維素班巧酸醋。在一個(gè)實(shí)施方案中，式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜 卓化合物與醋酸徑丙甲纖維素班巧酸醋的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一 部分嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一些實(shí)施方案中，固 體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg在130°C至 140°C之間出現(xiàn)。在其他此類的實(shí)施方案中，單一的Tg在約135°C出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方 案中，固體分散體在40°C、相對濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，在 固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二 氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。就本申請的目的而言，"基本上不存在"是指在約21° 2Θ下，在 無定形暈上不存在與結(jié)晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。
[0142] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含無定形形式的式（1)所示的嚷吩并 Ξ挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異 構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式與可藥用的聚合物的固體分散體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚 合物為聚乙締化咯燒酬。在一個(gè)實(shí)施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與 聚乙締化咯燒酬的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮 雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜 卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一些實(shí)施方案中，固體分散體表現(xiàn)出單一拐 點(diǎn)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg在175 °C至約185°C之間出現(xiàn)。在其 他此類的實(shí)施方案中，單一的Tg在約17%~下出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體 在40°C、相對濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，在固體分散體的X射 線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有 關(guān)的衍射線。就本申請的目的而言，"基本上不存在"是指在約21°2Θ下，在無定形暈上不存 在與結(jié)晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。
[0143] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含結(jié)晶形式的式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu) 體或同位素標(biāo)記形式與可藥用的聚合物的固體分散體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合 物為醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋。在一個(gè)實(shí)施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮 雜卓化合物與醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋的重量比為1:3至1:1。
[0144] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含結(jié)晶形式的式（1)所示的嚷吩并Ξ 挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu) 體或同位素標(biāo)記形式與可藥用的聚合物的固體分散體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合 物為聚乙締化咯燒酬。在一個(gè)實(shí)施方案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與聚 乙締化咯燒酬的重量比為1:3至1:1。
[0145] 在一些實(shí)施方案中，通過噴霧干燥來制備包含固體分散體的藥物組合物。
[0146] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分 散體由W下形成：式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物 (包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式，和可藥用的聚合物。在一個(gè) 實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合 物（1)與醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一 部分嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施方案 中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一些實(shí)施方案中，固 體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg在13(TC至 14(TC之間出現(xiàn)。在其他此類的實(shí)施方案中，單一的Tg在約135Γ出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方 案中，固體分散體在40°C、相對濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，在 固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二 氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。就本申請的目的而言，"基本上不存在"是指在約21°2Θ下，在 無定形暈上不存在與結(jié)晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。
[0147] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分 散體由W下形成：式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶劑化物 (包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式和可藥用的聚合物。在一個(gè) 實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為聚乙締化咯燒酬。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物（1)與聚乙締 化咯燒酬的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化 合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合 物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一些實(shí)施方案中，固體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻 璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg在175°C至185°C之間出現(xiàn)。在其他此類的 實(shí)施方案中，單一的Tg在約179°C出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體在40°C、相對 濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射 圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。 就本申請的目的而言，"基本上不存在"是指在約21° 2Θ下，在無定形暈上不存在與結(jié)晶的式 (1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。
[0148] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分 散體由W下形成:無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶 劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式和可藥用的聚合物。 在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋。在一個(gè)實(shí)施方案 中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋的重量 比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散 于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于 整個(gè)固體分散體中。在一些實(shí)施方案中，固體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度 (Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg在130°C至140°C之間出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方案中， 固體分散體在40°C、相對濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在其他此類的實(shí)施方案中， 單一的Tg在約135Γ出現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本 上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。就本申請的 目的而言，"基本上不存在"是指在約21° 2Θ下，在無定形暈上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的 嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。
[0149] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分 散體由W下形成:無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、溶 劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式和可藥用的聚合物。 在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為聚乙締化咯燒酬。在一個(gè)實(shí)施方案中，式（1)所示的 嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與聚乙締化咯燒酬的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案 中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè) 實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一些實(shí)施 方案中，固體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg 在175°C至185°C之間出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體在40°C、相對濕度為75% 的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在其他此類的實(shí)施方案中，單一的Tg在約179°C出現(xiàn)。在一些實(shí)施 方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩 并=挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。就本申請的目的而言，"基本上不存在"是指在約 21° 2Θ下，在無定形暈上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的 衍射線。
[0150] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分 散體由W下形成:結(jié)晶形式的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、 溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式和可藥用的聚合 物。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋。在一個(gè)實(shí)施方 案中，式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋的重 量比為1:3至1:1。
[0151] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含噴霧干燥的固體分散體，該固體分 散體由W下形成:結(jié)晶形式的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或其可藥用的鹽、 溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式和可藥用的聚合 物。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為聚乙締化咯燒酬。在一個(gè)實(shí)施方案中，式(1)所示 的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與聚乙締化咯燒酬的重量比為1:3至1:1。
[0152] 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含固體分散體，該 固體分散體由W下形成:2-[(6S)-4-(4-氯代苯基)-2,3,9-Ξ甲基-6H-嚷吩并[3,2-門-[1， 2,4]Ξ挫并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基]-N-(4-?苯基）乙酷胺二水合物(化合物α-l)) 或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式； W及可藥用的聚合物，其中所述化合物(1-1)如下：
[0153]
[0154] 在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為HPMCAS。在一個(gè)實(shí)施方案中，分散體中化合 物（1-1)和HPMCAS的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮 雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜 卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一個(gè)實(shí)施方案中，固體分散體是噴霧干燥的。 在一些實(shí)施方案中，固體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案 中，單一的Tg在130°C至140°C之間出現(xiàn)。在其他此類的實(shí)施方案中，單一的Tg在約135°C出 現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體在40°C、相對濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè) 月。在一些實(shí)施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的式 (1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。就本申請的目的而言，"基本上不 存在"是指在約21° 2Θ下，在無定形暈上不存在與結(jié)晶的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物（1- 1)有關(guān)的衍射線。
[0155] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含化合物（1-1)或其可藥用的鹽、溶劑化 物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位素標(biāo)記形式；W及可藥用的聚合物的 固體分散體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為PVP。在一個(gè)實(shí)施方案中，分散體中化合 物（1-1)和PVP的重量比為1: 3至1: 1。在一個(gè)實(shí)施方案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮雜 卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一個(gè)實(shí)施方案中，固體分散體是噴霧干燥的。在 一些實(shí)施方案中，固體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻璃玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方 案中，單一的Tg在175°C至185°C之間出現(xiàn)。在其他此類的實(shí)施方案中，單一的Tg在約179°C 出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體在40°C、相對濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1 個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的 式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。就本申請的目的而言，"基本上 不存在"是指在約21° 2Θ下，在無定形暈上不存在與結(jié)晶的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物 (1-1)有關(guān)的衍射線。
[0156] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含無定形形式的嚷吩并Ξ挫并二氮雜 卓化合物（1-1)或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同 位素標(biāo)記形式；W及可藥用的聚合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為HPMCAS。在一 個(gè)實(shí)施方案中，分散體中化合物（1-1)與HPMCAS的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中， 至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一個(gè)實(shí)施 方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一個(gè)實(shí)施方案 中，固體分散體是噴霧干燥的。在一些實(shí)施方案中，固體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻璃化轉(zhuǎn) 變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg在130°C至140°C之間出現(xiàn)。在其他此類的實(shí)施方 案中，單一的Tg在約135°C出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體在40°C、相對濕度為 75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射圖案中， 基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。就本申 請的目的而言，"基本上不存在"是指在約21°2Θ下，在無定形暈上不存在與結(jié)晶的嚷吩并Ξ 挫并二氮雜卓化合物(1-1)有關(guān)的衍射線。
[0157] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含無定形形式的嚷吩并Ξ挫并二氮雜 卓化合物（1-1)或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同 位素標(biāo)記形式與可藥用的聚合物的固體分散體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為 PVP。在一個(gè)實(shí)施方案中，分散體中化合物（1-1)與PVP的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方 案中，至少一部分嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在另一 個(gè)實(shí)施方案中，嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物均勻地分散于整個(gè)固體分散體中。在一個(gè)實(shí) 施方案中，固體分散體是噴霧干燥的。在一些實(shí)施方案中，固體分散體表現(xiàn)出單一拐點(diǎn)的玻 璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在一些實(shí)施方案中，單一的Tg在175°C至185°C之間出現(xiàn)。在其他此類的 實(shí)施方案中，單一的Tg在約189 °C出現(xiàn)。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體在40°C、相對 濕度為75%的環(huán)境下暴露至少1個(gè)月。在一些實(shí)施方案中，在固體分散體的X射線粉末衍射 圖案中，基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線。 就本申請的目的而言，"基本上不存在"是指在約21° 2Θ下，在無定形暈上不存在與結(jié)晶的嚷 吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物(1-1)有關(guān)的衍射線。
[0158] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含結(jié)晶形式的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 化合物(1-1)或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位 素標(biāo)記形式與可藥用的聚合物的固體分散體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為 HPMCAS。在一個(gè)實(shí)施方案中，分散體中化合物（1 -1)與HPMCAS的重量比為1: 3至1:1。在一個(gè) 實(shí)施方案中，固體分散體是噴霧干燥的。
[0159] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含結(jié)晶形式的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 化合物(1-1)或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位 素標(biāo)記形式與可藥用的聚合物的固體分散體。在一個(gè)實(shí)施方案中，可藥用的聚合物為PVP。 在一個(gè)實(shí)施方案中，分散體中化合物（1-1)與PVP的重量比為1:3至1:1。在一個(gè)實(shí)施方案中， 固體分散體是噴霧干燥的。
[0160] 當(dāng)經(jīng)口施用本發(fā)明所述的固體分散體時(shí)，其表現(xiàn)出特別有利的性質(zhì)。當(dāng)在動(dòng)物或 人類的標(biāo)準(zhǔn)生物利用度試驗(yàn)中施用時(shí)，所述固體分散體的有利性質(zhì)的例子包括但不限于一 致的且高水平的生物利用度。本發(fā)明的固體分散體可W包括含有式（1)所示的嚷吩并Ξ挫 并二氮雜卓化合物、聚合物W及添加劑的固體分散體。在一些實(shí)施方案中，固體分散體可W 實(shí)現(xiàn)使式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物吸收入血流中，而運(yùn)是不可能通過僅僅 將式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與添加劑混合而獲得的，運(yùn)是因?yàn)槭?1)所示 的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物藥物在水和大多數(shù)水性介質(zhì)中的溶解度可忽略不計(jì)?？蒞 使用多種體外和/或體內(nèi)研究來測量式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或者嚷吩 并=挫并二氮雜卓化合物（1-1)的生物利用度。體內(nèi)研究可W使用例如大鼠、狗或人類來進(jìn) 行。
[0161] 可W通過沿著相對于橫坐標(biāo)(X軸）的時(shí)間的縱坐標(biāo)(Y軸），繪制式（1)所示的嚷吩 并=挫并二氮雜卓化合物或者嚷吩并=挫并二氮雜卓化合物（1-1)的血清或血漿濃度，從 而獲得曲線下面積(AUC)值，由此測量生物利用度。然后，將所述固體分散體中的式（1)所示 的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或者嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物（1-1)的AUC值與等價(jià) 濃度的不包含聚合物的結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或結(jié)晶性的嚷吩 并S挫并二氮雜卓化合物（1-1)的AUC值比較。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)將所述固體分散體經(jīng) 口施用給狗時(shí)，該固體分散體的曲線下面積(AUC)值選自：由靜脈施用給狗的對照組合物的 相應(yīng)AUC值的至少0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.8倍、1.0倍，其中所述對照組合物包含等價(jià)量的結(jié) 晶的式(1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物。
[0162] 可W通過模擬胃環(huán)境和腸環(huán)境的pH值的體外測試來測量生物利用度?？蒞通過W 下方法進(jìn)行測量:將式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 化合物（1-1)的固體分散體懸浮在pH為1.0至2.0之間的水性體外測試介質(zhì)中，隨后將對照 體外測試介質(zhì)的pH值調(diào)節(jié)為5.0至7.0?？蒞在抑值調(diào)節(jié)后的最初2個(gè)小時(shí)中的任何時(shí)間來 測量無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或無定形嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 化合物（1-1)的濃度。在一些實(shí)施方案中，在pH值為5.0至7.0之間的水性體外測試介質(zhì)中， 與不包含聚合物的結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或者結(jié)晶的嚷吩并Ξ 挫并二氮雜卓化合物（1-1)的濃度相比，固體分散體使無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并 二氮雜卓化合物或者無定形的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物（1-1)的濃度高至少5倍、至少 6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或者至少10倍。
[0163] 在其他的實(shí)施方案中，在抑值為1.0至2.0的水性體外測試介質(zhì)中，與不包含聚合 物的結(jié)晶的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物的濃度相比，固體分散體中無定形 的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或無定形嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物（1- 1)的濃度高至少40 %、至少50 %、至少60 %、至少70 %、至少80 %。在一些此類的實(shí)施方案 中，固體分散體的聚合物為HPMCAS。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體的聚合物為PVP。
[0164] 在其他的實(shí)施方案中，所述固體分散體中的無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并 二氮雜卓化合物或者無定形嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物（1-1)的濃度是式（1)所示的嚷 吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物和可藥用的聚合物的固體分散體中的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫 并二氮雜卓化合物的濃度的至少40%、至少50% W上、至少60%、至少70%、至少80%，其中 所述可藥用的聚合物選自W下物質(zhì)組成的組中：徑丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸醋和丙締酸 乙醋-甲基丙締酸甲醋-Ξ甲基錠乙基甲基丙締酸醋氯化物共聚物，其中各固體分散體被放 置在抑值為1.0至2.0的水性體外測試介質(zhì)中。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體的聚 合物為HPMCAS。在一些此類的實(shí)施方案中，固體分散體的聚合物為PVP。
[0165] 在一些實(shí)施方案中，當(dāng)在一定的濕度和溫度下暴露一段時(shí)間時(shí)，本發(fā)明所述的固 體分散體表現(xiàn)出抵抗式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物或嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 化合物（1-1)的重結(jié)晶的穩(wěn)定性。在一個(gè)實(shí)施方案中，無定形的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并 二氮雜卓化合物或嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物（1-1)的保持無定形的濃度選自：至少 90 %、至少91 %、至少92 %、至少93 %、至少94%、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 % 和至少99 %。
[0166] III.劑型：
[0167] 可W用于本發(fā)明的固體分散體的合適的劑型包括但不限于膠囊、片劑、小型片劑、 珠、微囊劑(beadlet)、丸劑、小顆粒（granule)、粒劑（granulate)和粉末。可W使用例如腸 溶包衣來包裹合適的劑型。合適的包衣可W包括但不限于鄰苯二甲酸乙酸纖維素、徑丙基 甲基纖維素化PMC)、徑丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸醋、聚甲基丙締酸共聚物、或醋酸徑丙基 甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS)。在一些實(shí)施方案中，可存在某些組合，例如，在同一樣品中， 本發(fā)明的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓的一些分子可W成簇存在，而一些分子則W分子形式分散 于載體中。
[0168] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的固體分散體可W配制成片劑、囊片或膠囊。在一些實(shí) 施方案中，本發(fā)明的固體分散體可W配制成小型片劑或倒入口中（pour-into-mouth)的小 顆粒、或者成分(constitution)的口服粉末。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的固體分散體與其 他的賦形劑（例如，抑制重結(jié)晶/沉淀的聚合物、掩味成分等）組合并分散于合適的稀釋劑 中，從而提供即用型的懸浮制劑。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的固體分散體可W配制用于兒 科治療。
[0169] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物被配制用于口服給藥。在一個(gè)實(shí)施方案 中，所述的藥物組合物包含根據(jù)本發(fā)明所述的多個(gè)實(shí)施方案的固體分散體，其包含:式（1) 所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物、或其可藥用的鹽、溶劑化物(包括水合物）、消旋物、 對映異構(gòu)體、異構(gòu)體或同位素標(biāo)記的形式；W及聚合物載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的藥 物組合物還包含一種或多種添加劑，例如崩解劑、潤滑劑、助流劑、粘結(jié)劑和填料。
[0170] 用于所述的藥物組合物含義合適的可藥用的潤滑劑和可藥用的助流劑的實(shí)例包 括但不限于膠態(tài)氧化娃、Ξ娃酸儀、淀粉、滑石、Ξ堿式憐酸巧、硬脂酸儀、硬脂酸侶、硬脂酸 巧、碳酸儀、氧化儀、聚乙二醇、粉末狀纖維素、甘油二十二燒酸醋、硬脂酸、氨化藍(lán)麻油、單 硬脂酸甘油醋和硬脂酷富馬酸鋼。
[0171] 用于所述的藥物組合物的合適的可藥用的粘結(jié)劑的實(shí)例包括但不限于:淀粉、纖 維素及其衍生物，例如微晶纖維素（例如AVICEL PH，得自FMC公司）、徑丙基纖維素、徑乙基 纖維素和徑丙基甲基纖維素化PMC，例如MET冊CEL，得自Dow化emical公司）；薦糖、右旋糖、 玉米糖漿;多糖和明膠。
[0172] 用于所述的藥物組合物的合適的可藥用的填料和可藥用的稀釋劑的實(shí)例包括但 不限于:糖果制造商的糖、可壓縮糖、葡萄糖結(jié)合劑、糊精、右旋糖、乳糖、甘露醇、微晶纖維 素(MCC)、粉末狀纖維素、山梨醇、薦糖和滑石。
[0173] 在一些實(shí)施方案中，在所述的藥物組合物中，賦形劑可W發(fā)揮多于一種的功能。例 如，填料或粘結(jié)劑還可W為崩解劑、助流劑、抗粘附劑、潤滑劑、甜味劑等。
[0174] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可W還包含添加劑或配料，例如抗氧化 劑(例如抗壞血酸棟桐酸醋、下基化徑基茵香酸(BHA )、二下基化徑基甲苯(冊T )、α-生育酪、 丙基沒食子酸鹽和富馬酸）、抗微生物劑、酶抑制劑、穩(wěn)定劑(例如丙二酸)和/或防腐劑。
[0175] 通常，本發(fā)明的藥物組合物可W配制成任何合適的固體劑型。在一些實(shí)施方案中， 本發(fā)明的固體分散體混合在單位劑型中，例如作為膠囊或片劑、或者多微粒系統(tǒng)(例如小顆 ?；蛄⒒蛘叻勰?，W用于給藥。
[0176] 在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含:根據(jù)本發(fā)明所述的固體分散體的多個(gè)實(shí)施 方案的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物和醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋 化PMCAS)的固體分散體，其中所述嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物在固體分散體中是無定形 的，并且嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物與醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS)的重量 比為1:3至1:1 ;45重量％至50重量％的乳糖一水合物;35重量％至40重量％的微晶纖維素； 4重量％至6重量％的交聯(lián)簇甲基纖維素鋼;0.8重量％至1.5重量％的膠體二氧化娃;和0.8 重量％至1.5重量％硬脂酸儀。
[0177] IV.劑量：
[0178] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了可W配制成任何合適的固體劑型的藥物組合 物。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物包含本發(fā)明所述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫 并二氮雜卓化合物的多種實(shí)施方案中的一種或多種，其中所述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并 二氮雜卓的劑量為約lOmg至約lOOmg。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含本發(fā)明 所述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓的多種實(shí)施方案中的一種或多種，其中所述式（1) 所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓的劑量選自由如下劑量組成的組:約1 Omg至約10 Omg、約1 Omg 至約90mg、約1 Omg至約80mg、約1 Omg至約70mg、約1 Omg至約60mg、約1 Omg至約50mg、約1 Omg至 約40mg、約lOmg至約30mg和約lOmg至約20mg。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物包含 本發(fā)明所述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓的多種實(shí)施方案中的一種或多種，其中所 述式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓的劑量選自由約1 Omg、約5 Omg、約7 5mg、約10 Omg構(gòu)成 的組。
[0179] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括向有需要的受試者施用本發(fā)明所述多種實(shí) 施方案中的一種或多種的式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓，其劑量選自由如下劑量組 成的組：約 Img、約 2mg、約 2.5mg、約 3mg、約 4mg、約 5mg、約 7.5mg、約 lOmg、約 15mg、約 20mg、約 25mg、約 30mg、約 35mg、約40mg、約45mg、約 50mg、約 5 5mg、約 60mg、約 65mg、約 70mg、約 75mg、約 80mg、約 85mg、約 90mg、約95mg、約 1 OOmg、約 11 Omg、約 120mg、約 130mg、約 140mg和約 150mg;其 劑型選自由W下組成的組:每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每Ξ天一次、 每隔一天一次、每天一次、每天兩次、每天Ξ次、每天四次、每天五次。在另一個(gè)實(shí)施方案中， 任意前述劑量或劑型可W定期減少或增加。
[0180] 在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括向有需要的受試者施用選自由W下化合物 構(gòu)成的組中的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓:化合物（1-1)、（1-2)、（1-3)、（1-4)、（1-5)、（1-6)、 (1-7)、（1-8)、（1-9)、（1-10)、（1-11)、（1-12)、（1-13)、（1-14)、（1-15)、（1-16)、（1-17)和 (1-18);所述嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓的施用劑量選自由W下劑量構(gòu)成的組：約Img、約2mg、 約 2.5mg、約 3mg、約 4mg、約 5mg、約 7.5mg、約1Omg、約15mg、約 20mg、約 25mg、約 30mg、約 35mg、 約40mg、約45mg、約50mg、約55mg、約60mg、約65mg、約70mg、約 75mg、約80mg、約85mg、約90mg、 約95mg、約1 OOmg、約11 Omg、約120mg、約130mg、約140mg和約150mg;其劑型選自由W下組成 的組:每周一次、每六天一次、每五天一次、每四天一次、每Ξ天一次、每隔一天一次、每天一 次、每天兩次、每天Ξ次、每天四次W及每天五次。在另一個(gè)實(shí)施方案中，任意前述劑量或劑 型可W定期減少或增加。
[0181] 根據(jù)特定的治療目的、治療階段等，所述單位劑型適合每日給藥1至5次。在一個(gè)實(shí) 施方案中，有需要的受試者可W至少連續(xù)兩天每日至少1次施用該劑型。在一個(gè)實(shí)施方案 中，有需要的受試者可W至少隔日并每日至少1次施用該劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，有需要 的受試者可W至少每周施用該劑型，并且將該劑型分成相等的和/或不等的劑量。在一個(gè)實(shí) 施方案中，有需要的受試者可W每周施用該劑型，每隔3天和/或每周6次施用。在一個(gè)實(shí)施 方案中，有需要的受試者可W每隔1天、每3天、每4天、每5天、每6天和/或每周W分劑量施用 該劑型。在一個(gè)實(shí)施方案中，有需要的受試者可W每個(gè)月服用該劑型的2個(gè)或多個(gè)等分劑量 或非等分劑量。
[0182] 可W使用例如腸溶包衣來包裹所用的劑型（例如膠囊、片劑、小型片劑、珠、微囊 劑、丸劑、小顆粒、粒劑或粉末）。合適的包衣可W包括但不限于鄰苯二甲酸乙酸纖維素、徑 丙基甲基纖維素化PMC)、徑丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸醋、聚甲基丙締酸共聚物、或醋酸徑 丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS)。
[0183] V.工藝：
[0184] 本發(fā)明所公開的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物可游離堿或酸加成鹽的形式 存在，其可W根據(jù)美國專利申請公開No. 2010/0286127(其全部內(nèi)容W引用方式并入本文或 本申請中）中所述的工序來獲得。本發(fā)明的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓化合物的各對映異構(gòu)體 和非對映異構(gòu)體可W由包含不對稱中屯、或立體異構(gòu)中屯、的市售可得的起始材料W合成方 式制備，或者通過制備外消旋的混合物、然后通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的拆分方法來 制備。
[0185] 在一些實(shí)施方案中，通過溶劑蒸發(fā)法來制備所述多種實(shí)施方案中的一種或多種的 根據(jù)式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓的制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，溶劑蒸發(fā)法包括使根 據(jù)式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓和載體溶解于揮發(fā)性溶劑中，然后使揮發(fā)性溶劑蒸 發(fā)。在一個(gè)實(shí)施方案中，揮發(fā)性溶劑可W為一種或多種賦形劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，一種或 多種賦形劑包括但不限于抗粘劑、惰性填料、表面活性劑潤濕劑、P的周節(jié)劑和添加劑。在一 個(gè)實(shí)施方案中，賦形劑可W溶解于揮發(fā)性溶劑中，或者在揮發(fā)性溶劑中呈懸浮或溶脹狀態(tài)。
[0186] 在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的固體分散體的制備包括使懸浮于揮發(fā)性溶劑中 的一種或多種賦形劑干燥。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的干燥包括真空干燥、使揮發(fā)性溶劑在 低溫下緩慢蒸發(fā)、使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、噴霧干燥、噴霧制粒、冷凍干燥或使用超臨界流體。
[0187] 在一個(gè)實(shí)施方案中，使用噴霧干燥制備根據(jù)式（1)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓 組合物的制劑，其包括使所述的組合物的懸液或溶液霧化形成小滴，然后快速從制劑中除 去溶劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的制劑的制備設(shè)及噴霧制粒，其中將溶劑中的組合 物的溶液或懸液噴霧至合適的化學(xué)惰性和/或物理惰性填料(例如乳糖或甘露醇)上。在一 個(gè)實(shí)施方案中，通過雙向或Ξ向噴嘴實(shí)現(xiàn)所述的組合物的溶液或懸液的噴霧制粒。
[018引通過W下非限定性實(shí)施例來說明本發(fā)明。
[0189] VI.實(shí)施例：
[0190] 在W下非限定性的實(shí)施例中說明本發(fā)明。
[0191] 實(shí)施例1:化合物(1 -1)的固體分散體的體外篩選
[0192] 使用化合物（1-1) W及5種聚合物中的一種來制備十種固體分散體，其中所述聚合 物包括醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS-M)、徑丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸醋 化PMCP-HP55)、聚乙締化咯燒酬(PVP)、PVP-乙酸乙締醋(PVP-VA)和Euragit L100-55,并且 對于每種聚合物，化合物（1-1)的載量為25%和50%。使用噴霧干燥，然后在低溫對流烘箱 中進(jìn)行二次干燥，從而通過溶劑蒸發(fā)法來制備固體分散體。通過非沉降溶解性能測試(non? sink dissolution performance test) 來評估各固體分散體的性能 ，所述測試測量藥物的 總量和隨著時(shí)間溶液中所存在的游離藥物的量。選擇非沉降溶解是由于其能夠最好地代表 低溶解度化合物在體內(nèi)的情況。該測試包括在分散體被引入至測試介質(zhì)后約30分鐘至40分 鐘，分散體由胃抑(0.1N化Cl，pH1.0)至腸抑(FaFSSIF，pH6.5)的"胃轉(zhuǎn)移"，從而模擬了 體內(nèi)的情況。[化FSSIF為禁食狀態(tài)的人工腸液，其由3mM的牛黃膽酸鋼、0.75mM的卵憐脂、 0.174g化細(xì)顆粒、1.977g Na出Ρ04·出0、3.093g化α和適量純凈水500血組成]。使用高效 液相色譜化PLC)法和Agi 1 ent 1100串聯(lián)HPLC來定量溶解藥物的量。制劑的溶解情況（圖1A- U)表明：相對于在相同介質(zhì)中的未經(jīng)配制的化合物而言，在所有的分散體候選物中，藥物 的溶解度均大幅升高。在所有的固體分散體中，基于在腸抑下釋放的游離藥物的水平較高 運(yùn)一發(fā)現(xiàn)可知，與未經(jīng)配制的化合物相比，25 %化合物（1-1)在PVP中的分散體、25 %化合物 (1 -1)在HPMCAS-M中的分散體、W及50 %化合物（1 -1)在HPMCAS-M中的分散體對于增強(qiáng)的經(jīng) 口吸收而言是最有前景的候選物。
[019引實(shí)施例2:化合物(1 -1)的固體分散體的體內(nèi)篩選
[0194] W更大的規(guī)模制備Ξ種最有前景的化合物（1-1)的固體分散體，即25%化合物（1- 1)在PVP中的分散體、25 %化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的分散體、W及50 %化合物（1 -1)在 HPMCAS-M中的分散體，W用于體內(nèi)研究。各制劑均經(jīng)過了實(shí)施例1所述的體外溶解測試的評 估。為了確保運(yùn)些分散體是無定形且均質(zhì)的，通過X射線粉末衍射法(PXRD)和修正的差示掃 描量熱法(mDSC)來評估各分散體。另外，為了了解水對各種分散體的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg) 的影響，對首先在設(shè)定的相對濕度（即，25%、50%和75%畑)下平衡至少18小時(shí)的樣品進(jìn)行 mDSC。[水可W用作固體分散體的增塑劑，并且由活性化合物或聚合物導(dǎo)致的體系的吸濕性 可W影響被運(yùn)些體系吸收的水的量]。
[01M]非沉降溶解結(jié)果（圖2A-2C)與實(shí)施例1中分散體的結(jié)果相當(dāng)。PXRD結(jié)果（圖3)顯示 沒有證據(jù)表明任意一種分散體中存在結(jié)晶化合物，并且mDSC結(jié)果（圖4A-4C)顯示各分散體 均存在單一的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)，運(yùn)表明各分散體是均勻的。X射線衍射計(jì)為化uker D- 2Phaser。對于各分散體，觀察到Tg與相對濕度之間逆相關(guān)（圖5)。值得注意的是，對于在 75%畑下平衡的25%化合物（1-1)在PVP中的固體分散體，出現(xiàn)了兩個(gè)Tg，運(yùn)表明發(fā)生了相 分離，并且該分散體還顯示出在75%畑下發(fā)生了烙化，運(yùn)表明在RH平衡過程中發(fā)生了結(jié)晶 (圖6)。該發(fā)現(xiàn)表明25%化合物(1-1)在PVP中的分散體的穩(wěn)定性弱于HPMCAS-M分散體。
[0196] 為了評估運(yùn)Ξ種分散體的生物利用度，向多組雄性獵兔犬(每組3只）給予劑量為 3mg/kg的化合物（1-1)的固體分散體的水性懸液(通過口服填喂法給藥），或者給予劑量為 3mg/kg的溶解于水：乙醇:聚乙二醇(PEG) 400 (60: 20: 20)中的化合物（1 -1)(并W靜脈推注 給藥至頭靜脈中）。在靜脈給藥后的0分鐘(服藥之前）、5分鐘、15分鐘和30分鐘、和1小時(shí)、2 小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)和24小時(shí)，W及在口服填喂給藥后的0分鐘(服藥之前）、15分鐘 和30分鐘、和1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)和24小時(shí)由各動(dòng)物的頸靜脈收集血液樣 品。使用合格的LC-MS/MS法檢測各樣品中存在的化合物（1-1)的量，并且量化下限為0.5ng/ mL。通過使用線性梯形法則(直至最終可測的濃度，而未將終末消除相外推至無窮大)來測 定血漿濃度-時(shí)間曲線的曲線下面積(AUC)。通過對對數(shù)濃度-時(shí)間曲線的終末線性部分進(jìn) 行最小二乘回歸分析來計(jì)算消除半衰期（tl/2)。由血漿濃度數(shù)據(jù)直接得到最大血漿濃度 (Cmax)和達(dá)到Cmax的時(shí)間（tmax)。通過用口服給藥后的劑量歸一化的AUC除W靜脈給藥后的劑 量歸一化的AUC來計(jì)算口服生物利用度(F)，并W百分?jǐn)?shù)（％)形式報(bào)告。下表1中總結(jié)的結(jié)果 給出了 25 %化合物（1-1)在PVP中的固體分散體、25 %化合物（1-1)在HPMCAS-M中的固體分 散體和50%化合物（1 -1)在HPMCAS-M中的固體分散體的平均口服生物利用度，分別為58%、 49 % 和 74 %。
[0197] 表1:狗口服(PO)和靜脈(iv)給藥后的化合物（1-1)的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)(數(shù)值為3只 狗的平均值）
[019 引
[0199] AUC:血漿濃度-時(shí)間曲線下的面積;Cmax:最大血漿濃度;F:生物利用度;HPMCAS:醋 酸徑丙基甲基纖維素鋼；IV:靜脈內(nèi)；PEG:聚乙二醇;P0:經(jīng)口，口服;PVP:聚乙締化咯燒酬； tmax :達(dá)到Cmax的時(shí)間；tl/2 :血漿消除半衰期
[0200] 實(shí)施例3:包含化合物(1-1)的固體分散體的膠囊的制備和臨床應(yīng)用
[0201 ]制備lOmg強(qiáng)度的明膠膠囊，在患有惡性血液病的患者中進(jìn)行初步的臨床研究?；?于實(shí)施例1和2中所述的化合物（1-1)的固體分散體的體外和體內(nèi)測試結(jié)果，選擇50%化合 物（1-1)在HPMCAS-M中的固體分散體用于膠囊的研發(fā)。W3號尺寸的硬明膠膠囊，190mg的填 充量為目標(biāo)來開始膠囊的研發(fā)，因?yàn)檫\(yùn)樣的構(gòu)造可W通過填充更大尺寸的膠囊而潛在地增 加膠囊的強(qiáng)度，同時(shí)保持藥物組合物。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，設(shè)計(jì)了 4種膠囊制劑，其中具有不同量的崩 解劑并且具有或不具有潤濕劑。由于所有4種制劑都顯示出相似的崩解測試和溶解測試結(jié) 果，所W選擇最簡單的制劑(不具有潤濕劑，并具有最少量的崩解劑)用于制造。進(jìn)行制造工 藝的研發(fā)和規(guī)模擴(kuò)大的研究，W確定固體分散體的噴霧干燥工藝和干燥后的時(shí)間；共混的 參數(shù);為獲得約0.60g/cc的目標(biāo)堆密度的共混物的漉壓和研磨；W及膠囊填充的條件。
[0202] 將結(jié)晶化合物（1-1)和聚合物醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋化PMCAS-M)溶解于 丙酬中，并噴霧干燥，從而生產(chǎn)包含50 %化合物(1-1)載量的固體分散體中間體(SDI)顆粒。 PXRD分析顯示SDI是無定形的，mDSC分析顯示SDI是均勻的（即在環(huán)境條件下具有單一的 Tg)。在V型攬拌機(jī)的多個(gè)段中將50%化合物（1-1)在HPMCAS-M中的固體分散體(lOOOg)和賦 形劑(包括微晶纖維素填料-粘結(jié)劑(4428g)、交聯(lián)簇甲基纖維素鋼崩解劑(636g)、膠體二氧 化娃分散劑/潤滑劑（156g)、硬脂酸儀分散劑/潤滑劑（156g)和乳糖一水合物填料巧364g)) 共混。然后將混合物壓制并制粒，從而得到約〇.6g/mL的堆密度。使用自動(dòng)化的填充機(jī)將混 合物分配至3號尺寸的硬明膠膠囊（目標(biāo)填充量：190mg)中，并使用膠囊拋光機(jī)將制得的膠 囊拋光。
[0203] 在口服給藥lOmg膠囊(包含50 %化合物（1-1)在HPMCAS中的固體分散體)后進(jìn)行藥 物動(dòng)力學(xué)的評估，并將結(jié)果與對健康志愿者口服給藥4x lOmg膠囊(其包含化合物（1-1)的 化化agit固體分散體)后進(jìn)行的藥物動(dòng)力學(xué)評估加 W對比。
[0204] 在下表2A和2B中提供了運(yùn)兩種藥物組合物的比較。之前的EiKlragit制劑在2009年 1月8日公開的美國專利申請2009/0012064 A1中的實(shí)施例5中有所描述。該申請記載:通過 在水和乙醇的混合物中溶解和/或分散式(A)所示的嚷吩并Ξ挫并二氮雜卓和包裹用賦形 劑（包含氨溶甲基丙締酸醋共聚物B型化udragit RS)、甲基丙締酸共聚物C型化udragit L100-55)、滑石和娃酸侶儀)來制備EiKlragit固體分散體制劑。然后，使用離心流化床制粒 機(jī)將上述的非均勻混合物施加在微晶纖維素球(Nonpareil 101，F(xiàn)reund)上，從而生產(chǎn)分配 至2號尺寸的徑丙基甲基纖維素膠囊中的顆粒。
[0205] 在運(yùn)兩個(gè)臨床研究中，使用經(jīng)驗(yàn)證的LC-MS/MS方法來測定化合物（1-1)的血液水 平，并根據(jù)在膠囊給藥后24小時(shí)內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)測量的化合物（1-1)的血漿濃度來進(jìn)行藥物動(dòng) 力學(xué)分析。下表3中總結(jié)的結(jié)果顯示，根據(jù)AUC(924*4/1140,由于給藥劑量的差異而改變）， HPMCAS-M固體分散體制劑在人中的生物利用度比EiKlragit固體分散體制劑高3倍W上。此 夕h根據(jù)觀察到的Tmax，HPMCAS制劑的吸收速度快于Eudragit制劑（Tmax為1小時(shí)VS 4-6小 時(shí)）"HPMCAS-M固體分散體制劑的在系統(tǒng)暴露方面的明顯改善是意料之外的。
[020y 表2A:用于臨床應(yīng)用的化合物(1-1)的固體分散體膠囊
[0207]包含化合物（1 -1)的50 % HPMCAS固體分散體的藥物組合物：1 Omg強(qiáng)度，3號尺寸的 硬明膠膠囊
[020引
[0209] 表2B:包含化合物（1-1)的Eudragit LlOO-55固體分散體的藥物組合物：lOmg強(qiáng) 度，2號尺寸的硬明膠膠囊
[0210]
[0^1] *為無水形式
[0212] 表3:在將化合物(1-1)的固體分散體經(jīng)口施用給人后的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)
[0213]
[0214] AUCo-24h: 24小時(shí)內(nèi)0TX015血漿濃度對時(shí)間曲線下的面積
[0215] Cmax:最大血漿濃度
[0216] 虹:小時(shí)
[0217] HPMCAS:醋酸徑丙基甲基纖維素班巧酸醋 [021引 ni:毫升
[0219] ng:納克
[0。0] P0:經(jīng)口，口服
[0221 ] Tmax ： 達(dá)到Cmax的時(shí)間
[0222] 實(shí)施例4:在大鼠中的口服暴露
[0223] 在大鼠中測定化合物（1-1)的固體分散體的3種制劑的口服生物利用度。所選的3 種分散體為25 %化合物（1 -1)在PVP中的分散體、25 %化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的分散體 和50 %化合物（1 -1)在HPMCAS-MG中的分散體。在該研究中使用的動(dòng)物為得自±爾庫大學(xué) (芬蘭）的中央動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室（Central Animal Laboratory)的無特定病體（SPF)的Hsd: Sprague Dawl巧大鼠。大鼠最初購自位于荷蘭的化rlan。大鼠為雌性，并且為10周齡，12只 大鼠用于該研究中。在聚碳酸醋Makrolon II籠中飼養(yǎng)動(dòng)物(每個(gè)籠中3只），動(dòng)物室溫為21 +/-3°C，動(dòng)物室內(nèi)的相對濕度為55+/-15%，并且動(dòng)物室內(nèi)照明為人工照明，而且為12小時(shí) 明暗周期的循環(huán)(暗周期為18:00至06:00之間）。白楊木屑（了曰口￥61〇7,631:〇]11曰)用于墊料， 并且每周至少更換1次墊料。在對動(dòng)物定量給藥之前提供食物和水，但是在定量給藥后最初 的2個(gè)小時(shí)中移除食物和水。
[0224] 將預(yù)先計(jì)算的量的注射用無菌水加入至裝有采用合適的量的分散體的容器中，獲 得化合物（1-1)的濃度為0.75mg/mL，由此制備包含25 %化合物（1-1)在PVP中的分散體的口 服定量給藥溶液、包含25 %化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的分散體的口服定量給藥溶液和包 含50 %化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的分散體的口服定量給藥溶液。在每次給藥之前，將口 服定量給藥溶液進(jìn)行滿旋混合20秒。用于靜脈給藥的定量給藥溶液包含0.25mg/mL的化合 物（1-1)，該定量給藥溶液是通過將5mg的化合物（1-1)溶解于運(yùn)樣的混合物中來制備的，所 述混合物包含4mL的平均分子量為400Da的聚乙二醇（PEG400)、4mL的乙醇（96%純度）和 12mL的注射用無菌水。在加入水后的30分鐘之內(nèi)使用含有25%化合物(1-1化PVP中的分散 體的定量給藥溶液。在加入水后的60分鐘之內(nèi)使用含有25 %化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的 分散體的定量給藥溶液和含有50%化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的分散體的定量給藥溶液。 使用4mL/kg定量給藥量，從而使化合物（1-1)的靜脈給藥的給藥水平為Img/kg，口服給藥的 給藥水平為3mg/kg。定量給藥方案在表4中給出。
[0225] 表4.用于大鼠口服暴露研究的定量給藥方案
[0226]

[0227] 在定量給藥后的0.25小時(shí)、0.5小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)和24小時(shí) 的時(shí)間點(diǎn)，將約50化的血液樣品收集至包含化L乙二胺四乙酸化DTA)溶液的Eppendorf管 中，并且每個(gè)樣品都是在距所述時(shí)間點(diǎn)5分鐘時(shí)間窗內(nèi)收集的。由各樣品獲得SOiiL血漿并儲(chǔ) 存在干冰溫度下W用于分析。使用經(jīng)驗(yàn)證的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜化C-MS/MS)法對各樣品中化 合物(1-1)的濃度進(jìn)行分析，其定量下限為0.5ng/mL。
[02巧]使用化oenix WinNonlin軟件包（6.2.1 版，Pharsi曲t Co;rp公司，CA,USA)，采用標(biāo) 準(zhǔn)的非房室模型方法來計(jì)算藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。通過對對數(shù)濃度-時(shí)間曲線的終末線性部分 進(jìn)行最小二乘回歸分析來計(jì)算消除半衰期（tl/2)。通過使用線性梯形法則直至最終可測的 濃度，此后將終末消除相外推至無窮大來測定血漿濃度-時(shí)間曲線的曲線下面積(AUC)。通 過將藥物濃度曲線外推至無窮大來計(jì)算平均保留時(shí)間(MRT)，其代表了化合物在房室或系 統(tǒng)中保留的平均時(shí)間量。由血漿濃度數(shù)據(jù)直接得到最大血漿濃度(Cmax)和達(dá)到Cmax的時(shí)間 (tmax )。通過用口服給藥后的劑量歸一化的AU邱余W靜脈給藥后的劑量歸一化的AUC來計(jì)算 試驗(yàn)性口服生物利用度(F)，目陽=(AUC(口服)/劑量（口服））/(AUC(靜脈)/劑量(靜脈））]， 并W百分?jǐn)?shù)（％ )形式報(bào)告。
[0229] 藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)在表5中給出，血漿濃度對時(shí)間的圖示于圖7和8中。
[0230] 表5. 口服和靜脈給藥后的化合物（1-1)的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。值為得自3只動(dòng)物的平 均值。
[0231]
[0232] 實(shí)施例5.噴霧干燥分散體的制備
[0233] 使用5種所選的聚合物來制備化合物（1-1)的噴霧干燥的分散體，運(yùn)5種聚合物為： HPMCAS-MG(Shin Etsu Chemical公司）、HPMCP-HP55(Shin Etsu Chemical公司）、PVP(ISP， Ashland 公司的部口）、PVP-VA(BASF公司）和 化 agit LlOO-55 化 vonik Industries AG)。 使用每種聚合物W 25 %和50 %制備所有的噴霧干燥溶液。除了 PVP溶液W外，所有的溶液都 是在丙酬中制備的，PVP溶液是在乙醇中制備的。對于各溶液而旨，在lOg溶劑中制備1. Og固 體(聚合物和化合物（1-1))。使用具有1.5mm噴嘴的BiicM B-290，PE-024噴霧干燥器和Β? chi Β-295，Ρ-002冷凝器將溶液噴霧干燥。將噴霧干燥器的噴嘴壓力設(shè)定為80psi，目標(biāo)出口 溫度設(shè)定為40°C，冷卻器的溫度設(shè)定至-20°C，累速設(shè)定為100%，并且抽吸器設(shè)定為100%。 在噴霧干燥后，收集固體分散體，并在低溫對流烘箱中過夜干燥，從而除去殘余的溶劑。
[0234] 實(shí)施例6:濕度和溫度的穩(wěn)定性
[0235] 'VO 船'
[0236] 通過在高溫下暴露于水分來評估化合物（1-1)在HPMCAS-MG中的噴霧干燥分散體 的穩(wěn)定性。通過在75%相對濕度和40°C下放置1、2和3個(gè)月，來測定作為相對濕度的函數(shù)的 玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)。在HDPE瓶中將噴霧干燥的分散體儲(chǔ)存在LDPE袋內(nèi)，從而模擬散裝物 品包裝。結(jié)果總結(jié)于表6中。在時(shí)間0時(shí)，Tg為134°C，在1個(gè)月時(shí)Tg為134°C，在2個(gè)月時(shí)Tg為 135°C，在3個(gè)月時(shí)Tg為134°C，并且在各測量中僅觀測到單一的拐點(diǎn)。對每種樣品還獲得了 X 射線衍射圖譜。圖9示出了在穩(wěn)定性測試的時(shí)間0時(shí)，化合物（1-1化HPMCAS-MG中的固體分 散體的X射線粉末衍射圖譜。圖1〇、11和12示出了在暴露于40°C和75%相對濕度分另ijl個(gè)月、 2個(gè)月和3個(gè)月后，化合物(1-1化HPMCAS-MG中的固體分散體的X射線粉末衍射圖譜。
[0237] 圖案未顯示與化合物(1-1)有關(guān)的任何衍射線。
[0238] 實(shí)施例7:細(xì)胞系和原發(fā)性細(xì)胞的選擇
[0239] A1X的不同代表性細(xì)胞系包括：Jurkat細(xì)胞（T-A1X)、RS 4-ll(MlX-AF4B-前體 ALL)、T0-M-1、BV173(均為化+A化）；W及ML的不同代表性細(xì)胞系包括:Κ562(處于急性轉(zhuǎn)換 期的Ph+CML)、化-60 (NRAS驅(qū)動(dòng)的AML2)、ΝΟΜΟ 1 (Μ化-AF9驅(qū)動(dòng)的AML)、KG1 (BMP-FGRF+AML6) 及其更不成熟的亞型KGla;在添加有10%或20%熱滅活胎牛血清(分別）、2mM k谷氨酷胺、 lOOIU/mL青霉素和lOOg/mL鏈霉素的RPMI 1640(Gibco Invitrogen公司，瑞±己塞爾市）中 培養(yǎng)上述細(xì)胞。
[0240] 利用Ficoll-Paque化US密度梯度儀(Amersham Biosciences，美國森尼維耳市） 從骨髓(BM)中分離單核細(xì)胞(MNC)。將患者細(xì)胞保持在不含生長因子的添加有10%熱滅活 胎牛血清、2mM k谷氨酷胺、lOOIU/mL青霉素和lOOg/mL鏈霉素的IMDM(Gibco)中。
[0241] 實(shí)施例8:MTT檢驗(yàn)、調(diào)亡評價(jià)和細(xì)胞周期分析
[0242] MTT檢驗(yàn):W每孔106的密度將細(xì)胞首先接種在24孔板中，W避免在較小體積中發(fā) 生濃度改變，用不同劑量的由ImM DMS0儲(chǔ)存液新鮮制備的0TX015處理。將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到96孔 板中用于MTT檢驗(yàn)。未處理的細(xì)胞和用相等量的用于稀釋0TX015的DMS0(0.2-1%)處理的細(xì) 胞作為對照。制備5mg/ml的3- (4，5-二甲基嚷挫-2-基)-2，5-二苯基四挫漠化物(MTT)(分子 探針，Eugene，USA)的PBS儲(chǔ)存液。然后在每孔中加入0.5mg/mL的MTT溶液，并在暗中在37°C 下解育4h。然后用25 % SDS裂解緩沖液裂解細(xì)胞，并在570nm處讀取吸光度。每種細(xì)胞系進(jìn)行 兩次獨(dú)立試驗(yàn)。用Prism v5軟件(Gra地化d公司，La Jolla,USA)計(jì)算GI50值。
[0243] 調(diào)亡評價(jià):將來自患者或細(xì)胞系的共計(jì)IxlO6個(gè)細(xì)胞重懸于ImL的培養(yǎng)液中，并與 指定劑量的由ImM DMS0儲(chǔ)存液新鮮制備的0TX015解育。對照細(xì)胞與相當(dāng)量的二甲基亞諷 (DMS0 0.2-1 % )解育 W排除賦形劑的毒性。使用FACScan(Becton Dickinson,Mountain View，USA)通過流式細(xì)胞分析檢測調(diào)亡細(xì)胞。細(xì)胞用艦化丙晚（PI; 5yg/mL ; Becton Dickinson)染色，并根據(jù)制造商說明在室溫下與annexin-V-FITC(Becton Dickinson)共同 放置15分鐘，從而確定外膜憐脂酷絲氨酸暴露。數(shù)據(jù)用Flow jo (Tree Star公司，Ashland, USA)流式細(xì)胞儀軟件分析。
[0244] 細(xì)胞周期分析：對于常規(guī)的細(xì)胞周期分析，收獲IxlO6個(gè)細(xì)胞，用PBS洗涂，并用 70%冰乙醇固定。細(xì)胞與10化邑/1111^1?酷36(51邑1]1曰，5曰;[]11：-〇116]11:;[]1化11曰￥161',法國）共解 育，并用PI(2扣g/血，Becton Dickinson)染色，然后在37°C下解育30分鐘。隨后，通過流式 細(xì)胞分析來確定細(xì)胞周期分布。數(shù)據(jù)用Flow jo (Tree Star公司，Ashland, USA)流式細(xì)胞儀 軟件分析。
[0245] 通過外膜憐脂酷絲氨酸暴露和在不同時(shí)間點(diǎn)滲入艦化丙晚進(jìn)行檢測，化合物（1- 1)誘導(dǎo)了用不同劑量的藥物處理的Ξ種A1X細(xì)胞系(Jurkat、RS 4-11、TOM-1)和四種AML細(xì) 胞系化L60、K562、KG1和KGla)的調(diào)亡（圖13A-13C和圖14A-14D)?；衔铮?-1)在所有檢測的 細(xì)胞系中誘導(dǎo)調(diào)亡，但是在K562和KGla細(xì)胞中程度較輕（圖14B、D)。在所有其它細(xì)胞系中， 在用lOOnM的化合物（1-1)處理后的12小時(shí)至24小時(shí)內(nèi)，50%的細(xì)胞開始調(diào)亡。
[0246] 此外，化合物（1-1)在所有細(xì)胞系中誘導(dǎo)細(xì)胞周期停滯（圖15A-15C)。調(diào)亡數(shù)據(jù)顯 示，K562、KGla和T0M-1在暴露于化合物（1-1)后在細(xì)胞周期退化方面敏感性差。注意到，較 低劑量的式2(l〇nM)在時(shí)間延長的解育后（即72小時(shí)）誘導(dǎo)調(diào)亡（如在KG1細(xì)胞中所檢測的， 如圖16所示）。
[0247] 表7:在72小時(shí)的MTT檢驗(yàn)和GI50值。
[0248] _
[0249] AML和A化細(xì)胞系暴露于濃度增加的化合物（1-1) (0.1 ηΜ-10μΜ)。通過在72小時(shí)的 ΜΤΤ檢驗(yàn)確定增殖細(xì)胞的百分比，并用Prism軟件由五個(gè)重復(fù)的平均±50計(jì)算GI50值。GI50 值W3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值來表示。
[0250] 如表7所示，當(dāng)用不同劑量的化合物（1-1)處理AML細(xì)胞系（參見KGla和ΝΟΜΟΙ )W及 A化細(xì)胞系(參見RS4-1UBV-173、化rkat和TOM-1)時(shí)，通過外膜憐脂酷絲氨酸暴露和在72小 時(shí)滲入艦化丙晚進(jìn)行檢測(如圖39A-39C所示），化合物（1-1)在運(yùn)些細(xì)胞中W增強(qiáng)的劑量依 賴的方式誘導(dǎo)調(diào)亡。在AML細(xì)胞系中，2種化G1和ΝΟΜΟ 1)似乎是敏感的，G150值分別為198.3 ηΜ和229.1 ηΜ。巧巾細(xì)胞系化L60和KGla)似乎是敏感性較差的，GI值均為1.3μΜ，而Κ562被認(rèn) 為是具有抗性的，其GI50值為11.3μΜη0ΤΧ015在所有A化細(xì)胞系中引起細(xì)胞存活率的劑量依 賴性降低，GI50在34.2nM至249.7 nM之間。
[0251] 通常，化合物的最大半抑制濃度（IC-50值)是該化合物抑制生物學(xué)或生化功能的 有效性的度量。因此，可W認(rèn)為IC-50值是顯示抑制給定生物學(xué)過程一半(50%)時(shí)需要多少 特定藥物或任意化學(xué)物質(zhì)的定量度量。然而，有時(shí)使用GI-50來表征導(dǎo)致50%生長抑制的濃 度值。使用GI-50表明已經(jīng)校正了時(shí)間為0時(shí)的細(xì)胞計(jì)數(shù)。作為用于計(jì)算GI-50值的一個(gè)式子 的例子，將GI-50定義為100x(T-T〇)/(C-T〇) = 50時(shí)的測試化合物的濃度，其中例如T為暴露 于測試藥物48小時(shí)后的測試孔的光密度，To為時(shí)間為0時(shí)測試孔的光密度。
[0252] 此外，在幾乎所有細(xì)胞系中化合物（1-1)降低了 S期部分（圖40A-40H)。該效果在 A化細(xì)胞系RS4-11和BV-173中更為顯著，運(yùn)些細(xì)胞系出現(xiàn)G1期累積。
[0253] 實(shí)施例9:漠結(jié)構(gòu)域的表達(dá)
[0254] 使用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(QT-PCR)分析在不同細(xì)胞系和患者樣品中研究漠 結(jié)構(gòu)域的表達(dá)。在用苯酪和異硫氯酸脈的試劑溶液（TRlzo峨商標(biāo)試劑，Invitrogen， GrandIsland，NY)提取后獲得總RNA，滴定至化gA^L并儲(chǔ)存在-80°C。由化gRNA合成互補(bǔ) DNA(cDNA)。在熱循環(huán)儀ABI 7900HT中W標(biāo)準(zhǔn)模式用十分之一的cDNA(相當(dāng)于lOOng的RNA) W 25化的體積進(jìn)行QT-PCR反應(yīng)(50°C下2分鐘-95 °C下10分鐘，1個(gè)循環(huán);然后95 °C 15秒-6 °C 1 分鐘，50個(gè)循環(huán)）。
[0巧5] 通過QT-PCR檢測不同細(xì)胞系W不同水平表達(dá)的B畑2、B畑3和B畑4(圖17A-17C)。研 究了Ξ種不同類型的BRD4:保守型(BRD4C)、中間型和短型(BRD4S)。在不同的細(xì)胞系中，所 述不同形式的表達(dá)沒有差異。在調(diào)亡和BRD表達(dá)之間沒有明顯的相關(guān)性。AML細(xì)胞系K562具 有最低的表達(dá)水平，并且對化合物（1-1)處理的敏感性較低。與乳腺癌細(xì)胞系MCF-7相比， BRD的表達(dá)水平之間沒有差異。在所選的來自廝血的CD34+細(xì)胞中觀察到非常高水平的BRD。 在患者樣品中研究服D2、B畑3和服D4的表達(dá)?；颊咛卣骺偨Y(jié)在表8中。在所有A化患者中，陸+ A化示出了較低的B畑表達(dá)水平，而在AML患者中，B畑表達(dá)水平差異較大（圖17A-17C)。
[0256] 表8: ALL和ML患者特征
[0 巧 7]
[ο巧引研究用化合物（1-1)進(jìn)行處理W確定其是否誘導(dǎo)服D2、B畑3、Β畑4和c-MYC的下調(diào)。 致癌基因 C-MYC是BRD4的下游伴侶W維持白血病（DelmoreJ.E等，〔611.2011;146:904- 917)。諸如JQ1的其他小抑制劑誘導(dǎo)BRD4下調(diào)W及隨后的C-MYC下調(diào)。不同的白血病細(xì)胞系 用lOOnM式2處理，在3小時(shí)內(nèi)在蛋白質(zhì)水平觀察到與C-MYC下調(diào)相關(guān)的B畑2、BRD3和B畑4的 快速下調(diào)（圖18A和18B)。與T0M-1細(xì)胞相比，在3小時(shí)內(nèi)，在KG1和KGla中蛋白質(zhì)下調(diào)不與 cDNA降低相關(guān)（圖18A和18B)。在化rkat和RS 4-11細(xì)胞中，B畑2-4的cDNA起初下調(diào)，但是在 3小時(shí)之前升高（圖19A-19D)。結(jié)果示出了式2誘導(dǎo)了服D2、B畑3、B畑4和C-MYC的快速下調(diào)。
[0259] 此外，如圖41A-41H所示，通過RQ-PCR檢測到不同細(xì)胞系W不同水平表達(dá)BRD2、 BRD3和BRD4,并且bcr-abl驅(qū)動(dòng)細(xì)胞系BV-173和K562具有最低的基因表達(dá)水平（圖41八- 41B)。在包括MTT、調(diào)亡或細(xì)胞周期停滯W及BRD基因表達(dá)在內(nèi)的生物學(xué)效應(yīng)之間沒有明顯 相關(guān)性。我們研究了分別用250nM和500nM的0TX015處理，在48小時(shí)時(shí)在cDNA水平上的B畑2、 B畑3和B畑4的調(diào)節(jié)。我們不能檢測到由化合物（1-1)處理導(dǎo)致的B畑4、B畑2或服D3的一致性 下調(diào)（圖41C-41H)，而在KGUK562和化rkat細(xì)胞中檢測到B畑3和B畑2顯著上調(diào)，W及在KG1 和化60細(xì)胞中B畑2增加。
[0260] 實(shí)施例10:化合物（1-1)誘導(dǎo)CD34+和CD34-細(xì)胞調(diào)亡的有效性
[0261] 研究了化合物（1-1)在原發(fā)性細(xì)胞中誘導(dǎo)調(diào)亡的有效性。通過CD34+微珠陽性選擇 從廝血(健康對照）和一個(gè)AML患者中獲得CD34+和CD34-細(xì)胞。常規(guī)免疫表型分型顯示30% 的母細(xì)胞(blast cell)是CD34+陽性的。CD34+和CD34-廝血細(xì)胞的處理證明在500nM劑量水 平時(shí)對未成熟CD34+細(xì)胞有毒性，而成熟的細(xì)胞未受影響（圖20)dCD34+和CD34-AML細(xì)胞的處 理顯示出W劑量依賴的方式在體外誘導(dǎo)調(diào)亡。
[0262] 圖32A-32C示出了 W不同濃度的化合物（1-1)處理CD34-24小時(shí)后的調(diào)亡情況。
[0263] 實(shí)施例11:短暫暴露于化合物(1-1)后的調(diào)亡
[0264] 圖21A-21T示出了短暫暴露于化合物（1-1)之后96小時(shí)時(shí)的調(diào)亡。分別用lOnM和 lOOnM 的化合物（1-1)處理 HL60、KS62、化 rkat 和 RS4-11 細(xì)胞。在化時(shí)（lOnM 和 100nM)W 及 24h (lOnM)時(shí)洗涂細(xì)胞，丟棄上清，將細(xì)胞再次接種在新鮮培養(yǎng)基中。在9加時(shí)（24h至72h未示 出），通過FACS分析評價(jià)調(diào)亡細(xì)胞，并定義為Annexin V+具有或不具有PI吸收。圖21A-21T示 出了兩個(gè)實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)代表性試驗(yàn)。
[0265] 實(shí)施例12:暴露于不同濃度的化合物（1-1)之后的調(diào)亡
[0%6] 圖22A-2化示出了當(dāng)暴露于化M、InM和lOnM的化合物（1-1)后，對AML細(xì)胞系化60進(jìn) 行流式細(xì)胞分析的調(diào)亡數(shù)據(jù)。圖23A、23B和23C示出了圖22A-2化中化60細(xì)胞系的調(diào)亡。
[0267] 用化合物（1-1)進(jìn)行處理在化60和K562細(xì)胞中顯著地誘導(dǎo)調(diào)亡（分別為圖24A和 24B)。在 KG1 和 KGla 細(xì)胞（圖 25A 和 25B)、Jurkat 和 RS4-11 細(xì)胞（圖 26A 和 26B)W 及 T0M1 細(xì)胞 (圖27)中也觀察到顯著的調(diào)亡。K562對化合物（1-1)的處理敏感性較差，在24h時(shí)觀察到 20%的調(diào)亡細(xì)胞。在InM和lOnM濃度延長暴露時(shí)間得到不同的應(yīng)答情況:僅在lOnM暴露96h 后，HL60、KG1和化rkat細(xì)胞示出了 >90%的調(diào)亡并且TOM-1細(xì)胞示出了 70%的調(diào)亡；與此相 比，KGla、MlX-融合RS4-11和K562細(xì)胞示出了較低的調(diào)亡（分別為45%、30%和20%)，而在 對照中觀察到15 %至20 %水平的調(diào)亡。
[0268] 實(shí)施例13:洗去藥物后的調(diào)亡
[0269] 在敏感性化60和化rkat細(xì)胞系中，短暫暴露于藥物化后洗去藥物也與在96小時(shí)的 顯著延后的調(diào)亡有關(guān)(分別為圖28和29A、29B)，但在較不敏感的K562和RS4-11細(xì)胞系中并 非如此(圖30A和30B)。
[0270] 圖31A和31B中示出了 Ξ種A化細(xì)胞系的MTT檢驗(yàn)數(shù)據(jù)。
[0271] 實(shí)施例14:血液和骨髓的調(diào)亡
[0272] 圖33A-33G和34A-34B示出了不同濃度的化合物（1-1)對血液和骨髓細(xì)胞的濃度。
[0273] 實(shí)施例15:c-MYC動(dòng)力學(xué)
[0274] 在用化合物（1-1)處理后對AML和A化細(xì)胞測量C-MYC動(dòng)力學(xué)，在圖35中示出。在用 化合物（1 -1)處理AML和A1X細(xì)胞系后還測量BRD4動(dòng)力學(xué)，在圖36中示出。圖37示出了在用化 合物（1-1)處理AML和A化細(xì)胞系后的B畑2動(dòng)力學(xué)。圖38示出了在用化合物（1-1)處理AML和 A化細(xì)胞系后的BRD3動(dòng)力學(xué)。
[02巧]認(rèn)為致癌基因 C-MYC受到BRD4的激活，并且對白血病的維持至關(guān)重要。其他小BRD 抑制劑（即JQ1)在不同設(shè)置下誘導(dǎo)服D4下調(diào)W及隨后的C-MYC下調(diào)。我們在不同白血病細(xì)胞 系中確定了 C-MYC的基礎(chǔ)基因表達(dá)水平，其示出了有差異的結(jié)果，并且與化合物（1-1)針對 MTT、調(diào)亡或細(xì)胞周期影響的生物學(xué)效果沒有明確的相關(guān)性（圖42A和42B)。運(yùn)些細(xì)胞系用 250nM和500nM的化合物（1-1)處理，在4她時(shí)通過QT-PCR檢測，在所有細(xì)胞系中觀察到C-MYC 下調(diào)（圖42C和42D)。
[0276] 由于通過RQ-PCR檢測到B畑和C-MYC基礎(chǔ)基因表達(dá)與化合物（1-1)調(diào)節(jié)之間不存在 明顯的相關(guān)性，我們接著研究了化合物（1-1)在蛋白質(zhì)水平上對BRD 4、BRD2和BRD 3W及C- MYC的潛在影響。
[0277] 在所選的AML細(xì)胞系化60中，在暴露于500nM的化合物（1-1)7化后，B畑4和B畑3保 持不受影響，而在24h-處理后觀察到C-MYC的暫時(shí)下調(diào)（圖43A-43C);而幾乎耐受的AML細(xì)胞 系K562顯示出BRD4、B畑3和C-MYC在2地暴露后開始下調(diào)（圖43D-43F)。對于敏感性ALL細(xì)胞 系，Jurkat示出了在4她和72h時(shí)C-MYC下調(diào)（圖43G-43I)，而在RS4-11中服D4、BRD3和C-MYC 保持未受影響（圖43J-43L)。
[027引實(shí)施例16:免疫印跡
[0279] 由7xl06個(gè)細(xì)胞制備蛋白質(zhì)提取物;在十二烷基硫酸鋼(SDS)-聚丙締酷胺凝膠上 利用4-15%梯度凝膠(8;[0-1?曰(1，]/[曰11163-1曰-(：091161:16，法國）分離304邑的蛋白質(zhì)提取物，并 利用小型Trans-Blot Electro地oretic Transfer cell (Bio-Rad)轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜 上。所述膜用LiCor封閉緩沖液化iCor，Lincoln，肥，USA)封閉，并用相應(yīng)的第一抗體解育： 抗BRD4化pitomics 5716-1，8肥11叫日1116，郵4)、抗81?03(日656342,46〔日111，1]1〇、抗8尺02 (ab37633，AbCam，UK)、抗c-MYC(sc-764(N262)、SantaCruz，USA)和抗GAPDH(Invitrogen 3986〇〇,6阿11(1131曰11(1，1]54)。所得條帶用羊抗兔111打曰1^加70 68〇畑或羊抗鼠 1址腳1^郵70 800CW第二抗體化iCor)染色。利用LiCor Odyss巧掃描儀對膜進(jìn)行成像。手動(dòng)將框置于各目 的條帶周圍，其通過Odyssey 3.0分析軟件化iCor)報(bào)告已經(jīng)減去泳道內(nèi)背景的原始強(qiáng)度的 近紅外巧光值。
[0280] BRD2的條帶用羊(BRD2)抗兔過氧化物酶或羊抗鼠（GAPDH)過氧化物酶標(biāo)記的第二 抗體（Biorad，Hercules，USA)染色，并且利用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)化化andE化 plus，GE Healthcare Buckinghamshire，UK)顯示。
[0281] 實(shí)施例17:實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RQ-PCR)
[0282] 將用TRIZOL(Invitrogen，Grand 131日11(1，1]54)提取后獲得的總1?酷滴定至化旨/化 并儲(chǔ)存在-80°C下。由lyg RNA合成互補(bǔ)DNA(cDNA)。在熱循環(huán)儀ABI 7900HT中W標(biāo)準(zhǔn)模式 (50 °C 2分鐘-95 °C 10分鐘，1個(gè)循環(huán);然后是95 °C 15秒-60 °C 1分鐘，50個(gè)循環(huán)）用十分之一的 cDNA(相當(dāng)于1 OOng的RNA) W 25化體積進(jìn)行QT-PCR反應(yīng)(B畑2、B畑3、B畑4、C-MYC和ABL)。
[0283] 表9:PCR所用的引物
[0284]
[0285] 實(shí)施例18:化合物(1-1)對原發(fā)性細(xì)胞的影響
[0286] 我們進(jìn)一步研究了化合物（1-1)對原發(fā)性患者細(xì)胞的影響。我們對來自AML患者的 5個(gè)活體外樣品和2個(gè)A1X患者(包括1個(gè)A化化+)進(jìn)行了處理?；颊咛卣髟趫D44D中示出?；?物（1-1)在原發(fā)性AML患者樣品中W不同程度(35-85 % )誘導(dǎo)調(diào)亡（圖44A-44C)?；?A化患者 似乎具有耐受性。
[0287] 通過RQ-PCR分析評價(jià)患者樣品中B畑2、B畑3和BRD4的基礎(chǔ)基因表達(dá)?；颊咛卣骺?結(jié)在表10中。在A化患者中，化+A化顯示出較低的B畑表達(dá)水平（圖47A和47B;患者3至6)，而 在AML患者中BRD表達(dá)水平差異較大（圖47C和47D)。
[028引表10:研究B畑表達(dá)的不同A化和ML患者的特征
[0289]
[0290] 蛋白質(zhì)提取物可W得自分別用250nM和500nM的0TX015活體外處理的患者5(表10; 圖44)的BM細(xì)胞。運(yùn)些細(xì)胞在暴露于0TX015 7化后示出C-MYC的下調(diào)(45A-45C)。
[0291] 本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不脫離本發(fā)明的寬泛的發(fā)明構(gòu)思的條件下可W 對上文所示的并描述的示例性實(shí)施方案進(jìn)行修改。因此，應(yīng)該理解的是本發(fā)明不限于所示 的并描述的示例性實(shí)施方案，其旨在涵蓋在權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)的 修改。例如，示例性實(shí)施方案的特定特征可W為所要求保護(hù)的發(fā)明的一部分或不是其一部 分，并且所公開的實(shí)施方案的特征可W結(jié)合。除非本發(fā)明作出具體說明，術(shù)語"一個(gè)"、"一 種"和"所述"不限于一個(gè)元素，而是應(yīng)該理解為"至少一個(gè)"。
[0292] 應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的至少一些特征和描述被簡化為集中于與清楚地理解本發(fā) 明有關(guān)的元素，同時(shí)為了清晰起見，除去了本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解的其他元素(也可W 包含本發(fā)明的一部分）。但是由于此類元素是本領(lǐng)域公知的，并且由于它們不一定會(huì)更有利 于更好地理解本發(fā)明，所w在本發(fā)明中未提供此類元素的描述。
[0293]此外，所述的方法并非依賴于本發(fā)明列出的步驟的特定順序，就此而言，步驟的特 定順序不應(yīng)該解釋為對權(quán)利要求的限定。設(shè)及本發(fā)明的方法的權(quán)利要求不應(yīng)該限于書寫順 序的步驟的性能，并且本領(lǐng)域的技術(shù)人員可W容易理解運(yùn)些步驟可W改變，并且仍然保持 在本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療急性淋巴細(xì)胞性白血病的方法，包括向患者施用藥學(xué)可接受的量的組合 物，該組合物包含噻吩并三唑并二氮雜卓化合物、或其可藥用的鹽、或其水合物或溶劑化 物，所述噻吩并三唑并二氮雜卓化合物由下式(1)表示：其中R1為具有1至4個(gè)碳的烷基;辦為氫原子、鹵素原子、或任選地被鹵素原子或羥基取 代的具有1至4個(gè)碳的烷基;R3為鹵素原子;任選地被鹵素原子、具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1 至4個(gè)碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一NR 5--(CH2)m-R6,其中抱為氫原子、或具有1至4個(gè) 碳的烷基，m為O至4的整數(shù)，并且R 6為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7-CO--(CH2)n--R 8,其中R7為氫原子或具有1至4個(gè)碳的烷基，η為O至2的整數(shù)，并且R8為任選地 被鹵素原子取代的苯基或吡啶基;并且R 4為--(CH2)a-CO--NH-R9,其中a為1至4的整數(shù)，并 且R 9為具有1至4個(gè)碳的烷基;具有1至4個(gè)碳的羥烷基;具有1至4個(gè)碳的烷氧基;或任選地被 具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1至4個(gè)碳的烷氧基、氨基或羥基取代的苯基或吡啶基；或--(CH 2)b-C00R1Q，其中b為1至4的整數(shù)，并且Riq為具有1至4個(gè)碳的烷基;其中所述噻吩并三唑 并二氮雜卓化合物形成含有無定形噻吩并三唑并二氮雜卓化合物和可藥用的聚合物的固 體分散體，其中所述固體分散體展現(xiàn)出基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的噻吩并三唑并 二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X射線粉末衍射圖案。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述由式（1)表示的噻吩并三唑并二氮雜卓化合物 獨(dú)立地選自由以下化合物構(gòu)成的組： (i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并-[4,3_ &][1，4]二氮雜卓-6-基]4-(4-羥苯基）乙酰胺或其二水合物；（11)(5)-{4-(3'-氰基聯(lián)苯-4-基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓_6_基}乙 酸甲酯；（iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑 并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲酯；以及（iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙 ?；被?苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲 酯。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮雜卓化合物為（S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基)-N-(4-羥苯基）乙酰胺二水合物。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述可藥用的聚合物為醋酸羥丙基甲 基纖維素琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮雜卓化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯 (HPMCAS)的重量比為1:3至1:1。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述固體分散體表現(xiàn)出約130Γ至約140Γ的單一 的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)拐點(diǎn)。6. -種治療急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用藥學(xué)可接受的量的組合物，該 組合物包含噻吩并三唑并二氮雜卓化合物、或其可藥用的鹽、或其水合物或溶劑化物，所述 噻吩并三唑并二氮雜卓化合物由下式(1)表示：其中R1為具有1至4個(gè)碳的烷基;辦為氫原子、鹵素原子、或任選地被鹵素原子或羥基取 代的具有1至4個(gè)碳的烷基;R3為鹵素原子;任選地被鹵素原子、具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1 至4個(gè)碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一NR 5--(CH2)m-R6,其中抱為氫原子、或具有1至4個(gè) 碳的烷基，m為O至4的整數(shù)，并且R 6為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7-CO--(CH2)n--R 8,其中R7為氫原子或具有1至4個(gè)碳的烷基，η為O至2的整數(shù)，并且R8為任選地 被鹵素原子取代的苯基或吡啶基;并且R 4為--(CH2)a-CO--NH-R9,其中a為1至4的整數(shù)，并 且R 9為具有1至4個(gè)碳的烷基;具有1至4個(gè)碳的羥烷基;具有1至4個(gè)碳的烷氧基;或任選地被 具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1至4個(gè)碳的烷氧基、氨基或羥基取代的苯基或吡啶基；或--(CH 2)b-C00R1Q，其中b為1至4的整數(shù)，并且Riq為具有1至4個(gè)碳的烷基;其中所述噻吩并三唑 并二氮雜卓化合物形成含有無定形噻吩并三唑并二氮雜卓化合物和可藥用的聚合物的固 體分散體，其中所述固體分散體展現(xiàn)出基本上不存在與結(jié)晶的式（1)所示的噻吩并三唑并 二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X射線粉末衍射圖案。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述由式（1)表示的噻吩并三唑并二氮雜卓化合物 獨(dú)立地選自由以下化合物構(gòu)成的組： (i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并-[4,3_ &][1，4]二氮雜卓-6-基]4-(4-羥苯基）乙酰胺或其二水合物；（11)(5)-{4-(3'-氰基聯(lián)苯-4-基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓_6_基}乙 酸甲酯；（iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑 并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲酯；以及（iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙 ?；被?苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲 酯。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮雜卓化合物為（S)-2-(4- (4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基)-N-(4-羥苯基）乙酰胺二水合物。9. 根據(jù)權(quán)利要求6至8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述可藥用的聚合物為醋酸羥丙基甲 基纖維素琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮雜卓化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯 (HPMCAS)的重量比為1:3至1:1。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述固體分散體表現(xiàn)出約130°C至約140°C的單一 的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)拐點(diǎn)。11. 一種治療BCR-ABL陽性急性淋巴細(xì)胞性白血病的方法，包括向患者施用藥學(xué)可接受 的量的組合物，該組合物包含噻吩并三唑并二氮雜卓化合物、或其可藥用的鹽、或其水合物 或溶劑化物，所述噻吩并三唑并二氮雜卓化合物由下式(1)表示：其中R1為具有1至4個(gè)碳的烷基;辦為氫原子、鹵素原子、或任選地被鹵素原子或羥基取 代的具有1至4個(gè)碳的烷基;R3為鹵素原子;任選地被鹵素原子、具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1 至4個(gè)碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一NR 5--(CH2)m-R6,其中抱為氫原子、或具有1至4個(gè) 碳的烷基，m為0至4的整數(shù)，并且R 6為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7-CO--(CH2)n--R 8,其中R7為氫原子或具有1至4個(gè)碳的烷基，η為0至2的整數(shù)，并且R8為任選地 被鹵素原子取代的苯基或吡啶基;并且R 4為--(CH2)a-CO--NH-R9,其中a為1至4的整數(shù)，并 且R 9為具有1至4個(gè)碳的烷基;具有1至4個(gè)碳的羥烷基;具有1至4個(gè)碳的烷氧基;或任選地被 具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1至4個(gè)碳的烷氧基、氨基或羥基取代的苯基或吡啶基；或一 (CH 2) b-C00R1Q，其中b為1至4的整數(shù)，并且Riq為具有1至4個(gè)碳的烷基。12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述由式（1)表示的噻吩并三唑并二氮雜卓化合 物獨(dú)立地選自由以下化合物構(gòu)成的組： (i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并-[4,3_ &][1，4]二氮雜卓-6-基]4-(4-羥苯基）乙酰胺或其二水合物；（11)(5)-{4-(3'-氰基聯(lián)苯-4-基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓_6_基}乙 酸甲酯；（iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑 并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲酯；以及（iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙 ?；被?苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲 酯。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮雜卓化合物為(S)-2-(4- (4-氯代苯基)-2,3,9-三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基)-N-(4-羥苯基）乙酰胺二水合物。14. 根據(jù)權(quán)利要求11至13中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮雜卓化合 物形成固體分散體，其中所述固體分散體包含無定形的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮雜 卓化合物、和其可藥用的鹽、或其水合物；以及可藥用的聚合物。15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述固體分散體展現(xiàn)出基本上不存在與結(jié)晶的 式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X射線粉末衍射圖案。16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述可藥用的聚合物為醋酸羥丙基甲基纖維素 琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮雜卓化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS) 的重量比為1:3至1:1。17. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中所述固體分散體表現(xiàn)出約130°C至約140°C的單 一的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)拐點(diǎn)。18. -種治療CD34陽性急性骨髓性白血病的方法，包括向患者施用藥學(xué)可接受的量的 組合物，該組合物包含噻吩并三唑并二氮雜卓化合物、或其可藥用的鹽、或其水合物或溶劑 化物，所述噻吩并三唑并二氮雜卓化合物由下式(1)表示：其中R1為具有1至4個(gè)碳的烷基;辦為氫原子、鹵素原子、或任選地被鹵素原子或羥基取 代的具有1至4個(gè)碳的烷基;R3為鹵素原子;任選地被鹵素原子、具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1 至4個(gè)碳的烷氧基、或氰基取代的苯基;一NR 5--(CH2)m-R6,其中抱為氫原子、或具有1至4個(gè) 碳的烷基，m為O至4的整數(shù)，并且R 6為任選地被鹵素原子取代的苯基或吡啶基；或--NR7-CO--(CH2)n--R 8,其中R7為氫原子或具有1至4個(gè)碳的烷基，η為O至2的整數(shù)，并且R8為任選地 被鹵素原子取代的苯基或吡啶基;并且R 4為--(CH2)a-CO--NH-R9,其中a為1至4的整數(shù)，并 且R 9為具有1至4個(gè)碳的烷基;具有1至4個(gè)碳的羥烷基;具有1至4個(gè)碳的烷氧基;或任選地被 具有1至4個(gè)碳的烷基、具有1至4個(gè)碳的烷氧基、氨基或羥基取代的苯基或吡啶基；或一 (CH 2) b-C00R1Q，其中b為1至4的整數(shù)，并且Riq為具有1至4個(gè)碳的烷基。19. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述由式（1)表示的噻吩并三唑并二氮雜卓化合 物獨(dú)立地選自由以下化合物構(gòu)成的組： (i)(S)-2-[4-(4-氯代苯基)-2,3,9_ 三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并-[4,3_ &][1，4]二氮雜卓-6-基]4-(4-羥苯基）乙酰胺或其二水合物；（11)(5)-{4-(3'-氰基聯(lián)苯-4-基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓_6_基}乙 酸甲酯；（iii)(S)-{2,3,9-三甲基-4-(4-苯基氨基苯基)-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑 并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲酯；以及（iv)(S)-{2,3,9-三甲基-4-[4-(3-苯基丙 ?；被?苯基]-6H-噻吩并[3,2-f-][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基}乙酸甲 酯。20. 根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮雜卓化合物為(S)-2-(4-(4-氯代苯基)-2,3,9_三甲基-6H-噻吩并[3,2-f][l，2,4]三唑并[4,3-a][l，4]二氮雜卓-6-基)-N-(4-羥苯基）乙酰胺二水合物。21. 根據(jù)權(quán)利要求18至20中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述噻吩并三唑并二氮雜卓化合 物形成固體分散體，其中所述固體分散體包含無定形的式（1)所示的噻吩并三唑并二氮雜 卓化合物、和其可藥用的鹽、或其水合物；以及可藥用的聚合物。22. 根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述固體分散體展現(xiàn)出基本上不存在與結(jié)晶的 式(1)所示的噻吩并三唑并二氮雜卓化合物有關(guān)的衍射線的X射線粉末衍射圖案。23. 根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中所述可藥用的聚合物為醋酸羥丙基甲基纖維素 琥珀酸酯，其中噻吩并三唑并二氮雜卓化合物與醋酸羥丙基甲基纖維素琥珀酸酯(HPMCAS) 的重量比為1:3至1:1。24. 根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述固體分散體表現(xiàn)出約130°C至約140°C的單 一的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度(Tg)拐點(diǎn)。
【文檔編號】A61P35/02GK106029077SQ201480052842
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2014年8月1日
【發(fā)明人】埃爾韋·東布雷
【申請人】翁科埃斯克斯有限公司