一類黃烷化合物在預(yù)防或治療黑色素瘤中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，一類黃烷化合物在預(yù)防或治療黑色素瘤方面的藥物和 保健品方面的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 黑色素瘤是目前惡性腫瘤中發(fā)病率增長最快的一種，在我國，黑色素瘤的發(fā)病率 也在不斷增高，每年新發(fā)病例已超過10000例。目前，黑色素瘤的治療方法主要包括手術(shù)、 化療、免疫治療及靶向治療。多數(shù)早期患者通過手術(shù)能夠治愈，但對于進(jìn)展期患者，化療通 常效果不佳，因此，尋找更為有效的化療藥物單獨(dú)或輔助治療具有一定意義。
[0003] 自噬是目前涉及生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、植物學(xué)和微生物學(xué)等領(lǐng)域的一個快速發(fā)展的研究 熱點(diǎn)。尤其在生物醫(yī)學(xué)界，許多研究人員正在積極探討自噬在各種疾病中的作用，研究疾病 中自噬水平調(diào)控的分子機(jī)制，以期利用自噬為臨床疾病治療尋找新的有效靶點(diǎn)。這些疾病 包括感染性疾病、心腦血管疾病、癌癥、代謝紊亂性疾病和神經(jīng)退行性疾病等。
[0004] 細(xì)胞自噬是細(xì)胞在饑餓、能量缺乏等代謝應(yīng)激狀態(tài)下的一種分解代謝過程，細(xì)胞 內(nèi)的蛋白等大分子、細(xì)胞器和胞質(zhì)通過自噬作用被包裹、消化、降解成核苷、氨基酸和脂肪 酸等可被重復(fù)循環(huán)利用的物質(zhì)，用作合成新的大分子和能量來源ATP，從而維持細(xì)胞基本的 生命活動。自噬參與維持蛋白代謝平衡及細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，其在清除細(xì)胞內(nèi)廢物、結(jié)構(gòu)重 建以及細(xì)胞生長發(fā)育中起著重要作用。自噬既是細(xì)胞的一種正常生理活動，也可在細(xì)胞遭 受各種刺激（缺氧，缺營養(yǎng)，化學(xué)物質(zhì)刺激，微生物入侵，細(xì)胞器損傷，異常蛋白堆積等）時 作為應(yīng)激反應(yīng)而發(fā)生。自噬不僅具有維持細(xì)胞自我調(diào)節(jié)、促進(jìn)細(xì)胞生存的作用，過度活躍的 自嗤活動也可以引起細(xì)胞死亡，即"自嗤性細(xì)胞死亡（autophagic cell death)"。
[0005] 腫瘤細(xì)胞的自噬是一把雙刃劍：一方面，自噬可以清除腫瘤細(xì)胞內(nèi)折疊異常的蛋 白和功能異常的細(xì)胞器例如線粒體，抑制細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)，最終防止基因組損傷從而抑制癌 癥發(fā)生。另一方面，在腫瘤生長的后期，腫瘤細(xì)胞可利用自噬作用使自身在營養(yǎng)缺乏和低氧 或缺氧的狀況下得以存活。因此，在腫瘤發(fā)生發(fā)展的不同階段，自噬可能對腫瘤細(xì)胞有不同 的影響。
[0006] 機(jī)體內(nèi)的活性氧自由基（Reactive oxygen species, R0S)通過其濃度調(diào)節(jié)著機(jī)體 細(xì)胞的生死平衡。隨著自由基生物學(xué)研究的發(fā)展，研究者們逐漸認(rèn)識到ROS可雙向調(diào)控某 些腫瘤細(xì)胞的凋亡和增殖，并發(fā)現(xiàn)了自由基與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)之間的內(nèi)在關(guān)聯(lián)。細(xì)胞內(nèi)ROS 堆積是腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的重要差異之一，鑒于腫瘤細(xì)胞這一特性，利用某些可增加細(xì) 胞氧化應(yīng)激的化合物可達(dá)到對腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞的差異調(diào)節(jié)：一方面ROS水平的進(jìn)一步 增加可引起腫瘤細(xì)胞的凋亡或壞死；另一方面，正常細(xì)胞中ROS水平的增加仍在細(xì)胞生理 承受范圍內(nèi)，不會引起細(xì)胞凋亡。
[0007] 黃烷及其聚合物是廣泛存在于傳統(tǒng)藥用植物中的一類化學(xué)成分，藥理活性研究結(jié) 果表明，黃烷類化合物具有抗腫瘤、降糖、神經(jīng)保護(hù)、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎等方面的活 性，而黃烷聚合物近年來雖有活性方面的報(bào)道，但其研究尚未成熟，且其結(jié)構(gòu)復(fù)雜，單體化 合物不易提純。文獻(xiàn)報(bào)道，黃烷聚合物可以通過硫解的方法進(jìn)行降解，得到4位被硫代的黃 烷衍生物，但由于產(chǎn)物比較復(fù)雜，不易分離純化，因此目前已報(bào)道的黃烷衍生物中4位被雜 原子取代的衍生物較少。
[0008] 課題組在對紅景天的化學(xué)成分研究過程中發(fā)現(xiàn)，紅景天中的黃烷聚合物要么以 ECG為聚合單元，要么以EGCG為聚合單元，不同紅景天中黃烷聚合單元不同。與其他植物如 葡萄籽中的黃烷聚合單元不同的是，3-位羥基均被沒食子?；?，因此，反應(yīng)產(chǎn)物比較單一， 后處理簡單。利用此結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，我們對此類衍生物進(jìn)行了進(jìn)一步的衍生化合成，并對其藥理 活性進(jìn)行深入研究，結(jié)果顯示，該類化合物能夠激活自噬，選擇性增加腫瘤細(xì)胞ROS水平， 抑制腫瘤生長。目前，國內(nèi)尚未有報(bào)道此類黃烷衍生物激活自噬，選擇性增加腫瘤細(xì)胞ROS 水平，也未有此類黃烷衍生物在治療或預(yù)防黑色素瘤方面的專利申請。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一類新的黃烷化合物。
[0010] 本發(fā)明的另一目的在于提供一類黃烷化合物的制備方法。
[0011] 本發(fā)明的再一目的在于提供一種藥物組合物，其包括至少一個上述黃烷化合物及 藥用載體和/或賦形劑。
[0012] 本發(fā)明的又一目的在于提供一類黃烷化合物在制備用于預(yù)防和/或治療黑色素 瘤的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0013] 為解決本發(fā)明的技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[0014] 本發(fā)明第一方面提供了一類黃烷化合物在其結(jié)構(gòu)如下：
[0015]
[0016] 本發(fā)明第二方面提供了制備本發(fā)明黃烷化合物的方法。
[0017] 該類衍生物是通過對天然藥物中的黃烷聚合物進(jìn)行衍生化反應(yīng)后分離純化得到 的。具體通過以下幾個步驟實(shí)現(xiàn)：
[0018] 1)該部位的提取參照之前中國專利，專利申請?zhí)枮?01010587820. 7的紅景天有 效部位的提取方法，將含有黃烷聚合物的中藥材粉碎，用6-12倍量的有機(jī)溶劑提取2-5 次；將提取液過濾后進(jìn)行減壓濃縮，除去溶劑，即得藥材總提取物；
[0019] 2)將藥材總提取物進(jìn)行大孔吸附樹脂柱分離，洗脫液減壓濃縮，經(jīng)冷凍干燥后即 得黃烷聚合物部位；
[0020] 3)將黃烷聚合物部位通過加入硫代試劑進(jìn)行硫解反應(yīng)。
[0021] 步驟1)中優(yōu)選的有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇或丙酮。甲醇、乙醇或丙酮的優(yōu)選濃度 為30-95% (和水的混合物的質(zhì)量比）；
[0022] 步驟1)中為加快提交效率，提取方式優(yōu)選采用50-80°C ;
[0023] 步驟1)中優(yōu)選的含有黃烷聚合物的中藥材選自原料藥材選自大花紅景天、狹葉 紅景天、高山紅景天、玫瑰紅景天、德欽紅景天、喜馬紅景天、帕里紅景天、菱葉紅景天、四裂 紅景天、云南紅景天、大株紅景天、長鞭紅景天、唐古特紅景天、圣地紅景天、小叢紅景天、庫 頁紅景天兒茶、虎杖、大黃、密花豆、桂皮、鉤藤、金雞納皮。
[0024] 步驟2)中大孔吸附樹脂柱所選流動相優(yōu)選為純水-95%乙醇梯度系統(tǒng)；每個梯度 的洗脫體積為2-4個柱體積。
[0025] 步驟2)中優(yōu)選的大孔樹脂選自弱極性或中性大孔樹脂。
[0026] 步驟 2)中更優(yōu)選的大孔樹脂選自 Diaion HP-10、20、30、40、50、DM301、NKA-9、 AB-8、D101、DM130、LSA-10、LSA-20、DM-18、D312。
[0027] 步驟3)中選擇硫解試劑為2, 4, 6-三甲基芐硫醇，其結(jié)構(gòu)如下
[0028]
[0029] 本發(fā)明第三方面涉及以本發(fā)明化合物作為活性成份的藥物組合物。該藥物組合物 可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備?？赏ㄟ^將本發(fā)明化合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的固體 或液體賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成適于人或動物使用的任何劑型。本發(fā)明化合物在其藥 物組合物中的含量通常為〇. 1-95重量％。
[0030] 本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道 或非腸道，如口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮膚、 陰道、直腸等。
[0031] 給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型或半固體劑型。液體劑型可以是溶液劑（包 括真溶液和膠體溶液）、乳劑（包括ο/w型、w/o型和復(fù)乳）、混懸劑、注射劑（包括水針劑、 粉針劑和輸液）、滴眼劑、滴鼻劑、洗劑和搽劑等；固體劑型可以是片劑（包括普通片、腸溶 片、含片、分散片、咀嚼片、泡騰片、口腔崩解片）、膠囊劑（包括硬膠囊、軟膠囊、腸溶膠囊）、 顆粒劑、散劑、微丸、滴丸、栓劑、膜劑、貼片、氣（粉）霧劑、噴霧劑等；半固體劑型可以是軟 膏劑、凝膠劑、糊劑等。
[0032] 本發(fā)明化合物可以制成普通制劑、也制成是緩釋制劑、控釋制劑、靶向制劑及各種 微粒給藥系統(tǒng)。
[0033] 為了將本發(fā)明化合物制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種賦形劑，包括稀 釋劑、黏合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、助流劑。稀釋劑可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳 糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣等；濕潤劑可以是水、乙 醇、異丙醇等；粘合劑可以是淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纖維素、阿拉伯膠 漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、丙烯酸樹脂、卡 波姆、聚