一種愈創(chuàng)木烷型倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及從現(xiàn)有中成藥制劑中提取的愈創(chuàng)木烷型倍半 萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 熱毒寧注射液（國藥準(zhǔn)字Z20050217)為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司自主研發(fā)的 原中藥二類新藥，其處方為青蒿、金銀花、梔子，輔料為聚山梨酯80。熱毒寧注射液在外感風(fēng) 熱所致感冒、流感、咳嗽、上呼吸道感染等疾病的臨床治療中應(yīng)用廣泛，其作用迅速、效果顯 著。
[0003] 研究人員在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)了新的化學(xué)成分，并且發(fā)現(xiàn)此化合物在各個(gè)批次 的熱毒寧注射液中均穩(wěn)定存在。經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知，這是首次在熱毒寧注射液中發(fā)現(xiàn)并鑒定 出的新的化學(xué)成分，并經(jīng)過Scifinderscholar檢索發(fā)現(xiàn)該化合物為新化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明從熱毒寧注射液中制備提取出一種具有生物活性的愈創(chuàng)木烷型倍半萜類 化合物，并提供了其在制備治療手足口病藥物中的應(yīng)用。
[0005] 具體地說，本發(fā)明提供了一種新的愈創(chuàng)木烷型倍半萜類化合物，其結(jié)構(gòu)如（I)所 示：
[0006]
[0007] 本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法，包括如下步驟：
[0008] (1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂色譜柱分離，依次以水、30%乙 醇、90~100 %乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得到水洗脫部位、 30%乙醇洗脫部位、90~100%乙醇洗脫部位；
[0009] ((2)取步驟（1)的90~100%乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇梯 度洗脫，以氯仿-甲醇體積比為95 : 5的洗脫液洗脫3~5BV，洗脫液合并，標(biāo)記為餾分A， 餾分A經(jīng)SephadexLH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等體積、等度洗脫，去除色素帶后，收集餾 分，標(biāo)記為A-2,餾分A-2經(jīng)0DS柱色譜分離，用甲醇-水梯度洗脫，其中甲醇濃度為50%~ 70%，收集甲醇-水體積比為3 : 2的餾分A-2-2,餾分A-2-2經(jīng)半制備液相分離，得到本發(fā) 明化合物。
[0010] 上述制備方法中，步驟（2)所述半制備液相色譜，以比例為25 : 75的乙腈-水為 流動(dòng)相，檢測(cè)波長為208與220nm，流速4mL/min，柱溫為常溫。在半制備液相上，本發(fā)明化 合物的保留時(shí)間分別為31. 2min。
[0011] 發(fā)明人通過理化性質(zhì)和現(xiàn)代波譜學(xué)手段（UV、IR、MS、⑶、1H-NMR、13C-NMR和 2D-NMR)對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定，證實(shí)其為結(jié)構(gòu)如式I所示的愈創(chuàng)木烷型倍 半萜類化合物。
[0012] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種圖（I)所示化合物在制備治療手足口病藥物 中的應(yīng)用。發(fā)明人發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物對(duì)手足口病EV71病毒有一定的抑制作用。
[0013] 本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供一種藥物組合物，包含上述圖（I)所示化合物。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種治療手足口病的藥物組合物，含有治療有效量的上述圖（I) 化合物以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。
【附圖說明】
[0015] 圖 1 為化合物的HR-ESI-Q-T0F-MS
[0016] 圖2為化合物的1H-NMR譜
[0017] 圖3為化合物的13C_NMR譜和DEPT-135譜
[0018] 圖4為化合物的1H」HCOSY譜
[0019] 圖5為化合物的HMBC譜
[0020] 圖6為化合物的N0ESY譜
[0021] 圖7為化合物的⑶譜
[0022] 圖8為化合物的HSQC譜
[0023] 圖9為化合物的結(jié)構(gòu)式
【具體實(shí)施方式】
[0024] 為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì) 本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0025] 實(shí)施例1本發(fā)明化合物的制備
[0026] (1)取熱毒寧注射液成品，經(jīng)HP-20大孔吸附樹脂色譜柱分離，依次以水、30%乙 醇、95%乙醇梯度洗脫，分別收集各洗脫液，減壓濃縮至無醇味，得到水洗脫部位、30 %乙醇 洗脫部位、95%乙醇洗脫部位；
[0027] (2)取步驟（1)的90~100 %乙醇洗脫部位，經(jīng)硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇 梯度洗脫，以氯仿-甲醇體積比為95 : 5的洗脫液洗脫3~5BV，洗脫液合并，標(biāo)記為餾分A7.8g，餾分A經(jīng)SephadexLH-20柱色譜分離，氯仿-甲醇等體積、等度洗脫，去除色素帶后， 收集餾分，標(biāo)記為A-25. 4g，餾分A-2經(jīng)ODS柱色譜分離，用甲醇-水梯度洗脫，其中甲醇濃 度為50%~70%，收集甲醇-水體積比為3 : 2的餾分A-2-285mg，餾分A-2-2經(jīng)半制備液 相分離，得到本發(fā)明化合物。
[0028] 所述半制備液相HPLC分離，是以25 : 75的乙腈-水為流動(dòng)相，檢測(cè)波長為208 與220nm，流速4mL/min，在半制備液相上本發(fā)明化合物的保留時(shí)間分別為31. 2min。分離所 得溶液干燥，得到本發(fā)明化合物4. 9mg。
[0029] 實(shí)施例2本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
[0030] 本發(fā)明化合物為黃色無定性固體，ESI-MS(positive)給出m/z323 [M+Na]+ ; ESI-MS(negative)給出 345 [M+HC00]，提示化合物分子量為 300。HR-ESI-Q-T0F-MS給出 m/z299. 1497[M-H](計(jì)算值為299. 1495)(圖1)，確定化合物分子式為C15H2406,計(jì)算不飽和 度為5。
[0031]本發(fā)明化合物的1H-NMR(600MHz，inra30D)譜（見圖2)，顯示了高場(chǎng)區(qū)4個(gè)甲基 信號(hào)，其中3個(gè)甲基也呈現(xiàn)單峰，表明其與季碳直接相連；1個(gè)呈現(xiàn)d峰，表明其與叔碳直接 相連。13C-NMR(100MHz，inCD30D)結(jié)合DEPT-135譜（見圖3)共顯示15個(gè)碳信號(hào)，包括4 個(gè)甲基，3個(gè)亞甲基，2個(gè)次甲基，以及6個(gè)季碳信號(hào)[1個(gè)羰基，3個(gè)連氧SP3雜化季碳，1對(duì) 四取代雙鍵]。綜合以上NMR數(shù)據(jù)和不飽和度信息，可以推測(cè)化合物可能為1個(gè)倍半萜類化 合物，結(jié)構(gòu)中含有4個(gè)甲氧基、2個(gè)環(huán)、1個(gè)酮羰基和1個(gè)雙鍵。根據(jù)HSQC譜（見圖8)，對(duì)化 合物的碳?xì)湫盘?hào)進(jìn)行了歸屬。
[0032]根據(jù)HMBC(見圖5)相關(guān)峰H-15/C_3,4,5和H-2/C_l，3,5,推出α，β-不飽和環(huán) 戊酮的結(jié)構(gòu)片段。1H-1!!COSY實(shí)驗(yàn)中（見圖4)，可見H-8/H-9/H-10，H-10/CH3-14的相關(guān)峰， 結(jié)合H-6/C-l，4,5,7 的HMBC遠(yuǎn)程相關(guān)；CH3-14/C-1，10,9 和H-8/C-7,9,10 的HMBC遠(yuǎn)程相 關(guān)，構(gòu)建環(huán)庚烷的結(jié)構(gòu)片段。兩個(gè)單峰甲基CH3-12和CH3-13與C-7和C-11均具有HMBC遠(yuǎn) 程相關(guān)，推測(cè)結(jié)構(gòu)中含有片段c。在已經(jīng)推定的3個(gè)結(jié)構(gòu)片段中，我們可以發(fā)現(xiàn)1，5,7碳原 子為公用碳，從而將其連接為1個(gè)愈創(chuàng)木烷型的倍半萜骨架，結(jié)合分子式C15H2406，確定結(jié)構(gòu) 中還存在3個(gè)羥基及1個(gè)過氧羥基根據(jù)1位碳的化學(xué)位移為δ94. 0,確定過氧羥基的連接 位置為1