一種Toll樣受體4抑制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及羥基紅花黃色素 A作為Toll樣受體4抑制劑的 醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] Toll樣受體4(Toll like receptor 4，TLR4)，腦卒中是嚴(yán)重威脅人類健康的重要 疾?。‵eigin VL,Stroke epidemiology in the developing world,Lancet,2005；365： 2160-2161；Park TH，Redelmeier DA，Li S，et al.Academic Year-end Changeover and Stroke Outcomes?J Stroke Cerebrovasc Dis?2014；S1052-3057；Jauch EC?Saver JL? Adams HP Jr，et al. Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke：a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association . Stroke，2013;44:870-947; Marshall IJ，Wang Y，McKevitt C，et al. Trends in Risk Factor Prevalence and Management Before First Stroke：Data From the South London Stroke Register， Stroke，2013;44:1809-1816)，WH0發(fā)布的全球成人死亡率中占據(jù)第二位。其中，缺血性腦卒 中約占腦卒中的85 %，缺血、缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)損傷短期恢復(fù)血液灌注后，可加重中樞神經(jīng)系 統(tǒng)的損傷，導(dǎo)致患者出現(xiàn)截癱、意識(shí)不清，行動(dòng)不便等多發(fā)危險(xiǎn)，稱為腦缺血再灌注損傷 (Cerebral Ischemia/Reperfusion Injury，CIR)。腦缺血后再灌注可導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)的腦損 傷，其發(fā)病機(jī)制與固有免疫途徑介導(dǎo)炎癥反應(yīng)密切相關(guān)（Inose Y，Kato Y，Kitagawa K，et al. Activated microglia in ischemic stroke penumbra upregulated MCP-1 and CCR-2 expression in response tolysophosphatidyIcholine derived from adjacent neuiOns and astrocytes ,Neuropathology，2015，35:209-223) D 固有免疫系統(tǒng)對(duì)損傷的響 應(yīng)主要通過(guò)Toll樣受體（Quiniou SM，Boudinot P，Bengt6n E，Comprehensive survey and genomic characterization of Toll-like receptors (TLRs) in channel catfish， Ictalurus punctatus：identification of novel fish TLRs，Immunogenetics，2013;65: 511-30)，目前已確定有13個(gè)TLR家族受體為響應(yīng)受體(Kawai T，Akira S. TLR signaling. Cell Death Differ，2006;13:816-25)，其中Toll樣受體4 (Toll like receptor 4，TLR4) 為研究最多的受體。TLR4是中樞神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞的主要響應(yīng)受體(Johnson GB，Brunn GJ， Kodaira Y et al. Receptor-mediated monitoring of tissue well-being via detection of soluble heparan sulfate by Toll-like receptor 4.，J Immunol，2002; 168：5233-5239；Lehnardt S，Schott E，Trimbuch T，et al. A vicious cycle involving release of heat shock protein 60 from injured cells and activation of Tolllike receptor 4 mediates neurodegeneration in the CNS. J Neurosci，2008;28: 2320-233 I ； Kuang X ? Wang LF ? Yu L et a I·，LigustiIide ameliorates neuroinflammation and brain injury in focal cerebral ischemia/reperfusion rats：involvement of inhibition of TLR4/peroxiredoxin 6 signaling. Free Radic Biol Med，2014;71:165-715)，其能介導(dǎo)免疫相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。活化的 小膠質(zhì)細(xì)胞中，TLR4表達(dá)升高，可促進(jìn)炎癥活化和神經(jīng)毒性產(chǎn)生神經(jīng)損傷。腦缺血再灌注損 傷后（Ramos-Cejudo J?Gutierrez-Fernandez M?0ter〇-0rtega L et al. Brain-derived neurotrophic factor administration mediated oligodendrocyte differentiation and myelin formation in subcortical ischemic stroke. Stroke 2015;46:221-28)， NF-κΒ可作為核轉(zhuǎn)錄因子參與控制免疫和炎癥反應(yīng)(Gao Y，F(xiàn)ang X，Tong Y et al. TLR4-mediated MyD88_dependent signaling pathway is activated by cerebral ischemia- reperfusion in cortex in mice，Biomed Pharmacother，2009;63:442-450)，MAPK蛋白如 ERKl/2、p38、JNK的蛋白及其磷酸化均報(bào)道為TLR4途徑下介導(dǎo)的信號(hào)通路(Hu H，Li Z，Zhu X et al. GuaLou GuiZhi decoction inhibits LPS-induced microglial cell motility through the MAPK signaling pathway?Int J Mol Med?2013；32：1281-1286)? 核轉(zhuǎn)錄后炎癥因子TNF-a，IL_10和N0(Barton GM，Medzhitov R. Toll-like receptor signaling pathways · Science，2003; 300:1524-1525)的釋放均受到TLR4途徑上的活化D 目前已有多種抑制劑，TAK-242,系Toll樣受體4(TLR4)的人工合成拮抗劑(Matsunaga N， Tsuchimori N，Matsumoto T，et al.? TAK-242 (resatorvid)，a smal1-molecule inhibitor of Toll-like receptor (TLR) 4 signaling，binds selectively to TLR4 and interferes with interactions between TLR4 and its adaptor molecules，Mol Pharmacol，2011 ;79:34_41)，可通過(guò)抑制TLR4的Interleukin-1結(jié)合區(qū)域早前的研究已證 實(shí)，TAK-242可拮抗TLR4從而減弱腦出血引起的腦損傷(Wang YC，Wang PF，F(xiàn)ang H，et al. Toll-like receptor 4 antagonist attenuates intracerebral hemorrhage-induced brain injury. Stroke，2013;44:2545-2552)。綜上，設(shè)計(jì)或?qū)ふ乙訲LR4為作用靶點(diǎn)的抗腦 缺血再灌注損傷和抗神經(jīng)炎癥損傷等藥物的研究思路具有積極意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種Toll樣受體4抑制劑。本發(fā)明公開了羥基紅 花黃色素 A作為Toll樣受體4抑制劑的用途，其可用于制備治療或預(yù)防與Toll樣受體4相關(guān) 的疾病的藥物。
[0004] 本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問(wèn)題， 一種Toll樣受體4抑制劑，其特征在于，為羥基紅花黃色素 A。
[0005] 作為優(yōu)化，所述羥基紅花黃色素 A使用量為每千克體重使用l_4mg; 作為優(yōu)化，所述羥基紅花黃色素A使用量為每千克體重使用2mg。
[0006] 本發(fā)明利用系列親和色譜法發(fā)現(xiàn)了羥基紅花黃色素 A在小鼠腦缺血腦組織中的特 異性結(jié)合的蛋白（圖2)。并通過(guò)質(zhì)譜鑒定和蛋白免疫印跡技術(shù)鑒定該蛋白為TLR4。在此基礎(chǔ) 上采用大腦中動(dòng)脈栓塞模型middle cerebral artery occlusion，MCA0模型實(shí)驗(yàn)，考察了 羥基紅花黃色素 A的抑制腦缺血再灌注作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，羥基紅花黃色素 A具有降低腦 梗死體積、改善神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、抑制炎癥信號(hào)通路的作用。
【附圖說(shuō)明】
[0007] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例系列親和色譜原理示意圖； 圖2為本發(fā)明實(shí)施例羥基紅花黃色素 A與TLR4的特異性結(jié)合蛋白條帶電泳銀染圖； 圖3為本發(fā)明實(shí)施例多普勒血流儀監(jiān)測(cè)對(duì)腦缺血再灌注小鼠腦皮層血流量的影響圖； A:假手術(shù)組;B:MCAO模型組；C:HSYA I mg/kg;D: HSYA 2 mg/kg;E: HSYA 4 mg/kg;F: NIMO 2 mg/kg。