含川芎嗪基查爾酮芳氧烷酸類化合物、制備方法及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物化學領域，具體涉及含川芎嗪基查爾酮芳氧烷酸類化合物、其制 備方法及治療高血脂癥、動脈粥樣硬化的醫(yī)藥用途。
【背景技術】
[0002] 高脂血癥是人體脂代謝異常導致的血中脂質(zhì)和脂蛋白水平升高，包括總膽固 醇（TC)、甘油三酯（TG)、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C)水平過高和高密度脂蛋白膽固醇 (HDL-C)水平過低，是非酒精性脂肪肝、動脈粥樣硬化性心臟病和糖尿病等疾病發(fā)生的主要 危險因素[參見RossR.ThePathogenesisofatherosclerosis:aperspectiveforthe 1990s[J].Nature，1993, 362:801]。隨著人民生活水平的不斷提高，我國高脂血癥的發(fā)病率 不斷上升且呈現(xiàn)年輕化趨勢[參見趙文華，張堅，由悅.中國18歲及以上人群血脂異常 流行特點研究[J].中華預防醫(yī)學雜志，2005, 39 (5) : 306-310]。目前臨床上治療高脂血癥 常用的藥物主要有貝特類和他汀類藥物等，這些藥物雖然調(diào)血脂效果明顯，但價格昂貴且 易引起肝損傷。中醫(yī)學認為高脂血癥屬"痰濁"、"瘀血"范疇；"痰濁"是人體津液不歸正化 的病理產(chǎn)物，"瘀血"是人體血運不暢或離經(jīng)之血著而不去的病理表現(xiàn)。痰濁和瘀血作為病 理產(chǎn)物和致病因子，是高脂血癥發(fā)病的關鍵環(huán)節(jié)，所以對高脂血癥的治療以化痰降濁、活血 化瘀為主要原則[參見翁曉清，汪亞群.自擬中藥方治療痰瘀互結型高血脂癥80例療效 觀察[J].中醫(yī)藥臨床雜志，2006, 18(2) :147-148]?；谥嗅t(yī)學的思維，如果能設計出一類 既具有活血化瘀又具有降血脂作用的化合物將具有重要的臨床意義。
[0003] 發(fā)明人前期研究了結構特征一端為堿性基團，一端為酸性基團的川芎嗪芳酸醚類 化合物對對二磷酸腺苷（ADP)誘導的血小板聚集具有較好的抑制活性，結構式如下：
[0004]
[0005] 該化合物的抑制活性是奧扎格雷的5. 7倍，有很好的臨床應用價值[參見李家 明，趙永海，馬逢時，等.川芎嗪芳酸衍生物的合成及抗血小板聚集活性[J].有機化 學，2008, 28 (9) :1578-1583]。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明公開了一類含川芎嗪基查爾酮芳氧烷酸類化合物，結構特征上包含了一端 為堿性基團，一端為酸性基團，同時具有芳氧烷酸結構，期望所設計的化合物既具有抗血小 板聚集活性又具有降血脂活性，從而為治療高血脂癥及動脈粥樣硬化的治療提供新的選 擇。
[0007] 本發(fā)明的化合物結構式如下：
[0008]
[0009] 其中R代表Η或甲基A代表H、CH^C2H5。
[0010] 優(yōu)選下列任一化合物：
[0011]
[0012] 本發(fā)明還包括化合物（I)藥學上可接受的鹽，其藥學上可接受的鹽是化合物（I) 的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、精氨酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、枸櫞酸 鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽或醋酸鹽。
[0013] 藥效學實驗證明，本發(fā)明的化合物可用于治療或預防高血脂癥及動脈粥樣硬化疾 病。
[0014] 本發(fā)明所述的化合物可以添加藥學上可接受的載體制成常見的藥用制劑，如片 劑、膠囊、粉劑、糖漿、液劑、懸浮劑、針劑，可以加入香料、甜味劑、液體或固體填料或稀釋劑 等常用藥用輔料。
[0015] 本發(fā)明的化合物臨床所用劑量為0.Olmg~lOOOmg/天，也可根據(jù)病情的輕重或劑 型的不同偏離此范圍。
[0016] 化合物⑴可用下列方法制備：
[0017]
[0018] 以下通過實驗數(shù)據(jù)說明本發(fā)明化合物的有益效果
[0019] 實驗一體外抗血小板聚集實驗
[0020] 將雄性新西蘭家兔（體重1.8~2.2kg)用1 %鹽酸普魯卡因注射液局部麻醉，頸 動脈插管放血，和枸櫞酸鈉溶液（〇.38g枸櫞酸鈉與10mL生理鹽水配制成3. 8%的枸櫞酸鈉 溶液）以9:1混合，以1000r/min離心lOmin，取富血小板血漿（PRP)，剩余部分以3000r/ min離心lOmin，取貧血小板血衆(zhòng)（PPP)。采用肝微粒體體外溫孵方法：微粒體體外反應體 系一共lml，分別取NADP、G-PD、G-PDH、MgCl2以及肝微粒體適量，加入KC1-磷酸鹽緩沖液， 使反應體系終體積為lml，反應體系中分別含0. 5mmol/LNADP、5.Ommol/LG-6-PD、l.OU/mL G-6-PDH、5. 0mm〇l/LMgCl2、l.Omg/ml肝微粒體。取需要進行孵育的篩選藥物加入到微粒體 反應體系中，于37°C水浴中溫孵振蕩60min，放入-20°C冰箱內(nèi)終止反應。先取300μ1PPP 加入測試杯中，然后放入測試孔，按"ΡΡΡ"鍵進行定標。然后取280μ1PRP加入測試杯中， 加入10μ1不同濃度的藥液，在37°C預溫槽中預熱3min，放入測試孔后，按"開始"鍵時立 即加入誘導劑10μ1，以測定最大聚集率，并計算IC5。值。按下列公式計算血小板聚集抑制 率：血小板聚集抑制率（％) =[(空白對照組最大聚集率-給藥組最大聚集率）/空白對 照組最大聚集率]X100%。本發(fā)明化合物對AA和ADP誘導的血小板聚集的抑制活性見表 1〇
[0021] 表1化合物對AA和ADP誘導的血小板聚集的抑制活性
[0022]
[0023]
[0024] 體外抗血小板聚集實驗結果顯示，本發(fā)明的化合物均表現(xiàn)出一定的抗血小板聚集 作用，其中，化合物YA3和YA5對AA和ADP誘導的血小板聚集的抑制作用較強。雖然化合 物YA3和YA5的藥效作用弱于奧扎格雷和阿司匹林，但對同時具有降脂和活血化瘀作用的 藥物是有益的。
[0025] 實驗二本發(fā)明化合物對高脂血癥C57/BL6小鼠血脂的影響
[0026] 清潔級雄性健康野生型C57/BL6小鼠84只，隨機分成7組，每組12只，分別為空 白組（喂食普通飼料）、模型組（喂食高脂飼料，HFD)、陽性對照非諾貝特（FNB)45mg/kg 劑量組（喂食高脂飼料）、化合物YA345mg/kg、90mg/kg劑量組（喂食高脂飼料）、化合物 YA545mg/kg、90mg/kg劑量組（喂食高脂飼料）。各組灌胃給藥3周，于末次給藥后30min眼 球取血，3000r/min離心lOmin，分離血清，測定小鼠血清中總膽固醇（TC)，甘油三脂（TG)， 低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C)，高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C)的含量，測定方法按照試劑盒 說明書進行。數(shù)據(jù)以平均值土標準差表示，結果用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計分析，用t檢 驗評價實驗結果。本發(fā)明化合物對高血脂癥C57/BL6小鼠血脂水平的影響見表2。
[0027] 表2本發(fā)明化合物YA3和YA5對高血脂癥C57/BL6小鼠血脂水平的影響
[0028](η= 12，[±或 **P〈0.Olvs空白組；ΛΡ〈0· 05,ΛΛP〈0.Olvs模型組）
[0029]
[0030] 體內(nèi)降血脂活性結果顯示，化合物YA3、YA5具有較明顯的體內(nèi)降血脂活性，可以 明顯降低高脂血癥C57/BL6小鼠血清總膽固醇和低密度脂蛋白水平，并能升高顯高密度脂 蛋白水平。鑒于化合物YA3、YA5具有一定的抗抗血小板聚集作用，又具有明顯的降血脂活 性，呈現(xiàn)出良好的藥用前景。
【具體實施方式】
[0031] 實施例1
[0032] (E)-2-乙基-(4-(3-(3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）丙烯?；┍窖趸┮宜狨サ?合成（YA1)的制備1. 12-羥甲基-3, 5, 6-三甲基吡嗪的合成
[0033]
[0034] 反應步驟
[0035] 在250mL三頸燒瓶中依次加入川芎嗪（15. 0g，0.lmol)，30%H202溶液 (24mL，0. 2mol)，冰醋酸15mL，94°C反應12h，TLC(石油醚-乙酸乙酯1:1)檢測反應基本 完全后，冷卻下，用50%NaOH溶液調(diào)節(jié)pH= 10,二氯甲烷萃取（3X30mL)，合并有機相， 經(jīng)無水Na2S04干燥后，減壓濃縮，得川芎嗪單氮氧化物白色晶體13. 2g，收率78. 8%，mp 82. 4-84. 1°C。
[0036] 在250mL三頸燒瓶中依次加入川芎嗪單氮氧化物（13.2g，86.8mm〇l)，乙酸酐 (31. 2mL，330. 4mmol)，130°C反應5h，TLC(石油醚-乙酸乙酯1:1)檢測反應基本完全后，蒸 除過量乙酸酐，得（3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）乙酸甲酯中間體粗品。
[0037] 往上步反應得到（3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）乙酸甲酯中加入20%NaOH溶液 80mL，室溫反應12h，TLC(石油醚-乙酸乙酯1:1)檢測反應基本完全，過濾得濾液，用二 氯甲烷萃?。?X50mL)，合并有機相，經(jīng)無水Na2S04干燥，濃縮，石油醚重結晶，得2-羥甲 基-3, 5, 6-三甲基吡嗪淡黃色針狀結晶9. 7g，收率57. 8%，mp75. 3-77. 2°C。
[0038] 1. 23, 5, 6-三甲基吡嗪-2-甲醛的合成
[0039]
[0040] 反應步驟
[0041]在250mL三頸燒瓶中依次加入2-羥甲基-3, 5, 6-三甲基吡嗪（9. 5g，62. 5mmol)， Μη02 (16. 2g，187. 5mmol)，無水乙醇100mL，回流12h，TLC(石油醚-乙酸乙酯2:1)檢 測反應基本完全，冷卻，過濾得濾液，減壓回收乙醇，得黃色固體，經(jīng)硅膠柱色譜（石油 醚-乙酸乙酯4:1)純化，得3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-甲醛淡黃色固體8. 8g，收率93. 9%， mp84. 7-86. 5°C。
[0042] 1.3(E)-1-(4-羥基苯基）-3-(3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）丙-2-烯-1-酮的合成
[0043]
[0044] 反應步驟
[0045] 在10〇11^三頸燒瓶中依次加入3,5,6-三甲基吡嗪-2-甲醛（2.(^，13.3臟〇1)， 4-羥基苯乙酮（1.5g，11.Ommol)，無水乙醇10mL，冰浴條件下緩慢滴加入20%Κ0Η溶液 8.OmL，冰浴下反應10h，TLC(石油醚-乙酸乙酯2:1)檢測反應基本完全，將反應液倒入 100mL冰水中，用10%稀鹽酸調(diào)節(jié)pH= 6~7,析出黃色沉淀。過濾，濾餅用無水乙醇重結 晶，干燥得黃色晶體1. 〇g，收率33. 8%，mp129. 7-131.5°C。
[0046] 1.4(E)-2-乙基（4-(3-(3, 5, 6-三甲基吡嗪-2-基）丙烯?；┍窖趸┮阴サ?合成（YA1)
[0047]
[0048] 反應步驟
[0049] 在100mL三頸燒瓶中依次加入（E)-l-(4-羥基苯基）-3-(3, 5, 6-三甲 基吡嗪-2-基）丙-2-烯-1-酮（1.0g，3.7mmol)，ClCH2C00Et(0.6g，4.9mmol)， K2C03(0.77g，5.6mmol)，KI20mg，DMF10mL，90°C反應 6h，TLC(石油醚-乙酸乙酯 2:1) 檢測反應基本完全。冷卻，過濾，濾液加水50mL，乙酸乙酯（3X50mL)萃取，合并有機 相，飽和NaCl溶液（2X25mL)洗滌，經(jīng)無水Na2S04干燥后，減壓濃縮得黃色油狀物，經(jīng) 硅膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯5:1)純化得YA1淡黃色晶體0.9g，收率為68.2%，mp 119.1-120.3°C。4NMR(400MHz，CDCl3)S:8.21(d，J= 14·8Ηζ，1Η，=CH)，8.13(d，J= 8. 8Hz, 2Η,PhH), 7. 99 (d,J= 14. 8Hz, 1H, =CH), 7. 01 (d,J= 8. 8Hz, 2H,PhH), 4. 71 (s, 2 H, CH2), 4. 32 (q,J= 7. 2Hz, 2H,CH2), 2. 66 (s, 3H,CH3), 2. 57 (s, 3H,CH3), 2. 55 (s, 3H,CH3), I. 313 (t,J= 7. 2Hz, 3H,CH3);13CNMR(CDC13, 100MHz)δ: 188. 3, 168. 2, 161. 6, 152. 6, 149 .9, 149. 6, 143. 2, 137. 8, 131. 8, 131. 1, 126.