細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液（PBS)清洗以除去未貼壁細(xì)胞。然后分別添加不同濃度 (50 y g/mL、100 y g/mL、200 y g/mL、400 y g/mL、800 y g/mL 和 1000 y g/mL)的實(shí)施例 9 制備 的甘薯提取物I溶液和實(shí)施例9制備的甘薯抗癌活性物質(zhì)溶液（溶劑均為添加千分之一 DMSO的培養(yǎng)基），繼續(xù)培養(yǎng)48h。培養(yǎng)完成后，用100 ii L新鮮的培養(yǎng)基更新，每孔加20 ii L 的5. Omg/mL的MTT溶液后繼續(xù)孵育4h，吸管吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加150 ii L的DMSO,輕微 振蕩約IOmin使產(chǎn)生的紫色結(jié)晶物充分融解。再用酶標(biāo)儀于492nm下測定吸光值。甘薯粗 提物及甘薯抗癌活性物質(zhì)對癌細(xì)胞的增殖抑制率均采用下列公式進(jìn)行計(jì)算：
[0088] 細(xì)胞增殖抑制率（％) = (1-實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對照組吸光度值）X100。
[0089] 結(jié)果如表2和表3所示。
[0090] 表2甘薯提取物I與甘薯抗癌活性物質(zhì)對HT-29細(xì)胞的增殖抑制作用對比（％ )
[0092] 注：大寫字母代表不同濃度對抑制細(xì)胞增殖效果差異性，小寫字母代表不同物質(zhì) 對抑制細(xì)胞增殖效果差異性。
[0093] 由表2可知：所述甘薯提取物I和甘薯抗癌活性物質(zhì)對結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29增殖均 具有抑制作用，且甘薯抗癌活性物質(zhì)對結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的增殖抑制作用顯著高于甘薯提 取物I。甘薯抗癌活性物質(zhì)濃度為IOOU g ? mL \處理時(shí)間48h時(shí)，甘薯抗癌活性物質(zhì)對 HT-29細(xì)胞增殖的抑制率為82. 45% ;與甘薯提取物I相比，甘薯抗癌活性物質(zhì)對細(xì)胞增殖 抑制率提高了 44.48%。不同濃度（501^/1111、1001^/1111、2001^/1111、4001^/1111、8001^/ mL和1000 il g/mL)下，甘薯抗癌活性物質(zhì)對HT-29的抑制增殖作用均顯著高于甘薯提取物 I(P < 0? 05) 〇
[0094] 表3甘薯提取物I與甘薯抗癌活性物質(zhì)對Bcap-37細(xì)胞的增殖抑制作用對比 (% )
[0096] 注：大寫字母代表不同濃度對抑制細(xì)胞增殖效果差異性，小寫字母代表不同物質(zhì) 對抑制細(xì)胞增殖效果差異性。
[0097] 由表3可知：所述甘薯提取物I和甘薯抗癌活性物質(zhì)對乳腺癌細(xì)胞Bcap-37增殖 均具有抑制作用，且甘薯抗癌活性物質(zhì)對乳腺癌細(xì)胞Bcap-37的增殖抑制作用顯著高于甘 薯提取物I。甘薯抗癌活性物質(zhì)濃度為IOOU g ^mL \處理時(shí)間48h時(shí)，甘薯抗癌活性物質(zhì)對 HT-29細(xì)胞增殖的抑制率為65. 54% ;與甘薯提取物I相比，甘薯抗癌活性物質(zhì)對細(xì)胞增殖 抑制率提高了 29. 32%。不同濃度（50ii g/mL、100ii g/mL、200ii g/mL、400ii g/mL、800ii g/ mL和lOOOi! g/mL)下，甘薯抗癌活性物質(zhì)對Bcap-37的抑制增殖作用均顯著高于甘薯提取 物 I (P < 0? 05) 〇
[0098] 實(shí)施例14 :采用MTT法測定所述甘薯抗癌活性物質(zhì)對癌細(xì)胞的增殖抑制作用
[0099] 以每孔5X IO4個(gè)濃度的細(xì)胞（乳腺癌細(xì)胞Bcap-37或結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29)接種于 96孔板，用培養(yǎng)基調(diào)節(jié)每孔為200 ii L，在37°C和5 %的CO2濃度的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。形 成的單層細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液（PBS)清洗以除去未貼壁細(xì)胞。然后添加不同濃度（50 yg/ mL、100 ii g/mL、200 ii g/mL、400 ii g/mL、800 ii g/mL 和 1000 ii g/mL)的實(shí)施例 9 制備的甘薯 抗癌活性物質(zhì)溶液（溶劑為添加千分之一 DMSO的培養(yǎng)基），繼續(xù)培養(yǎng)24h、36h和48h。培 養(yǎng)完成后，用100 U L新鮮的培養(yǎng)基更新，每孔加20 ii L的5. Omg/mL的MTT溶液后繼續(xù)孵育 4h，吸管吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加150 ii L的DMS0,輕微振蕩約IOmin使產(chǎn)生的紫色結(jié)晶物充 分融解。再用酶標(biāo)儀于492nm下測定吸光值。甘薯抗癌活性物質(zhì)對癌細(xì)胞的增殖抑制率采 用下列公式進(jìn)行計(jì)算：
[0100] 細(xì)胞增殖抑制率（％) = (1-實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對照組吸光度值）X 100。
[0101] 結(jié)果如表4和表5所7JK。
[0102] 表4MTT法測定甘薯抗癌活性物質(zhì)對HT-29癌細(xì)胞增殖的抑制作用（％ )
[0104] 注：大寫字母代表不同濃度對抑制細(xì)胞增殖效果差異性，小寫字母代表不同處理 時(shí)間對抑制細(xì)胞增殖效果差異性。
[0105] 由表4可知：所述甘薯抗癌活性物質(zhì)對結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29的增殖抑制作用呈濃度 及時(shí)間依賴性，在分別采用不同濃度抗癌活性物質(zhì)對HT-29細(xì)胞進(jìn)行處理時(shí)，隨著濃度的 增大，甘薯抗癌活性物質(zhì)對HT-29的抑制增殖作用均顯著增強(qiáng)（P < 0. 05)。對于甘薯抗癌 活性物質(zhì)而言，隨著處理時(shí)間的延長，抑制率增大，當(dāng)以1000 P g ? mL 1處理48h時(shí)，抑制率 達(dá)到 99. 49%。
[0106] 表5MTT法測定甘薯抗癌活性物質(zhì)對乳腺癌細(xì)胞Bcap-37增殖的抑制作用（％ )
[0108] 注：大寫字母代表不同濃度對抑制細(xì)胞增殖效果差異性，小寫字母代表不同處理 時(shí)間對抑制細(xì)胞增殖效果差異性。
[0109] 由表5可知：所述甘薯抗癌活性物質(zhì)對乳腺癌細(xì)胞Bcap-37的增殖抑制作用呈濃 度及時(shí)間依賴性，在分別采用不同濃度甘薯抗癌活性物質(zhì)（50-1000U g ? mL 4對Bcap-37 細(xì)胞進(jìn)行處理時(shí)，隨著濃度的增大，甘薯抗癌活性物質(zhì)對Bcap-37的抑制增殖作用均顯著 增強(qiáng)（P < 〇. 05)。甘薯抗癌活性物質(zhì)濃度為1000 y g .mL \處理時(shí)間48h時(shí)，其對Bcap-37 細(xì)胞增殖抑制率為95. 20% ;隨著處理時(shí)間的延長，抑制率增大，處理時(shí)間48h時(shí)，抑制率達(dá) 到最大。
[0110] 實(shí)施例15 :結(jié)晶紫染色法測定所述甘薯抗癌活性物質(zhì)對癌細(xì)胞的增殖抑制作用
[0111] 用6孔板培養(yǎng)細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞（乳腺癌細(xì)胞Bcap-37或結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29)密度為 每孔I X IO6個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)方法與上述細(xì)胞增殖測定所述的方法相同。再加入1.0 mL新鮮配 制的樣品（〇. lmg/mL、0. 4mg/mL、lmg/mL實(shí)施例9制備的甘薯抗癌活性物質(zhì)（溶劑為添加千 分之一 DMSO的培養(yǎng)基））和培養(yǎng)基，除空白對照外，其余都含有l(wèi)OOng/mL佛波酯（PMA)。對 于用甘薯抗癌活性物質(zhì)處理24h或是對照實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞，抽去培養(yǎng)基，并用冰溫的PBS清洗細(xì) 胞兩次。加入ImL含0.2%的結(jié)晶紫（含10%甲醛的磷酸緩沖液）對細(xì)胞進(jìn)行染色，室溫 下反應(yīng)2min。然后將染色液除去，用冰溫的PBS清洗細(xì)胞兩次。粘附在孔上的細(xì)胞在顯微 鏡測定并拍照。
[0112] 結(jié)果如圖1和圖2所示。
[0113] 圖1為甘薯抗癌活性物質(zhì)對HT-29細(xì)胞增殖的影響（結(jié)晶紫法）。
[0114] 由圖1可知，甘薯抗癌活性物質(zhì)隨著濃度增大，染色的活HT-29細(xì)胞數(shù)量明顯減 少，甘薯抗癌活性物質(zhì)對HT-29細(xì)胞的增殖抑制作用呈濃度依賴性；這與MTT的測定結(jié)果相 一致。
[0115] 圖2為甘薯抗癌活性物質(zhì)對Bcap-37細(xì)胞增殖的影響（結(jié)晶紫法）。
[0116] 由圖2可知，甘薯抗癌活性物質(zhì)對Bcap-37的影響也呈現(xiàn)一定的濃度依賴性；這與 MTT的測定結(jié)果相一致。
[0117] 實(shí)施例16 :甘薯抗癌活性物質(zhì)抗癌細(xì)胞粘附測定
[0118] 將培養(yǎng)好的HT-29和Bcap-37細(xì)胞消化后，反復(fù)吹打使其分散均勻，用倒置顯微鏡 計(jì)數(shù)后，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度。以密度為5 X IO5/孔的細(xì)胞懸液密度接入12孔細(xì)胞培養(yǎng)板，1.0 mL/ 孔，于37°C、5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，吸棄培養(yǎng)基，用PBS清洗。再加入1.0 mL新鮮 配制的樣品（0. lmg/mL、0. 4mg/mL、lmg/mL實(shí)施例9制備的甘薯抗癌活性物質(zhì)（溶劑為添加 千分之一 DMSO的培養(yǎng)基））和培養(yǎng)基，除空白對照外，其余都含有l(wèi)OOng/mL佛波酯（PM)。 于37°C及5%的CO2培養(yǎng)箱中再培養(yǎng)24h，吸棄培養(yǎng)液，用PBS沖洗2次，每孔加入600uL的 胰酶消化3min。然后把12孔板置于室溫IOOrpm下?lián)u動(dòng)，計(jì)算癌細(xì)胞完全消化下來的時(shí)間 (min) 〇
[0119] 結(jié)果如表6所示。
[0120] 表6甘薯抗癌活性物質(zhì)對HT-29和Bcap-37細(xì)胞粘附的抑制作用（min)
[0123] 注：大寫字母代表不同濃度對抑制細(xì)胞增殖效果差異性，小寫字母代表對不同細(xì) 胞增殖抑制效果差異性。
[0124] 由表6可知：經(jīng)所述甘薯抗癌活性物質(zhì)作用HT-29和Bcap-37細(xì)胞24h后，HT-29 和Bcap-37細(xì)胞完全消化下來的時(shí)間均顯著小于加入PMA而不加甘薯抗癌活性物質(zhì)處理的 對照組；隨著甘薯抗癌活性物質(zhì)濃度（IOOug/mL、400iig/mL和1000 iig/mL)的增大，癌細(xì) 胞的粘附作用顯著減弱（P < 〇. 05);在抗癌活性物質(zhì)濃度小于400iig/mL時(shí)，細(xì)胞完全消 化下來的時(shí)間仍顯著小于對照組（P < 0. 05)。對于HT-29細(xì)胞，甘薯抗癌活性物質(zhì)濃度為 1000 iig/mL時(shí)，甘薯抗癌活性物質(zhì)處理組細(xì)胞完全消化下來的時(shí)間為5. 35min，與對照組 相比縮短了 55.8% ;對于Bcap-37細(xì)胞，甘薯抗癌活性物質(zhì)濃度為1000 ilg/mL時(shí)，甘薯抗 癌活性物質(zhì)處理組細(xì)胞完全消化下來的時(shí)間為4. 72min，與對照組相比縮短了 57. 0%。
[0125] 實(shí)施例17 :劃痕愈合試驗(yàn)測定甘薯抗癌活性物質(zhì)對癌細(xì)胞遷移的影響