一種腫瘤靶向絲裂霉素c類脂質(zhì)體及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥類抗腫瘤藥物制劑領(lǐng)域，特別是涉及一種防止惡性腫瘤生長和復(fù)發(fā)的腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]絲裂霉素C(Mitomycin C，MMC)，Mr334.37，氮丙啶類衍生物，是一種從放線菌Streptomyces caespitosus的培養(yǎng)液中分離得到的抗腫瘤抗生素,屬細(xì)胞周期非特異性抗腫瘤藥，抗瘤譜廣。MMC為藍(lán)紫色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，在安瓿中呈針狀或柱狀，可溶于水，其水溶液對酸、堿、光、熱皆不穩(wěn)定，在PH為6?9時較穩(wěn)定；易溶于N，N二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亞砜(DMSO)等強極性溶劑；微溶于甲醇、丙酮、乙酸丁酯；略溶于苯、四氯化碳、乙醚；不溶于石油醚。結(jié)晶粉末很穩(wěn)定，100°C加熱4h不降低效價。
[0003]絲裂霉素的作用機制:MMC分子中具有烷化功能的氨甲酰基與氮丙啶官能團(tuán)在一定情況下被激活后，成為不同的解離狀態(tài)。激活態(tài)的MMC的主要作用為使互補的DNA雙鍵之間形成交聯(lián)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的DNA的復(fù)制與合成，而不是直接影響RNA。絲裂霉素C和DNA結(jié)合時，大部分只和其中的一條鏈結(jié)合，一部分形成交聯(lián)而阻礙了 DNA雙鏈的拆開，同時也引起單鏈斷裂。
[0004]該藥臨床用于治療消化道癌、肺癌、肝癌、乳腺癌等多種腫瘤。其中MMC-C是該類抗生素中研究得較深入和臨床最常用的一種。但其具有全身毒性，特別是持久的骨髓抑制，白細(xì)胞和血小板減少、惡心、嘔吐、腹瀉、胃炎、皮炎發(fā)熱和不適等亦有發(fā)生，并可引起溶血性尿毒綜合癥(HUS)。據(jù)文獻(xiàn)報道，在接受MMC治療5-12個月后，約10%的腺癌患者發(fā)生HUS，引起腎功能減退，當(dāng)累計劑量超過60mg后，更易發(fā)生HUS，且停藥后癥狀持續(xù)加重。MMC對心、肺等臟器的毒性也有報道，這些毒副作用極大的限制了它的應(yīng)用。目前市場使用的MMC制劑有粉針劑、片劑、微膠囊劑等。徐英宏等還將絲裂霉素制成栓劑用于治療直腸癌和結(jié)腸癌，但是這些傳統(tǒng)劑型常常因為毒副作用大，或患者不能耐受而被迫停藥。
[0005]近幾年國內(nèi)外出現(xiàn)的絲裂霉素C的新劑型包括毫微粒、納米粒粉針劑、乳劑等。毫微粒(nanoparticles)通常包括毫微囊(nanocapsules)和毫微球(nanospheres)，是由天然或合成的高分子材料制成，粒徑約在I?100nm的固態(tài)膠體顆粒。Sansozena等作了絲裂霉素毫微粒劑的研究，實驗過程利用聚己內(nèi)酯裝載藥物絲裂霉素C，很大程度上提高了MMC的包封率(從7.93%到13.2%)，并且保證了 79%?80%的藥物在Ih內(nèi)釋放，且6h后的剩余含藥量僅為10%?20% ；Bilensoy等認(rèn)為小于400nm的毫微粒制劑在膀胱的腫瘤組織滲透能力較強，可達(dá)到一定的靶向作用，提高療效；乳劑是粒徑為I?10nm的乳滴分散在另一種液體中形成的膠體分散系統(tǒng)；KaradeniZ等利用原料泛影葡胺、碘油、絲裂霉素、司盤-80、表面活性劑異丙醇制備了 MMC乳劑，并用電化學(xué)的方法檢測了這一新型藥物輸送系統(tǒng)。制備過程:用泛影葡胺溶解絲裂霉素，加入2倍量的碘化油，按每毫升碘化油加入2滴滅菌的司盤-80，充分振搖成為均勻灰白色的乳劑，制成的乳劑具有一定的穩(wěn)定性，靜置24h后仍能呈均勻狀態(tài)；周紅玲等制備利用乳化聚合法結(jié)合微射流技術(shù)制備MMC-PBCA-NP粉針劑，生物相容性實驗證明，mmc-pbca-np沒有溶血性。
[0006]中國發(fā)明專利(公開號:CN101045049A)，涉及供注射用的一種絲裂霉素C多泡脂質(zhì)體及其制備方法，其特征是將絲裂霉素C溶于緩沖鹽溶液中作為水相與油相(含脂質(zhì)體成分)形成油包水初乳，然后再形成水包油包水的復(fù)乳多泡脂質(zhì)體。盡快該脂質(zhì)體有較高的包封率和一定的緩釋效果，但制劑穩(wěn)定性差，沒有靶向性。
[0007]中國發(fā)明專利(公開號:CN101327190)，涉及一種供注射用的抗腫瘤長循環(huán)靶向脂質(zhì)體，其特征在于將抗血管藥物與抗腫瘤藥物聯(lián)合，采用具有腫瘤部位靶向功能的多肽和親水性聚乙二醇(PEG)同時修飾的脂質(zhì)體進(jìn)行裝載，將二種藥物輸送到腫瘤部位，通過兩種藥物不同的釋放速率和作用機理，增強腫瘤治療效果。但該制劑同樣涉及穩(wěn)定性差等特點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]為解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體及其制備方法。
[0009]本發(fā)明的技術(shù)方案為提供一種腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體，包括原料藥絲裂霉素C、載體材料和靶向分子，所述載體材料包括卵磷脂和DSPE-PEG，所述靶向分子為葉酸，所述絲裂霉素C與卵磷脂的摩爾比為:1:1?4 ;所述DSPE-PEG和葉酸的總質(zhì)量占絲裂霉素C和卵磷脂復(fù)合物總質(zhì)量的5-40%。
[0010]優(yōu)選，上述卵磷脂為蛋黃卵磷脂或大豆卵磷脂。
[0011]本發(fā)明的另一技術(shù)方案為提供一種腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體的制備方法，包括如下步驟:
[0012](I)將絲裂霉素C和卵磷脂溶于有機溶劑A中，所述有機溶劑A為二甲基亞砜，四氫呋喃或二甲基甲酰胺，40-60°C水浴反應(yīng)2-6h，減壓除去反應(yīng)溶劑有機溶劑A，加入有機溶劑B洗滌，所述有機溶劑B為二氯甲烷，丙酮或三氯甲烷，過濾收集溶液，旋蒸干燥得紫色的粘稠狀物質(zhì)即絲裂霉素C和卵磷脂復(fù)合物；
[0013](2)將絲裂霉素C和卵磷脂復(fù)合物溶解于有機溶劑B中，作為油相加入到水相中，去除有機溶劑B，用微孔濾膜過濾，得到絲裂霉素C類脂質(zhì)體溶液；
[0014](3)將絲裂霉素C脂質(zhì)體溶液和DSPE-PEG-FA在40_6(TC下混合水浴0.5_lh，使用3500分子量的透析袋進(jìn)行透析去除未反應(yīng)的DSPE-PEG-FA，再通過微孔濾膜過濾，得到腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體溶液，凍干得到其凍干制品。
[0015]優(yōu)選的，上述的腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體的制備方法中，所述的DSPE-PEG-FA制備方法如下:首先葉酸用N，N’ - 二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺活化，活化后的葉酸與DSPE-PEG-Nh2在氮氣存在的情況下反應(yīng)制得。
[0016]優(yōu)選的，上述的腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體的制備方法中，所述絲裂霉素C與卵磷脂的摩爾比為:1:1?4。
[0017]優(yōu)選的，上述的腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體的制備方法中，所述DSPE-PEG-FA占絲裂霉素C和卵磷脂復(fù)合物質(zhì)量的5-40%。
[0018]優(yōu)選的，上述的腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體的制備方法中，包括如下步驟:
[0019]( I)將絲裂霉素C和大豆卵磷脂溶于四氫呋喃中，所述絲裂霉素C與大豆卵磷脂的摩爾比為:1:3 ;40°C水浴反應(yīng)4h，減壓除去反應(yīng)溶劑四氫呋喃，加入二氯甲烷洗滌，過濾收集溶液，旋蒸干燥得紫色的粘稠狀物質(zhì)即絲裂霉素C和卵磷脂復(fù)合物；
[0020](2)將絲裂霉素C和卵磷脂復(fù)合物溶解于二氯甲烷中，作為油相加入到水相中，去除二氯甲烷，用I微米微孔濾膜過濾，得到絲裂霉素C類脂質(zhì)體溶液；
[0021](3)將絲裂霉素C類脂質(zhì)體溶液和DSPE-PEG-FA在50°C條件下混合水浴0.5h，所述DSPE-PEG-FA占絲裂霉素C和卵磷脂復(fù)合物質(zhì)量的20%,使用3500分子量的透析袋進(jìn)行透析去除未反應(yīng)的DSPE-PEG-FA，再通過I微米微孔濾膜過濾，得到腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體溶液，凍干得到其凍干制品。
[0022]本發(fā)明有益效果:本發(fā)明腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體其載體材料為卵磷脂和DSPE-PEG ;靶向分子為葉酸，其為球形，粒徑在100-500nm之間分布，穩(wěn)定性好，具有較好的靶向及緩釋特性，具有裸藥所不具備的低毒性，長效性和高效性等特點。
【附圖說明】
[0023]圖1為荷瘤小鼠尾靜脈注射器官分布熒光圖；
[0024]圖2為釋藥曲線；
[0025]其中:
[0026]A組為MMC純藥；B組為絲裂霉素C類脂質(zhì)體；C組為腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體；a為MMC純藥；b為絲裂霉素C類脂質(zhì)體；c為PEG修飾的絲裂霉素類脂質(zhì)體；d為腫瘤靶向絲裂霉素C類脂質(zhì)體。
【具體實施方式】
[0027]為詳細(xì)說明本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、構(gòu)造特征、所實現(xiàn)目的及效果，以下結(jié)合實施方式詳予說明。
[0028]實例1:秤取大豆卵磷脂、絲裂霉素(摩爾比為:4:1)，置于圓底燒杯中，加入適量四氫呋喃溶解，40°C水浴反應(yīng)4h，減壓除去反應(yīng)溶劑四氫呋喃，再加入適量的三氯甲烷洗滌，過濾收集溶液，旋蒸干燥得紫色的粘稠狀物質(zhì)絲裂霉素C和卵磷脂復(fù)合物；
[0029]將絲裂霉素C和卵磷脂復(fù)合物溶解于三氯甲烷中，作為油相緩慢加入到水相中，攪拌去除有機溶劑后用I微米的微孔濾膜過濾，得到絲裂霉素C類