專利名稱：新型聚(丙二酸亞甲基酯)微球體、其制備方法及其藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及尤其是在藥物領(lǐng)域中用于輸送口服給藥的生物活性物質(zhì)、尤其是親水性物質(zhì)(肽或蛋白質(zhì))的顆粒載體的新型微球體。
本發(fā)明還涉及制備這些微球體的方法以及含有它們的藥物組合物。
在本申請中，術(shù)語“微球體”應(yīng)該被理解為基本上為球形的顆粒，平均直徑為1-100μm、優(yōu)選5-100μm， 由載體材料的密度或大或小的連續(xù)網(wǎng)絡(luò)形成。
這些微球體不同于由包圍空腔的壁組成的微膠囊。然而，應(yīng)該注意在多乳液中制備的微球體可能含有小球的集合體，所述小球分散在組成它們的連續(xù)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中。
對于上述后一種情況，這些小球的總體積通常為微球體總體積的1/20-1/2。
近年來，許多研究表明基于聚合物的顆粒系統(tǒng)能夠用于改變有治療活性的物質(zhì)的釋放特性。
因此，已經(jīng)通過各種技術(shù)制備出基于合成聚合物例如聚(乳酸)、乳酸-羥基乙酸共聚物、聚苯乙烯、聚(ε-己內(nèi)酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)或者基于甲基纖維素或乙基纖維素的微球體。
然而，這樣得到的微球體通常是非生物降解性的，并且，即使它們是生物降解性的，也呈現(xiàn)隨著時(shí)間推移明顯地延遲降解的特征。
因此，例如，對于基于聚(乳酸)的微球體來說，降解是非漸進(jìn)性的，并且需要在明顯長的時(shí)間間隔后才發(fā)生。
而且，乳酸聚合物通過釋放強(qiáng)酸性產(chǎn)物降解，這樣不僅導(dǎo)致聚合物降解的自催化作用，并且將導(dǎo)致其同被包封的物質(zhì)不相容。
對于其它所用的聚合物來說，微球體的降解速度非常低，甚至沒有降解。
所述顆粒在機(jī)體中的保留時(shí)間可能限制人們的再次使用。
最后，對于已知的微球體來說，多數(shù)具有明顯的疏水性，這樣促進(jìn)了其與被包封物質(zhì)之間的強(qiáng)相互作用并常常導(dǎo)致其與被包封物質(zhì)之間的變性作用，特別是當(dāng)后者為蛋白質(zhì)或肽時(shí)，情況更是如此。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有可能制備新的微球體，其能夠克服現(xiàn)有技術(shù)中微球體的缺陷。這也是本發(fā)明的基礎(chǔ)。
因此，根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，本申請涉及由其中任選地分散某種物質(zhì)的載體材料的連續(xù)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成的微球體，其特征是所述載體材料含有至少70％重量由下列通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元組成的均聚物 其中-R1代表含有1-6個(gè)碳原子的烷基或其中m為1-5的整數(shù)并且R3為具有1-6個(gè)碳原子的烷基的-(CH2)m-COOR3基團(tuán)；-R2代表含有1-6個(gè)碳原子的烷基；和-n為1-5的整數(shù)。
已經(jīng)證明由于組成微球體基質(zhì)的聚合物的化學(xué)性質(zhì)，這些新的微球體---具有漸進(jìn)性和調(diào)整的降解動(dòng)力學(xué)；---能夠高效地包封親水性物質(zhì)，特別是生物來源的物質(zhì)；而且，已經(jīng)非常令人驚奇地和令人意外地觀察到，這些微球體能夠---當(dāng)其與抗原結(jié)合時(shí)能夠誘導(dǎo)刺激免疫反應(yīng)；---在某些情況下，當(dāng)口服給藥時(shí)能夠抑制過敏性病理學(xué)反應(yīng)(誘導(dǎo)耐受性)。
因此，形成微球體基質(zhì)的聚合物材料特性組成本發(fā)明的獨(dú)創(chuàng)性。
所述聚合物材料基本上由含有通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元的均聚物組成。
這樣的聚合物具有顯著的生物兼容和生物浸蝕特性，即其能通過裂解外側(cè)取代基進(jìn)行化學(xué)或生物化學(xué)降解。
根據(jù)本發(fā)明，微球體的浸蝕速度取決于載體材料的分子量。因此，僅僅通過應(yīng)用具有適合于所需浸蝕速度的分子量的載體材料就可以調(diào)節(jié)浸蝕速度。
因此，本發(fā)明微球體具有漸進(jìn)性和可調(diào)節(jié)的生物浸蝕性，這樣可以例如把分散在載體材料中的生物活性物質(zhì)輸送至其最有效地發(fā)揮作用的機(jī)體部位。
微球體的生物浸蝕性還防止其在機(jī)體中的聚集，因此其應(yīng)用不再受到限制。
根據(jù)其具體特性，上面提到的均聚物由通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元組成，其中R1代表含有1-6個(gè)碳原子的烷基；R2代表含有1-6個(gè)碳原子的烷基；和n為1；優(yōu)選地，R1和R2代表CH2-CH3基團(tuán)。
這些不同種類的聚(丙二酸亞甲基基酯)類聚合物特別適合用于包封親水性物質(zhì)，特別是生物來源的物質(zhì)和任選生物活性的物質(zhì)。“生物活性分子”以非限制性方式表示任何在體內(nèi)或體外具有預(yù)防或治療生物學(xué)作用的分子，尤其是抗感染劑，特別是抗菌劑、抗生素、抗病毒劑、抗寄生蟲劑或抗細(xì)胞分裂劑，特別是抗腫瘤劑。
可以應(yīng)用的抗生素或抗菌劑可以是例如利福平和粘菌素。
二脫氧肌苷、利巴韋林、齊多夫定、阿昔洛韋、更昔洛韋、膦甲酸、阿糖腺苷和扎西他賓可以作為抗病毒劑的非限制性例子。
例如，順鉑和紫杉酚可以用作抗腫瘤劑。
根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案，微球體的載體材料含有90％-99.5％重量如上定義的均聚物；和0.5％-10％重量含有至少一種親水特性序列和至少一種疏水特性序列的共聚物，其中所述疏水特性序列優(yōu)選含有至少一個(gè)通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元。
有利地，上面提到的共聚物的親水特性序列選自聚(氧乙烯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(N-2-羥丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羥乙基酯)、親水性聚(氨基酸)例如聚賴氨酸、多糖，優(yōu)選聚(氧乙烯)。
所述共聚物可以具有嵌段結(jié)構(gòu)、優(yōu)選二嵌段或三嵌段結(jié)構(gòu)或者具有接枝結(jié)構(gòu)。
把這樣的共聚物加入到載體材料中可以使各個(gè)微球體中被包封的物質(zhì)均勻地分散。
這樣把共聚物加入到載體材料中還可以調(diào)節(jié)微球體表面的親水/疏水性比例，并防止或限制其與被包封物質(zhì)之間發(fā)生強(qiáng)大的并經(jīng)常變性的相互作用。
而且，對于這些共聚物來說，其疏水性序列的化學(xué)特性等同于構(gòu)成微球體主要部分的均聚物的化學(xué)特性，這些共聚物特別有利于實(shí)施目前優(yōu)選的微球體制備方法，所述方法在下面將更詳細(xì)地得到解釋。
通常來說，本發(fā)明的微球體可以通過實(shí)施包括下列步驟的方法得到--制備具有三相的多重乳液，其中間相由聚合物溶液組成，所述聚合物組成揮發(fā)性有機(jī)溶劑中的載體材料；和--蒸發(fā)所述有機(jī)溶劑，其條件是能夠引起組成內(nèi)相的小滴周圍的聚合物沉淀。
所述多重乳液可以通過經(jīng)典方式得到將油包水型的第一乳液分散于含有穩(wěn)定劑的第二水相中。
該多重乳液也可以通過“逆向”方法得到，該方法包括把水溶液傾入油包水型第一乳液中。非常令人意外地，該“逆向”方法得到非常顯著的效果，有時(shí)甚至比上述經(jīng)典技術(shù)得到的效果更好。
因此，根據(jù)第二方面，本發(fā)明涉及上述獲得微球體的方法，該方法包括
a)在任選含有表面活性劑的揮發(fā)性有機(jī)溶劑中制備上述組成載體材料的聚合物的第一種溶液，b)制備第二種同a)中所得溶液不相混溶的第二種溶液，任選地含有待分散的所述物質(zhì)和任選的表面活性劑，c)通過把第二種溶液分散于第一種溶液中制備第一種乳液，該連續(xù)相由聚合物溶液組成，d)按下列任意一種方式制備第二種乳液--或者在攪拌作用下把c)中得到的第一乳液分散于同所述第一乳液不相混溶的分散介質(zhì)中，所述分散介質(zhì)任選地含有穩(wěn)定劑；--或者在攪拌作用下把由同第一種乳液不混溶的任選地含有穩(wěn)定劑的介質(zhì)組成的溶液傾入所述第一種乳液中，e)在攪拌下蒸發(fā)所述有機(jī)溶劑。
根據(jù)本發(fā)明的具體特性，上述方法還包括f)離心分離微球體g)對所述微球體進(jìn)行一次或多次連續(xù)洗滌h)對所述微球體進(jìn)行冷凍干燥。
因此，本發(fā)明微球體的制備方法的第一步驟包括優(yōu)選在合適表面活性劑存在下制備一種油包水型乳液，其中油相或有機(jī)相含有用于組成所述微球體載體材料的聚合物。
首先，任選地在表面活性劑存在下，通過合適的揮發(fā)性有機(jī)溶劑制備構(gòu)成載體材料的聚合物的溶液。
有利地，只要所述基本上組成微球體載體材料的均聚物能夠在得到良好摩爾質(zhì)量和質(zhì)量分散特性的條件下得到，就可以在此步驟中應(yīng)用預(yù)先制備的聚合物。
例如通過EP 283346(相應(yīng)于US 4,931,584和US 5,142,098)記載的方法(上述專利在此引入作為參考)，可以從單體制備通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元組成的均聚物，所述單體通常在槳式泵的真空作用下脫氣直至重量恒定為止，以便除去聚合反應(yīng)抑制劑(SO2)。
然而，有利地，這些均聚物將在質(zhì)子惰性溶劑中以陰離子方式制備，例如把單體分散在丙酮中，然后在攪拌下加入氫氧化鈉，再蒸發(fā)丙酮，干燥如此獲得的聚合物。
其他質(zhì)子惰性有機(jī)溶劑例如乙腈、二噁烷和四氫呋喃可以用來代替丙酮。
能夠通過實(shí)施該方法獲得的均聚物分子量可以通過合理地選擇操作條件完美地進(jìn)行控制，其中所述的操作條件特別地包括有機(jī)相中單體的濃度、pH值和聚合反應(yīng)引發(fā)劑(氫氧化鈉)的體積摩爾濃度。
通常地，平均分子量為1,000-100,000、優(yōu)選5,000-80,000的均聚物可以用于本發(fā)明。
通常選擇揮發(fā)性有機(jī)溶劑來制備含有用于組成載體材料的聚合物的第一種溶液，使其沸點(diǎn)比水低。因此，有可能在最后的蒸發(fā)步驟中通過使聚合物沉淀以便容易地除去該溶劑。
乙酸乙酯屬于特別適合此目的的揮發(fā)性有機(jī)溶劑。
可以用于穩(wěn)定第一種乳液的表面活性劑可以具有不同的特性，并將被加入含有聚合物的有機(jī)相(第一種溶液)和/或組成分散相的水相(第二種溶液)中。
可以舉出的例子如泊咯沙姆如商品名為PluronicF68的市售產(chǎn)品、或者聚乙烯醇如商品名為Mowiol40-88的市售產(chǎn)品、或者聚山梨醇酯、或者其中疏水性序列化學(xué)特性與由通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元組成的均聚物相同的表面活性劑共聚物。
已經(jīng)表明這樣的表面活性劑共聚物、特別是聚(丙二酸亞甲基酯)和聚氧乙烯共聚物是特別有利的，因?yàn)樗鼈円环矫婺軌虻玫椒浅７€(wěn)定的第一乳液，另一方面在蒸發(fā)溶劑后能夠在基質(zhì)中獲得良好的表面活性劑粘固效果。
可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的經(jīng)典聚合技術(shù)制備上述表面活性劑共聚物。
在這些技術(shù)中，優(yōu)先選用陰離子聚合反應(yīng)、自由基聚合反應(yīng)或者共聚物前體序列偶聯(lián)技術(shù)。這些序列預(yù)先在鏈末端進(jìn)行充分的官能化反應(yīng)。
陰離子聚合反應(yīng)更特別地適合于制備嵌段共聚物。
陰離子聚合反應(yīng)包括單體接續(xù)加成反應(yīng)，并獲得完全定義結(jié)構(gòu)的共聚物，引發(fā)劑和單體的用量能夠控制各個(gè)序列的聚合度。
還可以通過下列方式得到嵌段共聚物--通過第一種單體的陰離子聚合反應(yīng)和第二種單體的鏈增長反應(yīng)；--或者通過活化充當(dāng)?shù)诙N單體的聚合反應(yīng)引發(fā)劑的前體聚合物。
可以用于陰離子聚合反應(yīng)的引發(fā)劑通常為--一方面，有機(jī)金屬衍生物，例如丁基鋰，特別是二苯基己基鋰；--另一方面，可以通過借助異丙苯基鉀、二苯基甲基鉀、萘基鉀活化羥基產(chǎn)生的烷氧化物，特別是大分子烷氧化物例如POE烷氧化物。
通常在能夠與共聚物各個(gè)嵌段兼容的溶劑中進(jìn)行陰離子聚合反應(yīng)。
如果具有親水性特性的序列由聚(氧乙烯)組成，并且疏水性序列由聚(丙二酸亞甲基酯)組成，這樣所述嵌段共聚物優(yōu)選這樣制備通過環(huán)氧乙烷和丙二酸亞甲基酯依次進(jìn)行陰離子聚合反應(yīng)或者通過對市售單羥基化聚氧乙烯化前體進(jìn)行活化，然后接著進(jìn)行聚(丙二酸亞甲基酯)序列的陰離子聚合反應(yīng)。
通常地，優(yōu)選應(yīng)用四氫呋喃作為聚合反應(yīng)的溶劑，該物質(zhì)能夠使反應(yīng)在均相介質(zhì)中進(jìn)行，并且能夠有利地影響聚合反應(yīng)動(dòng)力學(xué)。
制備親水序列所用的單體通常為市售產(chǎn)品。
偶聯(lián)技術(shù)也更特別適合制備嵌段共聚物。
在偶聯(lián)劑存在下，并任選地在活化劑存在下，通常在合適的溶劑中由預(yù)先合成的官能化的均聚物進(jìn)行該反應(yīng)。
在其中親水序列由聚氧乙烯組成和疏水序列由聚(丙二酸亞甲基酯)組成的本發(fā)明優(yōu)選共聚物的制備過程中，優(yōu)選應(yīng)用被α-羧基-官能化的聚(氧乙烯)均聚物和α-羥基-官能化的聚(丙二酸亞甲基酯)均聚物。
例如，可以通過用琥珀酸酐轉(zhuǎn)化市售α-羥基官能化聚(氧乙烯)得到α-羧基-官能化聚(氧乙烯)均聚物。
可以直接通過在水介質(zhì)中進(jìn)行陰離子合成或者通過使用氫氧化鈉水溶液作為聚合引發(fā)劑在溶劑中進(jìn)行陰離子合成來得到α-羥基官能化的聚(丙二酸亞甲基酯)均聚物。
二環(huán)己基碳二亞胺(DCCI)將有利地用作特別適合該聚合反應(yīng)的偶聯(lián)劑。
該偶聯(lián)反應(yīng)可以任選地通過堿催化反應(yīng)活化，并且通常在與均聚物相容的溶劑中發(fā)生，所述溶劑在本發(fā)明優(yōu)選共聚物的特定情況下具體地為例如二氯甲烷。
自由基聚合反應(yīng)更特別適合制備接枝共聚物。
通常由大分子單體也就是其末端之一帶有能夠進(jìn)行游離基聚合反應(yīng)并且能夠同單體反應(yīng)生成具有接枝結(jié)構(gòu)的共聚物的烯基的低聚物進(jìn)行聚合反應(yīng)。
通常在合適的溶劑中在引發(fā)劑存在下進(jìn)行所述聚合反應(yīng)。
有可能應(yīng)用各種官能化的大分子單體來制備其中親水序列由聚(氧乙烯)組成的共聚物。
更特別優(yōu)選地，應(yīng)用甲基丙烯?；倌芑木?氧乙烯)大分子單體。
這樣的產(chǎn)品可以是市售的(Aldrich)，并可以由例如分子量為308-440g/mol的聚(氧乙烯)鏈組成，或者由市售聚(乙二醇)單甲基醚通過在二氯甲烷中同甲基丙烯酸偶聯(lián)形成甲氧基末端官能團(tuán)來制備。
這樣的大分子單體甚至可以通過活化聚(氧乙烯)然后使其同甲基丙烯酰氯反應(yīng)來制備。
還可以通過預(yù)合成的聚(丙二酸亞甲基酯)外側(cè)酯鏈與聚(氧乙烯)單甲醚進(jìn)行酯基轉(zhuǎn)移反應(yīng)來制備具有接枝結(jié)構(gòu)的共聚物。
所述酯基轉(zhuǎn)移反應(yīng)通常在升溫和催化劑存在下用醇進(jìn)行。
其中疏水性序列分子總量為1,000-80,000g/mol、優(yōu)選1,000-50,000g/mol的共聚物特別適合于本發(fā)明。
通常地，有可能通過應(yīng)用例如Ultraturrax型(13,500rpm-5分鐘)剪切勻化器獲得用于制備本發(fā)明微球體的第一種乳液。
通常把被包封的物質(zhì)加入到第一種乳液的分散水相中。
本發(fā)明微球體制備方法的第二個(gè)步驟包括制備第二種乳液--在攪拌下，把第一個(gè)步驟得到的第一種乳液分散于同所述第一種乳液不相混溶的分散介質(zhì)中，所述分散介質(zhì)任選含有穩(wěn)定劑；--或者，在攪拌下把由同所述第一種乳液不相混溶的介質(zhì)組成的溶液傾入到所述第一種乳液中，所述介質(zhì)任選含有穩(wěn)定劑。
通常地，同第一種乳液不相混溶的分散介質(zhì)為水相，其中把第一種乳液優(yōu)選滴加到該水相中，同樣通過例如Ultraturrax型均化器(8,000rpm；5分鐘)制備所述乳液。
聚(乙烯醇)組成特別適合制備第二種乳液的穩(wěn)定劑。
任選地，可以在第二個(gè)步驟之后接著進(jìn)行替換有機(jī)溶劑的補(bǔ)充步驟。
本發(fā)明微球體制備方法的第三個(gè)必要步驟包括蒸發(fā)用于制備所述聚合物溶液的揮發(fā)性有機(jī)溶劑。
在具體的例子中，所述溶劑為乙酸乙酯，該蒸發(fā)步驟在室溫下和電磁攪拌下(1,400rpm)進(jìn)行約12小時(shí)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員將以合適的方式根據(jù)目的微球體的理化特性和形態(tài)學(xué)性質(zhì)選擇在本發(fā)明方法的這前三個(gè)必要步驟的各種實(shí)施條件。
通常地，為了用作制藥領(lǐng)域的載體，這些微球體的平均直徑為1-100μm、優(yōu)選5-50μm。
通常地，在第三個(gè)步驟末獲得的微球體將通過離心分離、洗滌和任選冷凍干燥。
根據(jù)第三個(gè)方面，本發(fā)明還涉及含有上述微球體的藥物組合物。這些組合物通常適合口服給藥，其劑型為例如片劑、明膠膠囊、粉劑或粒劑。
現(xiàn)在將通過下面非限制性實(shí)施例來說明本發(fā)明實(shí)施例中將使用下列縮寫EO環(huán)氧乙烷
POE聚(氧乙烯)MM 2.1.2下式所示丙二酸亞甲基酯 也被稱作1-乙氧基羰基-1-乙氧基羰基亞甲基氧羰基乙烯PMM2.1.2含有下式所示重復(fù)單元的聚合物 另外，在這些實(shí)施例中--微球體大小由Coulter計(jì)數(shù)器技術(shù)進(jìn)行測定，通過掃描電子顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢測，檢測或測定對象為粗制備的微球體，或者為經(jīng)冷凍破裂(cryofracture)后的微球體；--聚合物的分子量通過凝膠滲透色譜法(GPC)進(jìn)行測定。
實(shí)施例1在電磁攪拌下，把100mg丙二酸亞甲基酯2.1.2溶解于10ml丙酮中。在電磁攪拌下，漸漸地加入100微升0.1N氫氧化鈉。始終在電磁攪拌下維持聚合反應(yīng)5分鐘，加入100微升0.1N鹽酸。真空蒸除全部丙酮。然后用約100ml蒸餾水洗滌得到的聚合物，再真空干燥。聚合物的分子量為30,000。
將280mg聚(丙二酸亞甲基酯)溶解于10ml乙酸乙酯中。用Utraturrax以13,500rpm的速度攪拌5分鐘使1ml含有60mg卵清蛋白的水相在有機(jī)相中乳化。然后將該乳液加入100ml 2％聚(乙烯醇)水溶液中，應(yīng)用Ultraturrax以8,000rpm的速度攪拌5分鐘。在以1,400rpm的速度機(jī)械(旋轉(zhuǎn)葉片)攪拌下，室溫蒸發(fā)乙酸乙酯過夜。以4,000rpm的速度離心10分鐘收集微球體，然后用蒸餾水洗滌6次，每次洗滌都重新進(jìn)行—次離心操作。最后一次離心后，把微球體再懸浮于3ml蒸餾水中，然后冷凍干燥。
這樣獲得的微球體平均直徑為6微米，制劑中所用的14.2％卵清白蛋白被PMM2.1.2微球體所包封，其數(shù)量相當(dāng)于2.5％(w/w)的包封。
連續(xù)5天，將該制劑以100微克被包封蛋白/天/鼠的劑量經(jīng)口服給藥至C3H小鼠。在最后一次口服進(jìn)行7天后，在第0-第14天經(jīng)皮下注射游離卵清蛋白(100微克/鼠)使動(dòng)物對卵清蛋白敏感化。90％的小鼠能夠在第二次注射卵清蛋白后存活；但用不含卵清蛋白的微球體或者用同樣劑量但未被包封的卵清蛋白給藥時(shí)，小鼠存活率小于30％。
實(shí)施例2按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行，但把Pluronic F68以2％的濃度加入到含有卵清蛋白的水相中。
實(shí)施例3按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行，但把20mg POE-PMM共聚物加入到含有聚合物的水相中。
在該實(shí)施例中，應(yīng)用POE-PMM2.1.2嵌段共聚物。該共聚物制備方法為從制備POE嵌段開始，進(jìn)行兩個(gè)單體的連續(xù)聚合反應(yīng)，按照下列方案進(jìn)行把進(jìn)行聚合反應(yīng)的反應(yīng)器(250ml)連接到真空管，其中反應(yīng)器能夠在高度真空下工作，并且能夠除去質(zhì)子雜質(zhì)。
將除去所有微量水分的溶劑(THF,150ml)在-70℃的反應(yīng)器中低溫蒸餾。
然后用注射器通過隔膜加入引發(fā)劑(叔丁醇鉀(0.1N/THF)；10ml)。
然后通過低溫蒸餾引入環(huán)氧乙烷(5g)。
室溫下進(jìn)行聚合反應(yīng)48小時(shí)。此時(shí)，通過凝膠滲透色譜檢驗(yàn)樣品第一序列的分子量(4,000g/mol)和多分子性指數(shù)(1.13)。
把MM2.1.2(0.5ml)在真空下新鮮脫氣除去用作聚合反應(yīng)抑制劑的SO2，然后在室溫下迅速全部加入。
經(jīng)5小時(shí)后，通過加入甲醇使共聚物失活，然后讓共聚物在乙醚中沉淀。
由MM2.1.2得到的5個(gè)單元被固定在POE上，其相當(dāng)于1.150g/molPMM2.1.2的分子量。
共聚物的熱分析顯示玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為-16℃，熔點(diǎn)峰為45℃(△H=117J/g)。
實(shí)施例4按照實(shí)施例1的方法進(jìn)行，但應(yīng)用2mg V3 28肽(由HIV的gp120的V3 BRU環(huán)得到，序列為NNTRKSIHIGPGRAFYATGDIIGDIRQA)代替卵清蛋白(60mg)。得到的微球體平均大小為5.8微米，所用的70％V3 28肽被包封在微球體中，相當(dāng)于包封0.48％w/w。在掃描電子顯微鏡所作的研究顯示光滑的球形顆粒。
實(shí)施例5按照實(shí)施例4的方法進(jìn)行，但把Pluronic F 68以2％的濃度加入到含有肽的水相中。得到的微球體大小為7.0微米，所用的70％V3 28肽被包封在微球體中。
實(shí)施例6按照實(shí)施例4進(jìn)行，但把20mg POE-PMM共聚物加入含肽水相中。
實(shí)施例7按照實(shí)施例4進(jìn)行，但把20mg POE-PMM共聚物加入含有聚合物的有機(jī)相中。
實(shí)施例8按照實(shí)施例1進(jìn)行，但內(nèi)部水相由1毫升0.5M含有3mg Ⅱ型膠原的乙酸組成。這樣得到的微球體的平均直徑為6微米，制備過程中所用的66.6％膠原被包封在PMM 2.1.2微球體中，其相當(dāng)于包封0.7％(w/w)。
實(shí)施例9按照實(shí)施例1進(jìn)行，但內(nèi)部水相由1ml蒸餾水組成。這樣得到的微球體不含有生物活性物質(zhì)。其平均直徑為7.0微米。
實(shí)施例10
按照實(shí)施例1記載的方法進(jìn)行，但應(yīng)用質(zhì)粒pCDNA3(5mg)代替卵清蛋白(60mg)。
所得微球體的平均大小為7μm,9.8％所用質(zhì)粒被包封在微球體中，想當(dāng)于被包封0.17％(w/w)。
掃描電子顯微鏡進(jìn)行的研究顯示光滑的球形顆粒。
實(shí)施例11按照實(shí)施例10進(jìn)行，但把Pluronic以2％的濃度加入到含有質(zhì)粒的水相中。
得到的微球體平均直徑為7.0微米，12％所用質(zhì)粒被包封在微球體中，相當(dāng)于被包封0.22％(w/w)。
實(shí)施例12按照實(shí)施例1記載的方法進(jìn)行，但應(yīng)用低聚核苷酸(pdT16)(2mg)代替卵清蛋白(60mg)。
所得微球體的平均大小為4.8μm,20.6％所用低聚核苷酸被包封在微球體中，相當(dāng)于被包封0.19％(w/w)。
實(shí)施例13按照實(shí)施例12進(jìn)行，但把Pluronic以2％的濃度加入到含有低聚核苷酸的水相中。
得到的微球體平均直徑為5.7微米，23％所用低聚核苷酸被包封在微球體中，相當(dāng)于被包封0.21％(w/w)。
權(quán)利要求
1.由任選分散著物質(zhì)的載體材料連續(xù)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成的微球體，其特征在于所述載體材料含有至少70％重量由下列通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元組成的均聚物 其中-R1代表含有1-6個(gè)碳原子的烷基或其中m為1-5的整數(shù)并且R3為具有1-6個(gè)碳原子的烷基的-(CH2)m-COOR3基團(tuán)；-R2代表具有1-6個(gè)碳原子的烷基；和-n為1-5的整數(shù)。
2.權(quán)利要求1的微球體，其特征在于上述均聚物由通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元組成，其中R1代表具有1-6個(gè)碳原子的烷基；R2代表含有1-6個(gè)碳原子的烷基；和n等于1。
3.權(quán)利要求1的微球體，其特征在于上述均聚物由通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元組成，其中R1和R2代表-CH2-CH3基團(tuán)。
4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的微球體，其特征在于所述載體材料含有90％-99.5％重量權(quán)利要求1、2或3所定義的均聚物；和0.5％-10％重量、含有至少一個(gè)親水性序列和至少一個(gè)疏水性序列的共聚物，其中所述疏水特性序列含有至少一個(gè)通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元。
5.權(quán)利要求4的微球體，其特征在于上述共聚物的親水性序列選自聚(氧乙烯)、聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯烷酮)、聚(N-2-羥丙基甲基丙烯酰胺)、聚(甲基丙烯酸羥乙基酯)、親水性聚(氨基酸)如聚賴氨酸、多糖。
6.權(quán)利要求4或5的微球體，其特征在于所述共聚物具有嵌段結(jié)構(gòu)，優(yōu)選二嵌段或三嵌段結(jié)構(gòu)，或者具有接枝結(jié)構(gòu)。
7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的微球體，其特征在于物質(zhì)被有效地分散于所述載體材料中，所述物質(zhì)任選地具有生物活性。
8.權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)的微球體，其特征在于所述被分散的物質(zhì)為肽。
9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的微球體，其特征在于所述分散物質(zhì)為蛋白質(zhì)。
10.權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的微球體的制備方法，其特征在于包括a)在任選含有表面活性劑的揮發(fā)性有機(jī)溶劑中制備述組成載體材料的第一種聚合物溶液，b)制備同a)中所得溶液不相混溶的任選地含有待分散的所述物質(zhì)和任選的表面活性劑的第二種溶液，c)通過把第二種溶液分散于第一種溶液中制備第一種乳液，該連續(xù)相由聚合物溶液組成，d)按下列任意一種方式制備第二種乳液--或者在攪拌作用下把c)中得到的第一乳液分散于同所述第一乳液不相混溶的分散介質(zhì)中，所述分散介質(zhì)任選地含有穩(wěn)定劑；--或者在攪拌作用下把由同所述第一種乳液不混溶的介質(zhì)組成的溶液傾入到所述第一種乳液中，其中所述介質(zhì)任選地含有穩(wěn)定劑，e)在攪拌下蒸發(fā)所述有機(jī)溶劑。
11.權(quán)利要求10的方法，其特征在于還包括置換所述有機(jī)溶劑的步驟e′)，所述步驟e′)在步驟d)和步驟e)之間進(jìn)行。
12.權(quán)利要求10或11的方法，其特征在于還包括f)離心分離微球體g)對所述微球體進(jìn)行一次或多次連續(xù)洗滌h)對所述微球體進(jìn)行冷凍干燥。
13.權(quán)利要求10-12中任一項(xiàng)的方法，其特征在于用于制備第一種乳液的表面活性劑選自泊咯沙姆、聚山梨醇酯、聚(乙烯醇)和權(quán)利要求4-6中任一項(xiàng)定義的共聚物。
14.權(quán)利要求10-13中任一項(xiàng)的方法，其特征在于用于制備第二種乳液的所述穩(wěn)定劑為聚(乙烯醇)。
15.用于口服給藥的藥物組合物，其特征在于含有權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)定義的或者按照權(quán)利要求10-14中任一項(xiàng)的方法得到的微球體。
全文摘要
本發(fā)明涉及在藥物中特別用作用于輸送生物活性物質(zhì),特別是親水性物質(zhì)的顆粒載體的口服給藥新微球體,按照本發(fā)明,所述微球體由載體材料連續(xù)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成,其中分散著物質(zhì),所述載體材料含有至少70%重量由相當(dāng)于通式(Ⅰ)所示重復(fù)單元組成的均聚物,其中R
文檔編號A61K9/16GK1303274SQ99806677
公開日2001年7月11日 申請日期1999年4月28日 優(yōu)先權(quán)日1998年4月29日
發(fā)明者N·布魯－瑪格尼茲, C·里維薩基, E·法特爾, P·庫沃里爾, P·布萊頓 申請人:維赫索拉公司