專利名稱：一種犬瘟熱弱毒高產(chǎn)細胞株的培養(yǎng)方法
技術領域：
本發(fā)明涉及毛皮動物病毒疫苗的制備方法，確切地說公開了一種犬瘟熱弱毒高產(chǎn)細胞株的培養(yǎng)方法。
犬瘟熱是毛皮動物的主要疾病，發(fā)病率最高，死亡率也最高；雖然有用非洲綠猴腎傳代細胞(VERO)生產(chǎn)的犬瘟熱弱毒疫苗預防動物犬瘟熱發(fā)生，但效果很不理想，原因在于每毫升疫苗中的病毒含量太低，所以其免疫性差保護性低。
本發(fā)明的目的是公開一種犬瘟熱弱毒高產(chǎn)細胞株的培養(yǎng)方法，提供高含量的犬瘟熱弱毒疫苗。
為達到上述目的，本發(fā)明的構思是選用貓腎傳代細胞株(FK81)培養(yǎng)犬瘟熱弱毒。具體方案如下采用同步法進行接毒培養(yǎng)，用大方瓶將貓腎傳代細胞株(FK81)消化下來，把其中的2/3細胞吸入轉瓶中，并加入原方瓶培養(yǎng)液2～3倍的維持液，按轉瓶中液體量的2％接種犬瘟熱弱毒種，搖勻后進行旋轉培養(yǎng)96小時，出現(xiàn)融合細胞后即可收毒，得本發(fā)明產(chǎn)品。
本發(fā)明的積極效果在于應用貓腎傳代細胞株(FK81)來接種培養(yǎng)犬瘟熱弱毒，大大提高了病毒的產(chǎn)量，每毫升中的病毒含量由原來的低于106，提高到了108以上，比原來多了數(shù)十倍。在組織培養(yǎng)細胞上測定TCID50，即半數(shù)細胞培養(yǎng)物感染量法測得的結果表明由原來的TCID50效價為104，提高到了105.625，比原來提高了42倍多。采用37℃培養(yǎng)病毒與毛皮動物的體溫接近，保證了犬瘟熱弱毒不受溫度變化的影響而保持其免疫性，并且提高了其保護率，保護率達7/7。本發(fā)明大大縮短了犬瘟熱弱毒疫苗的培養(yǎng)周期，加快了疫苗的生產(chǎn)進程，原來用非洲綠猴腎傳代細胞和雞胚原代細胞培養(yǎng)該疫苗的5～7天一周期縮短為4天，經(jīng)裸鼠進行細胞試驗，未發(fā)現(xiàn)有致突變、致畸和致癌的任何毒性。
下面結合實施例進一步說明本發(fā)明實施例1首先，將貓腎傳代細胞株(FK81)100毫升瓶置于37℃溫箱中長成單層，傾棄其中的培養(yǎng)液，用消化液洗三次后，再加入1毫升的消化液，在室溫下消化3～5分鐘，單層細胞脫落后，加入原培養(yǎng)液3倍的生長液吸打均勻后，按1∶3的比例進行傳代，再置于37℃恒溫箱中生長增殖，得下一代傳代細胞。取4個2000毫升大方瓶貓腎傳代細胞(FK81)將其消化下來，把每瓶中的2/3的細胞吸入轉瓶中，再往轉瓶中加入1500毫升維持液，按轉瓶中液體的2％接犬瘟熱弱毒種，搖均后置于轉瓶機上進行旋轉培養(yǎng)96小時，該接毒細胞就有60～70％出現(xiàn)細胞病變(CPE)，便得本發(fā)明產(chǎn)品。
權利要求
1.一種犬瘟熱弱毒高產(chǎn)細胞株的培養(yǎng)方法，其特征在于用貓腎傳代細胞株(FK81)培養(yǎng)犬瘟熱弱毒。
2.根據(jù)權利要求1所述的培養(yǎng)方法，其特征在于采用同步法進行接毒培養(yǎng)，用大方瓶將貓腎傳代細胞株(FK81)消化下來，把其中的2/3細胞吸入轉瓶中，并加入原方瓶培養(yǎng)液2～3倍的維持液，按轉瓶中液體量的2％接種犬瘟熱弱毒種，搖勻后進行旋轉培養(yǎng)96小時，出現(xiàn)融合細胞后即可收毒。
全文摘要
本發(fā)明公開一種犬瘟熱弱毒高產(chǎn)細胞株的培養(yǎng)方法,是用貓腎傳代細胞株(FK
文檔編號A61K39/155GK1232704SQ9911289
公開日1999年10月27日 申請日期1999年5月4日 優(yōu)先權日1999年5月4日
發(fā)明者楊盛華 申請人:楊盛華