專利名稱：通過4-硝基-△的制作方法
背景技術(shù)：
本發(fā)明發(fā)明主要涉及雄激素和/或雌激素抑制劑的化合物，其用于抑制C17-20裂解酶、C17α-羥化酶和5α-還原酶，以及制備4-氨基-Δ4-3-酮甾類的方法。
雄激素和雌激素的生物合成主要通過C17-20裂解酶和C17α-羥化酶雙重作用酶甾體控制。當C17-20裂解酶催化17β位有二個碳側(cè)鏈的甾類轉(zhuǎn)化時，C17α-羥化酶則將該分子的羥基置于17α位。C17-20裂解酶的作用在于可產(chǎn)生形成睪酮、5α-二氫睪酮和雌激素(主要是雌酮與雌二醇)的重要前體分子。對C17-20裂解酶的有效抑制則會抑制雄激素和雌激素的形成，因此可用于治療所述雄激素和/或雌激素起不良作用的病理狀態(tài)或疾病。
酶甾體5α-還原酶催化睪酮轉(zhuǎn)化為二氫睪酮或DHT(17β-羥基-5α-雄烷-3-酮)。DHT是比睪酮更有效的一種雄激素，其在某些組中用作末器官效應器，特別是調(diào)節(jié)生長。對這種酶的有效抑制則會防止DHT的形成，因此可用于治療雄激素依賴性疾病，特別是DHT起重要副作用的疾病。
上述抑制劑影響雄激素和/或雌激素形成途徑中的各個步驟，已知它們可有效治療雄激素和/或雌激素依賴性疾病，因此合成上述抑制劑的另外技術(shù)也是有用的。可按照本說明書描述的方法獲得的某些4-氨基甾體衍生物公開在美國專利4,757,061(1988年7月12日發(fā)行)；美國專利5,120,840(1992年6月9日發(fā)行)；美國專利號5,143,909(1992年9月1日發(fā)行)。所公開的這些化合物三步合成法包括4，5-環(huán)氧甾體衍生物的生成，然后用疊氮化鈉處理生成4-疊氮化甾體衍生物。其后4-疊氮化甾體衍生物還原形成4-氨基甾體衍生物。該合成所用疊氮化鈉由于此化合物本身的不穩(wěn)定性，因此對健康有害。專業(yè)化學家可在實驗室小規(guī)模安全進行上述過程，因為只使用少量的疊氮化鈉。然而4-氨基甾體衍生物的大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)需要大量的疊氮化鈉及其衍生酸-疊氮酸。這個需要大量疊氮化鈉和疊氮酸在升高溫度下的合成就會對人類和環(huán)境產(chǎn)生重大危害。通過對化工廠的合理設(shè)計可減輕對環(huán)境和人類的危害，然而這種措施的代價過高，其根本性的危害仍不能完全消除。通過4-疊氮化中間體三步合成4-氨基-Δ4-甾類化合物的過程如方案A所示 先前試圖硝化Δ4-3-酮甾類化合物(由Schaub等在Tetrahedron20373(1964)和Suginome等在J.βull.Chem.Soc.Jap.621343(1989)中描述)而得到相應的2-硝基甾類化合物。推測是由于硝化作用是通過動力學的2，4-二烯醇影響而不是通過熱力學二烯醇-3，5-二烯醇。4-硝基甾類化合物的生成需要那些有利于3，5-二烯醇而不利于2，3-二烯醇生成的條件。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種通過形成4-硝基-3-酮甾類制備4-氨基-3-酮甾類的新方法，而4-硝基-3-酮甾類是相應的2，5-二烯醇硝化的產(chǎn)物。
本發(fā)明提供了制備以下通式化合物的新方法 其中R是OH，C1-C6鏈烷?；?，C1-C6鏈烷酰氧基，C1-C4鏈烷醇，COCH2OH，CO2H，CONR7R8，環(huán)丙氧基，環(huán)丙氨基，乙酰硫代鏈烷基，2，2-二甲基二氧戊環(huán)-4-基，1，2-二羥基乙基和C1-4烷烴硫醇基；R1是氫，羥基或C1-6烷基；R和R1一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在17位碳上；R2，R3和R4是彼此獨立的氫或C1-6烷基；R5和R6是彼此獨立的氫或OH；R5和R6可一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在11位碳上；R7是氫或C1-C8烷基；R8是C1-C8烷基；環(huán)上的符號 表示該鍵是單鍵或雙鍵；符號 或 表示取代基是α構(gòu)型(向紙平面里)；符號 或 表示取代基是β構(gòu)型(向紙平面外)；其中另外如下限定當R是OH時，R1是氫；當R5是OH時，R6是氫；因此包括a)將下列通式起始化合物 其中R-R8和 同以上定義，在升高或適當溫度下與 或 和 或 強堿反應足夠時間而生成相應的熱力學二烯醇，然后加入中性的硝化試劑生成4-硝基甾類化合物，然后b)將4-硝基甾類化合物與適當還原劑反應；以及c)選擇性將4-氨基甾類化合物轉(zhuǎn)化為可藥用鹽。
當需要硝化后修飾時，可通過已知步驟用常規(guī)方法實現(xiàn)。例如，按照下述方案將4-硝基睪酮的C17羥基氧化而得相應的17-酮 保護基的消除可按下列方案進行 本發(fā)明另外提供了某些用作C17-20裂解酶、C17α-羥化酶和/或5α-還原酶抑制劑的4-硝基甾類化合物。這些化合物通過如下通式表示
其中R是OH，C1-C6鏈烷?；?，C1-C6鏈烷酰氧基，C1-C4鏈烷醇，COCH2OH，CO2H，CONR7R8，環(huán)丙氧基，環(huán)丙氨基，乙酰硫代鏈烷基，2，2-二甲基二氧戊環(huán)-4-基，1，2-二羥基乙基和C1-4烷烴硫醇基；R1是氫，羥基或C1-6烷基；R和R1一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在17位碳上；R2，R3和R4是彼此獨立的氫或C1-6烷基；R5和R6是彼此獨立的氫或OH；R5和R6可一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在11位碳上；R7是氫或C1-C8烷基；R8是C1-C8烷基；環(huán)上的符號 表示該鍵是單鍵或雙鍵；符號 or 表示取代基是α構(gòu)型(向紙平面里)；符號 or 表示取代基是β構(gòu)型(向紙平面外)；其中另外如下限定當R是OH時，R1是氫；當R5是OH時，R6是氫。
本發(fā)明另外提供了抑制甾類化合物C17-20裂解酶、C17α-羥化酶和/或5α-還原酶的方法，該方法包括給予有效量的本發(fā)明化合物。發(fā)明詳述起始物是已知的或可用已知技術(shù)得到。
本文所用術(shù)語“C1-C6鏈烷?；笔侵?至6個碳原子的直鏈或支鏈烷?；?。該術(shù)語所屬范圍中包括有甲?；?，乙?；?，丙?；□；惗□；?，己?；取?br>
本文所用術(shù)語“C1-C4鏈烷醇基”是指1至4個碳原子的直鏈或支醇基，至少含有一個羥基官能團，但是連接到每個碳原子上的羥基不超過一個。該術(shù)語所屬范圍中包括有甲醇基，乙醇基，正丙醇基，異丙醇基，正丁醇基，2-丁醇基，2-甲基-1-丙醇基，2-甲基2-丙醇基，1，2-二羥基乙醇基，1，3-二羥基異丙醇基等。
本文所用術(shù)語“C1-C6烷基”是指1至6個碳原子的飽和直鏈或支鏈烴基。該術(shù)語所屬范圍中包括有甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，叔丁基，正戊基，正己基等。
本文所用術(shù)語“C1-C8烷基”是指1至8個碳原子的飽和直鏈或支鏈烴基。該術(shù)語所屬范圍中有甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，叔丁基，正戊基，正己基，正庚基，正辛基等。
本文所用術(shù)語“C1-C4鏈烷硫醇基”是指含有硫醇官能團的1至8個碳原子的飽和直鏈或支鏈烴基。該術(shù)語所屬范圍中有甲硫醇基，乙硫醇基，丙烷硫基醇，異丙烷硫醇基，正丁烷硫醇基，異丁烷硫醇基，叔丁烷硫醇基等。
本文所用術(shù)語“乙酰硫代鏈烷基”是指含有一個乙酰硫醇官能團的1至8個碳原子的飽和直鏈或支鏈烴基基團。該術(shù)語所屬范圍中有乙酰硫甲基，乙酰硫乙基，乙酰硫丙基，乙酰硫異丙基，乙酰硫丁基，乙酰硫異丁基，乙酰硫叔丁基其類似物。
本文所用術(shù)語“C1-C6鏈烷酰氧基”是指含有羧基官能團的1至6個碳原子的飽和直鏈或支鏈烴基。該術(shù)語所屬范圍中有甲酰氧基， 乙酰氧基，丙酰氧基，異丙酰氧基，正丁酰氧基，仲丁酰氧基，叔丁酰氧基，正戊酰氧基，仲戊酰氧基，叔戊酰氧基，正己酰氧基等。
本領(lǐng)域的普通專業(yè)人員易于確定本文所用術(shù)語“可藥用鹽”，其是指對患者不產(chǎn)生嚴重毒性的的酸加成鹽，同時其具有理想的操作及制備特性。這些鹽可以是無機鹽或有機鹽，可以是水合的或基本上無水的?？缮珊线m鹽的無機酸有鹽酸，氫溴酸，硫酸，磷酸以及金屬鹽，例如磷酸一氫鈉和硫酸氫鉀?？缮珊线m鹽的有機酸有一、二、三羧酸。這種酸的實例有但不局限于如乙酸， 乙醇酸，乳酸，丙酮酸，丙二酸，琥珀酸，戊二酸，富馬酸，蘋果酸，酒石酸，檸檬酸，抗壞血酸，馬來酸，羥基馬來酸，苯甲酸，羥基苯甲酸，苯乙酸，肉桂酸，水楊酸，2-苯氧基苯甲酸和磺酸，例如甲磺酸和2-羥基苯甲酸、2-羥基乙磺酸。 以上反應方案表示本發(fā)明的過程，其中首先將Δ4-3-酮與有效量的足夠強度的堿生成Δ4-二烯醇而硝化成相應的4-硝基化合物?！坝行Я康膹妷A”是指可在適當反應條件下將Δ4-3-酮起始物轉(zhuǎn)化為其熱力學二烯醇的具有適當強度和濃度的堿。
當選擇合適的反應條件時，合適堿及其濃度是其它反應條件的函數(shù)，例如取代基的數(shù)目和類型，反應時間，溶劑和所用溫度。就是說，通過甾類化合物6位碳的脫質(zhì)子作用而形成熱力學二烯醇中間體的主要參數(shù)如下說明?？捎玫摹皬妷A”范圍包括醇化金屬等，但是優(yōu)選3到6個碳原子的支鏈醇的鹽。最優(yōu)選含有3到5個碳原子的支鏈醇。例如叔丁醇鉀。
強堿的“有效量”隨甾類化合物上酸性質(zhì)子數(shù)目的不同而變化?！八嵝再|(zhì)子”是易于離解，例如OH，CO2H，NH。對于每個酸性質(zhì)子而言，需要一份等當量的堿。當使用本文所述的典型堿和含甾類化合物的“非酸性質(zhì)子”時，相對于甾類化合物的含量至少為2摩爾當量。優(yōu)選2至4摩爾當量，最優(yōu)選2摩爾當量(除酸性質(zhì)子外)。
在硝化反應產(chǎn)生二烯醇中間體的過程中，本領(lǐng)域的普通專業(yè)人員會意識到反應溫度與時間之間的變動范圍。在升高的溫度下需要較短的反應時間，而在低溫下則需較長時間。在本發(fā)明的實踐中，“升高的溫度”為約50℃到約100℃，優(yōu)選50℃到83℃，最優(yōu)選的反應溫度是約83℃。在升高的溫度下，“足以生成相應的熱力學二烯醇的時間”為約15分鐘到8小時，優(yōu)選約15分鐘到180分鐘，最優(yōu)選的反應時間是約60分鐘。
在低溫下，“適當?shù)臏囟取狈秶鸀榧s15℃到約50℃，優(yōu)選約17℃到約30℃，最優(yōu)選約20℃到約25℃。在這些溫度下，“足以生成相應的熱力學二烯醇的時間”約為15分鐘到48小時，優(yōu)選約1小時到24小時，最優(yōu)選約10到24小時。使用較低反應溫度和較長反應時間可提高反應產(chǎn)率，其為本發(fā)明實踐所優(yōu)選。由于本發(fā)明的過程中適宜使用的某種溶劑的凝固點可能低于以上溫度范圍的最低點，所以在反應處于這些低溫前，有必要將溶劑微熱或與其中一種反應物混合。
影響硝化反應的合適溶劑可以是任何2到5個碳原子的直鏈或支鏈烷烴衍生出的醇。尤其是仲醇和叔醇。例如，當乙醇或異丙醇可優(yōu)選使用時，更優(yōu)選叔戊醇和叔丁醇。最優(yōu)選的溶劑是叔丁醇。
硝化反應能受任一中性硝化試劑的影響，例如硝酸烷基酯。對特殊硝酸烷基酯的選擇取決于對其反應活性和價格的考慮。合適的硝酸烷基酯可以是3到8個碳原子的任一飽和直鏈或支鏈有機硝酸酯。優(yōu)選的硝酸烷基酯包括硝酸異丙酯，硝酸異丁酯和己基硝酸2-乙酯。最優(yōu)選的適當硝酸烷基酯是硝酸異丙酯。
可通過任何已知方法用適當還原劑還原4-硝基甾類化合物，包括，例如化學性的或是催化性的方法。典型的化學催化劑包括1)乙酸中的金屬鋅；2)在有或無氯化銨存在下的甲醇中的金屬鋅；3)乙醇中的氯化亞錫；或4)乙醇中的鐵和乙酸。有效的催化系統(tǒng)包括在醇溶劑如乙醇中的Lindlar催化劑(用鉛和喹啉“毒化”過的碳酸鈣上的鈀)。其他可用于催化氫化作用的系統(tǒng)，例如在甲醇中活性炭和甲酸銨上的鈀，在乙醇中活性炭和三氟乙酸上的鈀，或在乙醇中硫酸鋇上的鈀。
本發(fā)明化合物作為甾類化合物C17-20裂解酶抑制劑的體外酶抑制活性是用大鼠或cynomolgus猴的睪丸組織酶微粒體制劑建立的。從cynomolgus猴或大鼠的睪丸組織分離得微粒體。將待測試化合物溶于二甲基亞砜中，并在0.05M磷酸鉀緩沖液(cynomolgus猴裂解酶活性的pH為7.4，大鼠裂解酶活性的pH為7.2)中稀釋得測試化合物所需的濃度。DMSO最終測試濃度為0.1％(v/v)。含有NADPH再生系統(tǒng)的檢測包括1M NADPH，5mM葡萄糖-6-磷酸鹽，1IU/mL葡萄糖-6-磷酸脫氫酶和微粒體蛋白，總體積為0.2mL。
為了確定時間依賴性C17-20裂解酶失活作用，將測試化合物用20到62μg/mL微粒體蛋白、0.05M磷酸鉀緩沖液(pH7.4)和上述NADPH再生系統(tǒng)在34℃培養(yǎng)0至40分鐘。然后每次等份除去180uL，用于酶活性分析。將每一等份加到[7-3H]-17α-羥基孕甾烯醇酮中(11.2mCi/mmole；0.2μCi每份試劑)，另加未標記的17α-羥基孕甾烯醇酮使每份總底物濃度為0.3μM，然后在34℃培養(yǎng)6分鐘。為了確定測試化合物可逆的抑制作用，同時將底物和抑制劑(或DMSO的緩沖液作為對照)加到另外的分析組分中引發(fā)反應。用于cynomolgus猴裂解酶的底物是7-3H-17α-羥基孕甾烯醇酮，底物的最終濃度為0.3μM。對于大鼠裂解酶活性分析而言，所用的底物是[1，2-3H]-17α-羥基孕甾烯醇酮，總底物濃度為0.1μM(Km＝0.095μM)。將用于大鼠和猴裂解酶的全部試樣在34℃培養(yǎng)6分鐘。
作為5α-還原酶抑制劑的本發(fā)明化合物的活性是用實驗室動物前列腺組織中的5α-還原酶微粒體制劑測定的。確切地，微粒體是從cynomolgus猴前列腺組織中分離出來的。在使用樣品前應測定微粒體制劑的蛋白濃度。cynomolgus猴前列腺5α-還原酶活性的各個試樣含有0.1M磷酸鉀-檸檬酸鈉緩沖液(pH5.6)，0.1％牛血清清蛋白(W/V)，1.0mM EDTA鈉，7到96mg微粒體蛋白，1.0mM NADPH，5.0mM葡萄糖-6-磷酸鹽，11U/mL葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶，[1，2-3H]-睪酮(0.15μCi)，未標記的睪酮以獲得所需底物濃度，將溶于DMSO的抑制劑在0.1M檸檬酸鉀-檸檬酸鈉(50∶50)緩沖液(PH5.6)中稀釋而使最終試樣中DMSO的濃度為0.1％(V/V)。將不含抑制劑的相同緩沖液和DMSO用作對照試樣。從含有除酶以外所用組分的試樣中確定放射性本底。重復分析。加入睪酮引發(fā)反應并在Dubnoff震蕩保溫器于25℃培養(yǎng)30分鐘。試樣的總體積為100uL。在這些條件下，試樣與時間(30分鐘)成線性。
將待測抑制作用的化合物同時與睪酮加入。為測定IC50，選用在Km水平為單一濃度的睪酮。睪酮的Km值可用多種實驗測定，對于cynomolgus5α-還原酶而言，其范圍是0.025μM到0.091μM。
加入5mL氯仿∶甲醇(2∶1)終止每份分析試樣。然后相每份試樣中加入代表底物和產(chǎn)物的載體甾類化合物(每份2.5ug)和0.8mL蒸餾、去離子水。用于裂解酶分析的載體甾類化合物是17α-羥基孕甾烯醇酮、脫氫表雄甾酮和雄甾-5-烯-3β，17β-二醇(cynomolgus 猴裂解酶試樣)或17α-羥基孕甾酮、雄甾二酮和睪酮(大鼠裂解酶試樣)。將睪酮，二氫睪酮和3，17-雄甾二醇加到5α-還原酶試樣中中作為載體甾類化合物。放射性標記和未標記的甾體化合物通過Moore和Wilson方法提取(Methods inEnzymol.，eds O’malley，B.W.and Hardlan，J.G.36，1975，pp466-473)。用氯氣蒸發(fā)含有甾類化合物的有機相。對于裂解酶分析而言，將殘余物溶于18％四氫呋喃(V/V)的己烷溶液中。對于5α-還原酶分析而言，將干燥后的甾類殘余物溶于3％(V/V)異丙醇的己烷溶液中。然后在LiCrosorbDIOL衍生的硅膠柱上(10uM；4×250mm)，通過正相HPLC將甾類化合物分離，用3％到7.5％異丙醇的己烷溶液梯度洗脫，然后在75％(v/v)異丙醇的己烷溶液isocratic狀態(tài)下進行。用可用于裂解酶和5α-還原酶試樣的RadiomaticModel HS或Model A515Flo-One探測器測量甾類化合物峰值的放射性。
用底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的百分數(shù)計算每個試樣的酶活性，結(jié)果通過對照的抑制百分數(shù)來表達。將這些實驗數(shù)據(jù)代入適當?shù)亩?shù)模型及抑制劑的6個濃度值來測定IC50值。當用以上過程測試化合物后，得到以下結(jié)果(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮對猴睪丸C17-20裂解酶的IC50為41nM，大鼠睪丸C17-20裂解酶是86nM，猴前列腺5α-還原酶是17nM。當用cynomolgus猴睪丸裂解酶通過以上過程測試測試化合物時，得到下述結(jié)果
在甾類化合物C17-20裂解酶、5α-還原酶和/或C17α-羥化酶的抑制作用中，“有效抑制量”是指達到酶抑制效果的化合物量。達到所需抑制水平所必需的確切量是酶濃度、表面積、溫度和其它典型實驗參數(shù)的函數(shù)，并且是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所知的實驗變量。一般地，當將這些化合物給予實際患者時，最小有效量就是達到治療效果的量。所給化合物的確切量可在大范圍內(nèi)變化，主要取決于患者的類型和程度。例如，根據(jù)待治療患者和所治療疾病的嚴重性，所給予的化合物的有效抑制量可從每天每公斤體重約0.625至62.5mg不等，優(yōu)選每天每公斤體重約0.5至30mg?？诜挝粍┝靠珊欣?0到500mg的本發(fā)明化合物。另外，本發(fā)明化合物可通過非腸道途徑或植入給藥。
以下實施例用于說明本發(fā)明，而不應解釋為以任何方式限定本發(fā)明。除非另外說明，本文所提及的所有“室溫”都指約20℃到約23℃。第一步4-硝基甾類化合物的制備實施例1(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮將叔丁醇鉀(1.70g，15mM)和(20S)-20-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮(1.65g，5mM)在叔丁醇(25mL)中混合，然后在氬氣氛中加熱回流75分鐘。然后將硝酸異丙酯(0.51mL，5mM)加到回流的反應混合物中，形成一個放熱反應。一分鐘后，將反應容器從熱源移去并冷卻至室溫。然后加入乙酸(5mL)將冷卻后的混合物酸化，攪拌過夜。然后用二氯甲烷稀釋該混合物以形成足以增溶合成產(chǎn)物的分離相。隨后濾除固體，并用二氯甲烷洗滌。將濾液及洗液中的物質(zhì)合并并濃縮。將殘留物再溶于二氯甲烷中，然后在硅膠上通過閃式色譜純化得到(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。將此物質(zhì)從丙酮水溶液中結(jié)晶而得到白色針狀晶體(熔點166-168℃)。IR3435，1696，1623(m)，1633cm-1MS(CI)376(100％，M+1)，358(30％，M+1-H2O)1H-NMR(CDCl3)δ0.73(3H，s，C18-Me)，1.06(d，C20-Me)，1.29(s，C19-Me)，3.38(1H，dd， )，3.64(1H，dd， CH2).分析C22H33NO4·(0.2)H2O計算值C，69.70；H，8.80；N，3.62；實測值C，69.78；H，9.13；N，3.40。該化合物具有以下結(jié)構(gòu) 實施例1A(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮將叔丁醇鉀(1.70g，15mM)和(20S)-20-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮(1.65g，5mM)在叔丁醇中混合，在氬氣氛中加熱回流90分鐘。然后將混合物冷卻至室溫并用固定量的硝酸異丙酯(0.51mL，5mM)處理。18小時后，用5mL乙酸將反應器中的物質(zhì)酸化，隨后用二氯甲烷稀釋。濾除固體并進一步用另外的二氯甲烷洗滌。將濾液及洗滌殘余物按照實施例1純化而得結(jié)晶(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。實施例1B(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮將叔丁醇鉀(1.70g，15mM)和(20S)-20-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮(1.65g，5mM)在叔丁醇(25mL)中混合，在氬氣中于室溫攪拌3小時。然后向該混合物中加入固定量的硝酸異丙酯(0.51mL，5mM)，然后將混合物攪拌過夜。接著加入乙酸(5mL)。1小時后，濾除反應容器中殘留的固體，用二氯甲烷洗滌。將合并的濾液及洗滌殘余物按照實施例1純化而得結(jié)晶(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。實施例1C(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮將叔丁醇鉀(7.6g，67.8mM)和(20S)-20-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮(6.6g，20mM)在叔丁醇中混合，在氬氣氛中加熱回流60分鐘。然后加入固定量的硝酸異丙酯(2.34ml，20mM)。進一步回流20分鐘后，將反應容器冷卻到室溫。接著加入乙酸(10ML)，將反應容器攪拌18小時，然后用二氯甲烷(200ML)稀釋混合物。濾除固體，洗滌，重新與洗滌殘余物混合，按照實施例1純化而得結(jié)晶(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。實施例1D(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮將叔丁醇鉀(7.6g，67.8mM)和(20S)-20-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮(6.6g，20mM)在叔丁醇中混合，在氬氣氛中加熱回流120分鐘。然后加入固定量的己基硝酸2-乙酯(3.56mL，20mM)。10分鐘后，將反應容器冷卻至室溫。加入乙酸(9mL)使反應驟冷并攪拌過夜。用二氯甲烷(200mL)稀釋后，濾除固體，洗滌，與洗滌殘余物混合，按照實施例1純化而得結(jié)晶(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。實施例1E(20S)-20-羥甲基-4-硝基烷-4-烯-3-酮將(20S)-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮(6.18g，18.7mmol)的叔丁醇(91ml)溶液與叔丁醇鉀(6.43g，57.3mmol，3摩爾當量)于回流溫度反應1.5小時。在20分鐘內(nèi)滴加入硝酸異丙酯(2.9ml，1.6摩爾當量)，然后將反應冷至室溫并攪拌過夜(12-18小時)。然后用乙酸(6.2ml)處理反應混合物，室溫攪拌1小時后倒入水中(400ml)。用二氯甲烷(4×100ml)萃取，將硫酸鎂干燥后的有機相合并。過濾后，真空蒸發(fā)濾液得到紅色油狀物，通過硅膠塞過濾純化(己烷∶乙醚∶二氯甲烷＝4∶2∶1(2.5L)，然后2∶2∶1(1L))。合并并濃縮適當級分，將所得物從沸騰異丙醇(向其中加入水直至渾濁)中重結(jié)晶即得標題化合物(2.66g)。實施例217β-羥基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮按照實施例1的方法，將睪酮(2.88g，10mM)和叔丁醇鉀(3.40g，30mM)和硝酸異丙酯(1.01ml)反應即得17β-羥基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮，熔點158-160℃。(丙酮-己烷)IR 3533，1689，1615(m)，1635cm-1MS(CI)334(100％，M+1)，316(50％，M+1-H2O)1H-NMRδ(CDCl3)0.80(3H，s，C18-Me)，1.30(s，C19-Me)，3.66(1H，t，C17·H).該化合物具有以下結(jié)構(gòu)
用乙酸酐(3mL)和吡啶(6mL)處理上述合并的濾液及洗液。室溫放置過夜后，用水攪拌反應1小時。潷去液體后即得粘性固體，色譜純化后得到17β-乙酰氧基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮，熔點216-217℃。(丙酮水溶液)IR(CHCl3)1725，1695，1623(m)，1536，1256cm-1MS(CI)376(100％，M+1)，316(35％，M+1-AcOH)1H-NMR(CDCl3)0.84(3H，s，C18-Me)，1.30(s，C19-Me)，2.05(s，COMe)，5.62(1H，dd，C17-H). 正如前預計，17β-羥基-4-硝基甾類化合物可被修飾成相應的17-酮，例如下面的實施例。實施例2A 4-硝基雄甾-4-烯-3，17-二酮將冷至-6℃的17β-羥基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮(4-硝基睪酮，10.56g，31.7mM)的丙酮(900ml)溶液用瓊斯試劑(10.0ml)處理。用甲醇分解過量的試劑后，濾除固體。濃縮濾液(例如用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀)，然后通過硅膠閃式色譜法純化得到4-硝基雄甾-4-烯-3，17-二酮，熔點205-205.5℃。分解(丙酮-己烷)。
IR1738，1622，1533，1373cm-1MS(CI)332(100％，M+1)1H-NMR(CDCl3)0.93(s，C18-Me)，1.13(s，C19-Me). 實施例317β-羥基-7α-甲基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮按照實施例1的方法，將17β-羥基-7α-甲基睪酮(11.2g，37.0mM)、叔丁醇鉀(8.29g，73.9mM)和硝酸異丙酯(3.76ml)反應得到17β-羥基-7α-甲基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮，熔點229-230℃(分解)。(丙酮-己烷)IR(CHCl3)3614，1694，1658(m)，1623，1536cm-1MS(CI)348(100％，M+1)，330(40％，M+1-H2O)1H-NMR(CDCl3)0.89(d，C7-Me)，0.91(s，C18-Me)，1.16(s，C19-Me)，3.68(t，C17-H).該化合物具有以下結(jié)構(gòu) 通過下述實施例可將17β-羥基甾類化合物轉(zhuǎn)化成相應的17-酮。實施例3A7α-甲基-4-硝基雄甾-4-烯-3，17-二酮將17β-羥基-7α-甲基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮(4.2g，12.1mM)的丙酮(400ml)溶液冷卻至0℃并用瓊斯試劑(4.0ml)處理。加入甲醇分解過量的試劑。濾除固體，濃縮濾液得綠色固體。經(jīng)硅膠閃式色譜純化得到7α-甲基-4-硝基雄甾-4-烯-3，17-二酮(丙酮水溶液)。IR(CHCl3)1735，1697，1625(m)，1537cm-1MS(CI)346(100％，M+1)，328(50％，M+1-H2O)1H-NMR(CDCl3)0.86(3H，d，C7-H)，0.93(3H，s，C18-Me)，1.33(s，C19-Me).該化合物具有以下結(jié)構(gòu) 實施例411α，17β-二羥基-17α-甲基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮按照實施例1的方法，將11α，17β-二羥基-17-甲基雄甾-4-烯-3-酮(6.37g，20.0mM)、叔丁醇鉀(6.73g，60.0mM)和硝酸異丙酯(2.02ml)反應得到11α，17β-二羥基-17α-甲基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮的泡沫狀固體。IR3435，1691，1618(m)，1533，1373cm-1MS(CI)364(100％，M+1)，346(30％，M+1-H2O)，328(37％，M+1-2H2O)1H-NMR(CDCl3)0.93(3H，s，C18-Me)，1.21(s，C19-Me)，1.43(s，C17-Me)，4.08(1H，dt，C11-H).
該化合物具有以下結(jié)構(gòu) 實施例520，21-二羥基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮丙酮化合物按照實施例1的方法，將20，21-二羥基孕甾-4-烯-3-酮-21-乙酸酯(6.73g，18.0mM)、叔丁醇鉀(5.78g，51.5mM)和硝酸異丙酯(1.60ml)反應得到20，21-二羥基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。從丙酮水溶液中重結(jié)晶得到相應的丙酮化合物，熔點221-223℃(分解)。IR 1693，1622(m)，1535，1371m-1MS(CI)418(55％，M+1)，101(100％)1H-NMR(CDCl3)0.90(3H，s，C18·Me)，1.03(s，C19-Me)，1.33(s，Me)，1.37(s，Me)，3.46-3.54(1H，m，C20-H)，3.93-4.05(2H，m，C21-CH2).
該化合物具有以下結(jié)構(gòu) 通過下述實施例的方法可將丙酮基從20，21雙氧碳上脫去。實施例5A20，21-二羥基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮將從實施例5濾液重結(jié)晶后得到的20，21-二羥基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮丙酮化合物的甲醇溶液微熱助其形成溶液。然后將反應容器冷卻至室溫后加入5％鹽酸水溶液(10mL)。攪拌4小時后用碳酸鉀水溶液中和反應并在真空中濃縮。將殘留物分配在稀鹽酸水溶液和二氯甲烷中。然后分離有機層，用硫酸鎂干燥并濃縮得黃色泡沫狀物，將其在硅膠上通過閃式色譜純化得到20，21-二羥基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮，熔點183℃-185℃(甲醇水溶液)。IR(CHCl3)3628，3587，1693，1622，1535，1373cm-1MS(CI)378(100％，M+1)，342(35％，M+1-2H2O)1H-NMR0.92(3H，s，C18-Me)，1.30(3H，s，C19-Me)，3.34-3.44(1H，m，C20-H)，3.61-3.72(2H，m，C21-CH2).化合物具有以下結(jié)構(gòu) 實施例617β-環(huán)丙氧基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮按照實施例1的方法將17β-環(huán)丙氧雄甾-4-烯-3-酮(9.70g，29.5mM)、叔丁醇鉀(7.0g，62.4mM)和硝酸異丙酯(2.99ml)反應而得17β-環(huán)丙氧基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮，熔點137℃-138℃(甲醇)。IR(CHCl3)，1695，1622(m)，1535，1373cm-1MS(CI)374(100％，M+10，316(20％，M+1-c-C3H5-O)1H-NMR(CDCl3)0.38-0.61(4H，m)，0.80(3H，s，C18-Me)，1.29(s，C19-Me)，3.25-3.33(1H，m，cyclopropyl-CHO)，3.44(1H，t，C17-H).
化合物具有以下結(jié)構(gòu) 上述硝化的起始物可如下制備將17β-環(huán)丙氧雄甾-5-烯-3β-醇(19.36G，58.9mM)的丙酮(1.9L)溶液冷卻至-3℃，用瓊斯試劑(20ml)處理。用甲醇分解過量試劑。濾除固體。將濾液濃縮得到綠色油狀物，在硅膠上通過閃式色譜純化得到17β-環(huán)丙氧雄甾-4-烯-3-酮(11.0g，57％)。
上述氧化的起始物(17β-環(huán)丙氧雄甾-5-烯-3β-醇)可按照Angelastro和Blohm的美國專利4,966,897所述方法制備。實施例6A17β-(環(huán)丙氧基)-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮室溫與氮氣氛下，經(jīng)10分鐘將叔丁醇鉀(109g，0.97mol，2.1摩爾當量)加到攪拌下的17β-(環(huán)丙氧基)-雄甾-4-烯-3-酮的叔丁醇(2L)溶液中。連續(xù)在室溫下攪拌18小時，接著于室溫下經(jīng)30分鐘加入硝酸異丙酯(48.2g，0.46mol，1.0摩爾當量)的叔丁醇(50mL)溶液。室溫下連續(xù)再攪拌一天后，經(jīng)25分鐘加入冰醋酸(130mL)，再連續(xù)攪拌18小時。隨后加入二氯甲烷(1.5L)和鹽水(飽和NaCl，800mL)，再攪拌溶液10分鐘。然后分離有機相，用硫酸鎂干燥。過量洗滌反應漿，濃縮濾液(35℃/40毫米汞柱)而得深紅色油狀物。通過閃式色譜純化(SiO2，洗脫液∶乙酸乙酯/己烷5∶95，乙酸乙酯/己烷1∶9和乙酸乙酯/己烷15∶85)。合并并濃縮含有所需產(chǎn)物的級分(30℃/40毫米汞柱)，得到固體殘留物，將其在己烷(350mL)中攪拌。過濾并干燥該固體得到黃色固狀標題化合物(68g，40％)。將該濾液濃縮并重新進行如上色譜即得到另一部分化合物(8g，5％)。熔點133-134℃。IR(KBr)3437，3090，2945，2870，1693，1624，1531，1450，1373，1346，1332，1211，1188，1170，1076，1062，1035，1012，962，794，765cm-1.1H-NMR(CDCl3)δ0.50(4H，m，2x cyclopropyl-CH2)，0.80(3H，s，C18-Me)，1.30(3H，s，C19-Me)，3.3(3H，m，OCH ofcyclopropyl)，3.44(1H，t，C17-H).MS(CI，CH4)m/z(rel.intensity)374(100％，M+1).分析C22H31NO4的計算值C，70.75；H，8.37；N，3.75；實測值C，70.99；H，8.44；N，3.56。實施例74-硝基-雄甾-4-烯-3-酮-17β-羧酸按照實施例1的方法將雄甾-4-烯-3-酮-17β-羧酸(3.63g，11.4mM)、叔丁醇鉀(4g，35.3mmol)和硝酸異丙酯(1.9mL)反應生成4-硝基-21-雄甾-4-烯-3-酮-17β-羧酸，熔點205-208℃(分解)。IR(CHCl3)3034，2970，1697，1535，1373cm-1MS(CI)362(100％，M+1)1H-NMRδ(CDCl3)0.79(3H，s，C18·Me)，1.3(3H，s，C19·Me).
該化合物具有以下結(jié)構(gòu) 實施例83-羥基-4-硝基雄甾-3，5-二烯-17β-叔丁基甲酰胺將叔丁醇鉀(8.5g，75mmol)和叔丁醇(75mL)加到裝備有磁性攪棒和氣體入口的250mL圓底燒瓶中。加入雄甾-4-烯-3-酮-17β-甲酰胺(9.3g，25mmol)，將該溶液在65℃于氬氣氛中攪拌20分鐘。加入硝酸異丙酯(2.8mL，28mmol)使形成劇烈放熱反應，經(jīng)1小時將該溶液冷卻至25℃。加入乙酸(7.5mL)，濾除沉淀并濃縮濾液。將所得黑色膠溶于二氯甲烷，用水洗滌，濃縮并在300mL硅膠上進行色譜，用30-50％乙酸乙酯/己烷洗脫，從二氯甲烷/己烷中得到441mg晶狀產(chǎn)物。熔點207-208.5℃(分解)；IR(KBr)3441，2967，2943，2916，2885，2847，1693，1670，1624，1535，1508，1475，1452，1390，1367cm-1.Uv(EtOH)λmax＝242nM；ε＝13,100；1H-NMR(CDCl3)δ4.40(s，1H)，2.52-2.60(m，2H)，1.4-2.46(m，16H)，1.35(s，9H)，1.31(s，3H)，1.03-1.32(m，4H)，0.74(s，3H)ppm；分析C24H36N2O4計算值C69.20％；H8.71％，N6.72％；實測值C69.33％，H8.63％，N6.60％。該化合物結(jié)構(gòu)如下 實施例9A20-乙酰硫甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮在吡啶(2ml)中制備20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮(750mg，2.0mmol)(實施例1制備)和甲苯磺酰氯(400mg，2.1mmol)，在25℃攪拌12小時。24小時后，將殘留物再溶于二氯甲烷(2mL)中，加入另外的甲苯磺酰氯(40mg)。再攪拌12小時后，加入2滴水，將該混合物攪拌30分鐘，用二氯甲烷(50ml)、水(50ml)、10％HCl(50ml)洗滌，以MgSO4干燥。濃縮該物質(zhì)，從50∶50乙酸乙酯/己烷(1∶1)的溶液結(jié)晶得到黃色固體。熔點181℃-182℃。
將如上制備的甲苯磺酰鹽(529mg)溶于無水二甲基甲酰胺(10ml)，加入通過將Cs2CO3(163mg，0.5mmol)和HSCOCH3(86mg，1.1mM)溶于甲醇(3mL)并蒸發(fā)而新制得的CsSCOCH3。24小時后，用乙醚小時反應，用水洗滌，濃縮并用二氯甲烷/己烷(4∶1)進行閃式色譜。濃縮含有所需產(chǎn)物的級分并從己烷中結(jié)晶而得到225mg硫酯。
另外，替換由上述方法制得的甲苯磺酰鹽按照下述步驟制備相應的硫代乙?；飳s2CO3(163mg，0.5mmol)溶于甲醇(2ml)和HSCOCH3(90mg，1.1mmol)。真空濃縮均相溶液。將殘留物溶于二甲基甲酰胺(3ml)和甲苯磺酰鹽(529mg，1.0mM)。將所得溶液在25℃氮氣下攪拌18小時。將如上制備的硫代乙酸銫(1.0mmol)的另一溶液(1.0ml二甲基甲酰胺)加到反應容器中。轉(zhuǎn)化完成后(TLC確定)，加入1N HCl(1ml)，將所得溶液溶于乙酸乙酯，水洗，硫酸鎂干燥。
該化合物結(jié)構(gòu)如下 將實施例9A制備的硫代乙?；?65mg，0.15mM)溶于2ml甲醇和含0.3ml 1N LiOH的1mlTHF中。攪拌1小時后，加入0.1ml乙酸。用乙酸乙酯提取該溶液，水洗，硫酸鎂干燥。將產(chǎn)物溶于1.0ml乙酸中，加熱至約50℃，真空濃縮而得淡黃色固體(30mg)。
該化合物結(jié)構(gòu)如下 實施例1017β-環(huán)丙胺基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮將17β-環(huán)丙胺基-4-烯-3-酮(4.61g，14.07mmol)和叔丁醇鉀(4.74g，42.22mmol，3摩爾當量)的叔丁醇溶液(60ml)加熱回流1小時。當溶液開始回流時即加入硝酸異丙酯(1.43ml，14.07mM，1摩爾當量)。將反應慢慢冷至室溫，然后向反應混合物中加入冰醋酸(20ml)和二氯甲烷(20ml)以溶解橘紅色沉淀物。將反應于室溫放置過夜。過濾反應混合物，用二氯甲烷洗滌濾餅至白色。將濾液用另外200ml二氯甲烷稀釋，隨后用半飽和的氯化鈉水溶液(200ml)洗滌，然后用含等量半飽和氯化鈉水溶液和飽和碳酸氫鈉水溶液的200ml溶液洗滌。有機層用硫酸鎂干燥，真空濃縮，在硅膠上通過色譜純化(二氯甲烷/甲醇，19∶1)而得到17β-環(huán)丙胺基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮的黃色泡沫狀固體。1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ0.75(s，3H，C19-Me)；1.30(s，3H，C18-Me)ppm.IR(KBr)3435，2944，2870，1695，1533，1371，1013，766cm-1.MS(EI)＝372(M+).該化合物結(jié)構(gòu)如下 第二步將甾體4-硝基-Δ4-3-酮還原為4-氨基-Δ4-3-酮甾類化合物A.催化還原實施例114-氨基-20-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮將20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮(2.01g，5.35mM)的無水乙醇(28ml)溶液相繼用Lindlar催化劑(吸附5％鈀和5.2％鉑的碳酸鈣，0.81g)和喹啉(37μl)處理，在氫氣中于40-55p.s.i.保持24小時。然后用硅藻土過濾混合物，濾液濃縮為黃色固體，用短徑(short path)色譜法純化而得4-氨基-20-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮，熔點180-185℃(異丙醇水溶液)。IR3512，3470，3384，1648，1614，1576cm-1MS(CI)346(100％，M+1)，328(30％，M+1-H2O).1H-NMR0.72(3H，s，C8-Me)，1.02(d，C21-Me)，1.15(s，C19-Me)，2.6-3.2(v.br，NH2)，3.36(1H，dd，0.5·C22-CH2)，3.63(1H，dd，0.5·C22-CH2).
該化合物結(jié)構(gòu)如下 實施例1217β-環(huán)丙氧基-4-氨基-雄甾-4-烯-3-酮將17β-環(huán)丙氧基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮(4.36g，11.6mM)的無水乙醇(125ML)溶液相繼用Ljndlar催化劑和喹啉(80mL)處理。在一個大氣壓下于氫氣中將混合物攪拌117小時。反應混合物用頂端加有活性炭的硅藻土過濾，用無水乙醇洗滌。濃縮合并的濾液和洗液而得棕色液體(3.7g)，溶解于二氯甲烷中，裝于用己烷/乙酸乙酯(1∶4)制備的硅膠柱頂端，閃式色譜純化，用己烷/乙酸乙酯(1∶4)洗脫。
合并含產(chǎn)物的級分，濃縮得到淡黃色玻璃狀物質(zhì)(2.3g)，放置結(jié)晶。將晶體溶于甲醇，用棉花過濾，滴加入水直至開始結(jié)晶。將混合物置于冰箱過夜(12-18小時)。過濾收集晶體，用冷甲醇水溶液和水洗滌，然后真空干燥得到4-氨基-17β-(環(huán)丙氧基)-雄甾-4-烯-3-酮的淡黃色固體(1.97g)。IR(KBr)ν3458，3372，1674，1622(m)，1585cm-1.Anal.calc′d for C22H33NO2C76.92；H9.68；N4.08.FoundC76.86；H10.04；N4.08.1H-NMR(CDCl3)δ0.38-0.61(4H，m，2x CH2)，0.79(3H，s，C18-Me)，1.15(s，C19-Me)，3.27+3.44+ca.3.4(4H，cycloproxy-H，C17-H，NH2，m+t，v.br.).UV(EtOH)λ294(ε7570，1g.ε3.879)MS/CI 344(100％，M+1)，286(30％，M+1-C3H5OH).The compound 實施例12A4-氨基-17β-(環(huán)丙氧基)-雄甾-4-烯-3-酮鹽酸鹽在35℃于氮氣下，向17β-(環(huán)丙氧基)-4-硝基-雄甾-4-烯-3-酮(10g，26.7mmol)的甲醇溶液(200ml)中加入Lindlar催化劑(4g，5.9％Pd+5.4％Pb/CCP3(CaCO3)，D.R.Engelhard，Seneca，SC)和喹啉(0.2g，1.6mmol)。將所得混合物置于Parr振蕩器中，室溫下于氫氣中在50psi振搖20小時，期間約消耗3摩爾當量的氫氣。濾除催化劑。
將上述步驟重復大約9次(8×10g和1×7g)，合并過濾后的產(chǎn)物溶液。在該溶液中加入二氧化硅(550g)，將混合物于10-15℃減壓(10mmHg)濃縮。將二氧化硅和產(chǎn)物的混合物上閃式色譜柱(直徑20cm，含5kg二氧化硅)，相繼用15％(20L)，20％(20L)和30％(40L)乙酸乙酯的己烷溶液洗脫柱子。合并含產(chǎn)物的級分，在10℃、30mmHg下濃縮而得黃色溶液(600ml)。在4℃將該溶液用1.8M HCl的乙酸乙酯溶液(75ml)處理。所得反應漿用丙酮(200ml)和二氯甲烷(100ml)稀釋。攪拌30分鐘后，過濾收集固體，用丙酮(300ml)洗滌，干燥得到標題化合物(34g，37％)；熔點206-207℃。將濾液濃縮至300ml，收集固體得到第二批化合物(3.4g，4％)；熔點203-204℃。
IR(KBr)3445，3086，2945，2872，2555，1967，1791，1682，1641cm-1.
1H-NMR(CDCl3)δ0.50(4H，m，2x cyclopropyl-CH2)，0.76(3H，s，C18-Me)，1.21(3H，s，C19-CH3)，3.2(1H，m，OCH ofcyclopropyl)，3.39(1H，t，C17-H)，9.6(3H，br.s，NH3).
MS(CI)m/z344(100％，M+).分析C22H34NO2Cl·(0.6)H2O計算值C68.05；H9.07，N3.61；實測值C68.18，H9.06，N3.52。實施例1317β-環(huán)丙氨基-4-氨基孕甾-4-烯-3-酮將17β-環(huán)丙氨基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮(670mg，1.80mmol)溶于無水乙醇(11ml)，用Lindlar催化劑(268mg)和喹啉(3ul)處理。在大氣壓下(約760mm/mg)于氫氣中劇烈攪拌溶液18小時。過濾反應混合物，用乙醇(100ml)和二氯甲烷(100ml)洗滌。真空中除去溶劑，產(chǎn)物在硅膠上用色譜純化(二氯甲烷/甲醇，47∶3)而得黃色油狀物，結(jié)晶即得黃色固體。熔點149-150℃(乙醚)IR(KBr)3474，3366，2945，1616，1577cm-1(MS(Cl/CH4)[M++H)＝3431H-NMR(33MHz，CDCl3)δ0.73(3H，s，C18-Me)，1.15(3H，s，C19-Me)，2.66(1H，t，C17-H)13C-NMR(75MHz，CDCl3)δ6.464，7.185，11.289，20.803，23.682，24.757，29.683，29.753，30.914，32.860，34.899，35.307，37.904，42.453，52.910，54.549，69.014，132.938，138.860，194.343. B.化學還原實施例144-氨基-20-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮在20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮(0.52g，1.38ml)的無水乙醇(4.8ml)溶液中一次加入二氯化錫(2.1g)，然后加熱至70℃反應6小時。將反應容器冷卻至室溫，將該溶液用碳酸氫鈉(9g)小心中和10分鐘。然后過濾所得反應漿，將濾出的棕色固體在氫氟酸(25ml)和乙酸乙酯(25ml)中攪拌。重復氫氟酸和乙酸乙酯的處理過程。合并濾出的有機相，硫酸鎂干燥，過濾并濃縮。將所得殘余物通過閃式色譜法純化而得4-氨基-20-羥甲基孕甾-4-烯-3-酮的白色固體，其與美國專利5,218,110(Weintraub)和美國專利5,120,840(Weintraub等)所描述的化合物一致，這些專利在此作為參考。該化合物結(jié)構(gòu)如下 實施例144-氨基-17-環(huán)丙氧基雄甾-4-烯-3-酮用鋅粉(1.0g)處理17-環(huán)丙氧基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮(1.0g，2.71mM)的乙酸溶液(10ml)。室溫下劇烈攪拌混合物1.5小時。濾除鋅鹽并用乙酸乙酯洗滌。合并濾液和洗液，濃縮得到黃色固體，將其再溶于乙酸乙酯并用1M鹽酸(150ml)提取3次。合并的酸提取液用氫氧化鈉(pH14)中和，再用乙醚提取。用硫酸鈉干燥合并的有機層，濃縮得到4-氨基-17-環(huán)丙氧基雄甾-4-烯-3-酮(0.59g)，熔點100-102℃(甲醇水溶液)。IR3354，1662，1620，1581cm-1MS(CI)344(100％，M+1)1H-NMR0.37-0.61(4H，m，2x cyclopropyl CH2)，0.79(3H，s，C18-Me)，1.16(s，C19-Me)，3.25-3.33(m，cyclopropyl-CHO)，3.44(t，C17-H).該化合物結(jié)構(gòu)如下 實施例1620-乙酰硫甲基-4-氨基孕甾-4-烯-3-酮將20-乙酰硫甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮(173mg，0.40mmol)和300mg鋅粉于2ml冰醋酸中攪拌30分鐘。將混合物倒入乙酸乙酯(50ml)中，用3×50ml飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，硫酸鎂干燥。熔點173-176℃。
該化合物結(jié)構(gòu)如下
權(quán)利要求
1.制備下列通式化合物的方法 其中R是OH，C1-C6鏈烷酰基，C1-C6鏈烷酰氧基，C1-C4鏈烷醇，COCH2OH，CO2H，CONR7R8，環(huán)丙氧基，乙酰硫代鏈烷基，環(huán)丙氨基，叔丁基甲酰胺，2，2-二甲基二氧戊環(huán)-4-基，1，2-二羥基乙基和C-4烷烴硫醇；R1是氫，羥基或C1-6烷基；R2，R3和R4是彼此獨立的氫或C1-6烷基；R5和R6是彼此獨立的氫或OH；R7是氫或C1-C8烷基；R8是C1-C8烷基；環(huán)上的符號 表示該鍵是單鍵或雙鍵；其中R和R1一起以及/或者R5和R6一起可代表＝O；前提是當R是OH時，R1是氫；以及當R5是OH時，R6是氫；該方法依次包括a)將下列通式起始化合物 其中R-R8和 同以上定義，在升高或適當溫度下與有效量強堿反應足夠時間而生成相應的熱力學3，5-二烯醇酯，然后加入中性的硝化試劑生成4-硝基甾類化合物；然后b)將4-硝基甾類化合物與適當還原劑反應。
2.權(quán)利要求1的方法，其中的化合物為(17S)-環(huán)丙氧基雄甾-4-烯-3-酮。
3.權(quán)利要求1的方法，其中的化合物為(20S)-4-氨基-21-羥基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮。
4.權(quán)利要求1的方法，其中強堿選自叔丁醇鉀和叔戊酸鉀(potassiumtert-amylate)。
5.權(quán)利要求4的方法，其中有效量的強堿約在2-4摩爾當量之間。
6.權(quán)利要求5的方法，其中有數(shù)量的強堿約為2摩爾當量。
7.權(quán)利要求1的方法，其中升高的溫度約在17℃與100℃之間。
8.權(quán)利要求7的方法，其中升高的溫度約在50℃與83℃之間。
9.權(quán)利要求8的方法，其中升高的溫度約為83℃。
10.權(quán)利要求1的方法，其中足以生成熱力學二烯醇酯的時間約為5分鐘到8小時之間。
11.權(quán)利要求10的方法，其中足以生成熱力學二烯醇酯的時間約為15分鐘到180分鐘之間。
12.權(quán)利要求11的方法，其中足以生成熱力學二烯醇酯的時間約為60分鐘。
13.權(quán)利要求1的方法，其中的中性硝化劑是含3到8個碳原子的飽直鏈或支鏈硝酸烷基酯。
14.權(quán)利要求13的方法，其中的硝酸烷基酯選自硝酸異丙酯、硝酸異丁酯和己基硝酸2-乙酯。
15.權(quán)利要求14的方法，其中適當?shù)倪€原劑選自化學試劑如乙酸中的金屬鋅，或乙酸中的金屬鋅；催化劑如Lindlar催化劑。 其中R是OH，C1-C6鏈烷?；?，C1-C6鏈烷酰氧基，C1-C4鏈烷醇，COCH2OH，CO2H，CONR7R8，環(huán)丙氧基，環(huán)丙氨基，乙酰硫代鏈烷基，2，2-二甲基二氧戊環(huán)-4-基，1，2-二羥基乙基和C1-4烷烴硫醇；R1是氫，羥基或C1-6烷基；R和R1一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在17位碳上；R2，R3和R4是彼此獨立的氫或C1-6烷基；R5和R6是彼此獨立的氫或OH；R5和R6可一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在11位碳上；R7是氫或C1-C8烷基；R8是C1-C8烷基；前提是當R是OH時，R1是氫；以及當R5是OH時，R6是氫。
16.權(quán)利要求15的化合物為(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。
17.權(quán)利要求15的化合物為17β-環(huán)丙氧基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮。
18.抑制甾美化合物5α-還原酶的方法，包括給予有效抑制量的下列通式化合物 其中R是OH，C1-C6鏈烷?；?，C1-C6鏈烷酰氧基，C1-C4鏈烷醇，COCH2OH，CO2H，CONR7R8，環(huán)丙氧基，乙酰硫代鏈烷基，環(huán)丙氨基，2，2-二甲基二氧戊環(huán)-4-基，1，2-二羥基乙基和C1-4烷烴硫醇；R1是氫，羥基或C1-6烷基；R和R1一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在17位碳上；R2，R3和R4是彼此獨立的氫或C1-6烷基；R5和R6是彼此獨立的氫或OH；R5和R6可一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在11位碳上；R7是氫或C1-C8烷基；R8是C1-C8烷基；前提是當R是OH時，R1是氫；以及當R5是OH時，R6是氫。
19.權(quán)利要求18的方法，其中給予的化合物是20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。
20.抑制甾類化合物C17-20裂解酶的方法，包括給予有效抑制量的下列通式化合物 其中R是OH，C1-C6鏈烷酰基，C1-C6鏈烷酰氧基，C1-C4鏈烷醇，COCH2OH，CO2H，CONR7R8，環(huán)丙氧基，環(huán)丙氨基，乙酰硫代鏈烷基，2，2-二甲基二氧戊環(huán)-4-基，1，2-二羥基乙基和C1-4烷烴硫醇；R1是氫，羥基或C1-6烷基；R和R1一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在17位碳上；R2，R3和R4是彼此獨立的氫或C1-6烷基；R5和R6是彼此獨立的氫或OH；R5和R6可一起表示＝O，即一個氧原子以雙鍵連接在11位碳上；R7是氫或C1-C8烷基；R8是C1-C8烷基；前提是當R是OH時，R1是氫；以及當R5是OH時，R6是氫。
21.權(quán)利要求20的方法，其中給予的化合物是17β-環(huán)丙氧基-4-硝基雄甾-4-烯-3-酮。
22.權(quán)利要求20的方法，其中給予的化合物是(20S)-20-羥甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。
23.權(quán)利要求20的方法，其中給予的化合物是(20S)-20-硫甲基-4-硝基孕甾-4-烯-3-酮。
24.一種制備如下通式化合物的方法 其中R是OH，C1-C6鏈烷?；珻1-C6鏈烷酰氧基，C1-C4鏈烷醇，COCH2OH，CO2H，CONR7R8，環(huán)丙氧基，乙酰硫代鏈烷基，環(huán)丙氨基，叔丁基甲酰胺，2，2-二甲基二氧戊環(huán)-4-基，1，2-二羥基乙基和C1-4烷烴硫醇；R1是氫，羥基或C1-6烷基；R2，R3和R4是彼此獨立的氫或C1-6烷基；R5和R6是彼此獨立的氫或OH；R7是氫或C1-C8烷基；R8是C1-C8烷基；環(huán)上的符號 表示該鍵是單鍵或雙鍵；其中R和R1一起以及/或者R5和R6一起可代表＝O；前提是當R是OH時，R1是氫或C1-4烷基；以及當R5是OH時，R6是氫并且當R6是OH時，R5是氫；該方法依次包括 其中R-R8和 同以上定義，在適當溫度下與有效量強堿反應足夠時間而生成相應的熱力學3，5-二烯醇酯，然后加入中性的硝化試劑生成4-硝基甾類化合物；然后b)將4-硝基甾類化合物與適當還原劑反應；以及c)選擇性轉(zhuǎn)化為可藥用鹽。
25.權(quán)利要求24的方法，其中的化合物為(17S)-4-氨基-環(huán)丙氧基-雄甾-4-烯-3-酮。
26.權(quán)利要求24的方法，其中的化合物為(20S)-4-氨基-21-羥基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮。
27.權(quán)利要求24的方法，其中的化合物為4-氨基-21-羥基-20-甲基孕甾-4-烯-3-酮鹽酸鹽。
28.權(quán)利要求24的方法，其中適當?shù)臏囟仍诩s17℃至約30℃之間。
29.權(quán)利要求24的方法，其中適當?shù)臏囟仍诩s20℃至25℃之間。
全文摘要
本發(fā)明提供了4-硝基-△
文檔編號A61K31/56GK1147258SQ95192882
公開日1997年4月9日 申請日期1995年4月11日 優(yōu)先權(quán)日1994年5月2日
發(fā)明者P·M·韋特拉博, C·A·加特斯, M·R·安吉拉斯特羅, T·T·庫拉尼, G·A·伏萊恩, C-H·R·金 申請人:默里爾藥物公司