專利名稱：蛻皮甾酮作為誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化合物的治療活性領(lǐng)域，具體涉及蛻皮甾酮作為誘導(dǎo)哺乳動(dòng) 物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用。
背景技術(shù)：
神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells, NSCs)存在于胚胎和成年哺乳動(dòng)物的中 樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有自我更新和多向分化潛能，能分化為各種神經(jīng)細(xì)胞，如神經(jīng) 元、少突膠質(zhì)細(xì)胞以及星形膠質(zhì)細(xì)胞等，為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷、神經(jīng)系統(tǒng)變性 病或遺傳性代謝疾病、神經(jīng)退行性疾病等提供了新的治療策略。中樞神經(jīng)系統(tǒng) 損傷后，大部分NSCs分化為膠質(zhì)細(xì)胞，在損傷部位形成膠質(zhì)瘢痕，阻礙了軸突 生長(zhǎng)，使損傷不能修復(fù)。因此，提高NSCs向神經(jīng)元的分化比例成為神經(jīng)科學(xué)研 究的熱點(diǎn)。目前，國(guó)內(nèi)外通用的體外誘導(dǎo)NSCs增殖分化的方法是給予絲裂原，如堿性 成纖維細(xì)月包生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor, bFGF )及表皮生長(zhǎng) 因子(epidermal growth factor, EGF)等，干預(yù)維持培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞，j吏 其處于增殖狀態(tài)，除去絲裂原并添加含胎牛血清的培養(yǎng)基后，誘導(dǎo)NSCs進(jìn)行分 化，但這種方法所得到的分化細(xì)胞主要是膠質(zhì)細(xì)胞，神經(jīng)元比例較低。蛻皮甾酮(Ecdysterone， EDS)是活血化瘀中藥牛膝、漏,、露水草等的 有效單體成分，在動(dòng)植物界均有分布。研究發(fā)現(xiàn)，EDS生物學(xué)功能廣泛，具有促 進(jìn)蛋白核酸的合成、調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答、影響神經(jīng)遞質(zhì)代謝等多種作用；并能促進(jìn) 血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，對(duì)多種因素如缺血缺氧、內(nèi)毒素、腫瘤壞死因子等造成 的內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用；整體動(dòng)物給藥后，蛻皮甾酮對(duì)外傷或缺血引起 的腦損傷也有一定的保護(hù)作用，能促進(jìn)大鼠海馬學(xué)習(xí)記憶障礙的改善。研究還指出，作為內(nèi)源性甾體激素，EDS在昆蟲類生物大腦神經(jīng)發(fā)育中起重要的調(diào)控作 用，在不同的分泌濃度下，它能誘導(dǎo)昆蟲類神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖、分化甚至凋 亡。但迄今為止，EDS對(duì)哺乳動(dòng)物NSCs的增殖與分化是否也有調(diào)控作用尚未見 報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供EDS作為誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物NSCs向神經(jīng) 元分化的誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用，從而為NSCs移植治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病和損傷修復(fù)研究 提供新的思路和方法。本發(fā)明的目的之二在于提供一種誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物NSCs向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培 養(yǎng)基，含有誘導(dǎo)劑EDS。進(jìn)一步，所述細(xì)胞培養(yǎng)基中含有濃度為100-400 mg/L的誘導(dǎo)劑EDS;進(jìn)一步，所述細(xì)胞培養(yǎng)基中含有濃度為200 mg/L的誘導(dǎo)劑EDS;進(jìn)一步，所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有胎牛血清；進(jìn)一步，所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有體積百分濃度為5-20%的胎牛血清； 進(jìn)一步，所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有體積百分濃度為10%的胎牛血清。 本發(fā)明的目的之三在于提供一種誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物NSCs向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培 養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟a. DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液的制備取制備DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液1L用量的 DMEM/F12 (1:1)干粉1袋、谷氨酰胺2. 5 g，用濃度為0. 1 mol/L、 pH值為 7. 35的磷酸鹽緩沖液即PBS溶解并稀釋至1L,調(diào)節(jié)pH值為7. 5，用0. 2 pin微 孔濾膜過濾除菌，即得；b. 細(xì)胞培養(yǎng)基的制備按照制備100 ml細(xì)胞培養(yǎng)基計(jì)，取誘導(dǎo)劑蛻皮甾 酮10-40 mg，加入步驟a制得的DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液70 ml使溶解，用0, 2 微孔濾膜過濾除菌后，加入胎牛血清5-20ml、青霉素與鏈霉素的混合液(由濃 度為4萬U/ml的青霉素溶液、濃度為4萬U/ml的鏈霉素溶液按1: 1混合而成) 1 ml，最后用DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液定容至100 ml，即得。進(jìn)一步，所述步驟b中誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮的用量為20 mg; 進(jìn)一步，所述步驟b中誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮的用量為20mg,胎牛血清的加入量 為10 ml。本發(fā)明的有益效果在于在哺乳動(dòng)物NSCs分化培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)劑EDS， NSCs向神經(jīng)元分化的比例明顯提高，特別是當(dāng)EDS濃度為200 mg/L時(shí)，免疫熒 光染色后激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)顯示NSCs分化為神經(jīng)元的比例為22. 6±4. 7 %,而對(duì)照組II為12.4±3. 3%, 二者相比有顯著性差異(P<0. 05);同時(shí)， 流式細(xì)胞儀3次;險(xiǎn)測(cè)NSCs向神經(jīng)元分化比例，分別為24. 6%、 18. 5%、 21. 9%, 均值為21.7%，而對(duì)照組II分別為10. 4°/。、 9.5%、 11.9%,均值為IO. 6%, 二者有 統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(戶〈0. 05),與免疫熒光染色鑒定結(jié)果一致；以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)EDS 具有促進(jìn)NSCs向神經(jīng)元分化的作用，含有EDS的細(xì)胞培養(yǎng)基可誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物 NSCs向神經(jīng)元分化，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)，和特征在某種程度上將在隨后的說明書中進(jìn) 行闡述，并且在某種程度上，基于對(duì)下文的考察研究對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言 將是顯而易見的，或者可以從本發(fā)明的實(shí)踐中得到教導(dǎo)。本發(fā)明的目標(biāo)和其 他優(yōu)點(diǎn)可以通過下面的說明書和權(quán)利要求書來實(shí)現(xiàn)和獲得。


圖1為克隆球Nestin免疫熒光染色鑒定圖； 圖2為對(duì)照組II分化細(xì)胞免疫熒光染色鑒定圖；圖3為濃度為200 mg/L的EDS誘導(dǎo)NSCs向神經(jīng)元分化的免疫熒光染色鑒 定圖。
具體實(shí)施方式
下面將參照附圖，通過實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述EDS作為誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物NSCs 向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用的有益效果。一、材料與試劑1、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新生48小時(shí)內(nèi)的SD乳大鼠5只，由中國(guó)人民解》文軍第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物中心提供。2、 實(shí)驗(yàn)試劑細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM/F12 (1: 1 )， B27添加劑為Gibco公司產(chǎn)品，胎牛血清購(gòu) 自杭州四季青生物工程材料有限公司，bFGF及EGF為Sigma公司產(chǎn)品；EDS購(gòu) 自中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所； 一抗小鼠抗大鼠巢蛋白(Nestin)單克隆抗 體、小鼠抗大鼠膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)多克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，兔抗大鼠m型p-微管蛋白(Class III p-Tubulin, Tujl)單克隆抗體購(gòu)自碧云天生物:技術(shù)研究所；二抗 異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate， FITC )標(biāo)記的羊抗小鼠IgG、 Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgG、 Cy3標(biāo)記的羊抗兔IgG購(gòu)自碧云天生物技術(shù)研究所； 4'， 6-二脒基-2-苯p引-朵(4'， 6-diamidino —2-phenyl indole, DAPI )購(gòu)自碧云 天生物技術(shù)研究所。3、 細(xì)胞培養(yǎng)基DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液取制備DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液1L用量的DMEM/F12 (1:1)干粉l袋、谷氨酰胺2. 5 g,用濃度為0. 1 mol/L、 pH值為7. 35的璘 酸鹽緩沖液(PBS)溶解并稀釋至1L，調(diào)節(jié)pH值為7. 5,用0. 2 )im微孔濾膜過 濾除菌，即得。DMEM/F12無血清培養(yǎng)基在DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液中加入B27、 bFGF、 EGF 至B27最終體積百分濃度為2y。、bFGF終濃度為20 ng/ml 、EGF終濃度為20ng/ml, 即得。EDS誘導(dǎo)培養(yǎng)基分別取EDS 5、 10、 20、 40、 80 mg,加入DMEM/F12基礎(chǔ) 培養(yǎng)液70 ml使溶解，用0.2 iom微孔濾膜過濾除菌后，加入胎牛血清10 ml、 青霉素與鏈霉素的混合液(由濃度為4萬U/ml的青霉素溶液、濃度為4萬U/ml的鏈霉素溶液按l: 1混合而成)l ml，最后用DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液定容至100 ml ， 即得含有濃度分別為50、 100、 200、 400、 800 mg/L的EDS、體積百分濃度為 10 %的胎牛血清的EDS誘導(dǎo)培養(yǎng)基。二、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果1、 NSCs的分離、培養(yǎng)與鑒定方法將新生48小時(shí)內(nèi)的SD乳大鼠用體積百分濃度為75%的乙醇溶液消毒， 脫頸推處死后，無菌條件下打開顱腔，于解剖顯微鏡下剝離腦膜分離出海馬， 置D-Hank's溶液中剪切成大小約為0.5 mm'的細(xì)小組織塊，滴管反復(fù)吹打，再 經(jīng)200目銅網(wǎng)過濾后離心，細(xì)胞沉淀重懸于DMEM/F12無血清培養(yǎng)基，臺(tái)盼藍(lán)染 色后進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)；按細(xì)胞密度為1 x 10'細(xì)胞/ml將細(xì)胞接種于75 ml培養(yǎng)瓶中，置溫度37°C, 體積濃度為5%的C02培養(yǎng)箱中懸浮培養(yǎng)，當(dāng)原代克隆球形成后用機(jī)械分離法制作 單細(xì)胞懸液，再按細(xì)胞密度為5 x lV細(xì)胞/ml進(jìn)行傳代培養(yǎng)，每隔3天半量更換 培養(yǎng)液1次，每隔7-8天機(jī)械分離克隆球并傳代培養(yǎng)1次；將經(jīng)過傳代所形成的NSCs克隆球接種于預(yù)先涂布有多聚賴氨酸的載玻片 上，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)使其貼壁后進(jìn)行Nestin免疫熒光染色，觀察NSCs特異性 抗原Nestin的表達(dá)情況。免疫熒光染色方法為取上述貼壁克隆球，用質(zhì)量百 分濃度為4%的多聚曱醛溶液固定30分鐘，用濃度為0. lmol/L的PBS洗滌3次， 加入一抗小鼠抗大鼠Nestin單克隆抗體(稀釋度為1 : 100)，于室溫下孵育 6小時(shí)，PBS洗滌3次，加入二抗Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgG(稀釋度為1:150)， 于室溫下孵育50分鐘，PBS洗滌3次，甘油緩沖液(由甘油9份和濃度為0. 1 mol/L的PBS l份組成)封片，激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行檢查。結(jié)果原代細(xì)胞取材之后，培養(yǎng)24小時(shí)可見克隆開始形成，3-4天克隆形 態(tài)已較為豐滿規(guī)則，7-8天克隆球已需要傳代?？寺∏騈estin免疫熒光染色鑒 定結(jié)果見圖1，其中A為原代克隆球，xl00; B為傳代克隆球Nestin免疫熒光 染色，xl00;從圖可見傳代克隆球呈Nestin抗原強(qiáng)陽性。2、 EDS作為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)NSCs向神經(jīng)元分化的能力方法取傳代培養(yǎng)的NSCs克隆，用EDS濃度分別為50、 100、 200、 400、 800 mg/L的EDS誘導(dǎo)培養(yǎng)基，按細(xì)胞密度為5 x 1()S細(xì)胞/ml接種于預(yù)先置有多 聚賴氨酸涂層蓋玻片的12孔板內(nèi)，作為5個(gè)實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)設(shè)對(duì)照組I (按照EDS 誘導(dǎo)培養(yǎng)基配制方法制備培養(yǎng)基，但不加入EDS)及對(duì)照組II (用體積百分濃度 為10。/。的胎牛血清溶液代替EDS誘導(dǎo)培養(yǎng)基)，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔，置溫度37匸， 體積濃度為5%的C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，于培養(yǎng)10天后釆用免疫熒光染色和流式細(xì) 胞術(shù)檢測(cè)各組NSCs分化為神經(jīng)元的比例。免疫熒光染色方法為前述常規(guī)方法，不同之處在于以兔抗大鼠Tujl單克 隆抗體(稀釋度為1 : 200 )為一抗標(biāo)記神經(jīng)元，對(duì)應(yīng)二抗為Cy3標(biāo)記的羊抗兔 IgG (稀釋度為1 : 200 );以小鼠抗大鼠GFAP多克隆抗體(稀釋度為1 : 100) 為一抗標(biāo)記星形膠質(zhì)細(xì)胞，對(duì)應(yīng)二抗為FITC標(biāo)記的羊抗小鼠IgG (稀釋度為1 :150);用DAPI標(biāo)記細(xì)胞核；采用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行檢測(cè)，每組隨機(jī)計(jì)數(shù) 5個(gè)視野下Tuj 1陽性和GFAP陽性細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算其占總細(xì)胞數(shù)的比例。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)方法為每組收集5xl(T個(gè)細(xì)胞，用質(zhì)量百分濃度為4%的 多聚曱醛溶液固定30分鐘后，加入一抗兔抗大鼠Tujl單克隆抗體(稀釋度 為1 : 150),于室溫下孵育1小時(shí)，用濃度為0. 1 mol/L的PBS洗滌3次，加入 二抗FITC標(biāo)記的羊抗兔IgG (稀釋度為1 : 100)，于室溫下孵育45分鐘，PBS 洗滌3次后，釆用流式細(xì)胞儀檢測(cè)；對(duì)照組I和對(duì)照組II用PBS代替一抗，其 余方法相同。.結(jié)果對(duì)照組II分化細(xì)胞免疫熒光染色鑒定結(jié)果見圖2,其中A為NSCs分 化狀態(tài)，x 400; B-D為NSCs分化后行免疫熒光染色，B為GFAP免疫熒光染色； C為Tujl免疫熒光染色；D為GFAP與Tujl雙標(biāo)免疫熒光染色。從圖2可見， 分化條件下培養(yǎng)10天后，絕大部分細(xì)胞呈Tujl陽性或GFAP陽性。各組NSCs分化為Tujl陽性、GFAP陽性細(xì)胞的比例見表1,結(jié)果顯示EDS 誘導(dǎo)組除濃度為50 mg/L組外，其余各濃度組Tujl陽性細(xì)胞比例均較對(duì)照組II有所提高，其中濃度為200 mg/L組與對(duì)照組II有顯著差異(戶<0.05)。表1、各組NSCs分化為Tujl陽性、GFAP陽性細(xì)胞的比例(％ ， 7 ± <y)EDS (mg/L)組別對(duì)照組I對(duì)照組II50100200400800Tujl陽性13. 5±4. 612. 4 ±3. 311. 9 ±3. 415. 1 ± 5. 122. 6 ±4. 716. 3 ±5. 513. 8 ± 3. 4GFAP陽性84. 5 ±7, 485. 3 ±7. 887. 9±8. 182. 3± 9. 275. 3 ±8. 482. 4 ±6. 985. 5 ±8. 7濃度為200 mg/L的EDS誘導(dǎo)NSCs向神經(jīng)元分化的免疫熒光染色鑒定結(jié)果 見圖3,其中A-D為對(duì)照組II, E-H為濃度為200 mg/L的EDS誘導(dǎo)組；A-H均 DAPI染色；同時(shí)，B與F行Tujl免疫熒光染色；C與G行GFAP免疫熒光染色； D與H行GFAP與Tujl雙標(biāo)免疫熒光染色。從圖3可見，用濃度為200 mg/L的 EDS誘導(dǎo)后顯著提高了 NSCs向Tujl陽性細(xì)胞分化的比例。為進(jìn)一步明確濃度為200 mg/L的EDS對(duì)NSCs分化能力的影響，采用流式 細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NSCs向Tujl陽性細(xì)胞分化比例，重復(fù);f全測(cè)3次，結(jié)果分別為24. 6%、 18.5°/" 21.9%，均值為21.7%，而對(duì)照組II結(jié)果分別為10.4%、 9.5%、 11.9%, 均值為10. 6%, 二者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(<0. 05 )，顯示濃度為200 mg/L的EDS誘 導(dǎo)顯著提高了 NSCs向Tujl陽性細(xì)胞的分化，與免疫熒光染色鑒定結(jié)果相符。盡管通過參照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但本領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改 變，而不偏離所附權(quán)利要求書所限定的本發(fā)明的精神和范圍。10
權(quán)利要求
1. 蛻皮甾酮作為誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用。
2、 誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述 細(xì)胞培養(yǎng)基中含有誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng) 基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中含有濃度為100-400 mg/L的誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng) 基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中含有濃度為200 mg/L的誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮。
5、 根據(jù)權(quán)利要求2、 3、 4之任一權(quán)利要求所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向 神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有胎牛血清。
6、 根據(jù)權(quán)利要求5所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng) 基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有體積百分濃度為5-20%的胎牛血 清。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于所述細(xì)胞培養(yǎng)基中還含有體積百分濃度為10%的胎牛血清。
8、權(quán)利要求2所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基的 制備方法，包括以下步驟a. DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液的制備取制備DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液1L用量的 DMEM/F12 (1:1)干粉1袋、谷氨酰胺2. 5 g，用濃度為0. 1 mol/L、 pH值 為7. 35的磷酸鹽緩沖液即PBS溶解并稀釋至1L，調(diào)節(jié)pH值為7. 5，用0. 2 一 微孔濾膜過濾除菌，即得；b. 細(xì)胞培養(yǎng)基的制備按照制備100 ml細(xì)胞培養(yǎng)基計(jì)，取誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮 10-40 mg，加入步驟a制得的DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液70 ml使溶解，用0. 2 pm 微孔濾膜過濾除菌后，加入胎牛血清5-20 ml、青霉素與鏈霉素的混合液即由濃度為4萬U/ml的青霉素溶液、濃度為4萬U/ml的鏈霉素溶液按1: 1混 合而成的溶液l ml,最后用DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)液定容至100 ml,即得。
9、 根據(jù)權(quán)利要求8所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng) 基的制備方法，其特征在于步驟b中誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮的用量為20 mg。
10、 根據(jù)權(quán)利要求9所述的誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培 養(yǎng)基的制備方法，其特征在于步驟b中誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮的用量為20 mg，胎 牛血清的加入量為10 ml。
全文摘要
本發(fā)明公開了蛻皮甾酮作為誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的誘導(dǎo)劑的新應(yīng)用，公開了一種誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的細(xì)胞培養(yǎng)基，含有誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮，并且提供了此種細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法；實(shí)驗(yàn)證實(shí)在哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞分化培養(yǎng)基中加入誘導(dǎo)劑蛻皮甾酮，神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的比例明顯提高，特別是當(dāng)蛻皮甾酮濃度為200mg/L時(shí)效果最佳，含有蛻皮甾酮的細(xì)胞培養(yǎng)基可誘導(dǎo)哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C12N5/06GK101280291SQ200810069728
公開日2008年10月8日 申請(qǐng)日期2008年5月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月23日
發(fā)明者儲(chǔ)衛(wèi)華, 華 馮, 剛 朱, 林江凱, 詹夢(mèng)熊, 志 陳 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院