雄烯二酮生產配方的優(yōu)化的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種雄烯二酮生產配方的優(yōu)化工藝，屬于發(fā)酵技術領域。
【背景技術】
[0002] 雄烯二酮是從精巢或尿中提取出的具有雄性激素作用的一種留類化合物，單 純的依靠化學方法生產雄烯二酮遠遠達不到市場的需求。通過微生物選擇性降解甾醇 側鏈，可得到制備留體激素類藥物的重要中間體雄烯二酮（雄留-4-烯-3，17-二酮， androst-4-ene-3, 17-dione，簡稱AD)。因此采用微生物發(fā)酵生產AD具有產品純度高、生 產成本低、周期短等特點，是當前雄烯二酮生產的一大趨勢。
[0003] 但目前雄烯二酮發(fā)酵生產中還存在一定的弊端，發(fā)酵過程中產生的泡沫多，成本 高，提取工藝困難等。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種發(fā)酵過程中產生的泡沫少，成本低，能夠有效地降低發(fā) 酵染菌率，易于提取的雄烯二酮發(fā)酵新配方。
[0005] 本發(fā)明的內容與要點分述如下 一.根據更適宜發(fā)酵生產的原則進行優(yōu)化 優(yōu)化后的種子配方為（g/L):丙三醇2. 5,氯化銨2. 5,磷酸二氫鉀0.08,七水硫酸鎂 〇.1，酵母粉20，？!1值7.0; 優(yōu)化后的發(fā)酵配方為（g/L):丙三醇25,黃豆餅粉45,硫酸銨4,七水硫酸鎂3,磷酸氫 二鉀2,酵母粉3,氯化錳0. 004,碳酸鈣15,植物甾醇30,卵磷脂3, pH值7. 0。
[0006] 二.培養(yǎng)工藝與原工藝基本相同 (1)搖瓶工藝 種子瓶培養(yǎng)條件為：轉速200r/min，培養(yǎng)48±6h，培養(yǎng)溫度為30 土 1°C，濕度30%-60%。 發(fā)酵瓶培養(yǎng)條件為：轉速220r/min，培養(yǎng)5-7d，培養(yǎng)溫度為30±1°C，濕度30%-60%。
[0007] 與原工藝不同點：在發(fā)酵瓶培養(yǎng)48h后，每隔24h補加甘油和硫酸銨溶液：35%甘 油溶液，20%硫酸銨溶液，單獨滅菌后，取4ml20%硫酸銨溶液加入到50ml35%甘油溶液中，混 合均勻，從48h后，每隔24h補加 I. 5ml上述混合溶液。
[0008] (2)罐上工藝 種子罐工藝：溫度30 ± I °C，罐壓0. 05-0. 07MPa，攪拌轉速130-150rpm，空氣流量1:1， 培養(yǎng)周期24h。
[0009] 移種條件：pH值升至7. 5以上，無菌正常，菌體量大，菌體染色較深，粗壯可移入發(fā) 酵罐，接種量10%。
[0010] 發(fā)酵瓶培養(yǎng)工藝為：溫度30 ±1°C，罐壓0. 05-0. 07MPa，攪拌轉速根據溶氧情況調 節(jié)，溶氧> 30%，空氣流量1:1，轉速：150-260rpm， pH值用10%濃度氨水溶液控制在6. 6-7. 0,培養(yǎng)過程中補加甘油控制在5-10g/L。
[0011] 培養(yǎng)周期為160-170小時，放罐。
[0012] 與原工藝不同點：優(yōu)化后的配方需要在發(fā)酵罐培養(yǎng)過程中補加甘油，將甘油控制 在 5-10g/L。
[0013] 本發(fā)明的優(yōu)點和效果是： 1.丙三醇為液體碳源，更有利于菌體吸收利用。
[0014] 2.丙三醇是油性物質，能夠有效的減少發(fā)酵過程中產生的泡沫。
[0015] 3.卵磷脂對甾醇的助溶效果優(yōu)于吐溫-80。
[0016] 4.卵磷脂能夠組成細胞膜，使細胞活化，能夠促進菌體對甾醇的轉化。 5. 樹脂的去除，有利于后期提取，降低生產成本。
【具體實施方式】
[0017] 下面通過50L罐實驗例子對本發(fā)明做進一步說明，下述實例是說明性的，不是限 定性的，不能以下述實例來限定本發(fā)明的保護范圍。
[0018] 一.種子制備： 將成熟斜面接種到一級種子瓶中，裝量為l〇〇ml/500ml，30 ± I °C，濕度30%-60%培 養(yǎng)48±6h，菌體量大，pH值達到7. 5左右，接種到二級種子瓶中，裝量為200ml/1000ml， 30± 1°C，濕度30%-60%培養(yǎng)48±6h，菌體量大，pH值達到7. 5左右，接種到5L種子罐中。
[0019] 二.種子罐培養(yǎng)： 種子罐培養(yǎng)工藝為：溫度30 土 1°C，罐壓0. 05-0. 07MPa，攪拌轉速130-150rpm，空氣流 量1:1，培養(yǎng)周期24h。
[0020] 移種條件：pH值升至7. 5以上，無菌正常，菌體量大，菌體染色較深，粗壯可移入發(fā) 酵罐，接種量10%。
[0021] 三.發(fā)酵培養(yǎng)： 發(fā)酵瓶培養(yǎng)工藝為：溫度30 土 1°C，罐壓0. 05-0. 07MPa，攪拌轉速根據溶氧情況調節(jié)， 溶氧> 30%，空氣流量1:1，轉速：150-260rpm， pH值用10%濃度氨水溶液控制在6. 6-7. 0,培養(yǎng)過程中補加甘油控制在5-10g/L。
[0022] 培養(yǎng)周期為160-170小時，放罐。
[0023] 四.以原配方工藝為對照，修改后的配方為試驗，對比兩種配方的效果，結果如 下：
【主權項】
1. 雄烯二酮生產配方的優(yōu)化，其特征在于： 優(yōu)化后的種子配方為（g/L):丙三醇2. 5,氯化銨2. 5,磷酸二氫鉀0.08,七水硫酸鎂 〇.1，酵母粉20，？!1值7.0; 優(yōu)化后的發(fā)酵配方為（g/L):丙三醇25,黃豆餅粉45,硫酸銨4,七水硫酸鎂3,磷酸氫 二鉀2,酵母粉3,氯化錳0. 004,碳酸鈣15,植物甾醇30,卵磷脂3, pH值7. 0。
2. 根據權利要求1所述的雄烯二酮生產配方的優(yōu)化，其特征在于：發(fā)酵配方中所用的 助溶解劑為卵磷脂，其用量為3 g/L。
3. 根據權利要求1所述的雄烯二酮生產配方的優(yōu)化，其特征在于：種子配方中所用的 營養(yǎng)劑為丙三醇，其用量為2.5 g/L。
4. 根據權利要求1所述的雄烯二酮生產配方的優(yōu)化，其特征在于：優(yōu)化后的配方需要 在發(fā)酵罐培養(yǎng)過程中補加甘油，將甘油控制在5?10g/L。
【專利摘要】本發(fā)明涉及雄烯二酮生產配方的優(yōu)化，營養(yǎng)劑為丙三醇，助溶解劑為卵磷脂，優(yōu)化后的配方，發(fā)酵過程中產生的泡沫少，成本低，能夠有效地降低發(fā)酵染菌率，發(fā)酵后易于提取的雄烯二酮發(fā)酵新配方，更適宜發(fā)酵生產。
【IPC分類】C12P33-02
【公開號】CN104561212
【申請?zhí)枴緾N201310490547
【發(fā)明人】李瑾, 于新令, 劉祎禎
【申請人】山東方明藥業(yè)集團股份有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2013年10月19日