本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體地說是關(guān)于一種以瓜蔞籽油和山楂葉提取物為主要成分的降血脂復(fù)方。
背景技術(shù)：
：高脂血癥是由于全身脂肪代謝紊亂引起血漿中一種或幾種脂質(zhì)結(jié)構(gòu)失衡的疾病，是構(gòu)成心腦血管疾病的危險因素之一，高脂血癥是動脈粥樣硬化、脂肪肝、冠心病、糖尿病、肥胖癥等的伴發(fā)癥及誘發(fā)因素，降脂治療可以預(yù)防和降低冠心病、腦梗塞等疾病的發(fā)生率、病死率。然而西藥降脂肝損害明顯，限制其長期的臨床應(yīng)用范圍，因此研究廉價、安全、療效顯著的調(diào)脂中藥具有重要意義。瓜蔞籽為葫蘆科植物栝樓(trichosanlheskirilovuiimaxim)或雙邊栝褸(trichosanlhesrosthorniiharms)的干燥成熟種子，具有潤肺化痰，滑腸通便的功能。瓜蔞籽富含油脂、甾醇、三萜及其皂苷、蛋白質(zhì)及多種氨基酸，具有改善心血管疾病、抗炎、抗腫瘤、降血糖和瀉下等藥理作用(出自萬麗娟,盧金清,許俊潔,等.瓜蔞子化學(xué)成分和藥理作用的研究進展[j].中國藥房,2011,26(31):4440-4443.)。瓜蔞籽油經(jīng)過液壓冷榨提取獲得，其脂肪酸中含有93.08％的不飽和脂肪酸，以亞油酸(41.02％)、瓜蔞酸(25.57±0.30％)及油酸(21.83±0.06％)為主。飲食脂肪酸對血脂代謝、冠心病及動脈粥樣硬化的發(fā)生有重要影響，尤其是多不飽和脂肪酸(pufas)對血脂有正向調(diào)節(jié)作用，有利于降低心血管疾病發(fā)生的危險度系數(shù)。共軛亞麻酸瓜蔞酸(c9,tl1,cl3-18:3)也叫石榴酸，主要存在于瓜蔞和石榴中，研究表明共軛亞麻酸能減少內(nèi)臟脂肪和體脂的含量(arunap,venkataramanammad,singhak,etal.healthbenefitsofpunicicacid:areview.comprehensivereviewsinfoodscienceandfoodsafety2015,10(15):16-27)。山楂葉系薔薇科植物山里紅crataeguspinnatifidabge.var.majoyn.e.br.或山楂crataeguspinnatifidabge的干燥葉子,有活血化瘀、理氣通脈、化濁降脂的功能。主要含有黃酮類化合物。研究表明，山楂葉中的黃酮類成分具有良好的降脂作用。山楂葉黃酮能降低高脂血癥大鼠血清以及肝臟甘油三酯(triglyceride，tg)、膽固醇(tricholesterol，tc)含量(p<0.05)，并能有效地改善脂肪的積累(p<0.001)，增加肌肉組織中l(wèi)pl的含量(p<0.05)，減少脂肪組織中l(wèi)pl的含量(p<0.01)(出自梁偉偉,嚴(yán)瑾,吳利花,等.山楂葉總黃酮對高脂血癥大鼠脂代謝的影響[j].健康研究,2010,30(1):8-11.)。在確定瓜蔞籽油功能性組分的基礎(chǔ)上，基于降血脂天然藥物復(fù)配的活性組分導(dǎo)向原則，選擇一種與瓜蔞籽油的復(fù)配的天然藥物。兩種天然藥物(提取物)按照一定的比例聯(lián)用，組成降血脂的復(fù)方，通過協(xié)同作用達(dá)到最佳降脂效果。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有的技術(shù)不足，本發(fā)明提供一種降血脂瓜蔞籽油復(fù)方。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：一種降血脂瓜蔞籽油復(fù)方，該復(fù)方包括瓜蔞籽油和山楂葉提取物為有效成分。瓜蔞籽油和山楂葉提取物的質(zhì)量比為12.5～50:1。瓜蔞籽油為冷榨工藝獲得，其中冷榨的溫度范圍：30～60℃；壓力范圍：35～55mpa；壓榨時間范圍：30～50min；投料量范圍：250～450g；入榨水分范圍：4～7％。所述的瓜蔞籽油其中亞油酸的含量為≥35％，瓜蔞酸的含量≥20％，不飽脂肪酸含量≥80％。所述的山楂葉提取物中總黃酮含量≥75％。一種降血脂瓜蔞籽油復(fù)方的制備方法，包括以下步驟：步驟一，首先分別提取瓜蔞籽油和山楂葉提取物；所述瓜蔞籽油是采用專利(瓜蔞籽油的液壓冷榨方法)中的方法進行提取，所述山楂葉提取物根據(jù)藥典方法制??；步驟二，將步驟一中的產(chǎn)物根據(jù)劑量檔次按照一定比例混合；步驟三，將步驟二中的產(chǎn)物添加藥理上可接受的輔助添加劑混合均勻，然后制備成復(fù)方即可。所述的劑量檔次分為低劑量、中劑量和高劑量，其中低劑量中瓜蔞籽油和山楂葉提取物的質(zhì)量比為50:1；中劑量中瓜蔞籽油和山楂葉提取物的質(zhì)量比為25:1；高劑量中瓜蔞籽油和山楂葉提取物的質(zhì)量比為12.5:1。所述的瓜蔞籽油和山楂葉提取物之和占總質(zhì)量的百分比為98％。所述的輔助添加劑為蜂蠟，所述的蜂蠟占總質(zhì)量的百分比為2％。本發(fā)明的有益效果：瓜蔞籽油及其復(fù)方與模型組比較，血清tc、tg降低，差異均有顯著性，同時各劑量組血清ldl-c不顯著高于模型對照組，血清hdl-c不顯著低于模型對照組，可判定該受試樣品輔助降低tc、tg功能動物實驗結(jié)果陽性。復(fù)方具有顯著的體內(nèi)抗氧化活性，且對小鼠肝臟及主動脈具有一定的修復(fù)作用。具體實施方式實施例一，復(fù)方的制備分別取瓜蔞籽油和山楂葉提取物，按照表1所列的不同質(zhì)量比(瓜蔞籽油：山楂葉提取物)混合，并添加一種藥理上可接受的輔助添加劑，混合均勻，制備成復(fù)方備用。表1復(fù)方組成瓜蔞籽油:山楂葉提取物輔料復(fù)方低劑量98％(50:1)2％蜂蠟復(fù)方中劑量98％(25:1)2％蜂蠟復(fù)方高劑量98％(12.5:1)2％蜂蠟實施例二，降血脂及抗氧化活性實驗實驗?zāi)康膮⒄諊沂称匪幤繁O(jiān)督管理總局(cfda)頒布的《輔助降血脂功能評價方法》來初步評價瓜蔞籽油及其復(fù)方在c57bl/6小鼠中的降血脂藥效并篩選出最佳復(fù)方及其配比。實驗耗材基礎(chǔ)飼料(飼料依照gb14924.3-2001《實驗動物小鼠大鼠配合飼料》配制)；高脂飼料(添加20.0％蔗糖、15％豬油、1.2％膽固醇、0.2％膽酸鈉，適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等。除了粗脂肪外，模型飼料的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、鈣、磷、鈣、磷均要達(dá)到維持飼料的國家標(biāo)準(zhǔn))，為了防止脂肪酸的氧化，實驗日糧每星期新鮮配制，保存在-20℃冰箱；苯扎貝特片(h20010013江蘇天士力貝特制藥有限公司)；過氧化物岐化酶(sod)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(gsh-px)試劑盒購于南京建成研究所。實驗步驟①適應(yīng)期：c57bl/6小鼠(由上海斯萊克公司提供)，雄性，合格證號：2015000519251。于屏障系統(tǒng)下喂飼維持飼料觀察5～7天。②造模及干預(yù)期：對照組：普通飼料喂養(yǎng)；模型組：喂養(yǎng)高脂飼料，連續(xù)喂5周后，測定對照組和模型組小鼠不禁食采血(眼內(nèi)眥或尾部)，采血后盡快分離血清，測定血清tc、tg、ldl-c、hdl-c水平，高脂模型建立標(biāo)準(zhǔn)參照《輔助降血脂功能評價方法》，根據(jù)血脂水平隨機平均分為9組，按照表2分組進行干預(yù)，給藥7周。③血樣采集：實驗結(jié)束后小鼠安樂死，斷尾取血，低溫5000rpm離心收集血清，-80℃保存，用于血生化檢測。血生化檢測指標(biāo)：甘油三酯(tg)、總膽固醇(tc)、高密度脂蛋白(hdl-c)及低密度脂蛋白(ldl-c)。④抗氧化指數(shù)分析：取各組小鼠血清及勻漿后的肝臟組織，利用試劑盒分別測定sod及gsh-px活性。⑤病理觀察：麻醉小鼠后先用1×pbs灌流，再用4％多聚甲醛灌流，取肝臟、心臟及血管(從主動脈弓到腎髂總動脈)，生理鹽水沖洗，固定于4％多聚甲醛中過夜，然后進行切片、染色處理。表2分組及給藥結(jié)果①建模指標(biāo)測定結(jié)果由表3得知，模型組喂養(yǎng)高脂飼料連續(xù)喂5周后，通過與對照組比較，血清甘油三酯升高，血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇升高，差異均有顯著性，判定模型成立。表3建模后小鼠指標(biāo)變化(n＝10,)注：與正常組對比，*表示p<0.05，**表示p<0.01。②對小鼠血脂的影響由表4可知，復(fù)方組與模型對照組比較，血清tc、tg降低，差異均有顯著性，同時各劑量組ldl-c不顯著高于模型對照組，血清hdl-c不顯著低于模型對照組，可判定該受試樣品輔助降低tc、tg功能動物實驗結(jié)果陽性，其中復(fù)方中劑量效果最為顯著。表4瓜蔞籽油、山楂葉提取物及復(fù)方對小鼠血脂的影響(n＝10,)注：與高脂組對比，*表示p<0.05，**表示p<0.01，下同。③對體內(nèi)抗氧化指數(shù)的影響瓜蔞籽油、山楂葉提取物及復(fù)方對小鼠血清中sod活性較高脂組顯著性升高(p<0.05～p<0.01)，表明各劑量組均能增強小鼠血清中的sod活性，其中復(fù)方低劑量組小鼠血清中sod活性最高。山楂葉提取物對小鼠血清gsh-px活性顯著性升高(p<0.01)，瓜蔞籽油低中劑量組的gsh-px活性與高脂組無顯著性差異，通過復(fù)配后的復(fù)方瓜蔞籽油對小鼠血清gsh-px活性顯著升高(p<0.05)。綜合評價，復(fù)方低、中劑量組可對小鼠血清具有顯著的抗氧化作用，見表5。表5對小鼠血清抗氧化指數(shù)的影響(n＝10,)瓜蔞籽油、山楂葉提取物及復(fù)方瓜蔞籽油劑量組對小鼠肝臟組織sod活性均顯著性升高(p<0.01～p<0.05)，其中復(fù)方瓜蔞籽油對小鼠肝臟sod活性升高最為顯著，抗氧化能最強。除瓜蔞籽油高劑量組以外，瓜蔞籽油低中、山楂葉提取物及復(fù)方瓜蔞籽油劑量組對小鼠肝臟組織gsh-px活性均顯著性升高(p<0.01)，其中瓜蔞籽油中劑量組gsh-px活性最高。綜合表明，復(fù)方瓜蔞籽油對肝臟組織具有較強的抗氧化作用，見表6。表6對小鼠肝臟抗氧化指數(shù)的影響(n＝10,)組別sod(u/ml)gsh-px(u/ml)空白組157.34±4.73**1450.27±85.59高脂組133.37±3.401227.00±154.44生理鹽水132.59±1.711203.26±116.89苯扎貝特組143.14±5.59*1467.74±78.04復(fù)方低劑量組213.84±10.09**2035.04±119.45**復(fù)方中劑量組211.26±8.93**1752.81±98.50**復(fù)方高劑量組205.21±4.25**1905.29±32.50**山楂葉提取物組146.15±5.81*1694.71±104.18**瓜蔞籽油低劑量組199.52±16.43**2210.90±30.28**瓜蔞籽油中劑量組181.32±16.19**2347.70±73.88**瓜蔞籽油高劑量組155.86±21.23*1402.18±95.18④對小鼠肝臟及主動脈的病理觀察通過高脂組肝組織染色觀察，肝臟體積與空白組相比明顯腫大，肝細(xì)胞索排列亂，肝竇變窄，肝小葉界限不清，胞質(zhì)內(nèi)可見多個大小不等的脂肪空泡，細(xì)胞核被推向一邊，為典型的脂肪變性?？瞻捉M肝臟結(jié)構(gòu)完整，空白組未見病理學(xué)變化。苯扎貝特組和復(fù)方瓜蔞籽油低、中及高劑量組肝組織病理變化差異相似，與高脂組對比，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，很少出現(xiàn)脂肪空泡，肝細(xì)胞索排列較正常，復(fù)方低劑量組有輕度脂肪變性的肝細(xì)胞，總體脂肪變性微小。山楂葉提取物組和瓜蔞籽油組肝細(xì)胞病理觀察相近，都有脂肪空泡的出現(xiàn)，脂肪變性水平要明顯高于復(fù)方劑量組，表明通過瓜蔞籽油與山楂葉提取物復(fù)配，能夠發(fā)揮協(xié)同效應(yīng)，作用于多靶點來減少脂肪變性，降低肝損傷?？瞻捉M小鼠心臟主動脈內(nèi)、中、外膜層分界明確，內(nèi)膜結(jié)構(gòu)完整、厚度分布均勻，內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞排列規(guī)則，輪廓清晰，未見病理改變。高脂組主動脈結(jié)構(gòu)紊亂，增厚并不連續(xù)，有皺褶，細(xì)胞排列紊亂，形態(tài)多樣，并可見泡沫細(xì)胞形成內(nèi)膜厚度分布不均。瓜蔞籽油組及復(fù)方劑量組主動脈結(jié)構(gòu)分布較均勻，內(nèi)膜稍增厚，平滑肌增生，結(jié)構(gòu)較完整，少有皺褶，有少量的泡沫細(xì)胞。當(dāng)前第1頁12