本發(fā)明涉及植物提取物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體的說是涉及一種青刺果提取物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：青刺果，是薔薇科扁核木屬(prinsepiaroyle)植物扁核木(prinsepiautilisroyle)的果實(shí)，又名青刺尖，炮筒果、牛奶捶、雞蛋糕、梅花刺、槍子果、阿那斯、蒙自扁核木。青刺果主要分布在云南、貴州、四川等省區(qū)，盛產(chǎn)于云南麗江海拔2000m以上的無污染地帶。青刺果的果期是4～5月，成熟的鮮青刺果紫紅色，表面光滑，干果為深褐色或黑色，果皮皺縮貼于果核上，果核不易破碎，斷面黃白色，種子富含油脂，出油率在30％左右，可供食用和日用。青刺果可入藥，云南省納西族、白族、彝族、摩梭族等少數(shù)民族中已有上千年的應(yīng)用歷史。據(jù)現(xiàn)代資料記載，青刺果主治目翳多淚，消化不良等。國內(nèi)外醫(yī)藥工作者已從該植物中分離、鑒定出黃酮類成分左旋-表兒茶精；木脂素類成分刺尖醇；脂肪酸類成分棕櫚酸、硬脂酸、花生酸、油酸、亞油酸、亞麻酸等。在上個(gè)世紀(jì)二十年代，美籍奧地利植物學(xué)家josephcharlesfrancisrock博士在云南麗江考察期間，將發(fā)現(xiàn)的神奇植物青刺果披露于世，并在哈佛大學(xué)阿諾德植物園保存了當(dāng)年關(guān)于青刺果的文獻(xiàn)記載和植物標(biāo)本。青刺果油最早記載于神秘的東巴經(jīng)文中，具有悠久的護(hù)發(fā)和護(hù)膚方面的傳統(tǒng)應(yīng)用歷史和文化，例如青刺果油涂抹在皮膚上，可以防止蚊蟲叮咬或消除跌打扭傷形成的腫塊，防止皮膚干裂、瘙癢和治愈凍瘡；用青刺果油擦頭發(fā)能抑制頭發(fā)脫落，有使白發(fā)變黑的作用；人體皮膚局部燒傷和燙傷，用青刺果油涂于患處可防止傷口感染，加快傷口愈合且不留疤痕；用青刺果油涂抹新生嬰兒的皮膚，使皮膚干爽潤滑，并能促進(jìn)嬰兒胎毛的脫落；青刺果被稱為吉祥樹和百花之王。綜合目前青刺果的研究，主要集中于青刺果油的研究，關(guān)于青刺果非油類成分的研究較少，目前青刺果在化妝品方面的應(yīng)用也均以青刺果油為主要研究對(duì)象。中國專利cn104523479a公開了青刺尖提取物在美白用品中的應(yīng)用 及美白用品，其是少有的關(guān)于青刺果非油類成分的研究報(bào)道，其公開了青刺尖總多酚富集的提取物，特別是其中的青刺尖酯醇在美白用品中的應(yīng)用；另一個(gè)中國專利cn103720635a公開了一種抗皺眼霜，其以野桐提取物、青刺果提取物、靈芝提取物和銀杏提取物為組成成分，其中青刺果提取物以丙烷為提取溶劑。但是，在這兩個(gè)現(xiàn)有技術(shù)中，前者僅是提供了青刺果非油類提取物在美白方面的應(yīng)用，而后者以丙烷為提取溶劑，得到的是青刺果油類非極性成分，并不能將黃酮等極性較大的成分提取出來。目前尚未發(fā)現(xiàn)青刺果非油類提取物在化妝品領(lǐng)域中抗老化方面的用途和報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種青刺果提取物及其制備方法和應(yīng)用，使所述青刺果提取物具有顯著的自由基清除活性或/和促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖的作用，進(jìn)而能夠防止肌膚老化、維持年輕健康的肌膚狀態(tài)。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：一種青刺果提取物的制備方法，包括：步驟1、青刺果加水或乙醇提取，獲得青刺果粗提液；步驟2、青刺果粗提液濃縮，上樣至大孔吸附樹脂，依次用去離子水、30％乙醇溶液、70％乙醇溶液和95％乙醇溶液洗脫，分別收集各洗脫部位后減壓蒸餾除去溶劑，相應(yīng)地得到青刺果水洗脫部位、30％乙醇溶液洗脫部位、70％乙醇溶液洗脫部位和95％乙醇溶液洗脫部位；步驟3、所述青刺果粗提液蒸干獲得青刺果粗提物，青刺果水洗脫部位、30％乙醇溶液洗脫部位、70％乙醇溶液洗脫部位、95％乙醇溶液洗脫部位均為所制得的青刺果提取物。本發(fā)明所述青刺果提取物可以是其中任意一種，也可以是它們?nèi)我夥N類的混合物。作為優(yōu)選，所述制備方法步驟1為：青刺果按1g:20ml比例加入去離子水或乙醇，室溫超聲提取2次，每次1小時(shí)，離心，上清液過濾，收集所有濾液，獲得青刺果粗提液。本發(fā)明所述青刺果粗提液根據(jù)提取溶劑的不同，對(duì)應(yīng)分為青刺果水粗提液和青刺果乙醇粗提液，蒸干后僅為青刺果粗提物，對(duì)應(yīng)分為青刺果醇提物和青刺果水提物。作為優(yōu)選，步驟1所述乙醇為70％乙醇溶液。作為優(yōu)選，所述大孔吸附樹脂為ab-8型大孔吸附樹脂。同時(shí)，本發(fā)明還提供由上述本發(fā)明任意一項(xiàng)制備方法提取的青刺果提取物，所述青刺果提取物為非油類青刺果提取物，含有較多的總黃酮，優(yōu)選地，所述青刺果提取物總黃酮含量為0.04-2.97％。將本發(fā)明制備方法獲得青刺果提取物進(jìn)行dpph法自由基清除活性的測(cè)定，結(jié)果顯示所述青刺果提取物具有較高的自由基清除率，而市售的青刺果油的自由基清除率較低，兩者相比差別顯著；另外，在抗老化活性檢測(cè)中，即檢測(cè)對(duì)人成纖維細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用，結(jié)果顯示本發(fā)明所述青刺果醇提物及其30％乙醇溶液洗脫部位具有促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖的作用，而市售青刺果油以及其他提取物并無促進(jìn)作用?；谝陨嫌幸嫘Ч景l(fā)明提出了所述青刺果提取物在抗衰老和制備抗衰老化妝品中的應(yīng)用，還有在清除自由基和/或促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖，以及在制備清除自由基產(chǎn)品和/或促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖產(chǎn)品中的應(yīng)用。作為上述應(yīng)用的具體方式，本發(fā)明提供了一種抗衰老的皮膚外用劑，包含由本發(fā)明上述任意一項(xiàng)制備方法制備的青刺果提取物。由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明以青刺果為原材料，經(jīng)過適宜方法提取獲得青刺果非油類提取物，所提取的青刺果提取物具有顯著的自由基清除活性和促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖的作用，能夠用于皮膚抗衰老和相關(guān)化妝品中。具體實(shí)施方式本發(fā)明實(shí)施例公開了一種青刺果提取物及其制備方法和應(yīng)用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的產(chǎn)品和應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的產(chǎn)品及方法進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的一種青刺果提取物及其制備方法和應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1：本發(fā)明所述青刺果提取物的制備在50g市售青刺果中加入70％乙醇100ml，在室溫超聲提取2次，每次1小時(shí)，合并2次的提取液，獲得青刺果乙醇粗提液。將青刺果乙醇粗提液分為兩個(gè)部分，取50ml直接蒸干得到青刺果醇提物，將剩余的50ml減壓濃縮至25ml，用ab-8樹脂柱吸附，然后依次用去離子水、30％乙醇、70％乙醇和95％乙醇洗脫，分別收集后減壓蒸餾除去溶劑，相應(yīng)地得到青刺果水洗脫部位a、30％乙醇洗脫部位b、70％乙醇洗脫部位c和95％乙醇洗脫部位d；上述得到的青刺果醇提物與青刺果水洗脫部位a、30％乙醇洗脫部位b、70％乙醇洗脫部位c和95％乙醇洗脫部位d均為本發(fā)明所述青刺果提取物。實(shí)施例2：本發(fā)明所述青刺果提取物的制備在50g市售青刺果中加入去離子水100ml，在室溫超聲提取2次，每次1小時(shí)，合并2次的提取液，獲得青刺果水粗提液。將青刺果水粗提液分為兩個(gè)部分，取50ml直接蒸干得到青刺果水提物，將剩余的50ml減壓濃縮至25ml，用ab-8樹脂柱吸附，然后依次用去離子水、30％乙醇、70％乙醇和95％乙醇洗脫，分別收集后減壓蒸餾除去溶劑，相應(yīng)地得到青刺果水洗脫部位e、30％乙醇洗脫部位f、70％乙醇洗脫部位g和95％乙醇洗脫部位h；上述得到的青刺果水提物與青刺果水洗脫部位e、30％乙醇洗脫部位f、70％乙醇洗脫部位g和95％乙醇洗脫部位h均為本發(fā)明所述青刺果提取物。實(shí)施例3：青刺果提取物中總黃酮含量測(cè)定以實(shí)施例1和實(shí)施例2各青刺果提取物為檢測(cè)對(duì)象，按照中華人民共和國藥典(2010版)方法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定提取物中總黃酮含量。測(cè)定步驟為：1)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：精密量取對(duì)照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，各加30％乙醇至6.0ml，加5％亞硝酸鈉溶液1ml?；靹?，放置6分鐘，再加10％硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6分鐘。加氫氧化鈉試液10ml，再加30％乙醇至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)試劑為空白， 用紫外-可見分光光度法，在510nm的波長處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2)取一定量樣品置于25ml容量瓶中，其它按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備步驟，自“加亞硝酸鈉溶液1ml”起，依法測(cè)定吸光度，同時(shí)取供試品溶液3ml，除不加氫氧化鈉試液外，其余同上操作，作為空白，計(jì)算提取物中總黃酮含量(以蘆丁計(jì))。結(jié)果見表1。表1青刺果提取物中總黃酮含量樣品名稱總黃酮含量％青刺果醇提物1.35青刺果溶劑洗脫部位a0.04青刺果溶劑洗脫部位b0.89青刺果溶劑洗脫部位c2.71青刺果溶劑洗脫部位d0.93青刺果水提物1.46青刺果溶劑洗脫部位e0.05青刺果溶劑洗脫部位f0.93青刺果溶劑洗脫部位g2.97青刺果溶劑洗脫部位h1.10由表1可知，在本發(fā)明中所述青刺果提取物含有較多的總黃酮，經(jīng)過大孔樹脂分離后，總黃酮含量有明顯提高，活性也明顯增強(qiáng)。實(shí)施例4：抗氧化活性的測(cè)定(dpph法自由基清除活性的測(cè)定)將實(shí)施例1和實(shí)施例2制備的各青刺果提取物，用dpph法測(cè)定其清除自由基活性。測(cè)定步驟為：將樣品分別用去離子水配制成水溶液，移取2ml于10ml具塞試管中，加人2mldpph乙醇溶液(2*10-4mol/l)，充分混勻，室溫靜置，30min后用分光光度計(jì)測(cè)定517nm波長的吸光度a517(以乙醇為參比)；同時(shí)測(cè)定2mldpph溶液與2ml乙醇混合后的吸光度ac，以及2ml提 取液與2ml乙醇溶液混合后的吸光度a0。平行測(cè)定三次，取平均值，根據(jù)以下公式計(jì)算自由基清除率，記過見表2。自由基清除率＝(1-(a517-a0)/ac)*100％。表2dpph法自由基清除活性的測(cè)定結(jié)果樣品名稱樣品濃度mg/ml自由基清除率％青刺果油(市售)525青刺果醇提物0.0574青刺果溶劑洗脫部位a0.0556青刺果溶劑洗脫部位b0.0588青刺果溶劑洗脫部位c0.0584青刺果溶劑洗脫部位d0.0567青刺果水提物0.0581青刺果溶劑洗脫部位e0.0573青刺果溶劑洗脫部位f0.0596青刺果溶劑洗脫部位g0.0591青刺果溶劑洗脫部位h0.0585由表2可知，本發(fā)明中所述各青刺果提取物均具有優(yōu)異的自由基清除作用，可作為抗氧化劑，而且抗氧化活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于市售的青刺果油。因此，可以將各青刺果提取物單獨(dú)或聯(lián)合在皮膚外用劑中，作為防止肌膚老化、維持年輕健康的肌膚狀態(tài)的抗氧化活性物使用。實(shí)施例5：抗老化活性的測(cè)定(人成纖維細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用測(cè)定)按照實(shí)施例1和實(shí)施例2制備的各青刺果提取物用去離子水配制成質(zhì)量百分比為0.01％溶液，加入到人成纖維細(xì)胞培養(yǎng)液中，以不含樣品的去離子水為空白對(duì)照。培養(yǎng)48小時(shí)后，隨機(jī)取一部分細(xì)胞樣本，將細(xì)胞染色后，用酶標(biāo)儀測(cè)定475nm處吸光度，評(píng)估促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖的作用，空白對(duì)照的 增殖率為100％，若增殖率高于100％為對(duì)細(xì)胞由促進(jìn)增殖作用，高于120％為對(duì)細(xì)胞有顯著促進(jìn)增殖作用，結(jié)果見表3。表3抗老化活性測(cè)試樣品名稱人成纖維細(xì)胞增殖率％青刺果油(市售)99.03±1.69青刺果醇提物104±1.37青刺果溶劑洗脫部位a83.3±6.83青刺果溶劑洗脫部位b138.63±3.71青刺果溶劑洗脫部位c96.77±6.08青刺果溶劑洗脫部位d94.63±5.03青刺果水提物97.35±3.14青刺果溶劑洗脫部位e88.11±2.85青刺果溶劑洗脫部位f89.42±5.58青刺果溶劑洗脫部位g98.82±8.71青刺果溶劑洗脫部位h92.25+7.72空白對(duì)照100由表3可知，在本發(fā)明中青刺果醇提物以及30％乙醇洗脫部位b對(duì)人成纖維細(xì)胞具有的促進(jìn)增殖作用，其中青刺果30％乙醇洗脫部位b促進(jìn)增殖作用效果更加顯著，而對(duì)比市售的青刺果油，并無促進(jìn)人成纖維細(xì)胞增殖的作用。因此，可以將青刺果提取物配合在皮膚外用劑中，作為防止肌膚老化、維持年輕健康的肌膚狀態(tài)的抗老化劑使用。以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁12