本發(fā)明涉及血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)與腦啡肽酶抑制劑的藥物組合物及其用途，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

高血壓是最常見(jiàn)的慢性疾病之一，也是心腦血管病最主要的危險(xiǎn)因素，其腦卒中、心肌梗塞、心力衰竭及慢性腎臟病等主要并發(fā)癥的致殘、致死率高，嚴(yán)重消耗醫(yī)療資源，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。高血壓的主要治療目標(biāo)是最大限度地降低心血管并發(fā)癥的發(fā)生與死亡的總體危險(xiǎn)，需要治療所有可逆性心血管危險(xiǎn)因素、亞臨床靶器官損害以及各種并存的臨床疾病【中國(guó)高血壓防治指南修訂委員會(huì).中國(guó)高血壓防治指南2010.中華心血管病雜志，2011；39(7)：579】。

心力衰竭(簡(jiǎn)稱心衰)是高血壓后期的常見(jiàn)并發(fā)癥，其病理機(jī)制是心室泵血或充盈功能低下，心排血量不能滿足機(jī)體代謝的需要，組織、器官血液灌注不足，出現(xiàn)肺循環(huán)和/或體循環(huán)淤血，其實(shí)也是各種心臟病發(fā)展到嚴(yán)重階段的臨床綜合癥，也稱為充血性心力衰竭。心衰的特點(diǎn)是左室肥厚或擴(kuò)張，導(dǎo)致神經(jīng)內(nèi)分泌失常、循環(huán)功能異常，出現(xiàn)典型的臨床癥狀，如心悸氣促、呼吸困難、體液潴留(浮腫)、乏力(特別是運(yùn)動(dòng)時(shí))等。慢性心衰是指持續(xù)存在的心力衰竭狀態(tài)，可以穩(wěn)定、惡化或失代償。

心衰是心血管病患者喪失勞動(dòng)力及死亡的重要原因之一，全球估計(jì)有2600萬(wàn)人患有心衰。據(jù)世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)資料，心衰的發(fā)生率已達(dá)1.9％，人類(lèi)終生患病幾率達(dá)20％，心衰的兩年病死率為37％，6年死亡率高達(dá)82％。在美國(guó)，衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)顯示國(guó)家醫(yī)療費(fèi)用支出的1-2％用于心衰治療。我國(guó)心衰發(fā)病率亦比較高，心衰患病率預(yù)計(jì)在1.26％，估計(jì)約400萬(wàn)人左右。

臨床上治療心衰的常用藥物包括利尿劑、強(qiáng)心苷類(lèi)、非苷類(lèi)正性肌力藥、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)抑制劑、β受體阻斷劑等。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)是臨床上控制高血壓的常用藥物，它主要抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的活性，降低血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)和醛固酮的含量，同時(shí)能減少緩激肽降解，促進(jìn)前列腺素釋放，從而舒張血管、降低血壓。臨床上常用的ACEI有卡托普利、依那普利、貝那普利、賴諾普利、雷米普利、福辛普利、西拉普利、培哚普利等。

AngⅡ是RAAS中關(guān)鍵的一種生物學(xué)效應(yīng)物，它和特異受體AT1結(jié)合可介導(dǎo)血管平滑肌收縮、抗利尿激素及醛固酮分泌釋放(鈉水潴留)、交感神經(jīng)兒茶酚胺釋放增多等一系列效應(yīng)。心衰的病理生理機(jī)制涉及RAAS激活、醛固酮增加等，故ACEI不僅用于治療高血壓，同時(shí)也是治療心衰(尤其是伴有低射血分?jǐn)?shù)時(shí))的基礎(chǔ)藥物。左心室肥厚是心衰的重要病理基礎(chǔ)，ACEI兼有抗增生作用，能逆轉(zhuǎn)高血壓患者的心臟肥厚。ACEI逆轉(zhuǎn)心室重構(gòu)主要通過(guò)降低心室前后負(fù)荷、抑制AngⅡ的增生作用和交感神經(jīng)活性、抑制醛固酮誘導(dǎo)的心臟肥厚及間質(zhì)和血管周?chē)w維化等【中華醫(yī)學(xué)會(huì)血管病學(xué)分會(huì).血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑在心血管病中應(yīng)用中國(guó)專(zhuān)家共識(shí).中華心血管病雜志，2007,35(2)：97】。循證醫(yī)學(xué)研究顯示，在輕、中度心衰患者中，長(zhǎng)期用依那普利可減低死亡相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)16％?？傮w看，ACEI是RAAS抑制劑中心衰療效相對(duì)較好的一類(lèi)，但仍有1/2以上的頑固心衰療效反應(yīng)不佳，亟待改進(jìn)。

腦啡肽酶抑制劑是一類(lèi)能夠抑制腦啡肽酶活性的化合物或其前體。腦啡肽酶是一種中性內(nèi)肽酶，在體內(nèi)降解幾種內(nèi)源性血管活性肽，包括心房利鈉肽(ANP)、緩激肽和腎上腺髓質(zhì)素。抑制腦啡肽酶即可以增加這些物質(zhì)的水平，對(duì)抗血管收縮、鈉潴留、心肌重構(gòu)和神經(jīng)內(nèi)分泌的過(guò)度激活。特別強(qiáng)調(diào)的是，腦啡肽酶抑制的重要效應(yīng)是ANP的濃度增加，ANP具有強(qiáng)大的擴(kuò)血管、排鈉、利尿、抑制RAAS和抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)興奮進(jìn)而降低循環(huán)血量、減輕心臟負(fù)荷以及調(diào)節(jié)水電解質(zhì)平衡的作用，是體內(nèi)最重要的RAAS拮抗激素，在心衰的治療機(jī)制中占有重要地位。目前市場(chǎng)有個(gè)別單一的腦啡肽酶抑制劑類(lèi)藥物，但主要用于治療兒童腹瀉；沙庫(kù)比曲(sacubitril，又稱AHU-377)是一種腦啡肽酶抑制劑的實(shí)驗(yàn)性前體藥物，曾試用于治療高血壓【Bavishi C，et al.Role of neprilysin inhibitor combinations in hypertension:insights from hypertension and heart failure trials.Eur Heart J.2015；36(30):1967-1973】。

當(dāng)前臨床上心衰治療總體有效率不甚理想。因此，為提高ACEI治療慢性心衰的療效，進(jìn)一步降低心衰患者住院率、住院時(shí)間和死亡風(fēng)險(xiǎn)，本發(fā)明專(zhuān)利提供ACEI與腦啡肽酶抑制劑的組合物，通過(guò)兩者的雙效(多靶點(diǎn))RAAS抑制作用及其它潛在協(xié)同效應(yīng)，達(dá)到更有效治療慢性心衰的目的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是克服ACEI藥物存在的不足，提供一種在心衰治療有效率方面表現(xiàn)更優(yōu)的復(fù)方藥物組合物。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種藥物組合物，包括

(1)藥用劑量的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)；

(2)藥用劑量的腦啡肽酶抑制劑；

(3)藥劑學(xué)上可接受的載體。

所述ACEI選自卡托普利(Captopril)、依那普利(Enalapril)、貝那普利(Benazepril)、賴諾普利(Lisinopril)、雷米普利(Ramipril)、福辛普利(Fosinopril)、西拉普利(Cilazapril)、培哚普利(Perindopril)、咪達(dá)普利(Imidapril)、喹那普利(Quinapril)、地拉普利(Delapril)、螺普利(Spirapril)、阿拉普利(Alacepril)的一種，含量為1.25～75mg。

所述腦啡肽酶抑制劑選自沙庫(kù)比曲(sacubitril)等的一種，含量為10～120mg。

通過(guò)進(jìn)一步研究，ACEI的含量分別為卡托普利(12.5～75mg)、依那普利(2.5～30mg)、貝那普利(5～30mg)、賴諾普利(2.5～30mg)、雷米普利(1.25～15mg)、福辛普利(10～30mg)、西拉普利(1.25～5mg)、培哚普利(2～8mg)、咪達(dá)普利(2.5～10mg)、喹那普利(10～30mg)、地拉普利(7.5～45mg)、螺普利(6～25mg)、阿拉普利(25～75mg)等，上述物質(zhì)的活性代謝產(chǎn)物或鹽類(lèi)含量與相應(yīng)的上述物質(zhì)含量等同。

通過(guò)進(jìn)一步研究，腦啡肽酶抑制劑的含量為沙庫(kù)比曲10～120mg，進(jìn)一步優(yōu)選20～100mg，上述物質(zhì)的活性代謝產(chǎn)物或鹽類(lèi)含量與相應(yīng)的上述物質(zhì)含量等同。

本研究發(fā)現(xiàn)，腦啡肽酶抑制劑單用有輕度降壓作用，能顯著提升血漿ANP濃度，當(dāng)與ACEI合用時(shí)，能增強(qiáng)后者的抗心衰作用(詳見(jiàn)實(shí)施例)。在本發(fā)明中，引起心衰的基礎(chǔ)疾病以原發(fā)性高血壓及高血壓性心臟病為主，也可以由其它疾病引起，如冠心病、風(fēng)濕性心臟病等。

術(shù)語(yǔ)“藥用劑量”是指為達(dá)到有效控制或治療疾病的目的，臨床醫(yī)生根據(jù)患病個(gè)體病情嚴(yán)重程度對(duì)患病個(gè)體施與藥物的劑量。應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明提供的藥物藥用劑量不是對(duì)本發(fā)明的限制，而是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選，通常情況下，在該劑量?jī)?yōu)選范圍內(nèi)，該藥物能夠?qū)疾€(gè)體產(chǎn)生有效的治療效果?；疾€(gè)體是指患有疾病的獨(dú)立存在的生命體，在本發(fā)明中，生命體尤指人類(lèi)。應(yīng)當(dāng)理解，現(xiàn)有技術(shù)中，人類(lèi)藥用劑量或藥用劑量范圍可與哺乳動(dòng)物，如大鼠、小鼠等進(jìn)行換算以得出適合相應(yīng)動(dòng)物適用的藥用劑量或劑量范圍。

本發(fā)明提供的藥物組合物中的化合物在相同的制劑中可以同時(shí)施與患病個(gè)體，也可分別地相繼施與患病個(gè)體。若是相繼施與患病個(gè)體，則第二個(gè)(或附加的)活性成分施與的延遲不應(yīng)當(dāng)導(dǎo)致活性成分聯(lián)合帶來(lái)的有益效果的損失。若是同時(shí)施與患病個(gè)體，組合物中的化合物可以混合存在于同一個(gè)藥物制劑形式中，也可以以同樣的制劑形式分別獨(dú)立存在。若是以同樣的制劑形式分別獨(dú)立存在，則藥物組合物可以變通的以“組合藥盒”形式存在?！敖M合藥盒”是一種盒狀容器，內(nèi)置一種或多種劑量形式的藥物組合及其使用說(shuō)明書(shū)，在本發(fā)明中優(yōu)選所述的ACEI類(lèi)藥物和腦啡肽酶抑制劑沙庫(kù)比曲。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有藥用劑量的ACEI及其活性代謝產(chǎn)物中的一種、藥用劑量的腦啡肽酶抑制劑及其活性代謝產(chǎn)物或其鹽類(lèi)中的一種和可藥用載體的藥物組合物在用于制備治療心衰的藥物中的用途。

本發(fā)明提供的藥物組合物的劑型包括但不限于普通片劑、雙層片劑、多層片劑、緩釋片劑、單室控釋片劑、雙室控釋片劑、微孔型控釋片劑、舌下含片、口腔速崩片、分散片、腸溶片、顆粒劑、丸劑、腸溶膠囊、延遲釋放片、定時(shí)/位釋放片、普通膠囊、緩釋膠囊、控釋膠囊、含有微丸或小片的膠囊、含有微丸或小片的pH依賴型膠囊、顆粒劑、口服液、膜劑或貼劑等劑型，其中優(yōu)選片劑、膠囊或顆粒劑。

本發(fā)明的復(fù)方制劑可以每天服用一次或兩次，或者以緩釋或控釋方式每天或隔天服用一次，其中優(yōu)選每日服用1-2次。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供的藥物組合物具有明顯協(xié)同作用，即協(xié)同治療慢性心力衰竭的作用。本發(fā)明還提供了上述藥用劑量ACEI和腦啡肽酶抑制劑組成的藥物組合物在用于制備治療心力衰竭的藥物中的用途。

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，并非對(duì)本發(fā)明的限定，凡依照本發(fā)明內(nèi)容進(jìn)行的任何本領(lǐng)域的等同替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1.制備沙庫(kù)比曲20mg/依那普利5mg片(1000片量)

制備方法：將輔料過(guò)80目篩，干燥備用。取25g無(wú)水磷酸氫鈣、5g馬來(lái)酸依那普利按照等量遞增法混合均勻，按照處方量分別加入沙庫(kù)比曲、微晶纖維素、羧甲淀粉鈉和交聯(lián)聚維酮，用2％羥丙基甲基纖維素溶液制成軟材，20目篩制粒，40℃干燥約2h，20目篩整粒，控制顆粒的含水量為2-3％，將干燥后的顆粒與硬脂酸鎂、滑石粉混合均勻，半成品進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定含量，用壓片機(jī)壓制成1000片。制備過(guò)程中注意避光，制成的片劑需鋁塑泡罩包裝，避光保存。

實(shí)施例2.制備沙庫(kù)比曲30mg/雷米普利2.5mg片(1000片)

制備方法：輔料為直壓輔料，干燥備用。取處方量的雷米普利及微晶纖維素30g按照等量遞增法混合均勻，得到混粉1；稱取剩余處方量的微晶纖維素、乳糖、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、膠態(tài)二氧化硅，與沙庫(kù)比曲充分混勻，得到混粉2；將混粉1和混粉2與處方量的山愈酸甘油酯混合均勻，得最終混粉中間體，檢測(cè)混粉中間體，壓制成1000片。制備過(guò)程中注意避光，制成的片劑需鋁塑泡罩包裝，避光保存。

實(shí)施例3.制備沙庫(kù)比曲40mg/貝那普利10mg膠囊(1000粒量)

制備方法：將原輔料80目篩，干燥備用。取40g沙庫(kù)比曲、10g貝那普利按照等量遞增法混合均勻，分別加入乳糖、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉和低取代羥丙纖維素，混合均勻，用2％羥丙甲纖維素溶液制成軟材，20目篩制粒，40℃干燥約2h，20目篩整粒，控制顆粒的含水量為2-3％，將干燥后的顆粒與硬脂酸鎂混合均勻，半成品進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定含量，裝入空心膠囊即得。

實(shí)施例4.依那普利/沙庫(kù)比曲組方對(duì)心衰大鼠的治療作用

一、方法

1.動(dòng)物：Wistar大鼠40只，雌雄各半，體重200--240g，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2.造模方法：采用腹主動(dòng)脈縮窄法(心臟后負(fù)荷增加)制作慢性心衰大鼠模型。大鼠行4％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，每公斤體重注射40mg，劍突下腹正中切口，分層打開(kāi)腹腔，在腎動(dòng)脈分支以上鈍性游離腹主動(dòng)脈，將7#注射器針頭平行置于腹主動(dòng)脈上，用4#手術(shù)絲線將腹主動(dòng)脈和注射器一同結(jié)扎，然后緩慢將注射器撤出，關(guān)腹，分層縫合。使大鼠腹主動(dòng)脈直徑縮窄為0.7mm。正常對(duì)照組開(kāi)腹后將手術(shù)絲線穿過(guò)腹主動(dòng)脈，除不縮窄腹主動(dòng)脈以外，其他操作與手術(shù)組完全相同。正常喂養(yǎng)3周，測(cè)定血液動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，以確定慢性心衰模型是否成功。

3.分組給藥及指標(biāo)檢測(cè)：將上述造模成功后的心衰大鼠隨機(jī)分組，另設(shè)正常對(duì)照組大鼠10只，各組給藥或處理情況見(jiàn)表1。采用灌胃給藥，每天1次，連續(xù)3周。分別測(cè)定給藥前、給藥后不同時(shí)間大鼠心率(HR)、射血前期(PEP)、左室舒張時(shí)間(LVET)、每搏心輸出量(SV)、每分心輸出量(CO)。采用無(wú)創(chuàng)性心功能血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。接好心電圖的肢體導(dǎo)聯(lián)，同步記錄心電圖和心阻抗—階微分圖。記錄8-10個(gè)心動(dòng)周期，求其平均值。系統(tǒng)自動(dòng)采用Kubicek公式計(jì)算相關(guān)指標(biāo)。另取大鼠靜脈血1ml，用來(lái)檢測(cè)血漿ANP濃度(ELISA法)。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)。全部數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件進(jìn)行分析。

二、結(jié)果

1、造模情況：(1)一般情況：于手術(shù)后第3周觀察大鼠一般情況，以評(píng)價(jià)心衰程度，結(jié)果顯示：腹主動(dòng)脈縮窄法造成大鼠3周后出現(xiàn)明顯心衰癥狀，模型組大鼠活動(dòng)明顯減少，爪背紫紺，水腫，尿量減少，與正常對(duì)照組有顯著差異。(2)血流動(dòng)力學(xué)變化：第3周手術(shù)組和對(duì)照組大鼠心功能變化情況見(jiàn)表2。模型組HR由381+52.4次/分上升到471±57.8次/分，LVET由80.3+24.0ms縮短至52.5+22.3ms，SV和CO均顯著下降，提示模型組大鼠手術(shù)后3周心臟功能明顯下降，而對(duì)照組心功能各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)變化。組間比較HR、LVET、CO、SV均有顯著性差異，說(shuō)明模型組造模成功。(3)病理觀察：模型組電鏡所見(jiàn)：心肌T—管及肌漿網(wǎng)池均呈高度至極度擴(kuò)張成大串，有處大串連接成蔟。心肌線粒體于肌膜下增生成蔟、有的線粒體灶性溶解。心肌肌膜局部溶解、水腫，局部肌纖維溶解。散在的肌纖維有小灶性溶解。心肌束間微血管擴(kuò)張，內(nèi)皮細(xì)胞胞飲泡增多。正常對(duì)照組電鏡所見(jiàn)：為正常心肌組織，均符合下列條件：核常染色質(zhì)和異染色質(zhì)分明，有大圓核仁。有豐富核仁協(xié)同染色質(zhì)，有染色質(zhì)周?chē)伴g顆粒。核周間隙狹窄而一致。線粒體完整，大而嵴清晰。心肌T—管及肌漿網(wǎng)少而不擴(kuò)張。肌膜下無(wú)水腫。

表1第3周手術(shù)組和對(duì)照組大鼠心功能變化情況

【注】最初用30只大鼠造模，造模后死亡4只，即最后有26只存活。

每組第3周測(cè)量值分別與本組第1周比較：*P＜0.05，**P＜0.01；模型組與對(duì)照組的比較：^△P＜0.05,^△△P＜0.01。

2、依那普利/沙庫(kù)比曲與依那普利的比較：經(jīng)3周治療后，與模型組比較，依那普利組、依那普利/沙庫(kù)比曲組心衰大鼠第6周的血流動(dòng)力學(xué)均得到顯著改善，表現(xiàn)為心率及PEP下降、LVET及CO上升，依那普利組、依那普利/沙庫(kù)比曲組均提示對(duì)心衰的顯著治療作用。此外，與依那普利組比較，依那普利/沙庫(kù)比曲組血漿ANP濃度明顯增高,血流動(dòng)力學(xué)PEP下降、CO上升更為顯著，提示對(duì)心衰的治療作用有一定優(yōu)勢(shì)。

表2第6周各組大鼠心功能及血漿ANP情況比較(n＝10)

與對(duì)照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較：^△P＜0.05，^△△P＜0.01；與依那普利組比較：^#P＜0.05。

三、討論

本研究采用腹主動(dòng)脈縮窄法制作慢性心衰大鼠模型。心衰時(shí)血液動(dòng)力學(xué)異常是產(chǎn)生臨床充血癥狀的病理生理基礎(chǔ)。左室功能障礙引起CO降低和左室舒張時(shí)間延長(zhǎng)，前者導(dǎo)致組織器官血液灌注不足，后者引起肺血管嵌壓升高。采用縮窄大鼠腹主動(dòng)脈，造成壓力負(fù)荷病理性增高，心臟作功增加，引起左心衰，最終導(dǎo)致全心衰。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：腹主動(dòng)脈縮窄3周后出現(xiàn)明顯心衰癥狀，與正常對(duì)照組有顯著性差異。模型組大鼠活動(dòng)明顯減少，爪背紫紺、水腫，與對(duì)照組比較有顯著性差異。提示造模組大鼠心功能下降，全身血液灌注減少。心臟功收縮和舒張功能障礙分別引起CO降低和左室舒張末壓力(LVEDP)增高。隨著心輸出量的減少，激活了各種神經(jīng)內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)機(jī)制，使外周循環(huán)阻力增加，外周血液重新分配。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模型組HR顯著加快；LVET縮短，SV和CO均顯著下降，提示模型組大鼠手術(shù)后3周心臟功能明顯下降，而對(duì)照組心功能各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)變化，說(shuō)明造模成功。本實(shí)驗(yàn)采用無(wú)創(chuàng)性心功能血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，在大鼠清醒狀態(tài)下測(cè)量心功能血液動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，克服了在麻醉狀態(tài)下使用創(chuàng)傷性測(cè)量方法，從而避免了動(dòng)物所處狀態(tài)(清醒或麻醉)以及操作方法(有創(chuàng)或無(wú)創(chuàng))不同而造成的對(duì)大鼠心功能的干擾。模型組大鼠手術(shù)3周后心臟收縮和舒張功能均明顯降低，說(shuō)明模型組大鼠心臟收縮和舒張功能明顯下降。

本研究初步證實(shí)依那普利/沙庫(kù)比曲二聯(lián)組方在對(duì)心衰治療的顯著療效：經(jīng)3周治療后，與模型組比較，依那普利/沙庫(kù)比曲組心衰大鼠第6周的血流動(dòng)力學(xué)均得到顯著改善，表現(xiàn)為心率及PEP下降、LVET及CO上升，大鼠血漿ANP濃度亦明顯增高，這些結(jié)果的綜合提示對(duì)心衰的顯著治療作用。此外，與依那普利組比較，依那普利/沙庫(kù)比曲組ANP濃度明顯增高，PEP下降、CO上升也更為顯著，提示本組方對(duì)心衰的治療作用有一定優(yōu)勢(shì)。

實(shí)施例5.雷米普利/沙庫(kù)比曲組方對(duì)心衰大鼠的治療作用

一、方法

1.動(dòng)物：Wistar大鼠48只，雌雄各半，體重205--245g，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2.造模方法：同實(shí)施例4。

3.分組給藥及指標(biāo)檢測(cè)：將上述造模成功后的心衰大鼠隨機(jī)分組，另設(shè)正常對(duì)照組大鼠12只，各組給藥或處理情況見(jiàn)表4。采用灌胃給藥，每天1次，連續(xù)3周。分別測(cè)定給藥前、給藥后不同時(shí)間大鼠心率(HR)、射血前期(PEP)、左室舒張時(shí)間(LVET)、每搏心輸出量(SV)、每分心輸出量(CO)。采用無(wú)創(chuàng)性心功能血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。接好心電圖的肢體導(dǎo)聯(lián)，同步記錄心電圖和心阻抗—階微分圖。記錄8-10個(gè)心動(dòng)周期，求其平均值。系統(tǒng)自動(dòng)采用Kubicek公式計(jì)算相關(guān)指標(biāo)。另取大鼠靜脈血1ml，用來(lái)檢測(cè)血漿ANP濃度(ELISA法)。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)表示，兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用卡方檢驗(yàn)。全部數(shù)據(jù)采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行分析。二、結(jié)果

1、造模情況：(1)一般情況：于手術(shù)后第3周觀察大鼠一般情況，結(jié)果顯示：腹主動(dòng)脈縮窄法造成大鼠3周后出現(xiàn)明顯心衰癥狀，模型組大鼠活動(dòng)明顯減少，爪背紫紺，水腫，尿量減少，與正常對(duì)照組有顯著差異。(2)血流動(dòng)力學(xué)變化：第3周手術(shù)組和對(duì)照組大鼠心功能變化情況見(jiàn)表3。模型組HR上升，LVET縮短，SV和CO顯著下降，提示模型組大鼠手術(shù)后3周心臟功能明顯下降，而對(duì)照組心功能各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)變化，提示造模成功。(3)病理觀察：模型組電鏡見(jiàn)心肌T—管及肌漿網(wǎng)池均呈高度至極度擴(kuò)張成大串，有處大串連接成蔟。心肌線粒體于肌膜下增生成蔟、有的線粒體灶性溶解。心肌肌膜局部溶解、水腫，局部肌纖維溶解。散在的肌纖維有小灶性溶解。正常對(duì)照組電鏡未見(jiàn)上述病理改變。

表3第3周手術(shù)組和對(duì)照組大鼠心功能變化情況

【注】最初用36只大鼠造模，造模后死亡5只，即最后有31只成功。

每組第3周測(cè)量值分別與本組第1周比較：*P＜0.05，**P＜0.01；模型組與對(duì)照組的比較：^△P＜0.05,^△△P＜0.01。

2、雷米普利/沙庫(kù)比曲與雷米普利的比較：經(jīng)3周治療后，與模型組比較，雷米普利組、雷米普利/沙庫(kù)比曲組心衰大鼠第6周的血流動(dòng)力學(xué)均得到顯著改善，表現(xiàn)為心率及PEP下降、LVET及CO上升，雷米普利組、雷米普利/沙庫(kù)比曲組均提示對(duì)心衰的顯著治療作用。此外，與雷米普利組比較，雷米普利/沙庫(kù)比曲組血漿ANP濃度明顯增高,血流動(dòng)力學(xué)PEP下降、CO上升更為顯著，提示對(duì)心衰的治療作用有一定優(yōu)勢(shì)。

表4第6周各組大鼠心功能及血漿ANP情況比較

與對(duì)照組比較：*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較：^△P＜0.05，^△△P＜0.01；與雷米普利組比較：^#P＜0.05。

三、討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：模型組HR顯著加快；LVET縮短，SV和CO均顯著下降，提示模型組大鼠手術(shù)后3周心臟功能明顯下降，而對(duì)照組心功能各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)變化，說(shuō)明造模成功。本實(shí)驗(yàn)采用無(wú)創(chuàng)性心功能血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，在大鼠清醒狀態(tài)下測(cè)量心功能血液動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，克服了在麻醉狀態(tài)下使用創(chuàng)傷性測(cè)量方法，從而避免了動(dòng)物所處狀態(tài)(清醒或麻醉)以及操作方法(有創(chuàng)或無(wú)創(chuàng))不同而造成的對(duì)大鼠心功能的干擾。模型組大鼠手術(shù)3周后心臟收縮和舒張功能均明顯降低，說(shuō)明模型組大鼠心臟收縮和舒張功能明顯下降。

本研究初步證實(shí)雷米普利/沙庫(kù)比曲組方用于大鼠心衰時(shí)有顯著療效：經(jīng)3周治療后，與模型組比較，雷米普利/沙庫(kù)比曲組心衰大鼠第6周的血流動(dòng)力學(xué)均得到顯著改善，表現(xiàn)為心率及PEP下降、LVET及CO上升，大鼠血漿ANP濃度亦明顯增高，這些結(jié)果的綜合提示對(duì)心衰的顯著治療作用。此外，與雷米普利組比較，雷米普利/沙庫(kù)比曲組ANP濃度明顯增高，PEP下降、CO上升亦更為顯著，提示本組方對(duì)心衰的治療作用具有一定優(yōu)勢(shì)。