一種鹽酸伊立替康納米脂束制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鹽酸伊立替康納米脂束制劑，其包括包載材料、鹽酸伊立替康和注射用水性溶劑，所述包載材料選自PLGA-PEG、PGA-PEG、PCL-PEG、PEG-NH2、PEG-COOH、DSPE-PEG、Solutol?HS15和磷脂中的一種或至少兩種的混合物。本發(fā)明還公開了所述鹽酸伊立替康納米脂束制劑的制備方法、由其制備的鹽酸伊立替康納米制劑和鹽酸伊立替康納米脂束粉狀制劑。所提供的鹽酸伊立替康納米脂束制劑包封率能高達(dá)85％，且粒徑在10nm左右，能實(shí)現(xiàn)納米制劑對腫瘤的被動靶向，可以增加藥效并減少系統(tǒng)毒副作用；本發(fā)明所述鹽酸伊立替康納米脂束粉狀制劑，提高了鹽酸伊立替康制劑的安全性和順應(yīng)性，降低鹽酸伊立替康的毒性，延長體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，且本發(fā)明的制備工藝簡單易行，重復(fù)性好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
【專利說明】一種鹽酸伊立替康納米脂束制劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種納米脂束制劑及其制備方法，尤其涉及一種 鹽酸伊立替康納米脂束制劑及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 鹽酸伊立替康是喜樹堿的衍生物。喜樹堿是1966年美國Wall等從中國原產(chǎn)植物 喜樹堿（Camptotheca acuminata)中提取分離得到的五元環(huán)生物堿。喜樹堿具有很強(qiáng)的抗 癌活性和較廣的抗腫瘤譜。喜樹堿可以特異性地與I型拓?fù)洚悩?gòu)酶結(jié)合，通過抑制拓?fù)洚?構(gòu)酶來抑制與之相關(guān)的DNA復(fù)制修復(fù)、基因重組及轉(zhuǎn)錄。
[0003] 但是喜樹堿作為藥物使用中存在一定問題，其毒副作用如骨髓抑制和出血性膀胱 炎，以及它較差的水溶性，很大程度上限制了其臨床應(yīng)用。因此，研究人員陸續(xù)開發(fā)出擁有 更高抗癌活性和較低毒性的喜樹堿衍生物，比如10-輕基喜樹堿，7-乙基-10-輕基喜樹堿 (SN-38)等。其中，CPT-11的鹽酸鹽（即鹽酸伊立替康），不僅具有更高抗癌活性和很低的 毒性，還具有一定的水溶性，這大大提高了它在臨床應(yīng)用中的方便性。鹽酸伊立替康作為藥 物前體，給藥后代謝成活性體SN-38,顯示其抗腫瘤活性。
[0004] 由于鹽酸伊立替康的給藥產(chǎn)生骨髓功能抑制、胃腸障礙等副作用，因此對其使用 加以嚴(yán)格的限制。另外，其具有抗癌活性的α-羥基內(nèi)酯環(huán)容易水解，會導(dǎo)致其抗癌活性減 弱。為解決上述問題，使用細(xì)胞周期特異性代謝拮抗物質(zhì)喜樹堿類似物進(jìn)行抗癌治療時(shí)， 必須能夠長時(shí)間維持藥物的局部濃度。靜脈或皮下給予上述藥物后，其半衰期較短，僅為 數(shù)小時(shí)；因此為了延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，可以考慮使用封閉囊泡形態(tài)的載體進(jìn)行載 帶。目前已經(jīng)提出幾個(gè)喜樹堿類的脂質(zhì)體制劑化方案，例如，公開了通過使喜樹堿包含于脂 質(zhì)體膜中，從而抑制α-羥基內(nèi)酯環(huán)水解；另外，公開了一種使鹽酸伊立替康活性體SN-38 本身包含于脂質(zhì)體膜中的方法，但是由于SN-38在脂質(zhì)體膜中難于穩(wěn)定化，在血液中迅速 消失，因此難于較長時(shí)間維持SN-38在血漿中的濃度；還公開了采用通過被動包埋方法將 水溶性衍生物鹽酸伊立替康封入脂質(zhì)體中，靜電固定此脂質(zhì)雙層膜使其穩(wěn)定化的常用方法 (Passive loading法）進(jìn)行制備的例子。
[0005] 出于維持鹽酸伊立替康活性代謝物SN-38在血漿中的濃度的目的，希望開發(fā)這 樣一種制劑，即在封閉囊泡中以臨床上適當(dāng)充分的包埋量包封前體藥物鹽酸伊立替康，并 且以抑制α -羥基內(nèi)酯環(huán)水解的狀態(tài)長時(shí)間存在于血液中，能夠長時(shí)間維持活性代謝物 SN-38在血漿中的濃度，并保證制作工藝簡單易重復(fù)，易于工業(yè)化生產(chǎn)。此外，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn) 報(bào)道，腫瘤組織具有滲透性增強(qiáng)和滯留效應(yīng)，能夠?qū)崿F(xiàn)納米粒子在腫瘤部位的富集，而且粒 徑<50nm的納米粒子，其對腫瘤部位的被動靶向尤其明顯。因此，本領(lǐng)域希望制備小粒徑的 納米粒子，充分利用其對腫瘤組織的被動靶向來實(shí)現(xiàn)藥物在腫瘤部位的富集。
[0006] 專利CN201410016965公開了一種羥基喜樹堿納米脂束制劑及其制備方法，專利 CN201410014128公開了一種伊立替康納米脂束制劑及其制備方法。所述納米脂束制劑具 有降低藥物毒性、增強(qiáng)腫瘤靶向富集和提高患者順應(yīng)性的效果。然而，上述專利的脂束制 劑的組成成分復(fù)雜，難以掌握其配比，不易制備，實(shí)用性差；上述專利中脂束制劑的粒徑為 lOOnm左右，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道顯示<50nm的納米粒子才具有明顯的被動靶向腫瘤的效果；上述專 利未明確所得的脂束制劑的包封率，本領(lǐng)域已知包封率越大，則藥物在血液中的有效濃度 越大，且減少制作過程中藥物的投入量并大幅度節(jié)省成本。
[0007] 由此可見，本領(lǐng)域急需一種制備方法簡單、粒徑小且包封率更高的鹽酸伊立替康 納米脂束制劑，其容易獲得，靶向效果好，能夠?qū)崿F(xiàn)具有充分臨床效果的藥物包埋量，并長 時(shí)間維持鹽酸伊立替康活性代謝物SN-38在血漿中的濃度。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的之一在于提出一種鹽酸伊立替康納米脂束制劑，其制備方法簡單、 粒徑小且包封率高。為達(dá)此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0009] 所述鹽酸伊立替康納米脂束制劑包括包載材料、鹽酸伊立替康和注射用水性溶 齊U，所述包載材料選自 PLGA-PEG、PGA-PEG、PCL-PEG、PEG-NH2、PEG-COOH、DSPE-PEG、Solutol HS15和磷脂中的一種或至少兩種的混合物。在本發(fā)明實(shí)施方案中，所用的包載材料為 PLGA-PEG。
[0010] 任選地，所述鹽酸伊立替康納米脂束制劑包含α-乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇中 的至少一種。
[0011] 所述注射用水性溶劑選自去離子水、PBS緩沖溶液、生理鹽水、葡萄糖注射液、氨基 酸注射液中的一種或至少兩種的混合物。在本發(fā)明的實(shí)施方案中，所用的注射用水性溶劑 為去離子水。
[0012] 所述制劑包含10-60重量份的包載材料，10-30重量份的鹽酸伊立替康。
[0013] 所述注射用水性溶劑的質(zhì)量是所述包載材料和鹽酸伊立替康總質(zhì)量的5-100倍， 優(yōu)選10-30倍。
[0014] 本發(fā)明的鹽酸伊立替康納米脂束制劑，其組成成分簡單，不含例如十二羥基硬脂 酸酯、磷脂、乙醇、甘油等任何現(xiàn)存類似制劑中的復(fù)雜成分，從而具有簡單的制備方案，可重 復(fù)性強(qiáng)，易放大生產(chǎn)。
[0015] 本發(fā)明的另一目的在于提供制備本發(fā)明的鹽酸伊立替康納米脂束制劑的方法，其 兩種優(yōu)選的方法如下：
[0016] 第一種方法，其包括：將所述包載材料溶解在所述注射用水性溶劑中，形成澄清體 系之后，加入鹽酸伊立替康，水浴下攪拌直至形成澄清體系，即得到所述納米脂束制劑，所 述水浴溫度為30-55°C。
[0017] 第二種方法，其包括：將所述包載材料和鹽酸伊立替康一起溶解在有機(jī)溶劑中，除 去有機(jī)溶劑，然后加入所述注射液水性溶劑進(jìn)行水化，即得到所述納米脂束制劑。其中，所 述有機(jī)溶劑為氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙醇、甲醇中的一種或至少兩種的混合物；所述除去有 機(jī)溶劑的方法包括溶劑揮發(fā)法、旋膜法、透析法、凍干法中的一種或其至少兩種的組合。
[0018] 使用上述方法制備的鹽酸伊立替康納米脂束制劑為淺黃色液體，穩(wěn)定性良好。如 圖1、圖2所示，通過對鹽酸伊立替康納米脂束制劑的粒度檢測，其結(jié)果光強(qiáng)粒度多峰分布 顯示所述鹽酸伊立替康納米脂束制劑的粒徑分布符合正態(tài)分布，表明鹽酸伊立替康納米脂 束制劑的粒度均一，并顯示出平均粒徑為l〇nm左右。
[0019] 本發(fā)明的又一目的在于提供一種鹽酸伊立替康納米制劑，其通過將權(quán)利要求1-5 任一項(xiàng)所述的鹽酸伊立替康納米脂束制劑用注射用水稀釋5-100倍，例如20倍、30倍、40 倍、50倍或60倍，優(yōu)選20倍來制備。本發(fā)明的鹽酸伊立替康納米制劑為納米粒子體系，在 稀釋后的粒度檢測結(jié)果如圖3所示，平均粒徑為5-20nm，仍能保持所述鹽酸伊立替康納米 脂束制劑的納米粒子的大小，可直接用于靜脈注射并且可以延長鹽酸伊立替康的體內(nèi)循環(huán) 時(shí)間，并達(dá)到腫瘤靶向的目的。
[0020] 本發(fā)明提供的鹽酸伊立替康納米脂束制劑，也可以通過冷凍干燥制成粉狀制劑。 本發(fā)明的目的之一還在于提供一種鹽酸伊立替康納米脂束粉狀制劑，其通過本發(fā)明所述的 鹽酸伊立替康納米脂束制劑裝瓶、冷凍干燥和通氮?dú)夥忾]保存制得，提高了鹽酸伊立替康 制劑的安全性和順應(yīng)性。所述粉狀制劑溶解后可水化形成納米脂束用于靜脈注射，能降低 鹽酸伊立替康的毒性，延長體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，提高腫瘤靶向部位的藥物濃度，降低副作用。
[0021] 本發(fā)明具有以下有益效果：
[0022] 1)所提供的鹽酸伊立替康納米脂束制劑選用了特定且成分簡單的包載材料，大大 提高了鹽酸伊立替康的溶解性和制劑的順應(yīng)性，實(shí)現(xiàn)了具有充分臨床效果的藥物包封量， 以至少1.0(藥物（mol)/總脂束（mol))的高載帶量在封閉囊泡中包埋鹽酸伊立替康，鹽酸 伊立替康的包封率能高達(dá)85%，能在較低的輔料用量下實(shí)現(xiàn)鹽酸伊立替康的載帶；
[0023] 2)所述鹽酸伊立替康納米脂束制劑和所述鹽酸伊立替康納米制劑的粒徑在10nm 左右，能夠利用腫瘤組織的滲透增強(qiáng)和滯留效應(yīng)（EPR效應(yīng)）實(shí)現(xiàn)納米制劑對腫瘤的被動靶 向，促進(jìn)藥物在腫瘤組織的選擇性分布，可以增加藥效并減少系統(tǒng)毒副作用；
[0024] 3)本發(fā)明所述鹽酸伊立替康納米脂束粉狀制劑，提高了鹽酸伊立替康制劑的安全 性和順應(yīng)性。所述粉狀制劑溶解后可水化形成納米脂束用于靜脈注射，能降低鹽酸伊立替 康的毒性，延長體內(nèi)循環(huán)時(shí)間，提高腫瘤靶向部位的藥物濃度，降低副作用。在細(xì)胞毒性測 試試驗(yàn)中，本發(fā)明的鹽酸伊立替康納米脂束制劑可達(dá)到19. 2μ g/ml的IC5(I，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于領(lǐng)域 內(nèi)的類似制劑；且在腫瘤抑制實(shí)驗(yàn)中，24天內(nèi)都取得了較商業(yè)化的鹽酸伊立替康藥物開普 拓更強(qiáng)的腫瘤抑制能力。
[0025] 4)本發(fā)明的制備工藝簡單易行，重復(fù)性好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0026] 圖1為鹽酸伊立替康納米脂束制劑的粒度檢測結(jié)果-光強(qiáng)粒度多峰分布柱形圖。
[0027] 圖2為鹽酸伊立替康納米脂束制劑的粒度檢測結(jié)果-光強(qiáng)粒度正態(tài)分布曲線圖。
[0028] 圖3為鹽酸伊立替康納米脂束制劑稀釋所得的納米制劑的粒度檢測結(jié)果-光強(qiáng)粒 度正態(tài)分布曲線圖。
[0029] 圖4為在荷瘤老鼠體內(nèi)鹽酸伊立替康納米脂束制劑與商業(yè)化的鹽酸伊立替康藥 物開普拓（Campto)抑制腫瘤生長能力的比較。

【具體實(shí)施方式】
[0030] 下面結(jié)合附圖并通過【具體實(shí)施方式】來進(jìn)一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案。
[0031] 實(shí)施例1
[0032] 1)鹽酸伊立替康納米脂束制劑的制備
[0033] a)稱取lg PLGA-PEG和lOg水，室溫溶解，得到溶液。
[0034] b)往步驟a中制備的溶液中加入lg鹽酸伊立替康，常溫溶解，充分?jǐn)嚢瑁玫匠吻?溶液后，過濾，得到鹽酸伊立替康納米脂束制劑，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
[0035] 2)鹽酸伊立替康納米制劑的制備
[0036] 將步驟1制備的鹽酸伊立替康納米脂束制劑用20倍體積的葡萄糖溶液稀釋，得到 鹽酸伊立替康納米制劑。
[0037] 實(shí)施例2
[0038] 1)鹽酸伊立替康納米脂束制劑的制備
[0039] a)稱取2g PLGA-PEG和20g水，40°C水浴攪拌溶解，得到溶液。
[0040] b)往步驟a中制備的溶液中加入lg鹽酸伊立替康，50°C水浴溶解，充分?jǐn)嚢?，得?澄清溶液后，過濾，得到鹽酸伊立替康納米脂束制劑，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
[0041] 2)鹽酸伊立替康納米制劑的制備
[0042] 將步驟1制備的鹽酸伊立替康納米脂束制劑用20倍體積的生理鹽水稀釋，得到鹽 酸伊立替康納米制劑。
[0043] 實(shí)施例3
[0044] 1)鹽酸伊立替康納米脂束制劑的制備
[0045] a)稱取2g PLGA-PEG和30g 7jC，常溫?cái)嚢枞芙?，得到溶液?br> [0046] b)往步驟a中制備的溶液中加入lg鹽酸伊立替康，50°C水浴溶解，充分?jǐn)嚢?，得?澄清溶液后，過濾，得到鹽酸伊立替康納米脂束制劑，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
[0047] 2)鹽酸伊立替康納米制劑的制備
[0048] 將步驟1制備的鹽酸伊立替康納米脂束制劑用30倍體積的葡萄糖溶液稀釋，得到 鹽酸伊立替康納米制劑。
[0049] 實(shí)施例4
[0050] 1)鹽酸伊立替康納米脂束制劑的制備
[0051] a)稱取lg PLGA-PEG和30g水，常溫?cái)嚢枞芙?，得到溶液?br> [0052] b)往步驟a中制備的溶液中加入lg鹽酸伊立替康，45°C水浴溶解，充分?jǐn)嚢?，得?澄清溶液后，過濾，得到鹽酸伊立替康納米脂束制劑，通氮?dú)獗Ｗo(hù)，密封保存。
[0053] 2)鹽酸伊立替康納米制劑的制備
[0054] 將步驟1制備的鹽酸伊立替康納米脂束制劑用30倍體積的生理鹽水稀釋，得到鹽 酸伊立替康納米制劑。
[0055] 實(shí)施例5
[0056] 鹽酸伊立替康納米脂束制劑的粒度檢測
[0057] 用英國Malven儀器公司的ZS90儀器檢測伊立替康納米脂束制劑的粒徑，其動態(tài) 光散射結(jié)果類似圖1和圖2所示，制備的伊立替康納米脂束制劑為粒徑均勻的納米顆粒，粒 徑在10nm左右。
[0058] 實(shí)施例6
[0059] 鹽酸伊立替康納米制劑的粒度檢測
[0060] 用英國Malven儀器公司的ZS90儀器檢測伊立替康納米制劑的粒徑，其動態(tài)光散 射結(jié)果如圖3所示，制備的伊立替康納米制劑為粒徑均勻的納米顆粒，粒徑在10nm左右。
[0061] 實(shí)施例7
[0062] 細(xì)胞毒性測試
[0063] 選用幾種不同的腫瘤細(xì)胞株中，比較鹽酸伊立替康脂束與鹽酸伊立替康、商業(yè)化 的鹽酸伊立替康藥物開普拓的細(xì)胞毒性（ic5(l)。結(jié)果如表1所示，在三種腫瘤細(xì)胞株中，與 鹽酸伊立替康和開普拓相比，鹽酸伊立替康脂束具有更小的ic5(l值，表明本發(fā)明中的鹽酸 伊立替康納米脂束制劑與鹽酸伊立替康以及商業(yè)化的鹽酸伊立替康藥物開普拓相比，具有 更高的腫瘤細(xì)胞毒性。
[0064] 表1在幾種腫瘤細(xì)胞株中鹽酸伊立替康納米脂束制劑與鹽酸伊立替康、商業(yè)化的 鹽酸伊立替康藥物開普拓（Campto)的半數(shù)致死劑量（IC 5(I)比較
[0065]

【權(quán)利要求】
1. 一種鹽酸伊立替康納米脂束制劑，其包括包載材料、鹽酸伊立替康和注射用水性溶 齊U，所述包載材料選自 PLGA-PEG、PGA-PEG、PCL-PEG、PEG-NH2、PEG-COOH、DSPE-PEG、Solutol HS15和磷脂中的一種或至少兩種的混合物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的鹽酸伊立替康納米脂束制劑，其特征在于，所述鹽酸伊立替 康納米脂束制劑還包括α -乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇中的至少一種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的鹽酸伊立替康納米脂束制劑，其特征在于，所述注射用水 性溶劑選自去離子水、PBS緩沖溶液、生理鹽水、葡萄糖注射液、氨基酸注射液中的一種或至 少兩種的混合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的鹽酸伊立替康納米脂束制劑，其特征在于，所述制 劑包含10-60重量份的包載材料，10-30重量份的鹽酸伊立替康。
5. 根據(jù)根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的鹽酸伊立替康納米脂束制劑，其特征在于，所 述注射用水性溶劑的體積是所述包載材料和鹽酸伊立替康總質(zhì)量的5-100倍，優(yōu)選10-30 倍。
6. -種根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的鹽酸伊立替康納米脂束制劑的制備方法，其 包括：將所述包載材料溶解在所述注射用水性溶劑中，形成澄清體系之后，加入鹽酸伊立 替康，水浴下攪拌直至形成澄清體系，即得到所述納米脂束制劑；優(yōu)選地，所述水浴溫度為 30-55。。。
7. -種根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的鹽酸伊立替康納米脂束制劑的制備方法，其包 括：將所述包載材料和鹽酸伊立替康一起溶解在有機(jī)溶劑中，除去有機(jī)溶劑，然后加入所述 注射液水性溶劑進(jìn)行水化，即得到所述納米脂束制劑。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述有機(jī)溶劑為氯仿、二氯甲烷、丙 酮、乙醇、甲醇中的一種或至少兩種的混合物； 優(yōu)選地，所述除去有機(jī)溶劑的方法包括溶劑揮發(fā)法、旋膜法、透析法、凍干法中的一種 或其至少兩種的組合。
9. 一種鹽酸伊立替康納米制劑，其通過將權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的鹽酸伊立替康納 米脂束制劑用注射用水稀釋5-100倍，優(yōu)選稀釋20倍來制備。
10. -種鹽酸伊立替康納米脂束粉狀制劑，其通過將權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的鹽酸 伊立替康納米脂束制劑裝瓶、冷凍干燥和通氮?dú)夥忾]保存制得。
【文檔編號】A61K31/4745GK104083325SQ201410344489
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2014年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月18日
【發(fā)明者】梁興杰, 李嬋, 張春秋, 陳飛, 金叔賓, 王浩, 吳雁, 楊蓉 申請人:國家納米科學(xué)中心