唑來膦酸佐劑及含唑來膦酸佐劑的疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種唑來膦酸佐劑及含唑來膦酸佐劑的疫苗，即每單份疫苗劑中含有10～50μg的唑來膦酸佐劑。本發(fā)明提供的唑來膦酸佐劑的毒、副作用小，在免疫劑量范圍內(nèi)使用是安全可靠的，能夠有效的誘導抗原特異性的體液免疫應答，且其所誘導的體液免疫應答效果接近鋁佐劑，原料易得，性能穩(wěn)定，可作為多種疫苗的佐劑。
【專利說明】唑來膦酸佐劑及含唑來膦酸佐劑的疫苗
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種唑來膦酸免疫佐劑，以及含唑來膦酸佐劑的疫苗,屬于免疫學【技術領域】。
【背景技術】
[0002]佐劑是一類與能免疫原性物質(zhì)特異性或非特異性結合，誘發(fā)機體產(chǎn)生長期、有效的特異性免疫反應，發(fā)揮輔助作用的物質(zhì)。佐劑能夠減少免疫原的用量，降低疫苗的生產(chǎn)成本。近年來依托現(xiàn)代生物技術和基因工程的迅猛發(fā)展，疫苗的研制取得了很大的進步，重組亞單位疫苗、抗獨特型抗體疫苗、核酸疫苗及合成肽疫苗等得到開發(fā)，但由于這些疫苗存在著分子小、免疫原性弱、靶向性差等因素，難以誘導機體產(chǎn)生有效免疫應答，因此需要應用佐劑來增強其免疫原性或增強宿主對抗原免疫應答。
[0003]鋁佐劑是第一個被批準并普遍用于人類的疫苗佐劑，其作用機理是形成抗原貯藏庫；產(chǎn)生顆粒性抗原來促進抗原提呈給免疫細胞；使抗原滯留，緩慢釋放，從而吸引活性淋巴細胞，激活補體系統(tǒng)。但多年實踐證明，鋁佐劑對于小分子量抗原增強免疫應答的效果不夠理想，可引起局部刺激癥狀和不良反應，此外鋁鹽還可能導致神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生。隨著研究者對于佐劑作用機制的深入研究和分子生物學的發(fā)展，人們將會更有針對性的選擇合適的疫苗佐劑來預防和治療疾病，而佐劑的應用也將會更加安全高效，但目前可供使用的人用佐劑并不多。 因此開發(fā)研制新型的免疫佐劑有著重要的意義。
[0004]唑來膦酸為第三代的二磷酸鹽類藥物，主要用于治療骨質(zhì)疏松、乳腺癌，多發(fā)性骨髓瘤，肺癌，前列腺癌以及多種實體瘤引起的骨轉移和高鈣血癥。唑來膦酸能阻斷腫瘤細胞產(chǎn)生的各種各樣的刺激因子可誘導鈣離子的釋放，減慢骨轉移的發(fā)生和發(fā)展，可直接導致某些腫瘤細胞的死亡。近年來研究發(fā)現(xiàn)唑來膦酸不僅可以抑制腫瘤及骨相關疾病，還可以作用于機體免疫系統(tǒng)，如刺激Y S T淋巴細胞增殖，刺激樹突狀細胞(DCs)成熟。因此我們對唑來膦酸的佐劑效應進行了相關研究，發(fā)現(xiàn)該化合物具有較好的免疫增強效用，可以作為疫苗佐劑應用于多種疫苗。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為解決現(xiàn)有疫苗佐劑存在毒副作用、價格昂貴等問題，本發(fā)明提供一種安全、有效、穩(wěn)定的唑來膦酸佐劑以及含有唑來膦酸佐劑的疫苗。
[0006]本發(fā)明所述唑來膦酸在制備疫苗佐劑中的應用。
[0007]所述唑來膦酸為市購醫(yī)用產(chǎn)品，分子式為C5HltlN2O7P2 H2O,分子量為290.10，結構式如圖1所示,在人體中推薦劑量:為每200 μ L疫苗液中，唑來膦酸用量不超過2mg,優(yōu)選10 ~50 μ g0
[0008]本發(fā)明提供的含有唑來膦酸佐劑的疫苗，其特征在于每單份疫苗劑中含有10~50 μ g唑來膦酸。
[0009]本發(fā)明提供的含有唑來膦酸佐劑的疫苗經(jīng)過下列方法制備:按每單份疫苗劑加入10~50 μ g唑來膦酸的量，在疫苗中加入唑來膦酸后，再加生理鹽水至100 - 200ul，按常規(guī)混合，得含有唑來膦酸佐劑的疫苗。
[0010]所述每單份疫苗劑為臨床或者動物實驗中使用的常規(guī)單次注射參考量。
[0011 ] 所述疫苗為常規(guī)甲肝抗原、乙肝抗原、狂犬病毒抗原中的一種。
[0012]唑來膦酸佐劑能顯著增強抗原特異性的體液免疫反應。
[0013]本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有下列優(yōu)點和效果:(1)唑來膦酸佐劑的毒、副作用小，在免疫劑量范圍內(nèi)使用是安全可靠的；(2)唑來膦酸佐劑能夠有效的誘導抗原特異性的體液免疫應答，且其所誘導的體液免疫應答效果接近鋁佐劑；(3)唑來膦酸佐劑原料易得，為市售產(chǎn)品，性能穩(wěn)定，可作為多種疫苗的佐劑。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為唑來膦酸分子結構式。
【具體實施方式】
[0015]下面結合實施例，進一步闡述本發(fā)明。這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。文中所述的較佳條件實施方法僅作示范之用。
[0016]實施例1
本發(fā)明提供的含有唑來膦酸佐劑的疫苗是:在每單份HAV抗原(即動物實驗中使用的單次注射劑量)中，加入IOyg唑來膦酸注射液，再加生理鹽水至200ul，按常規(guī)混合后，得含有唑來膦酸佐劑10 μ g、甲肝抗原18`EU的甲肝疫苗。
[0017]所述，HAV抗原為市購的抗原滴度為512EU/ml的18EU HAV抗原液，購自中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所，所述唑來膦酸為市購的唑來膦酸注射液，購自江蘇揚子江藥業(yè)集團有限公司。
[0018]實施例1所得含有唑來膦酸佐劑的甲肝疫苗，其免疫試驗和效果如下:
A、免疫
將6 — 8周齡、體重18 — 22g清潔級雌性ICR小鼠分為唑來膦酸佐劑組、氫氧化鋁佐劑組、無佐劑組和空白組，共四組，每組8只；其中，所用氫氧化鋁為常用的氫氧化鋁膠體佐劑，其制法參照《中國藥典(三部)》，(國家藥典委員會.北京:人民衛(wèi)生出版社.2005:118-119)。
[0019]對唑來膦酸佐劑組:注射實施例1的含有唑來膦酸佐劑的甲肝疫苗至小鼠體內(nèi)，注射劑量為每只小鼠200 μ L，其中:200 μ L疫苗中唑來膦酸為10 μ g，甲肝抗原為18EU。
[0020]對氫氧化鋁佐劑組:注射氫氧化鋁佐劑與甲肝疫苗液的混合物，注射劑量為每只小鼠200 μ L，其中:200 μ L疫苗中氫氧化鋁佐劑為0.lmg，甲肝抗原為18EU。
[0021]無佐劑組:注射甲肝疫苗液，注射劑量為每只小鼠200μ L，其中甲肝抗原為18EU。
[0022]空白組:注射生理鹽水，注射劑量為每只小鼠200μ L。
[0023]免疫方案:在第O周經(jīng)腹部皮下注射免疫小鼠，免疫次數(shù)為一次。
[0024]B、ELISA檢測血清抗一甲肝抗原IgG抗體水平
在第O周免疫后第4、8、12、16周，采集小鼠尾靜脈血，分離血清，ELISA檢測血清抗一甲肝抗原IgG水平，按KPL公司生產(chǎn)的通用ELISA\試劑盒按試劑盒說明書進行操作。
[0025]C、數(shù)據(jù)分析
對所獲得的實驗數(shù)據(jù)以SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，以P < 0.05為差異的統(tǒng)計學意義。
[0026]表1為使用實施例1中16周內(nèi)，各實驗組小鼠血清抗-甲肝抗原IgG抗體效價。
[0027]表1
【權利要求】
1.唑來膦酸在制備疫苗佐劑中的應用。
2.如權利要求1所述的唑來膦酸在制備疫苗佐劑中的應用，其特征在于所述唑來膦酸為化合物Zoledronic Acid，其化學名稱為[1-羥基-2- (1-咪唑基)乙叉]二磷酸-水合物，分子式為C5HltlN2O7P2 H2O,分子量為290.10。
3.一種含有唑來膦酸佐劑的疫苗，其特征在于每單份疫苗劑中含有10~50 μ g的唑來勝Ife佐劑。
4.如權利要求3所述的含有唑來膦酸佐劑的疫苗，其特征在于經(jīng)過下列方法制備:按每單份疫苗劑加入10~50 μ g唑來膦酸的量，在疫苗中加入唑來膦酸后，再加生理鹽水至100 - 200ul，按常規(guī)混合，得含有唑來膦酸佐劑的疫苗。
【文檔編號】A61K39/39GK103768595SQ201410039446
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月27日 優(yōu)先權日:2014年1月27日
【發(fā)明者】王海漩, 李虹娟, 胡凝珠, 胡云章, 李彥涵, 李建芳 申請人:中國醫(yī)學科學院醫(yī)學生物學研究所