甘氨酸鋅佐劑及含甘氨酸鋅佐劑的疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種甘氨酸鋅佐劑及含有甘氨酸鋅佐劑的疫苗，即每單份疫苗劑中含有用pH=6~8的PBS溶解的0.1~1mg的甘氨酸鋅佐劑。本發(fā)明提供的甘氨酸鋅佐劑是藥用輔料，是鋅營養(yǎng)強(qiáng)化劑，毒副作用小，在免疫劑量范圍內(nèi)使用是安全可靠的，能夠有效誘導(dǎo)抗原特異性的體液免疫應(yīng)答，且所誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答效果優(yōu)于無佐劑組，甘氨酸鋅佐劑原料易得，為市售產(chǎn)品，制備工藝簡單，成本低，性能穩(wěn)定，生物學(xué)效價較高、無毒害作用，可添加于多種傳統(tǒng)疫苗和基因工程疫苗中作為疫苗佐劑。
【專利說明】[0001] 甘氨酸鋅佐劑及含甘氨酸鋅佐劑的疫苗

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及一種甘氨酸鋅佐劑及含該佐劑的疫苗，屬于免疫學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0003] 近年來，隨著疫苗研究的不斷深入，特別是分子生物技術(shù)的迅速發(fā)展，研制出的新 型基因工程疫苗純度高、特異性強(qiáng)，但分子小，免疫原性相對較弱，難以產(chǎn)生有效的免疫應(yīng) 答。因此應(yīng)用佐劑來增強(qiáng)其免疫原性就顯得尤為重要。
[0004] 目前，已認(rèn)證應(yīng)用于人類的佐劑仍寥寥無幾，鋁鹽佐劑就是其中之一。鋁鹽佐劑在 提高抗體水平和安全方面已獲得長期的實踐證實，但由于其可引起過敏、誘導(dǎo)退行性神經(jīng) 病變等缺點(diǎn)，迫切需要開發(fā)新型疫苗佐劑以克服這些缺陷，更好的為人類服務(wù)。
[0005] 甘氨酸鋅（Glycine zinc)是微量元素氨基酸螯合物，氨基酸螯合鋅是一類以二價 鋅離子與氨基酸中給電子的氨基氮原子形成配位鍵，又與給電子的羰基氧原子形成五元或 六元環(huán)絡(luò)合物。它集氨基酸與鋅元素于一體，是一種類似動物體內(nèi)吸收形式和生物功能形 式的鋅源添加劑,具有適口性好、生物效價高、穩(wěn)定性好及能提高機(jī)體免疫力等特點(diǎn)。
[0006] 鋅是動物生長和生命活動所必需的微量元素之一，在動物機(jī)體內(nèi)發(fā)揮著重要的生 理生化功能，它是體內(nèi)多種酶的組成成分或激活劑，具有加速人體的生長發(fā)育、改善味覺、 提高智力、增強(qiáng)性功能、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、預(yù)防感染和促進(jìn)傷口愈合等作用。鋅作為直接參與 免疫功能的重要生命元素，是免疫器官生長發(fā)育和免疫應(yīng)答所必需的營養(yǎng)因子。鋅能增強(qiáng) 肝臟的合成能力和細(xì)胞對病毒的敏感性并參與解毒，從而改善機(jī)體的防御能力。鋅參與補(bǔ) 體反應(yīng)，它可以促進(jìn)補(bǔ)體的級聯(lián)放大，起到補(bǔ)助和加強(qiáng)吞噬細(xì)胞及抗體的防御能力的作用。 甘氨酸是分子量最小的氨基酸，其與微量元素反應(yīng)生成的鰲合物也是分子量最小的氨基酸 微量元素鰲合物，能更好的被肌體吸收、利用。由于氨基酸與鋅都具有一定的殺菌作用，又 具有相當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)作用，兩者有很好的配伍性。而氨基酸與鋅的螯合結(jié)構(gòu)使甘氨酸鋅有良好 的化學(xué)穩(wěn)定性與熱穩(wěn)定性，具有抗干擾與緩解礦物質(zhì)之間的拮抗作用、入血快、生物利用率 高等顯著優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)由國家有關(guān)衛(wèi)生檢測部門鑒定，并確認(rèn)為食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑。有關(guān)文獻(xiàn)表 明一定濃度的甘氨酸鋅對外周血淋巴細(xì)胞核酸合成呈明顯激活作用，氨基酸螯合鋅具有增 強(qiáng)抗菌能力、提高免疫應(yīng)答反應(yīng)、促進(jìn)動物細(xì)胞和體液免疫力的功效，它主要通過提高動物 初次免疫應(yīng)答和再次免疫應(yīng)答的主要體液免疫物質(zhì)含量來提高動物免疫反應(yīng)，由此可推測 甘氨酸鋅具有免疫增強(qiáng)作用，可以作為疫苗佐劑應(yīng)用于多種疫苗。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為解決現(xiàn)有疫苗佐劑存在的毒副作用、價格昂貴等問題，本發(fā)明提供一種安全、有 效、穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)的甘氨酸鋅佐劑以及含有甘氨酸鋅佐劑的疫苗。
[0008] 本發(fā)明所述甘氨酸鋅在制備疫苗佐劑中的應(yīng)用。
[0009] 所述甘氨酸鋅為市購醫(yī)用產(chǎn)品，為氨基酸螯合物，分子式為 力<?&30/300) 3，分子量為213. 5,鋅含量為29. 0?30. 6wt%，結(jié)構(gòu)式如圖1所示。
[0010] 本發(fā)明提供的含有甘氨酸鋅的疫苗，其特征在于每單份疫苗劑中含有〇. l~lmg甘 氨酸鋅。
[0011] 所述甘氨酸鋅是用PH=6~8的PBS溶解的甘氨酸鋅。
[0012] 所述甘氨酸鋅佐劑在人體中推薦劑量為：每200 μ L疫苗液中，甘氨酸鋅用量不超 過 lmg。
[0013] 本發(fā)明提供的含有甘氨酸鋅佐劑的疫苗經(jīng)過下列方法制備： 按每單份疫苗劑加入0. l~lmg甘氨酸鋅的量，在疫苗劑中加入用pH=6~8的PBS溶解的 甘氨酸鋅，再加生理鹽水至200 μ L，按常規(guī)混合均勻，即得含有甘氨酸鋅佐劑的疫苗。
[0014] 所述每單份疫苗劑為臨床或者動物實驗中使用的常規(guī)單次注射參考量。
[0015] 所述疫苗為常規(guī)甲肝抗原、乙肝抗原、狂犬病毒抗原中的一種。
[0016] 甘氨酸鋅佐劑能顯著增強(qiáng)抗原特異性的體液免疫反應(yīng)。
[0017] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有下列優(yōu)點(diǎn)和效果：（1)甘氨酸鋅佐劑是藥用輔料，是 鋅營養(yǎng)強(qiáng)化劑，毒副作用小，在免疫劑量范圍內(nèi)使用是安全可靠的；（2)甘氨酸鋅佐劑能夠 有效的誘導(dǎo)抗原特異性的體液免疫應(yīng)答，且其所誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答效果優(yōu)于無佐劑組； (3)甘氨酸鋅佐劑原料易得，為市售產(chǎn)品，制備工藝簡單，成本低，性能穩(wěn)定，生物學(xué)效價較 高、無毒害作用，可添加于多種傳統(tǒng)疫苗和基因工程疫苗中作為疫苗佐劑；（4)甘氨酸鋅佐 劑與疫苗聯(lián)合應(yīng)用能有效增強(qiáng)疫苗體液免疫應(yīng)答，免疫效果優(yōu)于無佐劑的疫苗。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0018] 圖1為甘氨酸鋅分子結(jié)構(gòu)式。

【具體實施方式】
[0019] 下面結(jié)合實施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限 制本發(fā)明的范圍，下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，均按照常規(guī)條件或按照制造 廠商所建議的條件。文中所述的較佳條件實施方法僅作示范之用。
[0020] 實施例1 本例提供的含有甘氨酸鋅佐劑的甲肝疫苗是：將〇. lmg甘氨酸鋅溶于ρΗ=6. 5的PBS 中，再與每單份HAV抗原（即動物實驗使用的單次注射劑量)按常規(guī)混合均勻，得含有甘氨酸 鋅佐劑的甲肝疫苗。
[0021] 其中，甘氨酸鋅為市購產(chǎn)品，為氨基酸螯合物，分子式為，分子 量為213. 5,鋅含量為29. 0?30. 6wt%，購自上海金穗生物科技有限公司；HAV抗原為市購 的滴度為256EU/ml的18EU HAV抗原液，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué) 研究所。
[0022] 實施例1所得含有甘氨酸鋅佐劑的甲肝疫苗的免疫試驗和效果如下： A、免疫 將6?8周齡、18?22g的清潔級ICR小鼠隨機(jī)分為甘氨酸鋅佐劑組、氫氧化錯佐劑 組、無佐劑組和空白組，共四組，每組8只；所用氫氧化鋁為常用的氫氧化鋁膠體佐劑，其制 法參照《中國藥典(三部)》，（國家藥典委員會.北京：人民衛(wèi)生出版社.2005:118-119)，在 人體中的劑量為1.8?2. 7mg。
[0023] 對甘氨酸鋅佐劑組：注射實施例1的含有甘氨酸鋅佐劑的甲肝疫苗至小鼠體內(nèi)， 注射劑量為每只小鼠200 μ L，其中200 μ L疫苗中含有甘氨酸鋅0. 5mg，甲肝抗原18EU。
[0024] 對氫氧化鋁佐劑組：將氫氧化鋁0. 5mg與甲肝抗原18EU混合后加生理鹽水至 200uL，經(jīng)腹腔皮下多點(diǎn)注射到小鼠體內(nèi)，注射劑量為每只小鼠200μ L。
[0025] 對無佐劑組：將甲肝抗原18EU與生理鹽水混合至200uL，再經(jīng)腹腔皮下多點(diǎn)注射 到小鼠體內(nèi)，注射劑量為每只小鼠200 μ L。
[0026] 對空白組：僅注射生理鹽水，注射劑量為每只小鼠200uL。
[0027] 免疫方案：在第0周經(jīng)腹腔皮下多點(diǎn)注射到小鼠體內(nèi)，免疫次數(shù)為一次。
[0028] B、ELISA檢測血清抗一HAV IgG水平 在免疫后的第4、8、12、16周，采集小鼠尾靜脈血，分離血清，ELISA檢測血清抗一 HAV IgG水平，按KPL公司生產(chǎn)的小鼠 IgG ELISA試劑盒說明書進(jìn)行檢測操作。
[0029] C、數(shù)據(jù)分析 對所獲得的實驗數(shù)據(jù)以SPSS16. 0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，以P < 0. 05為差異 的統(tǒng)計學(xué)意義。
[0030] 表1為使用實施例1提供的佐劑后，24周內(nèi)，各實驗組小鼠血清抗-HAV IgG水平 (抗體效價值)。
[0031] 表 1

【權(quán)利要求】
1. 甘氨酸鋅在制備疫苗佐劑中的應(yīng)用。
2. 如權(quán)利要求1所述的甘氨酸鋅在制備疫苗佐劑中的 應(yīng)用，其特征在于所述甘氨酸鋅為氨基酸螯合物，分子式為 ；5<^?好3>0/200)2 ,分子量為 213. 5,鋅含量為：29· 0 ?30. 6wt%。
3. -種含有甘氨酸鋅佐劑的疫苗，其特征在于每單份疫苗劑中含有0. l~lmg的甘氨酸 鋅佐劑，所述的每單份疫苗劑為臨床使用的常規(guī)單次注射參考量。
4. 如權(quán)利要求3所述的含有甘氨酸鋅佐劑的疫苗，其特征在于經(jīng)過下列方法制備：按 每單份疫苗劑加入〇. l~lmg甘氨酸鋅的量，在疫苗劑中加入用pH=6~8的PBS溶解的甘氨酸 鋅，再加生理鹽水至200 μ L，按常規(guī)混合均勻，即得含有甘氨酸鋅佐劑的疫苗。
【文檔編號】A61K39/39GK104096229SQ201410313922
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月3日
【發(fā)明者】陳振普, 王海漩, 胡凝珠, 胡云章 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所