專利名稱：一種鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，本發(fā)明還涉及該組合物的制備方法，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
膠原蛋白主要存在于動物的骨、軟骨、皮膚和肌腱組織中，約占哺乳動物自身所含蛋白質(zhì)總量的25% 35%，發(fā)揮著支架作用和保護(hù)作用。膠原多肽是膠原蛋白的酶解產(chǎn)物，分子質(zhì)量要比膠原蛋白低得多，其肽鏈已經(jīng)斷開，可被人體直接吸收利用。目前，大量的研究表明，利用蛋白酶水解畜骨得到的水解產(chǎn)物膠原多肽具有多種生物活性功能，例如降血壓、抗氧化、預(yù)防和治療關(guān)節(jié)炎和抗衰老等?？咕氖菂⑴c固有免疫的、具有廣譜高效抗菌活性的物質(zhì)，在動植物體內(nèi)大量存在，具有抗菌性強(qiáng)、安全無毒、水溶性好、熱穩(wěn)定性好、作用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，同時還具有保健作用。鱷魚與恐龍同時代，是地球上最古老的動物之一，有“活化石”之稱。鱷魚同時還是地球上壽命最長的動物之一，壽命高達(dá)兩百多歲，比龜和鱉還長。此外，鱷魚還是地球上體形最大的動物，目前在非洲發(fā)現(xiàn)最大的鱷魚體長有12米，重量高達(dá)8頓。如此龐大的身體必然需要超強(qiáng)的骨骼才能支撐。研究發(fā)現(xiàn)，鱷魚的骨骼硬度比牛骨要硬十倍，加工時常常需要采用德國進(jìn)口的特質(zhì)合金鋼。研究發(fā)現(xiàn)，鱷骨粉中含有大量的活性鈣和磷以及豐富的膠原蛋白等，亦可用于預(yù)防和治療老年骨質(zhì)疏松、嬰幼兒缺鈣等。同時，鱷魚尾膠含有豐富的膠質(zhì)，能有效的防治骨質(zhì)疏松，并有潤膚養(yǎng)顏的功效?！?br>
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可以改善人體骨關(guān)節(jié)的生物制品及其制備該組合物的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的前一技術(shù)方案是這樣的:該鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽I 90%，D-氨基葡萄糖
I50%，硫酸軟骨素I 50%，各組分之和為100%。優(yōu)選的，所述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，該組合物包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽10 80%，D-氨基葡萄糖5 40%，硫酸軟骨素5 40%，各組分之和為100%。更優(yōu)的，所述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，該組合物包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽25 65%，D-氨基葡萄糖10 30%，硫酸軟骨素10 30，各組分之和為100%。本發(fā)明提供的后一技術(shù)方案是這樣的:該鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物的制備方法，依次包括下述步驟:1)稱取鱷魚骨，磨碎，按質(zhì)量比1:1加入水，煮沸后保持15min后置于4°C冷卻，將冷卻后凝固于上層的油脂去除，制備骨泥；2)將骨泥與蒸餾水按1:1的質(zhì)量比裝入燒瓶中，置于恒溫水浴中進(jìn)行酶解l_5h ;3)酶解結(jié)束后，在8(TC水浴中保溫20min使酶失活；4)將滅酶后的酶解液冷卻至室溫,去除未水解的骨粒,然后在4°C、10000r/min離心分離15min，除去固體物質(zhì)，收集上清液，利用真空冷凍干燥機(jī)凍干成粉末備用。上述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物的制備方法，其特征在于，步驟2)所述的酶解時采用的酶為復(fù)合動物蛋白酶或者風(fēng)味蛋白酶或者堿性蛋白酶或者木瓜蛋白酶或者胃蛋白酶或者中性蛋白酶或者胰蛋白酶的其中之一；步驟2)所述的酶解時溫度為37-60/°C ；步驟2)所述的酶解時要不斷加入酸堿以維持溶液的pH值在3-8之間；步驟2)所述的酶解酶與骨泥的質(zhì)量比為:1:0.005-0.01。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):發(fā)明將鱷魚骨骼中的膠原蛋白提取出來，在在改善關(guān)節(jié)炎等骨關(guān)節(jié)疾病治療方面具有良好的療效，為骨關(guān)節(jié)疾病的治療提供了新途徑。


圖1是7種酶不同處理時間下的水解度變化趨勢；圖2是不同酶添加量對水解度的影響。其中:動物復(fù)合蛋白酶I ;風(fēng)味蛋白酶2 ;胰蛋白酶3 ;堿性蛋白酶4 ;中性蛋白酶5 ;胃蛋白酶6 ;木瓜蛋白酶7。
具體實(shí)施方案以下將結(jié)合具體實(shí)施方式
，對本發(fā)明的的權(quán)利要求作作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制，任何人在本 發(fā)明權(quán)利要求范圍內(nèi)做所的有限次的修改，仍在本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例1本發(fā)明的一種鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，包括下述原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽lg, D-氨基葡萄糖49g,硫酸軟骨素50g。實(shí)施例2本發(fā)明的一種鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，包括下述原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽90g, D-氨基葡萄糖5g,硫酸軟骨素5g。實(shí)施例3本發(fā)明的一種鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，包括下述原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽50g, D-氨基葡萄糖20g,硫酸軟骨素30g。實(shí)施例4本發(fā)明的一種鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，包括下述原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽lg, D-氨基葡萄糖49g,硫酸軟骨素50g。實(shí)施例5I材料與方法1.1材料與試劑鱷魚骨由廣西欽州華宏特種水產(chǎn)養(yǎng)殖開發(fā)有限公司吳川分公司提供。
胃蛋白酶(8.6X10U/g)、胰蛋白酶 05.2X10 U/g)、木瓜蛋白酶(2.5X 104U/g)、瓊脂國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；堿性蛋白酶(9.2X104U/g)、中性蛋白酶(6.2X10 U/g)、風(fēng)味蛋白酶(4.2X10 U/g)、動物復(fù)合蛋白酶(8.9X10 U/g)諾維信(中國)投資有限公司；金黃色葡萄球菌和腸炎沙門氏菌中國食品發(fā)酵工業(yè)研究院；營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基和腦心浸液培養(yǎng)基北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司。1.2儀器與設(shè)備恒溫培養(yǎng)箱(日本三洋公司)；骨粉碎機(jī)(河北廊坊惠友機(jī)械公司)；LGJ_30真空冷凍干燥機(jī)(北京四環(huán)科學(xué)儀器廠有限公司)；牛津杯(河南新鄉(xiāng)市新華檢測儀器廠);電熱恒溫水浴鍋(北京市醫(yī)療設(shè)備廠)；二級生物安全柜(新加坡藝思高科技有限公司)。1.3 方法1.3.1鱷魚骨膠原蛋白酶解稱取200g鱷魚骨，進(jìn)行修整、清洗并破碎成小的顆粒狀，大小約為2mm，加入等質(zhì)量的清水，煮沸后維持15min，之后置4°C環(huán)境下冷卻，將冷卻后凝固于上層的油脂去除，反復(fù)兩次，獲得實(shí)驗(yàn)用骨泥。然后將骨泥200g加入至蒸餾水中，置于恒溫水浴中進(jìn)行酶解。采用7種蛋白酶(復(fù)合動物蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶)酶解。各蛋白酶酶解鱷魚骨所采用的PH值和溫度條件如表I所示，酶解所用的骨水質(zhì)量比例為1:1。反應(yīng)過程中要不斷加入酸堿以維持溶液的PH值。酶解結(jié)束后，在80°C水浴中保溫20min使酶失活。表I各蛋白酶酶解鱷魚骨的pH值和溫度條件
權(quán)利要求
1.一種鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，其特征在于，該組合包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽I 90%，D-氨基葡萄糖I 50%，硫酸軟骨素I 50%，各組分之和為100%ο
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，其特征在于，該組合物包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽10 80%，D-氨基葡萄糖5 40%，硫酸軟骨素5 40%，各組分之和為100%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物，其特征在于，該組合物包括下述質(zhì)量百分比的原料:鱷魚膠原蛋白抗菌肽25 65%，D-氨基葡萄糖10 30%，硫酸軟骨素10 30，各組分之和為100%。
4.權(quán)利要求1所述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物的制備方法，其特征在于，該制備方法依次包括下述步驟: 1)稱取鱷魚骨，磨碎，按質(zhì)量比1:1加入水，煮沸后保持15min后置于4°C冷卻，將冷卻后凝固于上層的油脂去除，制備骨泥； 2)將骨泥與蒸餾水按1:1的質(zhì)量比裝入燒瓶中，置于恒溫水浴中進(jìn)行酶解l_5h ； 3)酶解結(jié)束后，在8(TC水浴中保溫20min使酶失活； 4)將滅酶后的酶解液冷卻至室溫，去除未水解的骨粒，然后在4°C、10000r/min離心分離15min，除去固體物質(zhì)，收集上清液，利用真空冷凍干燥機(jī)凍干成粉末備用。
5.據(jù)權(quán)利要求4所述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物的制備方法，其特征在于，步驟2)所述的酶解時采用的酶為復(fù)合動物蛋白酶或者風(fēng)味蛋白酶或者堿性蛋白酶或者木瓜蛋白酶或者胃蛋白酶或者中性蛋白酶或者 胰蛋白酶的其中之一。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物的制備方法，其特征在于，步驟2)所述的酶解時溫度為37-60/°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物的制備方法，其特征在于，步驟2)所述的酶解時要不斷加入酸堿以維持溶液的pH值在3-8之間。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物的制備方法，其特征在于，步驟2)所述的酶解酶與骨泥的質(zhì)量比為:1:0.005-0.01。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鱷魚膠原蛋白抗菌肽的組合物及其制備方法，旨在提供一種對關(guān)節(jié)炎等骨關(guān)節(jié)疾病治療方面具有良好的療效的組合物，其技術(shù)要點(diǎn)是該組合包括下述質(zhì)量百分比的原料鱷魚膠原蛋白抗菌肽1-90%，D-氨基葡萄糖1-50%，硫酸軟骨素1-50%，各組分之和為100%；其制備方法是稱取鱷魚膠原蛋白抗菌肽，D-氨基葡萄糖，硫酸軟骨素，麥芽糊精和粘合劑； 2)將步驟1)稱取的鱷魚膠原蛋白抗菌肽和D-氨基葡萄糖多肽通過傳統(tǒng)的噴霧方法制成細(xì)小顆粒，然后和硫酸軟骨素顆粒混合在一起，充分的攪拌，再添加的麥芽糊精和粘合劑；屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
文檔編號A61K38/01GK103239705SQ20131017511
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月10日
發(fā)明者汪華東 申請人:汪華東