利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留dna的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征是：以人用乙型腦炎疫苗收獲液為原料，使用中空纖維膜微過濾方法，去除人用乙型腦炎疫苗收獲液中的雜蛋白及DNA，收集過濾后的液體經(jīng)超濾濃縮系統(tǒng)制成人用乙型腦炎疫苗濃縮液，滅活后使用分子篩層析純化系統(tǒng)對人用乙型腦炎疫苗滅活液進行純化。本發(fā)明在不影響疫苗制品生物活性的前提下，通過中空纖維膜對病毒收獲液進行微濾處理，有效去除殘留在其中的一定比例的DNA，從而使成品疫苗DNA殘留量達到合格標準。
【專利說明】利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種人用乙型腦炎疫苗制品中去除DNA及雜蛋白的方法，特別是涉及一種利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法。本發(fā)明提到的中空纖維膜為中空纖維微濾膜，其材質(zhì)主要成分是PP或PVDF等。
【背景技術】
[0002]人用乙型腦炎疫苗是將乙型腦炎病毒接種于適合的動物細胞上，經(jīng)繁殖后病毒釋放到培養(yǎng)液中，此間一些殘余的宿主細胞或其碎片也會隨著混在培養(yǎng)液中，經(jīng)澄清，濃縮滅活，純化后，提取得到乙型腦炎病毒疫苗原液中，會產(chǎn)生游離的宿主DNA及與抗原蛋白結(jié)合的宿主DNA，原液中還含有大量的宿主蛋白，濃縮純化工藝會將一定比例的游離的DNA除去，但仍會有殘余DNA存在，特別是與病毒或抗原蛋白結(jié)合的DNA會殘留在純化原液中，如去除不徹底，這部分殘留的DNA會隨著成品疫苗一起被注入到人體內(nèi)，可能會在人體內(nèi)引起不良反應，或具有導致癌癥發(fā)生的可能。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的就在于解決現(xiàn)有技術存在的上述不足，給出一種利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法。本發(fā)明在不影響疫苗制品生物活性的前提下，通過中空纖維膜對病毒收獲液進行微濾處理，有效去除殘留在其中的一定比例的DNA，從而使成品疫苗DNA殘留量達到合格標準。
[0004]本發(fā)明給出的技術方案是:這種利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法，其特點是:以人用乙型腦炎疫苗收獲液為原料，使用中空纖維膜微過濾方法，去除人用乙型腦炎疫苗收獲液中的雜蛋白及DNA，收集過濾后的液體經(jīng)超濾濃縮系統(tǒng)制成人用乙型腦炎疫苗濃縮液，滅活后使用分子篩層析純化系統(tǒng)對人用乙型腦炎疫苗滅活液進行純化。
[0005]這種利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法，其優(yōu)選的方案是: [0006]選取一個批次的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，使用中空纖維膜對其進行微過濾處理，中空纖維膜系統(tǒng)為GE公司生產(chǎn)的型號為CFP-6-D-8A，孔徑為0.65 μ m，膜面積為
4.0m2，料液進口端壓力< 10PSI，料液出口端壓力為≥0PSI，料液回流端壓力< 3PSI，處理的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，總體積為230L-240L，總工作時間為1.5h_2.0h，整個微過濾處理過程中保證料液溫度在18°C -26°C之間。過濾后得到的液體進入到濃縮工藝程序，通過超濾濃縮系統(tǒng)將其制成乙型腦炎疫苗濃縮液，滅活后批號為SA-03，再通過分子篩層析系統(tǒng)純化，收集到的人用乙型腦炎疫苗純化液批號為SA-04。
[0007]這種利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法，其優(yōu)選的方案是:[0008]選取一個批次的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，使用中空纖維膜對其進行微過濾處理，中空纖維膜系統(tǒng)的型號為CFP-6-D-8A，孔徑為0.65 μ m,膜面積為4.0m2,料液進口端壓力< 10PSI，料液出口端壓力為≥OPSI，料液回流端壓力< 3PSI，處理的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，總體積為110L-120L，總工作時間為0.8h-l.0h,整個微過濾處理過程中保證料液溫度在18°C -26°C之間。過濾后得到的液體進入到濃縮工藝程序，通過超濾濃縮系統(tǒng)將其制成乙型腦炎疫苗濃縮液，滅活后批號為SA-05，再通過分子篩層析系統(tǒng)純化，收集到的人用乙型腦炎疫苗純化液批號為SA-06。
[0009]中空纖維膜具有纖維管狀的開放式流道結(jié)構，無篩網(wǎng)的管狀流道結(jié)構避免了料液的無規(guī)則劇烈湍流，因此具有更低的剪切力，溫和的操作可以有效防止病毒表面糖蛋白的脫落和蛋白的聚集，有利于保護大分子病毒的完整性，防止病毒顆粒聚集的同時有助于雜蛋白和DNA的透過和去除。
[0010]疫苗病毒收獲液經(jīng)過過濾處理后，進入到濃縮工藝程序，通過超濾濃縮系統(tǒng)將其制成疫苗病毒濃縮液，在這個過程中，所得到的超濾透過液中會含有一定數(shù)量的雜蛋白和DNA.對疫苗病毒收獲液，采取不同的過濾方式，對應得到的超濾透過液中DNA的含量會有明顯差異。具體檢測數(shù)據(jù)見表3。
[0011]與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是:
[0012]1.中空纖維膜具有良好的物理化學耐受性，料液進口耐壓大于4bar，可以在50攝氏度以下，耐受lmol/L NaOH溶液徹底清洗消毒，大多數(shù)中空纖維膜還可以高壓滅菌，壽命長，成本低。
[0013]2.中空纖維膜在對溶液進行分離過程中，不發(fā)生質(zhì)的變化，化學兼容性優(yōu)越，耗能低，工藝流程簡單，易于操作管理。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1SA-02純化圖譜
[0015]是人用乙型腦炎疫苗滅活液(SA-Ol)，直接經(jīng)分子篩層析純化后(SA-02)的圖譜，圖中縱坐標(紫外吸收值mAU)，橫坐標(體積ml)。
[0016]圖2SA-04純化圖譜
[0017]是人用乙型腦炎疫苗滅活液(SA-03)，先使用中空纖維膜微過濾后，再進行分子篩層析純化后(SA-04)的圖譜，圖中縱坐標(紫外吸收值mAU，橫坐標(體積ml)。
[0018]圖3SA-06純化圖譜
[0019]是人用乙型腦炎疫苗滅活液(SA-05)，先使用中空纖維膜微過濾后，再進行分子篩層析純化后(SA-06)的圖譜，圖中縱坐標(紫外吸收值mAU)，橫坐標(體積ml)。
【具體實施方式】
[0020]以下實施例詳細說明了本發(fā)明的技術方案，但不用于限制本發(fā)明的保護范圍。
[0021]實施例1 [0022]選取一個批次的乙型腦炎疫苗病毒收獲液，使用套筒濾器對其進行澄清過濾處理，套筒濾器系統(tǒng)的型號為TPO12TV25TCTFELB，孔徑為0.65 μ m，膜面積約為4.0m2，料液進口壓力< 10PSI，料液出口壓力約為OPSI，處理的人用乙型腦炎疫苗收獲液，總體積為230L-240L，總工作時間為1.5h_2.0h,整個澄清過濾處理過程中保證料液溫度在18°C_26°C之間，過濾后得到的液體進入到濃縮工藝程序，通過超濾濃縮系統(tǒng)將其制成人用乙型腦炎疫苗濃縮液，滅活后批號為SA-Ol，再通過分子篩層析系統(tǒng)純化，收集到的人用乙型腦炎疫苗純化液批號為SA-02。
[0023]濃縮工藝程序中:超濾透過液批號為SC-Ol。
[0024]實施例2
[0025]選取一個批次的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，使用中空纖維膜對其進行微過濾處理，中空纖維膜系統(tǒng)的型號為CFP-6-D-8A，孔徑為0.65 μ m，膜面積約為4.0m2，料液進口端壓力< 10PSI，料液出口端壓力約為0PSI，料液回流端壓力< 3PSI，處理的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，總體積為230L-240L，總工作時間為1.5h_2.0h,整個微過濾處理過程中保證料液溫度在18°C -26°C之間。過濾后得到的液體進入到濃縮工藝程序，通過超濾濃縮系統(tǒng)將其制成乙型腦炎疫苗濃縮液，滅活后批號為SA-03，再通過分子篩層析系統(tǒng)純化，收集到的人用乙型腦炎疫苗純化液批號為SA-04。
[0026]濃縮工藝程序中:超濾透過液批號為SC-02。
[0027]實施例3
[0028]選取一個批次的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，使用中空纖維膜對其進行微過濾處理，中空纖維膜系統(tǒng)的型號為CFP-6-D-8A，孔徑為0.65 μ m，膜面積約為4.0m2，料液進口端壓力< 10PSI，料 液出口端壓力約為0PSI，料液回流端壓力< 3PSI，處理的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，總體積為110L-120L，總工作時間為0.8h-l.0h,整個微過濾處理過程中保證料液溫度在18°C -26°C之間。過濾后得到的液體進入到濃縮工藝程序，通過超濾濃縮系統(tǒng)將其制成乙型腦炎疫苗濃縮液，滅活后批號為SA-05，再通過分子篩層析系統(tǒng)純化，收集到的人用乙型腦炎疫苗純化液批號為SA-06。
[0029]濃縮工藝程序中:超濾透過液批號為SC-03。
[0030]將SA-01、SA-02、SA-03、SA-04、SA-05、SA-06 分別經(jīng)行抗原含量、DNA 殘留量檢測。檢測數(shù)據(jù)見表1。
[0031]將SC-01、SC-02、SC_03分別進行DNA含量檢測。檢測數(shù)據(jù)詳見表3。
[0032]表1: SA-OI~SA-06抗原含量、DNA殘留量檢測結(jié)果。
[0033]
【權利要求】
1.一種利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征在于:以人用乙型腦炎疫苗收獲液為原料，使用中空纖維膜微過濾方法，去除人用乙型腦炎疫苗收獲液中的雜蛋白及DNA，收集過濾后的液體經(jīng)超濾濃縮系統(tǒng)制成人用乙型腦炎疫苗濃縮液，滅活后使用分子篩層析純化系統(tǒng)對人用乙型腦炎疫苗滅活液進行純化。
2.按照權利要求1所述的利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征在于優(yōu)選的方案是: 選取一個批次的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，使用中空纖維膜對其進行微過濾處理，中空纖維膜系統(tǒng)為GE公司生產(chǎn)的型號為CFP-6-D-8A，孔徑為0.65 μ m，，膜面積為4.0m2，料液進口端壓力< 10PSI，料液出口端壓力為≥0PSI，料液回流端壓力< 3PSI，處理的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，總體積為230L-240L，總工作時間為1.5h_2.0h，整個微過濾處理過程中保證料液溫度在18°C _26°C之間，過濾后得到的液體進入到濃縮工藝程序，通過超濾濃縮系統(tǒng)將其制成乙型腦炎疫苗濃縮液(滅活后批號為SA-03)，再通過分子篩層析系統(tǒng)純化，收集到的即為人用乙型腦炎疫苗純化液(批號為SA-04)。
3.按照權利要求1所述的利用中空纖維膜去除人用乙型腦炎疫苗制品中殘留DNA的方法，其特征在于優(yōu)選的方案是: 選取一個批次的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，使用中空纖維膜對其進行微過濾處理，中空纖維膜系統(tǒng)的型號為CFP-6-D-8A，孔徑為0.65μπι，膜面積為4.0m2，料液進口端壓力< IOPSI，料液出口端壓力為≥OPSI，料液回流端壓力< 3PSI，處理的人用乙型腦炎疫苗病毒收獲液，總體積為110L-120L，總工作時間為0.8h-l.0h,整個微過濾處理過程中保證料液溫度在18°C _26°C之間，過濾后得到的液體進入到濃縮工藝程序，通過超濾濃縮系統(tǒng)將其制成乙型腦炎疫苗濃縮液(滅活后批號為SA-05)，再通過分子篩層析系統(tǒng)純化，收集到的即為人用乙型腦炎疫苗純化液(批號為SA-06)。
【文檔編號】A61K39/12GK103768589SQ201210398655
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年10月18日 優(yōu)先權日:2012年10月18日
【發(fā)明者】高軍, 白珠穆, 李旭, 李慶岸, 秦大偉, 石雅麗 申請人:遼寧成大生物股份有限公司