專利名稱：一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
蜚蠊，又名美洲大蠊(俗稱蟑螂，)是蜚蠊科中體積最大的，成蟲體長(zhǎng)四 35毫米。 蜚蠊表皮含有鞏膜質(zhì)和甲殼質(zhì)，溴、鋅、鎳、錳、鉀、鈣、鈦、氯、硫、硅、鋁、鎂等元素，肌肉水解可得13種氨基酸，身體內(nèi)還貯藏著微生素Bi、B2、煙酸和抗壞血酸等，淋巴中含海藻糖、海藻糖酶、糖蛋白、肌醇、原兒茶酸葡萄甙等；全體含麥角硫因、龍蝦肌堿、胡蘆巴堿、甘氨酸、 甜菜堿、肛堿、三甲胺、腺嘌呤等?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，蜚蠊提取物具有很強(qiáng)的生物活性，但是現(xiàn)有技術(shù)對(duì)于蜚蠊提取物的應(yīng)用還存在很大的局限性，蜚蠊提取物應(yīng)用潛力有待于進(jìn)一步開發(fā)和利用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑；第二目的在于提供一種該該注射劑的制備方法。本發(fā)明的第一目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，
所述的注射劑中含有重量比3 6%的蜚蠊醇提取物，10 30%聚乙二醇和0. 7 1% 氯化鈉，余量為注射用水。其優(yōu)化方案，所述的注射劑中含有重量比4 5%的蜚蠊提取物，15 20%聚乙二醇和0. 8 1%氯化鈉，余量為注射用水。所述的聚乙二醇為400型聚乙二醇。本發(fā)明的第二目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，所述的注射劑的制備方法包括
蜚蠊醇提取物制備蜚蠊干蟲體粉碎成粗粉，經(jīng)5 10倍重量的90 95%乙醇滲漉提取8 12小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮得稠膏；再加4 6倍純化水充分?jǐn)嚢璨㈧o置12 24 小時(shí)使油水分離，去除沉淀物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置1 2小時(shí)吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮后加入8 10倍重量的65 85% 乙醇進(jìn)行二次醇提，冷藏12 M小時(shí)后過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后，再加入8 10倍重量份的純化水進(jìn)行水提，經(jīng)冷藏后12 24小時(shí)，低溫離心過濾得水提液，水提液用0. 1 0. 5% 重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，并加熱至60 80°C后靜止0. 5 1小時(shí)；經(jīng)膜過濾器過濾、超濾后減壓濃縮得蜚蠊提取物稠膏；
藥物注射劑的制備按組合物配比將蜚蠊提取物、藥用聚乙二醇和醫(yī)用氯化鈉混合，用注射用水稀釋至1000ml，濾過，灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得蜚蠊提取物的注射劑。其優(yōu)化方案，
所述的蜚蠊提取物制備中，蜚蠊粗粉加入5 10倍重量比的90 95%乙醇浸漬48 60小時(shí)，再用90 95%乙醇作溶劑緩慢滲濾至濾液呈微黃色，濾液經(jīng)減壓濃縮得稠膏。
所述的蜚蠊提取物制備中離心時(shí)的溫度為2 6°C。所述的蜚蠊提取物制備中冷藏溫度為4 8°C。所述的蜚蠊提取物制備中，減壓濃縮溫度為60 80°C。所述的蜚蠊提取物制備中，稠膏的相對(duì)密度為1. 2 1. 3。本發(fā)明蜚蠊提取物及其制劑能夠促進(jìn)心肌細(xì)胞Ca2+內(nèi)流，溫和持久地增加心肌收縮力，擴(kuò)張血管，降低肺動(dòng)脈壓、肺毛細(xì)血管壓；擴(kuò)張冠脈、增加冠脈流量，抑制氧自由基介導(dǎo)的心肌損傷；擴(kuò)張腎血管、增加腎血流量、利尿；改善微循環(huán)；糾正神經(jīng)內(nèi)分泌失衡。


附圖為本發(fā)明注射液的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明加以限制， 基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明所述的注射劑中含有重量比3 6%的蜚蠊醇提取物，10 30%聚乙二醇和 0. 7 1%氯化鈉，余量為注射用水。其優(yōu)選實(shí)施方式，所述的注射劑中含有重量比4 5%的蜚蠊提取物，15 20%聚乙二醇和0. 8 1%氯化鈉，余量為注射用水。所述的聚乙二醇為400型聚乙二醇。本發(fā)明所述的注射劑的制備方法包括
蜚蠊醇提取物制備蜚蠊干蟲體粉碎成粗粉，經(jīng)5 10倍重量的90 95%乙醇滲漉提取8 12小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮得稠膏；再加4 6倍純化水充分?jǐn)嚢璨㈧o置12 24 小時(shí)使油水分離，去除沉淀物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置1 2小時(shí)吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮后加入8 10倍重量的65 85% 乙醇進(jìn)行二次醇提，冷藏12 M小時(shí)后過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后，再加入8 10倍重量份的純化水進(jìn)行水提，經(jīng)冷藏后12 M小時(shí)，低溫離心過濾得水提液，水提液用0. 1 0. 5% 重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，并加熱至60 80°C后靜止0. 5 1小時(shí)；經(jīng)膜過濾器過濾、超濾后減壓濃縮得蜚蠊提取物稠膏；
藥物注射劑的制備按組合物配比將蜚蠊提取物、藥用聚乙二醇和醫(yī)用氯化鈉混合，用注射用水稀釋至1000ml，濾過，灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得蜚蠊提取物的注射劑。其優(yōu)選實(shí)施方式，
所述的蜚蠊提取物制備中，蜚蠊粗粉加入5 10倍重量比的90 95%乙醇浸漬48 60小時(shí)，再用90 95%乙醇作溶劑緩慢滲濾至濾液呈微黃色，濾液經(jīng)減壓濃縮得稠膏。所述的蜚蠊提取物制備中離心時(shí)的溫度為2 6°C。所述的蜚蠊提取物制備中冷藏溫度為4 8°C。所述的蜚蠊提取物制備中，減壓濃縮溫度為60 80°C。所述的蜚蠊提取物制備中，稠膏的相對(duì)密度為1. 2 1. 3。實(shí)施例1
取蜚蠊干蟲體IOOOg粉碎成粗粉，加入5倍重量的90%乙醇浸漬48小時(shí)，再以90%的
4乙醇滲漉提取8小時(shí)，提取液在60°C下減壓濃縮得相對(duì)密度為1. 2 1. 3的稠膏；再加4 倍純化水充分?jǐn)嚢璨㈧o置12小時(shí)使油水分離，去除沉淀物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置1小時(shí)吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮后加入 8倍重量的65%乙醇進(jìn)行二次醇提，在4°C下冷藏12小時(shí)后過濾，濾液在60°C下減壓濃縮后，再加入8倍重量份的純化水進(jìn)行水提，在4°C下冷藏12小時(shí)后，在2°C下低溫離心過濾得水提液，水提液用0. 1%重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，并加熱至60°C后靜止0.5 小時(shí)；經(jīng)膜過濾器過濾、超濾后減壓濃縮得相對(duì)密度為1. 2 1. 3的蜚蠊提取物稠膏；
按3%的蜚蠊醇提取物，10%聚乙二醇和0. 7%%氯化鈉，余量為注射用水的比例配合，經(jīng)濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。實(shí)施例2
蜚蠊干蟲體粉碎成粗粉lOOOg，加入10倍重量的95%乙醇浸漬60小時(shí)，然后再用95% 回流提取12小時(shí)，提取液在80°C下減壓濃縮得相對(duì)密度為1. 2 1. 3的稠膏；再加6倍純化水充分?jǐn)嚢璨㈧o置M小時(shí)使油水分離，去除沉淀物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置2小時(shí)吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液在80°C下減壓濃縮后加入0倍重量的85%乙醇進(jìn)行二次醇提，在8°C下冷藏M小時(shí)后過濾，濾液在80°C下減壓濃縮后，再加入10倍重量份的純化水進(jìn)行水提，在8°C下冷藏M小時(shí)后，在6°C下低溫離心過濾得水提液，水提液用0. 5%重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，并加熱至80°C后靜止1 小時(shí)；經(jīng)膜過濾器過濾、超濾后減壓濃縮得相對(duì)密度為1. 2 1. 3的蜚蠊提取物稠膏；
按6%的蜚蠊醇提取物，30%聚乙二醇和1. 0%氯化鈉，余量為注射用水的比例配合，經(jīng)濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。實(shí)施例3
蜚蠊干蟲體粉碎成粗粉lOOOg，經(jīng)8倍重量的95%乙醇浸漬55小時(shí)，然后再用95%回流提取10小時(shí)，提取液在70°C下減壓濃縮得相對(duì)密度為1. 2 1. 3的稠膏；再加5倍純化水充分?jǐn)嚢璨㈧o置18小時(shí)使油水分離，去除沉淀物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置1. 5小時(shí)吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液在70°C下減壓濃縮后加入 9倍重量的75%乙醇進(jìn)行二次醇提，在6°C下冷藏18小時(shí)后過濾，濾液在70°C下減壓濃縮后，再加入9倍重量份的純化水進(jìn)行水提，在6°C下冷藏18小時(shí)后，在4°C下低溫離心過濾得水提液，水提液用0. 3%重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，并加熱至70°C后靜止0. 7 小時(shí)；經(jīng)膜過濾器過濾、超濾后減壓濃縮得相對(duì)密度為1. 2 1. 3的蜚蠊提取物稠膏；
按5%的蜚蠊醇提取物，20%聚乙二醇和0. 8%氯化鈉，余量為注射用水的比例配合，經(jīng)濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。實(shí)施例4
用實(shí)施例1中制備的蜚蠊提取物稠膏，按4%的蜚蠊提取物，15%的聚乙二醇和0. 8%的氯化鈉，余量為注射用水，經(jīng)濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。實(shí)施例5
用實(shí)施例1中制備的蜚蠊提取物稠膏，按5%的蜚蠊提取物，20%聚乙二醇和1. 0%氯化鈉，余量為注射用水，經(jīng)濾過、灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得所述的注射劑。本發(fā)明的注射劑為黃色澄明液體，按以下方法對(duì)注射液和蜚蠊提取物進(jìn)行鑒別、 檢查和測(cè)定1、鑒別
(1)薄層色譜法試驗(yàn)
取注射劑1ml，加水稀釋至5ml，作為供試品溶液。取蜚蠊干品lg，加正丁醇-冰醋酸(4 1)混合液50ml，超聲處理30分鐘后過濾， 將濾液蒸干，殘?jiān)铀甀ml溶解，作為藥材對(duì)照溶液。依照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一硅膠GF2M薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4:1 :1)混合液展開，取出，晾干， 置紫外光燈(2Mnm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯3 個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)。再噴以1的茚三酮溶液，105°C下加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，應(yīng)顯1個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)。( 2 )高效液相色譜法試驗(yàn)
取注射劑1ml，加水稀釋至5ml，通過強(qiáng)堿性陰離子交換葡聚糖層析柱(QAE-kphadex A-25型，內(nèi)徑1. 5cm,柱高5cm)，用20ml水洗脫，棄去水洗脫液，再用0. 02mol/L鹽酸洗脫， 棄去初洗脫液8ml，收集續(xù)洗脫液20ml，作為供試品溶液。依照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》一部附錄VI D)試驗(yàn)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱(柱長(zhǎng)150mm，柱內(nèi)徑為4. 6mm);以0. 05mol/L醋酸鈉緩沖液(pH 5. 0)-甲醇(90 10)混合液為流動(dòng)相，用二極管陣列檢測(cè)器(DAD)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)波長(zhǎng)為246nm，流速為每分鐘0. 5ml，柱溫為30°C。精密吸取供試品溶液5μ1，注入液相色譜儀，測(cè)定，記錄12 分鐘內(nèi)的色譜圖。供試品色譜圖中主峰(最大峰面積)的DAD紫外檢測(cè)光譜圖在246nm與 286nm的波長(zhǎng)處有最大吸收。2、檢查
色澤取本品1ml，加水至10ml，搖勻，依照《中國(guó)藥典》一部附錄XI A第一法進(jìn)行檢查， 與黃色8號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液比較，不得更深。pH值應(yīng)為5. 4 6. 4 (《中國(guó)藥典》一部附錄ΥΠ G)。蛋白質(zhì)取注射劑1ml，加入新鮮配制的30%磺基水楊酸溶液1ml，混勻，放置5分鐘，不得出現(xiàn)渾濁。樹脂取注射劑5ml，加鹽酸1滴，放置30分鐘，應(yīng)無樹脂狀物析出。草酸鹽取注射劑2ml，加3%氯化鈣試液2 3滴，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁或沉淀。鉀離子取注射劑anl，先用小火熾灼至炭化，再在500 600°C熾灼至完全灰化， 加入6%醋酸使溶解。置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻，量取Iml置于IOml納氏比色管中，加堿性甲醛溶液(甲醛溶液用0. lmol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至8. 0 9. 0)12滴，3%的乙二胺四醋酸鈉溶液2滴，3%的四苯硼酸鈉溶液0. 5ml，加水至IOml作為供試品管。取硫酸鉀適量研細(xì)，于110°C干燥至恒重，精密稱取2. 330g，加水適量使溶解成1000ml，精密吸取 IOml加水稀釋成100ml，即得標(biāo)準(zhǔn)鉀離子溶液；取標(biāo)準(zhǔn)鉀離子溶液(100 μ g/ml )0. 8ml，置于 IOml納氏比色管中，同上操作作為對(duì)照品管，取供試品管和對(duì)照品管進(jìn)行目測(cè)比濁，供試品管不得更渾濁。重金屬取注射劑anl，依照《中國(guó)藥典》一部附錄IX E第二法檢查，含重金屬不得過百萬分之五。
砷鹽取注射劑1. 0ml，緩緩加熱炭化，如炭化不完全，加少量硫酸潤(rùn)濕后，緩緩加熱使完全炭化，再于500 600°C熾灼灰化，放冷，加鹽酸5ml，加水23ml，依照《中國(guó)藥典》 一部附錄IX F第一法檢查，應(yīng)符合規(guī)定的0. 0002%。熱原取注射劑依照《中國(guó)藥典》一部附錄XIII A檢查，劑量按家兔體重每kg注射 lml，其結(jié)果應(yīng)符合規(guī)定。異常毒性取注射劑，每Iml中加入氯化鈉注射液稀釋至10ml，依照《中國(guó)藥典》二部附錄XI C檢查，按靜脈注射給藥，其結(jié)果應(yīng)符合規(guī)定。3、過敏試驗(yàn)
供試液制備取注射劑，每Iml加氯化鈉注射液稀釋至作為供試品。取體重250 350g健康豚鼠6只，隔日每只每次腹腔注射供試品0. 5ml，共3次， 進(jìn)行致敏。然后將其均分為2組，每組3只，分別在首次注射后14日及21日，由靜脈注射供試品Iml進(jìn)行攻擊。在注射后30分鐘內(nèi)，不得出現(xiàn)過敏反應(yīng)。如有豎毛、噴嚏、干嘔、連續(xù)咳嗽3聲和呼吸困難等現(xiàn)象中的2種或2種以上，或出現(xiàn)抽搐、休克、死亡現(xiàn)象之一者，則判定供試品不符合規(guī)定。溶血與凝聚試驗(yàn)
先配制m的紅細(xì)胞混懸液。取家兔血數(shù)毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖 ο 分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血液，加 ο倍量的生理氯化鈉溶液，搖勻，離心，除去上清夜，沉淀的紅細(xì)胞再生理氯化鈉溶液洗滌2 3次，至上清液不顯紅色為止；將所得的紅細(xì)胞用生理氯化鈉溶液配制成m的紅細(xì)胞混懸液，即得。進(jìn)行試驗(yàn)。取潔凈試管5支，編號(hào)，1 3號(hào)管為供試品管，4號(hào)管為陰性對(duì)照管，5 號(hào)管為陽性對(duì)照管；按下表所示依次加入m的紅細(xì)胞混懸液、生理氯化鈉溶液、蒸餾水、供試注射液，混均后，立即置于37°c的恒溫水浴中，開始每隔15分鐘觀察一次，1小時(shí)后，每隔 1小時(shí)觀察一次，共觀察3小時(shí)。
權(quán)利要求
1.一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑，其特征是所述的注射劑中含有重量比 3 6%的蜚蠊醇提取物，10 30%聚乙二醇和0. 7 1%氯化鈉，余量為注射用水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑，其特征是所述的注射劑中含有重量比4 5%的蜚蠊提取物，15 20%聚乙二醇和0. 8 1%氯化鈉，余量為注射用水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑，其特征是所述的聚乙二醇為400型聚乙二醇。
4.一種權(quán)利要求1所述的注射劑的制備方法，其特征在于所述的注射劑的制備方法包括蜚蠊醇提取物制備蜚蠊干蟲體粉碎成粗粉，經(jīng)5 10倍重量的90 95%乙醇滲漉提取8 12小時(shí)，提取液經(jīng)減壓濃縮得稠膏；再加4 6倍純化水充分?jǐn)嚢璨㈧o置12 M 小時(shí)使油水分離，去除沉淀物和油脂，收集水層藥液，加入藥用活性炭靜置1 2小時(shí)吸附藥液至無色，裝柱，水飽和正丁醇洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮后加入8 10倍重量的65 85% 乙醇進(jìn)行二次醇提，冷藏12 M小時(shí)后過濾，濾液經(jīng)減壓濃縮后，再加入8 10倍重量份的純化水進(jìn)行水提，經(jīng)冷藏后12 M小時(shí)，低溫離心過濾得水提液，水提液用0. 1 0. 5% 重量比的針用活性炭脫色，邊加邊攪拌，并加熱至60 80°C后靜止0. 5 1小時(shí)；經(jīng)膜過濾器過濾、超濾后減壓濃縮得蜚蠊提取物稠膏；藥物注射劑的制備按組合物配比將蜚蠊提取物、藥用聚乙二醇和醫(yī)用氯化鈉混合，用注射用水稀釋至1000ml，濾過，灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得蜚蠊提取物的注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的注射劑的制備方法，其特征是所述的蜚蠊提取物制備中，蜚蠊粗粉加入5 10倍重量比的90 95%乙醇浸漬48 60小時(shí)，再用90 95%乙醇作溶劑緩慢滲濾至濾液呈微黃色，濾液經(jīng)減壓濃縮得稠膏。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的注射劑的制備方法，其特征是所述的蜚蠊提取物制備中離心時(shí)的溫度為2 6°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的注射劑的制備方法，其特征是所述的蜚蠊提取物制備中冷藏溫度為4 8°C。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的注射劑的制備方法，其特征是所述的蜚蠊提取物制備中，減壓濃縮溫度為60 80°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的注射劑的制備方法，其特征是所述的蜚蠊提取物制備中，稠膏的相對(duì)密度為1.2 1.3。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療慢性充血性心力衰竭征的注射劑及其制備方法。所述的藥物組合物含有重量比3%～6%的蜚蠊提取物，10%～30%聚乙二醇和0.7～1.0%氯化鈉，余量為注射用水。所述的制備方法包括蜚蠊提取物制備蜚蠊干蟲體粉碎成粗粉，經(jīng)乙醇回流，提取液經(jīng)減壓濃縮得稠膏；再加純化水使油水分離，收集水層藥液，活性炭吸附，裝柱，正丁醇洗脫，洗脫液經(jīng)減壓濃縮后進(jìn)行二次醇提，濾液經(jīng)減壓濃縮后水提，離心、過濾，脫色、超濾后減壓濃縮得蜚蠊提取物稠膏。藥物注射劑的制備按組合物配比將蜚蠊提取物、藥用聚乙二醇和藥用氯化鈉混合，調(diào)PH值5.4～6.4，用注射用水稀釋至1000ml，濾過，灌封、滅菌、燈檢、包裝，即得蜚蠊提取物的注射劑。
文檔編號(hào)A61P9/04GK102319268SQ20111023007
公開日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月12日
發(fā)明者徐自學(xué), 李立華, 李筱玲, 楊枝時(shí), 邵維在 申請(qǐng)人:云南省騰沖制藥廠