專利名稱：一種新型的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種新型的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紫杉醇(Paclitaxel)是從短葉紅豆杉(Taxus brevifolia Nutt.)的樹皮、干燥 根以及枝葉中提取的天然產(chǎn)物，臨床用于治療卵巢癌、乳腺癌以及非小細(xì)胞肺癌。其化學(xué)結(jié) 構(gòu)如下 化學(xué)名稱為5β，20-環(huán)氧-1，2α，4，7β，10β，13α-六羥基紫杉 烷-11-烯-9"酮-4，10- 二乙酸酯-2-苯甲酸酯_13[ (2，R，3，S)_N_苯甲酰-3-苯基異絲 氨酸酯]。因其在水中的溶解度極微(約0. 1 μ g/ml)，僅在甲醇、乙醇、二甲基亞砜等有機(jī)溶 劑溶解，從而給紫杉醇的靜脈給藥帶來極大的困難。紫杉醇注射液采用表面活性劑聚氧乙 烯蓖麻油(Cremophor EL)和無水乙醇(55 45, ν/ν)作為溶劑溶解紫杉醇。如1992年美 國FDA批準(zhǔn)的紫杉醇注射液(美國百時(shí)美施貴寶公司，商品名=Taxol，泰素)。Cremorphor EL雖然能增加紫杉醇的水溶性，但由于其在體內(nèi)的降解后能促進(jìn)機(jī)體釋放組胺，從而可能 導(dǎo)致嚴(yán)重的超過敏反應(yīng)。因此，為了預(yù)防過敏反應(yīng)，在靜脈滴注紫杉醇注射液前30min，病人 需要接受抗過敏的預(yù)處理靜脈滴注糖皮質(zhì)激素，如地塞米松，還有H1和H2受體的拮抗劑， 如苯海拉明、西咪替丁或雷尼替丁。靜脈滴注的時(shí)間要不低于3h。即便如此處理，紫杉醇注 射液的臨床應(yīng)用時(shí)仍然會(huì)遇到由于超敏反應(yīng)，而不能繼續(xù)用藥的病例。此外，作為抗腫瘤藥 物，紫杉醇藥物本身也存在著骨髓抑制、白細(xì)胞減少、血小板減少、貧血等毒性反應(yīng)，限制了 其抗癌作用的應(yīng)用?，F(xiàn)有技術(shù)中也有采用紫杉醇白蛋白納米粒注射混懸液的方式來解決上述問題的， 但是成本太高，是現(xiàn)在市售紫杉醇注射液的5倍以上，而迄今為止，制備脂質(zhì)體作為紫杉醇 靜脈給藥載體仍然是解決紫杉醇注射溶劑問題的一種很好的選擇。理想的紫杉醇脂質(zhì)體能 夠發(fā)揮如下作用避免紫杉醇注射液由于溶劑而導(dǎo)致的超過敏反應(yīng)；降低外周循環(huán)毒性反 應(yīng)，提高機(jī)體對(duì)紫杉醇的耐受性；具有儲(chǔ)庫效應(yīng)和被動(dòng)靶向效應(yīng)。基于相同的原因，很多像紫杉醇一樣的抗腫瘤藥物如多烯紫杉醇和10-羥基喜樹堿也均可采用脂質(zhì)體作為載體，在 避免超過敏反應(yīng)、降低毒性作用的前提下達(dá)到提高給藥劑量、提高藥效。但是現(xiàn)在使用的脂質(zhì)體，存在著體外穩(wěn)定性穩(wěn)定差和載藥量低的缺點(diǎn)分散在脂 質(zhì)體磷脂雙分子層中的紫杉醇容易受載藥量、溫度等因素的影響，發(fā)生自身分子間的聚 集，進(jìn)而生成針狀的藥物結(jié)晶，析出到水溶液中；同時(shí)在穩(wěn)定范圍的紫杉醇脂質(zhì)體中，一般 藥物與磷脂材料的摩爾比為1 30，使得脂質(zhì)體的載藥量大大降低。為了解決上述的問題有研究采用在脂質(zhì)體處方中加入負(fù)電性的磷脂材料如蛋黃 卵磷脂酰甘油(ePG)、四肉豆蔻酰心磷脂(Cardiolipin)、DOTAP等來提高紫杉醇脂質(zhì)體的 穩(wěn)定性能，但所采用的蛋黃卵磷脂酰甘油(ePG)、四肉豆蔻酰心磷脂(Cardiolipin)、DOTAP 均為人工提純和合成的磷脂材料，因此存在著價(jià)格昂貴的缺點(diǎn)。通常這些荷電性磷脂材 料用量，一般為磷脂的摩爾比的1 10，而紫杉醇的載藥量較低，藥物與磷脂的摩爾比為 1 30。因此荷電性磷脂材料的用量是紫杉醇摩爾比的3倍，用量相對(duì)較高，這就進(jìn)一步增 加了紫杉醇脂質(zhì)體的生產(chǎn)成本；而對(duì)于載藥量過低這一技術(shù)問題而言，現(xiàn)有技術(shù)中還沒有 技術(shù)方案可以很好的解決。除此之外，為了提高脂質(zhì)體在血漿中和體內(nèi)穩(wěn)定性的最好的措施，就是設(shè)計(jì)制備 長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，這是由于長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體由于長(zhǎng)循環(huán)材料PEG化材料的修飾和保護(hù)作用，干 擾體內(nèi)血液中的調(diào)理和脂質(zhì)交換，從而可明顯提高脂質(zhì)體體內(nèi)穩(wěn)定性、延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)時(shí)間。 為了達(dá)到制備長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的目的，關(guān)鍵是對(duì)PEG材料的選擇和應(yīng)用，而聚乙二醇2000- 二 硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)為目前長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體通常采用的PEG化磷脂材料， 上市的阿霉素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體DOXIL處方中采用即采用該材料，但是PEG2000-DSPE為人工合 成的磷脂材料，合成路線相對(duì)復(fù)雜，生產(chǎn)成本高，市售價(jià)格昂貴，在長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的處方中， PEG2000-DSPE用量至少為磷脂總量的5% (摩爾比)，才能起到較好的長(zhǎng)循環(huán)效果，但由于 其分子量為2790，因此其實(shí)際的質(zhì)量比相對(duì)較大，這樣就一步增加了長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的生產(chǎn) 成本。而也有研究表明，有人采用聚乙二醇或聚山林醇酯或者PEG化膽固醇來作為長(zhǎng)循環(huán) 材料，均沒有取得很好的效果。由此可見，如何選擇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的基本制備材料，對(duì)于長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的生產(chǎn)和 使用有著極為重要的作用，而如何提供一種能夠彌補(bǔ)上述提到的技術(shù)方案的不足的脂質(zhì)體 材料，也是現(xiàn)在繼續(xù)解決的技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)上述技術(shù)方案存在的諸多不足，提供一種一種新型的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組 合物及其應(yīng)用方法，主要采用磷脂、膽固醇、負(fù)電性材料、長(zhǎng)循環(huán)材料作為主要原料，其中特 別采用了維生素E琥珀酸酯或膽固醇琥珀酸酯為負(fù)電性材料，維生素E聚乙二醇琥珀酸酯 (TPGS)作為長(zhǎng)循環(huán)材料，提高了該長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物與藥物結(jié)合的穩(wěn)定性，可作為抗腫 瘤藥物紫杉醇、多烯紫杉醇、10-羥基喜樹堿的載體，同時(shí)其耐受性提高，作為藥物載體時(shí)， 其所載藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間明顯長(zhǎng)于市售的各種載體，且成本較低，適合于廣泛的推廣 應(yīng)用。本發(fā)明所采用的具體技術(shù)方案是一種長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，包括由磷脂和膽固醇構(gòu)成的成膜材料，負(fù)電性材料和長(zhǎng)循環(huán)材料，所采用的負(fù)電性材料為維生素E琥珀酯、膽固醇琥珀酯、脫氧膽酸鈉、膽固醇 硫酸鈉中的一種或多種；所采用的長(zhǎng)循環(huán)材料為維生素E聚乙二醇琥珀酸酯，其分子結(jié)構(gòu) 中聚乙二醇的分子量范圍為500-5000 ；所述磷脂、膽固醇、負(fù)電性材料、長(zhǎng)循環(huán)材料的摩爾 比為100 10-50 0.1-10 2-10。由于在配方中使用了新的負(fù)電性材料，使脂質(zhì)體分散體系的Zeta電位保持在_15 至_35mV的范圍內(nèi)，有利于保持脂質(zhì)體分散體系的穩(wěn)定性；而由于采用了維生素E聚乙二 醇琥珀酸酯(TPGS)作為長(zhǎng)循環(huán)材料，延長(zhǎng)了藥物在體內(nèi)的循環(huán)作用時(shí)間，達(dá)到了提高穩(wěn)定 性和長(zhǎng)循環(huán)的目的。為了提高藥物的穩(wěn)定性，本發(fā)明所述的脂質(zhì)體組合物中也含有負(fù)電材料，但是為 了克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，發(fā)明人按照下述的原則進(jìn)行了選擇脂質(zhì)體的穩(wěn)定性能好；安 全性好，體內(nèi)可生物降解，并且已有在藥用輔料方面應(yīng)用的先例；價(jià)格低廉、市場(chǎng)來源有保 障。而本發(fā)明中所選擇的負(fù)電材料恰恰滿足了這些要求，從而在靜脈給藥途徑的安全性、成 本因素、脂質(zhì)體的穩(wěn)定性能等方面做到了均衡處理，取得了理想的效果，除了采用已經(jīng)報(bào)道 過得膽固醇硫酸鈉作為負(fù)電材料外，本發(fā)明的發(fā)明人還選擇了如下的負(fù)電材料維生素E琥珀酸酯是維生素E的琥珀酸酯衍生物(d- α -tocopherol acid succinate, VES)，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下 式I維生素E琥珀酸酯具有天然維生素E生理活性功能，穩(wěn)定性比維生素E大大提高， 已成為VE類藥品普遍應(yīng)用的原料，已得到廣泛的應(yīng)用，幾乎所有的片劑、膠囊類藥品和營 養(yǎng)補(bǔ)充劑中使用的維生素E均為維生素E琥珀酸酯或其鈣鹽。維生素E琥珀酸酯具有的廣 泛抗腫瘤特性、提高免疫力活性，能有效地作為癌癥的輔助治療手段。用在抗腫瘤藥物脂 質(zhì)體中，可利用其對(duì)卵巢癌、乳腺癌等腫瘤的廣泛抑制作用，提高紫杉醇等抗腫瘤藥物的療 效。維生素E琥珀酸酯在血漿生理中性ρΗ條件下，其分子結(jié)構(gòu)中的琥珀酸的羧基解 離，分子帶負(fù)電荷。也可以在使用時(shí)將其轉(zhuǎn)換為水溶性的維生素E琥珀酯(鈉鹽，銨鹽)，提 高其水溶性、解離性、荷電性能。同時(shí)，維生素E琥珀酸酯，還具有還原性能，可提高脂質(zhì)體 制劑中藥物的穩(wěn)定性能。維生素E琥珀酸酯，體內(nèi)可生物降解，不存在安全性風(fēng)險(xiǎn)，因此可 以作為本發(fā)明的備選負(fù)電性材料。膽固醇琥珀酸酯(cholesterol hemisuccinate, CHS)是膽固醇的琥珀酯衍生物， 又名膽固醇半琥珀酸酯，膽固醇半丁二酸酯，是一種抗動(dòng)脈硬化的原料藥?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)如下 式II在血漿生理中性pH條件下，其分子結(jié)構(gòu)中的琥珀酸的羧基解離，分子帶負(fù)電荷。 也可以在使用時(shí)將其轉(zhuǎn)換為水溶性的膽固醇琥珀醋(鈉鹽)。膽固醇琥珀酯除了荷負(fù)電荷 外，還具有較好的脂質(zhì)體膜穩(wěn)定作用。這種膽固醇的琥珀酸衍生物，體內(nèi)可生物降解，不存 在安全性風(fēng)險(xiǎn)，可以安全的作為負(fù)電性材料使用。脫氧膽酸鈉(sodium deoxycholate, SDC)是人體膽汁內(nèi)存在的一種膽鹽，是一種
陰離子表面活性劑?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)式如下 式III脫氧膽酸鈉解離后荷負(fù)電荷，因此可利用這一性質(zhì)來增加脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。兩性 霉素B注射液的處方中，采用等摩爾比脫氧膽酸鈉與兩性霉素B形成復(fù)合物，提高其水溶 性。因此，許多文獻(xiàn)報(bào)道采用脫氧膽酸鈉作為負(fù)電性材料，加入脂質(zhì)體中，來提高穩(wěn)定性能。 這種材料體內(nèi)可生物降解，也不存在安全性的風(fēng)險(xiǎn)。上述三種負(fù)電性材料加上膽固醇硫酸鈉，可以混合使用，也可以單獨(dú)使用，為了達(dá) 到最佳的效果，可以單獨(dú)選用維生素E琥珀酸酯。前面已經(jīng)描述過脂質(zhì)體的處方中的長(zhǎng)循環(huán)材料是成功制備長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體關(guān)鍵，在 本發(fā)明中針對(duì)目前廣泛應(yīng)用的PEG化磷脂材料PEG2000-DSPE價(jià)格昂貴的缺點(diǎn)，本發(fā)明人試 圖選用來源易得，價(jià)格相對(duì)低廉，同樣具有長(zhǎng)循環(huán)性能的材料來取代PEG2000-DSPE。本發(fā) 明人對(duì)比目前專利和文獻(xiàn)中采用的長(zhǎng)循環(huán)材料，分析其優(yōu)缺點(diǎn)，將維生素E聚乙二醇琥珀 酯(DL-α-Tocopherol polyethylene glycol succinate，TPGS)應(yīng)用到長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的 制備中，在處方設(shè)計(jì)中，通過負(fù)電性材料的選用、膽固醇穩(wěn)定等措施，配合維生素E聚乙二 醇琥珀酯的作用成功制備了體內(nèi)外性能優(yōu)良的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，從而達(dá)到了本發(fā)明的技術(shù)目 的，提高了穩(wěn)定性和長(zhǎng)循環(huán)功能。TPGS的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
式IV 維生素E聚乙二醇琥珀酯又稱為水溶性維生素E，目前應(yīng)用研究大多集中在其對(duì) 難溶性藥物的增溶方面和作為新型乳化劑、提高乳劑的穩(wěn)定性。TPGS 1000已經(jīng)廣泛用于醫(yī) 藥、保健、化妝品領(lǐng)域，TPGS已被美國藥典收載，因此材料的來源、安全性方面不存在困難。 TPGS的合成路線相對(duì)簡(jiǎn)單，合成路線見專利CN101232871A，原料來源豐富，以維生素E琥珀 酸酯和聚乙二醇(PEG)為原料，通過酯化法合成即得，因此具有明顯的價(jià)格優(yōu)勢(shì)。而對(duì)其在 長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的應(yīng)用研究方面，沒有引起足夠的重視。TPGS的聚乙二醇(PEG)鏈，隨著聚 合度的不同，有許多規(guī)格。通常作為乳化劑、增溶劑應(yīng)用，尤其是通過口服給藥途徑給藥應(yīng) 用時(shí)，一般認(rèn)為 TPGS 1000 是最合適的(Collnot EM,Baldes C. Influence of vitamin E TPGSpoly(ethylene glycol)chain length on apical, efflux transporters in Caco-2 eellmonolayers[J], Journal of Controlled Release. 2006，111 (1-2) :35_40)。但作為月旨 質(zhì)體的長(zhǎng)循環(huán)材料來講，PEG分子量范圍為500-5000時(shí)，PEG長(zhǎng)鏈能在脂質(zhì)體的表面起到較 好的遮蔽效果，特別是PEG分子量為2000時(shí)，其鏈長(zhǎng)跟PEG2000-DSPE的鏈長(zhǎng)相同，因此優(yōu) 選TPGS 2000作為長(zhǎng)循環(huán)材料，這樣就大大降低了成本，同時(shí)起到了很好的長(zhǎng)循環(huán)效果。采用加入了上述負(fù)電材料和長(zhǎng)循環(huán)材料制備的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，用來包封抗 腫瘤藥物，本發(fā)明所得的脂質(zhì)體組合物荷負(fù)電、電荷量低，質(zhì)量非常穩(wěn)定，具有明顯的長(zhǎng)循 環(huán)特性，具備工業(yè)化應(yīng)用的前景，彌補(bǔ)了現(xiàn)有脂質(zhì)體技術(shù)的不足。除了上述方案外，為了完成該發(fā)明制備成成形的脂質(zhì)體材料，配方中還添加有由 磷脂和膽固醇構(gòu)成的成膜材料，其中所采用的磷脂為不飽和磷脂或飽和磷脂或其混合物； 其中所述的不飽和磷脂為大豆磷脂或蛋黃卵磷脂或其混合物；所述的飽和磷脂為氫化大豆 磷脂或氫化蛋黃磷脂或脂肪酸鏈的碳原子數(shù)為14-18的飽和磷脂，如二棕櫚酰磷脂酰膽堿 (DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)，但是從生產(chǎn)成本考慮，則優(yōu)選氫化飽和大豆磷脂、氫 化飽和卵磷脂。氫化飽和大豆磷脂優(yōu)選純度97%以上，其主要成分為磷脂酰膽堿，還含有少 量的磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇。由于其脂肪鏈氫化飽和，因此能夠防止磷脂的水解氧化、 提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。而另一個(gè)必需組分是膽固醇，膽固醇與磷脂一起作為成膜材料，調(diào)節(jié)脂質(zhì)雙分子 層的流動(dòng)性。處方中含有一定量的膽固醇可以避免脂質(zhì)體與血漿中的脂蛋白進(jìn)行脂質(zhì)交 換，而遭到破壞，從而提高脂質(zhì)體的體內(nèi)穩(wěn)定性能。為了達(dá)到最佳的效果，發(fā)明人將上述物質(zhì)的比例限定為磷脂、膽固醇、負(fù)電性材 料、長(zhǎng)循環(huán)材料的摩爾比為100 10-50 0.1-10 2-10。而更優(yōu)先的則采用摩爾比為 100 20-35 0.5-5 3_6，這樣可以更好的發(fā)揮負(fù)電材料和長(zhǎng)循環(huán)材料的作用，所制備 的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物更加穩(wěn)定。為了提高最終的效果，在上述配方的基礎(chǔ)上，所述的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物內(nèi)還含 有抗氧化劑和凍干保護(hù)劑，其中抗氧化劑選自維生素E，其與磷脂的摩爾比為0.1-2 100；而在日常生產(chǎn)中，含有活性化合物的脂質(zhì)體可以用冷凍干燥來穩(wěn)定，以制成適宜的組合物 形式，在該過程中，需要加入凍干保護(hù)劑，依靠其玻璃態(tài)的穩(wěn)定膜作用，來保護(hù)脂質(zhì)體的結(jié) 構(gòu)完整性，本發(fā)明的凍于保護(hù)劑選自蔗糖、海藻糖、乳糖中的一種或多種，其用量為磷脂重 量的1-8倍，其中更優(yōu)選采用蔗糖。前面已經(jīng)說過，本發(fā)明所制備的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物的用途是作為載體制備包裹 活性成分的藥物，而所述的活性成分為抗腫瘤藥物，包括紫杉醇或多烯紫杉醇或10-羥基 喜樹堿等；當(dāng)包裹的活性物質(zhì)為紫杉醇時(shí)，紫杉醇與磷脂的摩爾比為1-5 100。更優(yōu)選的 采用 2-5 100。而將長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物作為載體制備包裹活性成分的凍干劑的方法，包括薄膜 分散，高壓均質(zhì)，無菌過濾，冷凍干燥法的步驟，其具體步驟如下將活性物質(zhì)、磷脂、膽固醇、負(fù)電性材料、長(zhǎng)循環(huán)材料及抗氧化劑溶解于無水乙醇 中，于31-50°C的水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜，真空干燥，充分抽去無水乙醇；加入凍干保護(hù)劑溶液，50-550C的水浴條件下水化；高壓均質(zhì)或用微孔膜擠出的方 式制備平均粒徑80nm-300nm的脂質(zhì)體；采用0. 22 μ m的聚偏氟乙烯膜無菌過濾；分裝于容器中中，冷凍干燥后通入惰性氣體，壓蓋即得。為了使得制備的脂質(zhì)體更加實(shí)用，可控制高壓均質(zhì)或用微孔膜擠出的方式制備的 脂質(zhì)體平均粒徑為lOOnm。在上述的制備方法中，適宜的溶劑為非極性的或弱極性的溶劑，并且能夠在蒸發(fā) 后不留下毒性的殘留物。通常所使用的有機(jī)溶劑選自甲醇、乙醇、氯仿或它們的混合物。在 本發(fā)明中，優(yōu)選無水乙醇。本發(fā)明中采用的惰性氣體選自氮?dú)?、氦氣、氬氣中的一種。所采 用的凍干保護(hù)劑溶液為其水溶液，如蔗糖水溶液等。當(dāng)包裹的活性物質(zhì)為紫杉醇時(shí)，本發(fā)明制備所得的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物為 紫杉醇注射給藥新劑型，由于處方中不含有聚氧乙烯蓖麻油，從而避免了由此導(dǎo)致的超敏 反應(yīng)，與常規(guī)紫杉醇注射液和普通脂質(zhì)體相比，提高了耐受性，提高了療效。為了驗(yàn)證本發(fā) 明制備的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的效果，發(fā)明人將上述的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物進(jìn)行了性能的 測(cè)試，取得了下述的有益效果(一 )半成品及制劑的穩(wěn)定性本發(fā)明制備的新型的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物在凍干之前測(cè)定其粒徑、Zeta電 位，為_15mV至-35mV之間，室溫條件下放置12h，在此期間測(cè)定其粒徑、Zeta電位，基本保 持不變。脂質(zhì)體在混懸狀態(tài)下，保持均勻分散、不發(fā)生聚集和沉淀。冷凍干燥后，用滅菌注 射用水復(fù)溶，室溫條件下放置12h，在此期間測(cè)定其粒徑、Zeta電位，基本保持不變，脂質(zhì)體 在混懸狀態(tài)下，保持均勻分散狀態(tài)，沒有發(fā)生聚集和沉淀現(xiàn)象。凍干前樣品和冷凍干燥后復(fù) 溶樣品的粒徑測(cè)定結(jié)果表明其粒徑分布在SOnnHBOOnm范圍內(nèi)。( 二 )動(dòng)物體內(nèi)的耐受性試驗(yàn)、藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)和藥效學(xué)試驗(yàn)在動(dòng)物試驗(yàn)中，新型的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體給藥組小鼠未表現(xiàn)出毒副反應(yīng)，各項(xiàng) 生理指標(biāo)正常，而等劑量的紫杉醇注射液組動(dòng)物在給藥后出現(xiàn)短暫昏迷。藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)結(jié)果 表明，新型的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體同紫杉醇注射液、市售的紫杉醇普通脂質(zhì)體相比，能顯著 延長(zhǎng)體內(nèi)滯留時(shí)間，具有明顯的長(zhǎng)循環(huán)特性。藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明，新型的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂
8質(zhì)體與等劑量的紫杉醇注射液相比，抑瘤率提高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。由此可知，本發(fā)明所述的 新型的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體可提高動(dòng)物的耐受性、延長(zhǎng)體內(nèi)滯留時(shí)間，提高療效。(三)產(chǎn)業(yè)化的可行性本發(fā)明脂質(zhì)體組合物，處方中采用的磷脂、膽固醇、負(fù)電性材料(維生素E琥珀酯、 膽固醇琥珀酯、脫氧膽酸鈉)、長(zhǎng)循環(huán)材料(維生素E聚乙二醇琥珀酸酯TPGS)等各組成成 分均為市場(chǎng)上可以得到的藥用制劑材料，來源易得，價(jià)格相對(duì)低廉；均有在其他藥物制劑、 尤其是注射劑中應(yīng)用的先例，安全性能好。本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)便，采用的制劑設(shè)備為脂質(zhì)體 制備常用設(shè)備，便于放大應(yīng)用到工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模。以紫杉醇作為活性成分制得的新型長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，避免了紫杉醇注射液中 的聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor EL)所導(dǎo)致的超過敏反應(yīng)。通過復(fù)溶后的脂質(zhì)體急性毒性試 驗(yàn)結(jié)果可知，新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物靜脈注射給藥后可降低紫杉醇的全身毒性， 提高耐受性。藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物靜脈注射給藥后延長(zhǎng) 脂質(zhì)體在血漿中的滯留時(shí)間，具有長(zhǎng)循環(huán)特性，從而有更多的脂質(zhì)體藥物通過滲透和滯留 效應(yīng)(Era效應(yīng))，到達(dá)腫瘤組織，從而提高藥效。綜上所述，可以看到應(yīng)用本發(fā)明所述技術(shù)方案制備的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，提高 了該長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物與藥物結(jié)合的穩(wěn)定性，可作為抗腫瘤藥物紫杉醇、多烯紫杉醇、 10-羥基喜樹堿的載體，同時(shí)其耐受性提高，作為藥物載體時(shí)，其所載藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí) 間明顯長(zhǎng)于市售的各種載體，且成本較低，適合于廣泛的推廣應(yīng)用。


圖1為實(shí)施例1制得的脂質(zhì)體的透射電鏡照片；圖2為實(shí)施例1制得的脂質(zhì)體凍干前粒徑分布；圖3為實(shí)施例1制得的脂質(zhì)體凍干復(fù)溶后粒徑分布；圖4為實(shí)施例1制得的脂質(zhì)體、紫杉醇注射液、紫杉醇普通脂質(zhì)體在人血漿中的釋 放曲線；圖5為實(shí)施例1制得的脂質(zhì)體、紫杉醇注射液、紫杉醇普通脂質(zhì)體在大鼠體內(nèi)的血 藥濃度曲線。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容做進(jìn)一步的詳細(xì)說 明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍；實(shí)施例中由摩爾比換算得到的物料的質(zhì)量投料，由于磷脂多為混合物，故在計(jì)算 時(shí)取其大約分子量。涉及到的物料的分子量如下大豆磷脂(SPC) 750蛋黃卵磷脂(ePC) 780氫化飽和大豆磷脂(HSPC) 762氫化飽和卵磷脂(HEPC) 782二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC) 740二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC) 760膽固醇386· 6膽固醇琥珀酸酯(CHS) 486. 7維生素E琥珀酸酯(VES) 531脫氧膽酸鈉(SDC) 414. 6
膽固醇硫酸鈉(CS-Na) 489 維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 500)維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000) 1510維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000) 2500維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 5000) 5500聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE) 2790維生素E 430. 7紫杉醇853. 9多烯紫杉醇807. 910-羥基喜樹堿364. 3實(shí)施例中所用原料或設(shè)備均可從市場(chǎng)獲得。其中大豆磷脂(SPC)、蛋黃卵磷脂 (ePC)、氫化飽和大豆磷脂(HSPC Lipoid S PC-3)、氫化飽和卵磷脂(HEPC)、二棕櫚酰磷脂 酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、脫氧膽酸鈉(SDC)、聚乙二醇2000-二硬脂酰 磷脂酰乙醇胺(PEG2000-DSPE)均購自德國利寶益(Lipoid)公司(上海東尚實(shí)業(yè)有限公 司代理)；膽固醇、膽固醇硫酸鈉(CS-Na)購自西安力邦制藥有限公司；維生素E琥珀酸酯 (VES)購自武漢合中生化制藥有限公司；膽固醇琥珀酸酯(CHS)購自鄭州利偉生物化工有 限公司；不同規(guī)格的維生素E聚氧乙烯琥珀酸酯(TPGS)購自浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌 制藥廠；維生素E購自山東博山制藥有限公司；紫杉醇、多烯紫杉醇、羥基喜樹堿購自成都 天源天然產(chǎn)物有限公司；蔗糖購自山東聊城安信藥用輔料有限公司；海藻糖、乳糖購自武 漢遠(yuǎn)城科技發(fā)展有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購自上海亞榮生化儀器廠；循環(huán)水真空泵購自鞏義市予華儀器有限 責(zé)任公司；EmulSiFleX-C3高壓均質(zhì)機(jī)(配擠出器、導(dǎo)熱管)購自加拿大艾維斯汀公司；恒 溫水浴超聲儀購自上?？茖?dǎo)超聲儀有限公司；Nic0mp388/ZetaPALS激光粒度測(cè)定儀(美 國Nicomp公司)；Labco臺(tái)式冷凍干燥機(jī)(美國Labco公司)；冷凍干燥西林瓶、膠塞購自 淳安千島湖高峰玻璃瓶廠；XSP-10C生物顯微鏡購自上海光學(xué)儀器廠；微孔濾膜(lOOnm， 200nm)、0. 22μπι聚偏氟乙烯(PVDF)無菌過濾膜購自海豪夏核孔膜科技開發(fā)有限公司；透 析袋(分子截留質(zhì)量為8000 14400U)購自北京夏斯生物技術(shù)公司。實(shí)施例1新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.60g氫化大豆磷脂16g膽固醇 2. 5g維生素E琥珀酸酯 0. Ig維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)2. 5g維生素E 0. 05g蔗糖2Og注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、氫化大豆磷脂、膽固醇、維生素E琥珀酸酯(VES)、維生 素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、維生素E，加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，在氮?dú)饬鞅Ｗo(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分 除去殘留溶劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散 均勻，用高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，0. 22um PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍 干后通入氮?dú)?，壓蓋密封。按照中藥典2005版二部附錄XIX E中方法，測(cè)得樣品的包封率為96. 5%。
按照中國藥典版二部附錄XIX E中方法，以激光粒徑測(cè)定儀測(cè)定凍干前脂質(zhì)體樣 品，平均粒徑為110. 5nm。冷凍干燥樣品，用注射用水復(fù)溶的樣品平均粒徑為123. 2nm。其透射電鏡照片見圖1，粒徑分布圖見圖2和圖3。實(shí)施例2 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0. 15g 氫化大豆磷脂16g膽固醇 4. 5g 維生素E琥珀酸酯 0. 5g維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000) 2. 5g維生素E 0. 08g海藻糖 20g注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、氫化大豆磷脂、膽固醇、維生素E琥珀酸酯(VES)、維生 素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)、維生素E，加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，在氮?dú)饬鞅Ｗo(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分 除去殘留溶劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散 均勻，用擠出器IOOnm微孔膜擠出，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷 凍干燥，凍干后通入氮?dú)猓瑝荷w密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為108. 5nm，包封率為99. 5%。實(shí)施例3 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.90g 氫化大豆磷脂16g膽固醇 1.25g 維生素E琥珀酸酯 l.Og維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 500)2. Og維生素E 0. Ig乳糖15g注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、氫化大豆磷脂、膽固醇、維生素E琥珀酸酯、維生素E聚 乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、維生素E，加IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮?dú)?流保護(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留溶 劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用高 壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍干后通入 氮?dú)猓瑝荷w密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為115. 2nm包封率為86. 3%。實(shí)施例4 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.60g 氫化大豆磷脂 16g膽固醇 2.5g 膽固醇琥珀酸酯 l.Og維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000) 4. 5g維生素E 0. 05g蔗糖20g注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、氫化大豆磷脂、膽固醇、膽固醇琥珀酸酯、維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、維生素E加入，IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮 氣流保護(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留 溶劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用 高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍干后通 入氮?dú)?，壓蓋密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為114. lnm，包封率為96. 6%。實(shí)施例5 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.30g 氫化卵磷脂16g膽固醇 4. Og 膽固醇琥珀酸酯 l.Og維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 5000) 2. 3g維生素E 0. 05g乳糖15g注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、氫化卵磷脂、膽固醇、膽固醇琥珀酸酯、維生素E聚乙 二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)、維生素E，加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮?dú)?流保護(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留溶 劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用擠 出器IOOnm微孔膜擠出，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍 干后通入氬氣，壓蓋密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為116. 2nm，包封率為94. 3%。實(shí)施例6 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.6g 二棕櫚酰磷脂酰膽堿 15. 5g膽固醇 2. 5g 脫氧膽酸鈉0.45g維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)4. 8g維生素E 0. 05g蔗糖15g注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、膽固醇、脫氧膽酸鈉、維生素E 聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、維生素E，加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在 氮?dú)饬鞅Ｗo(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘 留溶劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻， 用高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍干后 通入哈、氦氣，壓蓋密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為102. lnm，包封率為95. 3%。實(shí)施例7 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.2g 二硬脂酰磷脂酰膽堿16g膽固醇 3. 5g 膽固醇硫酸鈉0.05g維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)1. 6g維生素E 0. 05g
12
海藻糖 20g注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、氫化大豆磷脂、膽固醇、維生素E琥珀酸酯、維生素E聚 乙二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)、維生素E，加IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮?dú)?流保護(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留溶 齊U。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用擠 出器IOOnm微孔膜擠出，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍 干后通入氮?dú)?，壓蓋密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為116. 3nm，包封率為94. 2%。實(shí)施例8 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.40g 氫化大豆磷脂16g膽固醇 2. Og 維生素E琥珀酸酯 l.Og聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺 3. Og維生素E 0. Ig乳糖15g注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、氫化大豆磷脂、膽固醇、維生素E琥珀酸酯、聚乙二醇 2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、維生素E加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮 氣流保護(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留 溶利。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用 高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍干后通 入氬氣，壓蓋密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為103. 2nm，包封率為96. 5%。實(shí)施例9 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.36g氫化蛋黃磷脂 16g膽固醇 3.2g膽固醇琥珀酸酯 1.6g聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺5.8g維生素E 0. IOg蔗糖2Og注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、氫化蛋黃磷脂、膽固醇、膽固醇E琥珀酸酯、聚乙二醇 2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、維生素E加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮 氣流保護(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留 溶劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用 擠出器IOOnm微孔膜擠出，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥， 凍干后通入氮?dú)猓瑝荷w密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為101. 6nm，包封率為94. 3%。實(shí)施例10 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.2g 二棕櫚酰磷脂酰膽堿 16g
膽固醇 2.4g 膽固醇硫酸鈉0.03g聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺1.25g維生素E 0. 05g蔗糖15g注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、氫化大豆磷脂、膽固醇、膽固醇硫酸鈉、聚乙二醇 2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、維生素E加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮 氣流保護(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留 溶劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用 擠出器IOOnm微孔膜擠出，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥， 凍干后通入氬氣，壓蓋密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為120. 6nm，包封率為96. 7%。實(shí)施例11 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.6g 大豆磷脂(SPC)16g膽固醇 2.4g 維生素E琥珀酸酯 1.2g維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS1000) 0. 65g維生素E 0. 05g海藻糖 IOg注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、大豆磷脂、膽固醇、維生素E琥珀酸酯、維生素E聚乙 二醇琥珀酸酯(TPGS 1000)、維生素E加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮?dú)?流保護(hù)條件下，40°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留溶 劑。加入用注射用水溶解的海藻糖溶液，40°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用 高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍干后通 入氮?dú)?，壓蓋密封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為116. 5nm，包封率為93. 7%。實(shí)施例12 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.2g蛋黃卵磷脂(ePC) 16. 5g膽固醇 0.8g膽固醇琥珀酸酯 1.5g維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)2. 5g維生素E 0. 04g乳糖15g注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、蛋黃卵磷脂、膽固醇、膽固醇琥珀酸酯、維生素E聚乙 二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、維生素E加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮?dú)?流保護(hù)條件下，40°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留溶 劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，40°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用擠 出器IOOnm微孔膜擠出，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍 干后通入氮?dú)?，壓蓋密封。
與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為114. Onm，包封率為95. 5%。實(shí)施例13 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備紫杉醇 0.30g 大豆磷脂16g膽固醇 2. 5g 脫氧膽酸鈉0. 25g維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 5000) 2. 3g維生素E 0. Ig蔗糖2Og注射用水 200ml分別稱取處方量的紫杉醇、大豆磷脂、膽固醇、脫氧膽酸鈉、維生素E聚乙二醇琥 珀酸酯(TPGS 5000)、維生素E加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在氮?dú)饬鞅Ｗo(hù) 條件下，40°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留溶劑。加 入用注射用水溶解的蔗糖溶液，40°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散均勻，用高壓均質(zhì) 機(jī)均質(zhì)，0. 22ym PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍干后通入氮?dú)猓瑝?蓋笛、封。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為123. 4nm，包封率為91. 2%。實(shí)施例14 新型多烯紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備多烯紫杉醇 1. 20g 氫化大豆磷脂16g膽固醇2. Og 維生素E琥珀酸酯 0. Ig維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)3. Og維生素E0. IOg蔗糖20g注射用水200ml分別稱取處方量的多烯紫杉醇、氫化大豆磷脂、膽固醇、維生素E琥珀酸酯、維生 素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、維生素E加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，在氮?dú)饬鞅Ｗo(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分 除去殘留溶劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散 均勻，用擠出器IOOnm微孔膜擠出，0. 22 μ m PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷 凍干燥，凍干后通入氮?dú)?，壓蓋密封，即得多烯紫杉醇的凍干長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體制劑。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為107. lnm，包封率為93. 3%。實(shí)施例15 新型10-羥基喜樹堿長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備10-羥基喜樹堿 0. 50g 氫化大豆磷脂 16g膽固醇4. Og 維生素E琥珀酸酯0. Ig
維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)3. Og維生素E0. IOg蔗糖30g注射用水300ml分別稱取處方量的10-羥基喜樹堿、氫化大豆磷脂、膽固醇、維生素E琥珀酸酯、維 生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS 2000)、維生素E加入IOOml無水乙醇，溶解后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 儀，在氮?dú)饬鞅Ｗo(hù)條件下，50°C水浴恒溫，抽干溶劑，制備成膜，置真空干燥器中放置，充分除去殘留溶劑。加入用注射用水溶解的蔗糖溶液，55°C恒溫，磁力攪拌30min，水浴超聲分散 均勻，用高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)，0. 22um PVDF濾膜無菌過濾，分裝于凍干西林瓶中，冷凍干燥，凍 干后通入氮?dú)?，壓蓋密封，即得10-羥基喜樹堿的凍干長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體制劑。與實(shí)施例1同樣方法測(cè)定，凍干前樣品的平均粒徑為109. 4nm，包封率為95. 3%。實(shí)施例16 新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的組合物的穩(wěn)定性試驗(yàn)該試驗(yàn)旨在考察實(shí)施例中制備的脂質(zhì)體樣品的貯存穩(wěn)定性和使用穩(wěn)定性。將實(shí)施例1、4、6制得的干燥的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物在2-10°C保存，于0、1、 3、6、12個(gè)月取樣，觀察其外觀，用注射用水復(fù)溶，用顯微鏡檢查，結(jié)果見表1。將實(shí)施例1、4、6制得的干燥的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物復(fù)溶后的溶液室溫條 件下放置，于0、1、4、8、12小時(shí)取樣，觀察外觀，用顯微鏡檢查，結(jié)果見表2。將實(shí)施例1、4、6制得的干燥的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物用注射用水復(fù)溶，然后 用8倍體積的5%葡萄糖注射液稀釋，室溫條件下放置，于0、1、2、3、4小時(shí)取樣，觀察外觀， 用顯微鏡檢查，結(jié)果見表3。由結(jié)果可知，紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物凍干劑在2-10°C保存12個(gè)月后，復(fù)溶后 不發(fā)生聚集，沒有紫杉醇針狀結(jié)晶析出。復(fù)溶后溶液室溫條件下放置12小時(shí)，不發(fā)生聚集， 沒有紫杉醇結(jié)晶析出。復(fù)溶后用5%葡萄糖注射液稀釋8倍，室溫條件下放置4小時(shí)，不發(fā) 生聚集，沒有紫杉醇結(jié)晶析出。表1新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體低溫放置(2-10°C )放置穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 表2新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物復(fù)溶后室溫放置穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果
16 表3新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物復(fù)溶后用8倍體積的5 %葡萄糖注射液稀釋， 室溫放置穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 試驗(yàn)例1新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物的人血漿穩(wěn)定性試驗(yàn)試驗(yàn)樣品(1)紫杉醇注射液(泰素，百時(shí)美施貴寶公司，30mg/5ml) ； (2)紫杉醇 普通脂質(zhì)體(力撲素，注射用紫杉醇脂質(zhì)體，南京思科藥業(yè)有限公司，規(guī)格30mg/瓶)；(3) 紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物(實(shí)施例1制備的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，規(guī)格15mg/瓶)。精密量取紫杉醇注射液1ml，用生理鹽水2ml稀釋，作為紫杉醇注射液的稀釋液。 將紫杉醇普通脂質(zhì)體、紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物分別用15ml，IOml注射用水復(fù)溶，即得 紫杉醇普通脂質(zhì)體和紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體復(fù)溶液。精密量取紫杉醇注射液的稀釋液，紫杉 醇普通脂質(zhì)體和紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體復(fù)溶液各1ml，加入人血漿2ml，置筒狀透析袋中(分 子截留量1.4萬)，封口，置于裝有200ml pH7. 4PBS(0. 05mol/L)的燒杯中，37°C水浴磁力攪 拌。分別于0. 5、l、2、4、6、8、10、24h取樣Iml (同時(shí)補(bǔ)充同溫空白介質(zhì)lml)。HPLC法測(cè)定 計(jì)算各時(shí)間段的脂質(zhì)體累積釋放的藥物量。以下公式計(jì)算釋放度。釋放度透析外液的累積釋放量/透析袋中藥物的總量X 100%。血漿中穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，紫杉醇普通脂質(zhì)體在血漿中藥物滲漏迅速，24h釋放 46. 72%，比紫杉醇注射液的釋放速度(15. 96% )還要快，紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體在血漿中的 穩(wěn)定性好，藥物釋放緩慢，24h釋放僅為4. 4%，顯示出優(yōu)良的緩釋特性。血漿中的穩(wěn)定性試 驗(yàn)結(jié)果見圖4。試驗(yàn)例2新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物的急性毒性試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康目疾毂景l(fā)明的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體按常規(guī)方式給藥后的即時(shí)毒性反應(yīng) 和多次給藥的耐受性。試驗(yàn)分組及樣品⑴陰性對(duì)照組空白脂質(zhì)體；(2)陽性對(duì)照組紫杉醇注射液 (泰素，百時(shí)美施貴寶，規(guī)格30mg/5ml) ； (3)低劑量、高劑量試驗(yàn)組紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體 (實(shí)施例1制備的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，規(guī)格15mg/瓶，用注射用水復(fù)溶)。試驗(yàn)動(dòng)物昆明種雌性小鼠，體重18_20g，隨機(jī)分為4組，每組5只。陰性對(duì)照組 給以試驗(yàn)組含有的最高量脂質(zhì)的空白脂質(zhì)體。陽性對(duì)照組給予紫杉醇注射液。試驗(yàn)組給予 紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，在第1，4，7天對(duì)各組尾靜脈注射給藥。試驗(yàn)結(jié)果⑴即時(shí)毒性反應(yīng)觀察各組小鼠給藥后即時(shí)觀察，陰性對(duì)照組和低劑 量、高劑量試驗(yàn)組均無無明顯毒性反應(yīng)。紫杉醇注射液組中有的小鼠出現(xiàn)呼吸急促、短暫昏 迷現(xiàn)象。(2)小鼠體重變化陰性對(duì)照組小鼠體重逐步上升。試驗(yàn)結(jié)果見表4。表4新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體體急性毒性試驗(yàn)中動(dòng)物體重變化 試驗(yàn)例3新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備組合物的藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)取SD大鼠15只，隨機(jī)分成3組，分別給予紫杉醇注射液(泰素，百時(shí)美施貴寶，規(guī) 格30mg/5ml)、紫杉醇普通脂質(zhì)體(力撲素，注射用紫杉醇脂質(zhì)體，南京思科藥業(yè)有限公司， 規(guī)格30mg/瓶)、紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(實(shí)施例1制備，規(guī)格15mg/瓶)，(脂質(zhì)體用注射用 水復(fù)溶)，以15mg/kg劑量經(jīng)大鼠尾靜脈緩慢推注，分別于給藥后5,30min, 1,2,4,6,8,12， 16，24h眼底靜脈叢取血0. 5ml于肝素化離心管中，離心5min分離血漿，經(jīng)血樣處理后，HPLC 分析，標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法計(jì)算血漿藥物濃度。色譜柱0DS_C18柱(20(kimX4. 6謹(jǐn)，5μπι)；流動(dòng)相甲醇-水(65 35)，流速 1. Oml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)227nm，柱溫:30°C，進(jìn)樣體積:20μ 1。血樣處理精取待測(cè)血漿ΙΟΟμ 1，加入叔丁基甲醚2ml于旋渦混合器上混合3min， 3000r/min離心lOmin，吸取上層清液1. 5ml置另一離心管中，于35°C水浴中氮?dú)饬飨聯(lián)]干。 殘留物以流動(dòng)相ΙΟΟμ 1溶解，20 μ 1進(jìn)樣。數(shù)據(jù)處理所得大鼠血藥濃度數(shù)據(jù)用中國藥理學(xué)會(huì)數(shù)學(xué)藥理委員會(huì)編寫的3Ρ87 藥動(dòng)學(xué)程序進(jìn)行處理。用進(jìn)行處理，求得各處方藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果紫杉醇注射液、市售紫杉醇普通脂質(zhì)體、紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體血藥濃度曲線 均符合二室模型，t1/20 分別為 1. 685h，1. 882h 和 17. 829h，AUCch48 分別為 123. 84，168. 598 和 1028. 896μ g · h/ml。結(jié)果見圖 5。結(jié)論紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為有明顯的改變，與市售紫杉醇 注射液、普通脂質(zhì)體相比，消除半衰期、血中的循環(huán)時(shí)間均有不同程度的延長(zhǎng)，AUC增加，具 有明顯的長(zhǎng)循環(huán)特性。試驗(yàn)例4新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體脂質(zhì)體組合物的藥效學(xué)試驗(yàn)試驗(yàn)動(dòng)物采用C57BL/6黑小鼠，雄性，體重19_22g，隨機(jī)分組，每組10只。分組及給藥情況如下
(1)對(duì)照組空白脂質(zhì)體；(2)紫杉醇注射液(泰素，百時(shí)美施貴寶，規(guī)格30mg/5ml)；(3)紫杉醇普通脂質(zhì)體給藥組注射用紫杉醇脂質(zhì)體(力撲素，南京思科藥業(yè)有限 公司，規(guī)格30mg/瓶)；(4)紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體給藥組實(shí)施例1制備的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物 (規(guī)格15mg/瓶)試驗(yàn)方法取B16黑色素瘤源，采用勻漿法，以生理鹽水1 6制備成瘤細(xì)胞懸液，右腋皮下 接種B16黑色素瘤，腫瘤接種后24h，小鼠尾靜脈注射給藥，觀察即時(shí)反應(yīng)及體重變化。試驗(yàn) 結(jié)束后，剖取腫瘤稱重，按下式計(jì)算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率(對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤 重X100%。試驗(yàn)結(jié)果見表5，由表可見，新型紫杉醇脂質(zhì)體的抑瘤率明顯高于紫杉醇普通 脂質(zhì)體和紫杉醇注射液。表5新型紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的藥效學(xué)試驗(yàn) 可見實(shí)施例1制備的紫杉醇長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物抑瘤率明顯提高。
權(quán)利要求
一種長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，包括由磷脂和膽固醇構(gòu)成的成膜材料，負(fù)電性材料和長(zhǎng)循環(huán)材料，其特征在于所采用的負(fù)電性材料為維生素E琥珀酯、膽固醇琥珀酯、脫氧膽酸鈉、膽固醇硫酸鈉中的一種或多種；所采用的長(zhǎng)循環(huán)材料為維生素E聚乙二醇琥珀酸酯，其分子結(jié)構(gòu)中聚乙二醇的分子量范圍為500 5000；所述磷脂、膽固醇、負(fù)電性材料、長(zhǎng)循環(huán)材料的摩爾比為100∶10 50∶0.1 10∶2 10。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，其特征在于所采用的負(fù)電性材料為 維生素E琥珀酯；所采用維生素E聚乙二醇琥珀酸酯，其分子結(jié)構(gòu)中聚乙二醇的分子量為 2000。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的磷脂為不飽 和磷脂或飽和磷脂或其混合物；其中所述的不飽和磷脂為大豆磷脂或蛋黃卵磷脂或其混合 物；所述的飽和磷脂為氫化大豆磷脂或氫化蛋黃磷脂或脂肪酸鏈的碳原子數(shù)為14-18的飽 和磷脂或其混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述的脂肪酸鏈的碳原 子數(shù)為14-18的飽和磷脂為二棕櫚酰磷脂膽堿或二硬脂酰磷脂酰膽堿。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物，其特征在于所述脂質(zhì)體組合物 內(nèi)還含有抗氧化劑和凍干保護(hù)劑，其中抗氧化劑選自維生素E，其與磷脂的摩爾比為 0.1-2 100，凍干保護(hù)劑選自蔗糖、海藻糖、乳糖中的一種或多種，其用量為磷脂重量的1-8倍。
6.如權(quán)利要求1所述長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物的用途是作為載體制備包裹活性成分的藥 物，所述的活性成分為抗腫瘤藥物，包括紫杉醇或多烯紫杉醇或10-羥基喜樹堿。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用途，其特征在于包裹的活性物質(zhì)為紫杉醇時(shí)，紫杉醇與磷 脂的摩爾比為1_5 100。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述紫杉醇與磷脂的摩爾比為2-5 100。
9.將長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物作為載體制備包裹活性成分的凍干劑的方法，包括薄膜分 散，高壓均質(zhì)，無菌過濾，冷凍干燥法的步驟，其具體步驟如下將活性物質(zhì)、磷脂、膽固醇、負(fù)電性材料、長(zhǎng)循環(huán)材料及抗氧化劑溶解于無水乙醇中，于 30-50°C的水浴條件下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜，真空干燥，充分抽去無水乙醇；加入凍干保護(hù)劑水溶液，50-55°C的水浴條件下水化；高壓均質(zhì)或用微孔膜擠出的方式 制備平均粒徑80nm-300nm的脂質(zhì)體；采用0. 22 y m的聚偏氟乙烯膜無菌過濾； 分裝于容器中中，冷凍干燥后通入惰性氣體，壓蓋即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于高壓均質(zhì)或用微孔膜擠出的方式制 備的脂質(zhì)體的平均粒徑為lOOnm。全文摘要
本發(fā)明涉及一種新型的長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物及其應(yīng)用方法，主要采用磷脂、膽固醇、負(fù)電性材料、長(zhǎng)循環(huán)材料作為主要原料，其中特別采用了維生素E琥珀酸酯或膽固醇琥珀酸酯為負(fù)電性材料，維生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)作為長(zhǎng)循環(huán)材料，提高了該長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體組合物與藥物結(jié)合的穩(wěn)定性，可作為抗腫瘤藥物紫杉醇、多烯紫杉醇、10-羥基喜樹堿的載體，同時(shí)其耐受性提高，作為藥物載體時(shí)，其所載藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間明顯長(zhǎng)于市售的各種載體，且成本較低，適合于廣泛的推廣應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K9/127GK101889982SQ201010147030
公開日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月15日
發(fā)明者劉善奎, 李鐵軍, 甄天民, 鐘延強(qiáng) 申請(qǐng)人:山東京衛(wèi)制藥有限公司