專利名稱：：一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物及制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及天然產(chǎn)物化學(xué)領(lǐng)域，具體地說涉及一種三萜皂苷類化合物及制備方法及用途。
背景技術(shù)：
：白酒草[Qw少zayV^o",'ca(Thunb.)Less.]系菊科白酒草屬植物白酒草的全草，又名白酒棵、白酒香、酒藥草、銀紐子，分布于浙江、福建、臺(tái)灣、云南、貴州、湖南、廣東、廣西、西藏等省區(qū)。白酒草屬(Co^z")植物全世界約有80-100種，主要分布于東、西半球的熱帶和亞熱帶地區(qū)。我國有10種1變種，其中白酒草根或全草藥用，治療小兒肺炎、肋膜炎、喉炎、角膜炎等癥。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種從植物白酒草中提取的一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物。本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物在制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的制備方法。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物，其結(jié)構(gòu)式如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物在制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的制備方法，包括如下步驟(1)將粉碎干燥的白酒草全草用乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取，提取液過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物；(2)將膏狀物分散于相當(dāng)膏狀物質(zhì)量5-15倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3-5次，每次乙酸乙酯的加入量為分散液體積的0.8-2倍，再加入正丁醇萃取3-5次，每次正丁醇的加入量為分散液體積的0.8-2倍，正丁醇萃取液減壓濃縮得濃縮物；(3)將濃縮物溶解于相當(dāng)濃縮物質(zhì)量8-12倍的水中，過大孔吸附樹脂柱，用0%-60%的乙醇水溶液或甲醇水溶液梯度洗脫，收集40%-60%的乙醇或甲醇洗脫液，減壓濃縮得到總皂私(4)將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以體積比為7-4:3-6:0.3-0.6的氯仿-甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，共收集75個(gè)流分，合并流分43-55;(5)將流分43-55上反相ODS層析柱，用體積百分比為30%-100%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分11-15，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%-70%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分6-9，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%-60%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集23個(gè)流分，合并流分19-21，經(jīng)制備高效液相色譜純化后得到一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物。步驟(1)較好的是以粉碎干燥的白酒草全草為原料，加入原料6-12質(zhì)量倍的體積百分比濃度為50%-100%的乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取2-5次，每次l-4小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物。步驟(1)最好是以粉碎干燥的白酒草全草為原料，加入原料10質(zhì)量倍的體積百分比濃度為60%-80%的乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物。步驟(3)中大孔樹脂的型號(hào)可以選AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于所提取分離的一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物具有抗腫瘤活性，制備方法簡單。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。實(shí)施例1一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>分子式C67H1G8035，分子量1472;化合物(I)的結(jié)構(gòu)通過分析各種核磁共振譜。HNMR、13CNMR、DEPT、COSY、HMQC、HMBC、TOCSY、NOESY)和高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)等及與類似化合物的波譜數(shù)據(jù)比較得以鑒定?；衔?I)的波譜數(shù)據(jù)如下[a]2D°-25.7(c1.08,MeOH).IR(KBr)vmax3391，2926,1734,1083cm—1.&NMR(C5D5N):苷元部分1.32(s,H3-24),1.54(s,H3-25),1.11(s,H3-26),1.73(s,H3-27),0.96(s,H3-29),U1(s,H3-30),4.77(brs,H-2),4.31(H-3),5.60(brs,H-12),5.21(brs,H-16),3.66,4.30(H2-23);糖部分，28位糖鏈阿拉伯糖6.48(brs,H-l)，鼠李糖5.66(brs,H-l)，1.69(d,7=6.0Hz，H3-6)，木糖5.04(d，■/=7.5Hz，H-l),3.34(dd，J=10.5，11.0Hz，H-5)，開糖6.38(brs，H-l),4.99(brs，H-2),4.59(d,/=9.5Hz，H-4)'末端阿拉伯糖5.04(d,J"=7.5Hz,H國l),3.62(brd,J=12.0Hz,H-5);3位糖鏈:葡萄糖5.12(d,/=7.5Hz,H-l)，木糖5.16(d,/=8.0Hz,H-l)。13CNMR(C5D5N):苷元部分44.3(C-l),70.8(C-2),83.0(C-3)，42.9(C-4)，47.8(C-5)，18.1(C-6),33.2(C-7),40.2(C-8)，47.6(C-9),37.0(C-IO)，24.0(C-ll),123.0(C-12),144.4(C-13)，42.2(C-14),36.1(C-15),74.0(C-16),49.6(C-17),41.3(C-18),47.0(C-19),30.9(C-20),36.0(C-21),32.1(C-22),65.2(C-23)，15.0(C-24),17.4(C-25),17.6(C-26),27.2(C-27)，175.9(C-28),33.2(C-29),24.8(C-30)。糖部分，28位糖鏈阿拉伯糖93.4(C陽l)，75.5(C-2),69.6(C-3)，65.8(C-4),62.7(C-5)，鼠李糖101.1(C-l),71.8(C-2)，72.7(C-3),83.6(C-4)，68.6(C-5),18.3(C-6)，木糖106.3(C-l)，75.3(C-2),83.2(C-3),69.3(C-4),67.1(C-5)，斧糖109.4(C-l),84.5(C-2),81.4(C-3),75.7(C-4),65.8(C-5)，末端阿拉伯糖105.2(C-l),72.7(C-2),74.7(C-3),69.3(C-4),67.7(C-5);3位糖鏈葡萄糖105.4(C-l),74.5(C-2),87.7(C-3),69.7(C-4),77.9(C-5),62.2(C-6)，木糖106.4(C-l),75.3(C-2)，78.1(C-3),70.9(C-4),67.4(C-5)。HighresolutionESIMS:m/z[M+Na]+1495.6545(calcdforC67H108O35Na,1495.6563).實(shí)施例2一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物抗腫瘤活性試驗(yàn)結(jié)果如下選擇宮頸癌細(xì)胞HeLa和胃癌細(xì)胞BGC-803,以紫杉醇為陽性藥物，測(cè)試所獲得一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的抗腫瘤活性，結(jié)果表明化合物(I)具有抗腫瘤活性，對(duì)HeLa細(xì)胞的ICso為5.149xl(T6mol/L;對(duì)BGC-803細(xì)胞化合物(I)表現(xiàn)出活性，其1<:50為4.935x10-6mol/L。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例3一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的制備方法，包括如下步驟-(1)以粉碎干燥的白酒草全草2.5kg為原料，加入25kg的體積百分比濃度為95%的乙醇水溶液回流提取兩次，每次2小時(shí)，再用60%乙醇回流提取兩次，每次2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物；(2)將膏狀物分散于相當(dāng)膏狀物質(zhì)量IO倍的水中制成分散液，加入3000ml乙酸乙酯萃取4次，再加入正丁醇3000ml萃取4次，正丁醇萃取液減壓濃縮得濃縮物127g;(3)將濃縮物溶解于相當(dāng)濃縮物質(zhì)量10倍的水中，過大孔吸附樹脂柱D101柱，用水，30%乙醇水溶液，40%乙醇水溶液，60%乙醇水溶液梯度洗脫，收集40%-60%的乙醇洗脫液，減壓濃縮得到總皂苷50g;'(4)將總皂苷進(jìn)行硅膠(100-200目)柱層析，以體積比為7:3:0.3—6.5:3.5:0.35—6:4:0.4—5.5:4.5:0.45—5:5:0.5—4:6:0.6的氯仿-甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，每500mL收集一個(gè)流分，共收集75個(gè)流分，合并流分43-55(13g);(5)將流分43-55上反相ODS層析柱，用體積百分比為30%—50%—70%—100%的甲醇水溶液梯度洗脫，每100mL收集一個(gè)流分，共收'集20個(gè)流分，合并流分11-15，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%—70%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分6-9，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集23個(gè)流分，合并流分19-21，經(jīng)制備高效液相色譜純化后得到一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物。實(shí)施例4一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的制備方法，包括如下步驟(1)以粉碎干燥的白酒草全草為原料，加入原料IO質(zhì)量倍的體積百分比濃度為60%的乙醇水溶液回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物；(2)將膏狀物分散于相當(dāng)膏狀物質(zhì)量8倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次乙酸乙酯的加入量為分散液體積的2倍，再加入正丁醇萃取3次，每次正丁醇的加入量為分散液體積的2倍，正丁醇萃取液減壓濃縮得濃縮物；(3)將濃縮物溶解于相當(dāng)濃縮物質(zhì)量IO倍的水中，過大孔吸附樹脂AB-8型柱，用水，30%乙醇水溶液，40%乙醇水溶液，60%乙醇水溶液梯度洗脫，收集40%-60%的乙醇洗脫液，減壓濃縮得到總皂苷；(4)將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以體積比為7:3:0.3—6.5:3.5:0.35—6:4:0.4—5.5:4.5:0.45—5:5:0.5—4:6:0.6的氯仿-甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，共收集75個(gè)流分，合并流分43-55;(5)將流分43-55上反相ODS層析柱，用體積百分比為30%—50%—70%—100%的甲醇水溶液梯度洗脫，每100mL收集一個(gè)流分，共收集20個(gè)流分，合并流分11-15，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%—70%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分6-9，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集23個(gè)流分，合并流分19-21，經(jīng)制備高效液相色譜純化后得到一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物。實(shí)施例5一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的制備方法，包括如下步驟(1)以粉碎干燥的白酒草全草為原料，加入原料IO質(zhì)量倍的體積百分比濃度為80%的甲醇水溶液回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物；(2)將膏狀物分散于相當(dāng)膏狀物質(zhì)量IO倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取5次，每次乙酸乙酯的加入量為分散液體積的0.8倍，再加入正丁醇萃取5次，每次正丁醇的加入量為分散液體積的0.8倍，正丁醇萃取液減壓濃縮得濃縮物；(3)將濃縮物溶解于相當(dāng)濃縮物質(zhì)量8倍的水中，過大孔吸附樹脂HP20型柱，用水，30%甲醇水溶液，40%甲醇水溶液、60°/。甲醇水溶液梯度洗脫，收集40%-60%的甲醇洗脫液，減壓濃縮得到總皂苷；(4)將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以體積比為7:3:0.3—6.5:3.5:0.35—6:4:0.4—5.5:4.5:0.45—5:5:0.5—4:6:0.6的氯仿-甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，共收集75個(gè)流分，合并流分43-55;(5)將流分43-55上反相ODS層析柱，用體積百分比為30%—50%—70%一100%的甲醇水溶液梯度洗脫，每100mL收集一個(gè)流分，共收集20個(gè)流分，合并流分11-15，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%—70%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分6-9，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集23個(gè)流分，合并流分19-21，經(jīng)制備高效液相色譜純化后得到一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物。實(shí)施例6一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的制備方法，包括如下步驟(1)以粉碎干燥的白酒草全草為原料，加入原料6質(zhì)量倍的體積百分比濃度為100%的乙醇回流提取2次，每次4小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物；(2)將膏狀物分散于相當(dāng)膏狀物質(zhì)量5倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取4次，每次乙酸乙酯的加入量為分散液體積的1倍，再加入正丁醇萃取4次，每次正丁醇的加入量為分散液體積的1倍，正丁醇萃取液減壓濃縮得濃縮物；(3)將濃縮物溶解于相當(dāng)濃縮物質(zhì)量12倍的水中，過大孔吸附樹脂HPD100型柱，用水，30%甲醇水溶液，40%甲醇水溶液，60%甲醇水溶液梯度洗脫，收集40%-60%的甲醇洗脫液，減壓濃縮得到總皂苷；(4)將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以體積比為7:3:0.3—6.5:3.5:0.35—6:4:0.4—5.5:4.5:0.45—5:5:0.5—4:6:0.6的氯仿-甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，共收集75個(gè)流分，合并流分43-55;(5)將流分43-55上反相ODS層析柱，用體積百分比為30%—50%—70%—100%的甲醇水溶液梯度洗脫，每100mL收集一個(gè)流分，共收集20個(gè)流分，合并流分11-15，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%—70%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分6-9，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集23個(gè)流分，合并流分19-21，經(jīng)制備高效液相色譜純化后得到一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物。實(shí)施例7一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的制備方法，包括如下步驟(1)以粉碎干燥的白酒草全草為原料，加入原料12質(zhì)量倍的體積百分比濃度為50%的甲醇水溶液回流提取4次，每次1小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物;(2)將膏狀物分散于相當(dāng)膏狀物質(zhì)量15倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3次，每次乙酸乙酯的加入量為分散液體積的1倍，再加入正丁醇萃取3次，每次正丁醇的加入量為分散液體積的1倍，正丁醇萃取液減壓濃縮得濃縮物；(3)將濃縮物溶解于相當(dāng)濃縮物質(zhì)量IO倍的水中，過大孔吸附樹脂HPD100A型柱，用水，30%乙醇水溶液，40%乙醇水溶液，60%乙醇水溶液梯度洗脫，收集40%-60%的乙醇洗脫液，減壓濃縮得到總皂苷；(4)將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以體積比為7:3:0.3—6.5:3.5:0.35—6:4:0.4—5.5:4.5:0.45—5:5:0.5—4:6:0.6的氯仿-甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，共收集75個(gè)流分，合并流分43-55;(5)將流分43-55上反相ODS層析柱，用體積百分比為30%—50%—70%—100%的甲醇水溶液梯度洗脫，每100mL收集一個(gè)流分，共收集20個(gè)流分，合并流分11-15，上反相ODS層析柱，甩體積百分比為50%—60%—70%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分6-9,上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集23個(gè)流分，合并流分19-21，經(jīng)制備高效液相色譜純化后得到一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物。實(shí)施例8一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的制備方法，包括如下步驟(1)以粉碎干燥的白酒草全草為原料，加入原料10質(zhì)量倍的體積百分比濃度為75%的乙醇水溶液回流提取5次，每次2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物；(2)將膏狀物分散于相當(dāng)膏狀物質(zhì)量IO倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取4次，每次乙酸乙酯的加入量為分散液體積的1.5倍，再加入正丁醇萃取4次，每次正丁醇的加入量為分散液體積的1.5倍，正丁醇萃取液減壓濃縮得濃縮物；(3)將濃縮物溶解于相當(dāng)濃縮物質(zhì)量12倍的水中，過大孔吸附樹脂HPD300型柱，用zK，30%乙醇水溶液，40%乙醇水溶液，60%乙醇水溶液梯度洗脫，收集40%-60%的乙醇洗脫液，減壓濃縮得到總皂苷；(4)將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以體積比為7:3:0.3—6.5:3.5:0.35—6:4:0.4—5.5:4.5:0.45—5:5:0.5—4:6:0.6的氯仿-甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，共收集75個(gè)流分，合并流分43-55;(5)將流分43-55上反相ODS層析柱，用體積百分比為30%—50%—70%—100%的甲醇水溶液梯度洗脫，每100mL收集一個(gè)流分，共收集20個(gè)流分，合并流分11-15，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%—60%—70%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分6-9，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%一60%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集23個(gè)流分，合并流分19-21:經(jīng)制備高效液相色譜純化后得到一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物。用大孔吸附樹脂X-5型、NKA-II型、D101型或DA201型替代本實(shí)施例中大孔吸附樹脂HPD300型，可以組成新的實(shí)施例。權(quán)利要求1.一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物，其結(jié)構(gòu)式如下所示id="icf0001"file="S2008100529753C00011.gif"wi="94"he="67"top="59"left="67"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>2.權(quán)利要求1所述的一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物在制備抗腫瘤藥物的應(yīng)用。3.權(quán)利要求1所述的一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物的制備方法，其特征是包括如下步驟(1)將粉碎干燥的白酒草全草用乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取，提取液過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物；(2)將膏狀物分散于相當(dāng)膏狀物質(zhì)量5-15倍的水中制成分散液，加入乙酸乙酯萃取3-5次，每次乙酸乙酯的加入量為分散液體積的0.8-2倍，再加入正丁醇萃取3-5次，每次正丁醇的加入量為分散液體積的0.8-2倍，正丁醇萃取液減壓濃縮得濃縮物；(3)將濃縮物溶解于相當(dāng)濃縮物質(zhì)量8-12倍的水中，過大孔吸附樹脂柱，用0%-60%的乙醇水溶液或甲醇水溶液梯度洗脫，收集40%-60%的乙醇或甲醇洗脫液，減壓濃縮得到總皂苷；(4)將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以體積比為7-4:3-6:0.3-0.6的氯仿-甲醇-水進(jìn)行梯度洗脫，共收集75個(gè)流分，合并流分43-55;(5)將流分43-55上反相ODS層析柱，用體積百分比為30%-100%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分11-15，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%-70%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集20個(gè)流分，合并流分6-9，上反相ODS層析柱，用體積百分比為50%-60%的甲醇水溶液梯度洗脫，共收集23個(gè)流分，合并流分19-21，經(jīng)制備高效液相色譜純化后得到一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種三萜皂苷類化合物的制備方法，其特征是所述步驟(1)為以粉碎干燥的白酒草全草為原料，加入原料6-12質(zhì)量倍的體積百分比濃度為50%-100%的乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取2-5次，每次l-4小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物。.5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種三萜皂苷類化合物的制備方法，其特征是所述步驟(1)為以粉碎干燥的白酒草全草為原料，加入原料10質(zhì)量倍的體積百分比濃度為60%-80%的乙醇水溶液或甲醇水溶液回流提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液減壓濃縮得膏狀物。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種三萜皂苷類化合物的制備方法，其特征是所述步驟(3)中所述大孔樹脂的型號(hào)為AB-8型、HP20型、HPD100型、HPD100A型、HPD300型、X陽5型、NKA-II型、D101型或DA201型。.全文摘要本發(fā)明公開了一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物及制備方法及用途，化合物的結(jié)構(gòu)為(I)，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于所提取分離的一種三萜皂苷類抗腫瘤化合物具有抗腫瘤活性，制備方法簡單。文檔編號(hào)A61K31/704GK101270143SQ20081005297公開日2008年9月24日申請(qǐng)日期2008年5月4日優(yōu)先權(quán)日2008年5月4日發(fā)明者楊鳳英,蘇艷芳申請(qǐng)人:天津大學(xué)