專利名稱：：一種藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，特別涉及一種預(yù)防或治療肝纖維化或早期肝硬化的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
：肝纖維化是在慢性肝損害基礎(chǔ)上導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)異常增生所致，它是發(fā)展成肝硬化的必經(jīng)階段，阻斷肝纖維化則有可能控制肝硬化的發(fā)生。而導(dǎo)致慢性肝損傷并有可能形成肝纖維化者，以慢性乙型肝炎最為常見。慢性乙型肝炎是常見的傳染性疾病，全球攜帶乙肝表面抗原(HBsAg)的人數(shù)超過2.8億。我國是乙型肝炎的高流行地區(qū)，有40%-60%的人群受過HBV感染，9.97%的人群(約一億二千萬人口)為HBsAg攜帶者。成人受到乙型肝炎病毒感染后，演變?yōu)槁愿窝渍呒s占10%-20%,從慢性肝炎可經(jīng)肝纖維化發(fā)展為肝硬化，一般只經(jīng)2-6年的時間。因此，探索防治肝纖維化的有效方法和藥物是臨床研究的重要任務(wù)。肝纖維化是慢性乙型肝炎的重要病理變化之一，是發(fā)展成肝硬化的必經(jīng)階段。因此，阻止和改善肝纖維化是攻克慢性肝炎、早期肝硬化的突破口，是當(dāng)今醫(yī)學(xué)有待攻克的難題。己故世界著名專家HansPopper曾經(jīng)指出誰能阻止或減緩肝纖維化的發(fā)生，誰就將治愈大多數(shù)慢性肝病?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)有從不同角度治療肝纖維化的報導(dǎo)，但臨床療效不甚理想，臨床研究也無實質(zhì)性進(jìn)展。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于提供一種藥物組合物；本發(fā)明另一個目的在于提供該組合物的制備方法；本發(fā)明第三個目的在于提供該制劑的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成為黃貧400600重量份丹參150300重量份莪術(shù)150300重量份白術(shù)150300重量份郁金100200重量份茵陳100200重量份柴胡100200重量份桃仁100200重量份北豆根50150重量份甘草50150重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥優(yōu)選組成為黃芪510重量份丹參200重量份莪術(shù)200重量份白術(shù)200重量份8郁金150重量份150重量份柴胡150重量份桃仁150重量份北豆根100重量份甘草100重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥優(yōu)選組成為黃芪450重量份丹參200重量份莪術(shù)200重量份白術(shù)200重量份郁金120重量份茵陳120重量份柴胡120重量份桃仁120重量份北豆根80重量份甘草80重量份。本發(fā)明藥物組合物的原料藥優(yōu)選組成為黃芪550重量份丹參250重量份莪術(shù)250重量份白術(shù)250重量份郁金180重量份茵陳180重量份柴胡180重量份桃仁180重量份北豆根120重量份甘草120重量份。本發(fā)明藥物組合物加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。本發(fā)明藥物組合物還可以由如下方法制備取莪術(shù)、白術(shù)、郁金提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液A另器保存，藥渣A備用；將丹參加入48倍量6090%乙醇提取24次，每次13小時，合并提取液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，于408(TC烘干，得干膏粉A，藥渣B備用；將黃芪加水提取24次，時間為每次13小時，用水量為每次810倍，合并煎液，濾過，濾液濃縮至每體積份相當(dāng)于O.20.8重量份藥材，以3000轉(zhuǎn)/分離心，除去部分雜質(zhì)，上清液濃縮至稠膏A備用；其余柴胡、桃仁、茵陳、北豆根、甘草五味藥與丹參藥渣B及莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味藥的藥渣A合并，加水煎煮24次，用水量為每次810倍，時間為每次13小時，合并煎液，過濾，濾液與莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味的水溶液A合并，濃縮至在6CTC時測得相對密度為1.01.5，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏B，稠膏B與黃芪水提取物稠膏A合并，于408(TC烘干，得干膏粉B備用；莪術(shù)、白術(shù)、郁金揮發(fā)油制成e-CD包合物，將上述干膏粉A與干膏粉B混合，粉碎成60100目細(xì)粉并與揮發(fā)油e-CD包合物混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床或藥學(xué)上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。本發(fā)明藥物組合物的制備方法優(yōu)選為9取莪術(shù)、白術(shù)、郁金提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液A另器保存，藥渣A備用；將丹參加入6倍量80%乙醇提取3次，每次1小時，合并3次提取液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏狀，于60'C烘干，得干膏粉A，藥渣B備用；將黃芪加水提取3次，時間分別為2、1、l小時，用水量分別為IO、8、8倍，合并煎液，濾過，濾液濃縮至每體積份相當(dāng)于O.5重量份藥材，以3000轉(zhuǎn)/分離心，除去部分雜質(zhì)，上清液濃縮至稠膏A備用；其余柴胡、桃仁、茵陳、北豆根、甘草五味藥與丹參藥渣B及莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味藥的藥渣A合并，加水煎煮3次，用水量分別為IO、8、8倍，時間分別為2、1、l小時，合并3次煎液，過濾，濾液與莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味的水溶液A合并，濃縮至在60'C時測得相對密度為1.13，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏稠膏B，稠膏B與黃芪水提取物稠膏A合并于6(TC烘干，得干膏粉B備用；莪術(shù)、白術(shù)、郁金揮發(fā)油制成e-CD包合物，將上述干膏粉A與干膏粉B混合，粉碎成80目細(xì)粉并與揮發(fā)油e-CD包合物混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成臨床或藥學(xué)上可接受的片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。本發(fā)明藥物組合物制劑的質(zhì)量控制方法包括如下含量測定和/或如下一種或幾種鑒別含量測定取本發(fā)明藥物組合物制劑38重量份，精密稱定，置索氏提取器中，加4060體積份13%氫氧化鉀甲醇溶液，加熱回流提取48小時，再冷浸過夜，提取液減壓回收至干，殘渣加1030體積份水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分別為3040體積份，合并氯仿下丁醇=13:0.5l的萃取液，用13%磷酸二氫鉀水溶液5080體積份洗滌，棄去水相，有機(jī)相減壓蒸干，加入13體積份甲醇溶液定溶，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲甙對照品，加甲醇制成1體積份含0.0010.002重量份的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液0.0010.003體積份，對照品溶液0.0010.003體積份與0.0020.005體積份，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，常溫下將氯仿甲醇水=6080:2030:510比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴515%濃硫酸乙醇溶液，再80120。C下加熱38分鐘，取出，再薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用透明膠紙固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長入s:530nm,入R=650nm，測量供試品吸收度積分值和對照品吸收度積分值，計算，即得，本發(fā)明藥物組合物制劑按日服用劑量計含黃芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg;鑒別A、按照含量測定項下制備供試品溶液，取對照品黃芪甲甙加甲醇制成l體積份含0.0010.003重量份的溶液為對照品溶液；另取黃芪藥材13重量份，置沙氏提取器中，力[]13%氫氧化鉀甲醇溶液提取610小時后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水1030體積份，再以氯仿正丁醇=13:0.51.5比例混合液萃取三次分別為40、30、30體積份，合并萃取液，加13%的磷酸二氫鉀溶液60體積份洗滌，棄去水相，再以60體積份水洗滌一次，有機(jī)相回收至干，加13體積份甲醇溶解，制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.0010.002體積份，分別點于同一塊15cmX10cm硅膠G鋁板，常溫下將氯仿甲醇水=6080:2030:510比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴515%濃硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取本發(fā)明藥物組合物制劑810重量份置于圓底燒瓶中，加水200300體積份加熱至沸騰提取揮發(fā)油，約13小時后，收集揮發(fā)油，用石油醚洗滌揮發(fā)油提取器管壁，并加入到揮發(fā)油中，作為供試品；另取白術(shù)對照藥材13重量份，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材供試品溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.0010.002體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.1為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴13%香草醛硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取本發(fā)明藥物組合物制劑48重量份，置三角瓶中，加入乙醚3050體積份振蕩，靜置12小時后，過濾，回收乙醚提取溶液至干，殘渣加13體積份乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液備用；另取丹參對照藥材1重量份，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材溶液，做對照藥材供試液備用稱取丹參酮Ha對照品0.0010.003重量份，加乙酸乙酯溶液制成濃度為每體積份含0.00080.0012重量份丹參酮IIa的對照品溶液備用；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.0030.008體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以苯乙酸乙酯=910:0.5l的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；D、取本發(fā)明藥物組合物制劑810重量份，置錐形瓶中，加入90100%甲醇4060體積份，用功率150W，頻率20kHz的超聲波振蕩2050分鐘后，過濾，取續(xù)濾液2040體積份，減壓回收溶劑置干，殘渣加蒸餾水1030體積份微熱溶解，用水飽和正丁醇萃取三次，體積分別為1020體積份，合并正丁醇萃取液，再用13%氫氧化鉀洗滌正丁醇萃取液兩次，體積分別為1020體積份，棄去堿液，正丁醇萃取液用正丁醇飽和水溶液洗至中性，棄去水層，減壓回收正丁醇萃取液干，殘渣加90100%乙醇1~3體積份溶解，作為供試品溶液；另取柴胡藥材1重量份，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.0040.008體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇水=58:25:13的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴515%硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；E、取本發(fā)明藥物組合物制劑38重量份，置三角瓶中，加入乙醚3050體積份振蕩，靜置12小時后，過濾，棄去醚層，加入甲醇2040體積份，加熱回流12小時，過濾，回收甲醇溶液至干，殘渣加水3050體積份使溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次1030體積份，合并正丁醇溶液，用水洗滌3次，每次1030體積份，將正丁醇層蒸干，殘渣加甲醇13體積份溶解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材13重量份，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.0030.008體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇甲酸=28:13:0.10.3的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴3080%硫酸甲醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。本發(fā)明藥物組合物制劑的質(zhì)量控制方法優(yōu)選為如下含量測定和/或鑒別含量測定取本發(fā)明藥物組合物制劑5重量份，精密稱定，置索氏提取器中，加50體積份2%氫氧化鉀甲醇溶液，加熱回流提取6小時，再冷浸過夜，提取液減壓回收至干，殘渣加15體積份水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分別為40、30、30體積份，合并氯仿下丁醇=2:1的萃取液，用1%磷酸二氫鉀水溶液60體積份洗滌，棄去水相，有機(jī)相減壓蒸干，加入1體積份甲醇溶液定溶，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲甙對照品，加甲醇制成1體積份含0.001重量份的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液0.001體積份，對照品溶液0.002體積份與0.004體積份，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，常溫下將氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴10%濃硫酸乙醇溶液，再10(TC下加熱5分鐘，取出，再薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用透明膠紙固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長入s-530nm，入R=650nm，測量供試品吸收度積分值和對照品吸收度積分值，計算，即得，本發(fā)明藥物組合物制劑按日服用劑量計含黃芪甲式C44H6804，不得低于2.700mg;鑒別A、按照含量測定項下制備供試品溶液，取對照品黃芪甲甙加甲醇制成l體積份含O.OOl重量份的溶液為對照品溶液；另取黃芪藥材1.5重量份，置沙氏提取器中，加2%氫氧化鉀甲醇溶液提取8小時后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水15體積份，再以氯仿正丁醇=2:1比例混合液萃取三次分別為40、30、30體積份，合并萃取液，加1%的磷酸二氫鉀溶液60體積份洗滌，棄去水相，再以60體積份水洗滌一次，有機(jī)相回收至干，加l體積份甲醇溶解，制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.002體積份，分別點于同一塊15cmX10cm硅膠G鋁板，常溫下將氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴10%濃硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取本發(fā)明藥物組合物制劑9重量份置于圓底燒瓶中，加水250體積份加熱至沸騰提取揮發(fā)油，約12小時后，收集揮發(fā)油，用石油醚洗滌揮發(fā)油提取器管壁，并加入到揮發(fā)油中，作為供試品；另取白術(shù)對照藥材2重量份，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材供試品溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.002體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以石油醚乙酸乙酯=5:O.l為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴1%香草醛硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取本發(fā)明藥物組合物制劑6重量份，置三角瓶中，加入乙醚40體積份振蕩，靜置1小時后，過濾，回收乙醚提取溶液至干，殘渣加2體積份乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液備用；另取丹參對照藥材1重量份，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材溶液，做對照藥材供試液備用；稱取丹參酮IIa對照品0.002重量份，加乙酸乙酯溶液制成濃度為每體積份含O.001重量份丹參酮IIa的對照品溶液備用；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.005體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以苯乙酸乙酯=9.5:0.5的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；D、取本發(fā)明藥物組合物制劑9重量份，置錐形瓶中，加入95%甲醇50體積份，用功率150W，頻率20kHz的超聲波振蕩40分鐘后，過濾，取續(xù)濾液30體積份，減壓回收溶劑置千，殘渣加蒸餾水15體積份微熱溶解，用水飽和正丁醇萃取三次，體積分別為20、20、IO體積份，合并正丁醇萃取液，再用1%氫氧化鉀洗滌正丁醇萃取液兩次，體積分別為20、20體積份，棄去堿液，正丁醇萃取液用正丁醇飽和水溶液洗至中性，棄去水層，減壓回收正丁醇萃取液干，殘渣加95%乙醇1體積份溶解，作為供試品溶液；另取柴胡對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.006體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇水=7:3:1的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；E、取本發(fā)明藥物組合物制劑5重量份，置三角瓶中，加入乙醚40體積份振蕩，靜置1小時后，過濾，棄去醚層，加入甲醇30體積份，加熱回流l小時，過濾，回收甲醇溶液至干，殘渣加水40體積份使溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20體積份，合并正丁醇溶液，用水洗滌3次，每次20體積份，將正丁醇層蒸干，殘渣加甲醇l體積份溶解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材1重量份，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.005體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇甲酸=5:1:0.1的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴50%硫酸甲醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。本發(fā)明所述的重量份與體積份的比例為克/毫升。原料藥中茵陳為菊科植物濱蒿或茵陳蒿的干燥地上部分，應(yīng)符合2000年版一部中華人民共和國藥典第192頁茵陳項下有關(guān)規(guī)定。原料藥中北豆根為防己科植物蝙蝠葛的干燥根莖，應(yīng)符合2000版一部中國藥典第74頁北豆根項下的有關(guān)規(guī)定。原料藥中甘草為豆科植物甘草脹果甘草或光果甘草，符合2000年版一部中華人民共和國藥典第65頁甘草項下有關(guān)規(guī)定。原料藥中黃芪藥材按中國藥典黃芪項下含量測定法測定三批藥材黃芪甲甙含量為0.114%、0.113%、0.043%。應(yīng)用人血白蛋白復(fù)制大鼠肝纖維化模型，觀察本發(fā)明顆粒對該模型的治療作用，療程為3個月和6個月。療程結(jié)束時取肝免疫組化染色觀察肝組織I、III、IV型膠原的變化。秋水仙堿和本發(fā)明顆粒均可使I、III、IV型膠原降解，但以后者更明顯。本發(fā)明顆粒能促使i、m型膠原降解，尤對I型膠原的降解更加明顯，1個月療程和3個月療程結(jié)束時，與模型組比較均有顯著性差異；本發(fā)明顆粒亦能促進(jìn)IV型膠原的降解，減少IV型膠原的含量，具有重要的臨床意義。經(jīng)大鼠試驗表明，分別于第l個月、第3個月療程結(jié)束時，股動脈取血3-5ml檢測d-II聚體、at-m及紅細(xì)胞變形能力。結(jié)果與模型組及對照組相比，本發(fā)明顆粒能明顯改善高凝狀態(tài)，不同療程均能提高紅細(xì)胞變形能力，并使d-n聚體、at-ni降低，且有量效和時效相關(guān)性。說明該藥有較好的活血化瘀作用，尤其是改善紅細(xì)胞變形能力的作用，對肝纖維化時肝內(nèi)瘀血狀態(tài)能起到通暢血脈的功效。14用強(qiáng)的松建立小鼠免疫功能低下模型及在小鼠正常免疫狀態(tài)下觀察本發(fā)明顆粒對小鼠免疫功能的影響，結(jié)果本發(fā)明顆粒對正常小鼠及應(yīng)用強(qiáng)的松導(dǎo)致小鼠免疫功能低下時，均可在一定程度上提高小鼠的NK細(xì)胞活性及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，但對吞噬細(xì)胞的吞噬作用影響不大。在正常小鼠，本發(fā)明顆粒降低TNF-a、IL-2活性，而對免疫功能低下狀態(tài)的TNF-a、IL-2活性無明顯影響。下面實驗例用于進(jìn)一步說明但不限于本發(fā)明。實驗例l黃芪的提取條件考察A.提取溶媒的選擇取黃芪飲片20g，分別以50%乙醇提取、70%乙醇提取、水提取和水提取50%醇沉淀除雜質(zhì)四種方法進(jìn)行提取，提取液采用薄層掃描法(中國藥典1995年版，一部，第272頁)測定四種方法提取液中黃芪甲甙的含量。結(jié)果結(jié)果分析，水及50%乙醇提取的樣品中黃芪甲甙含量高，而且數(shù)據(jù)很接近。而采用水提50%乙醇沉淀和70%乙醇提取的樣品黃芪甲甙含量均較低，故宜采用水或50%乙醇提取。因以水提取除能使黃芪甲甙充分提出外，還能最大限度地保留黃芪多糖，故決定采用水提取的方法。B.黃芪煎煮條件的考察取黃芪飲片10g，共9份，按因素水平和試驗條件安排實驗，分別加水浸泡1小時后，補(bǔ)加水至所需量，加熱提取，提取液合并，濾過，水浴濃縮至50ml以下，放置至室溫，轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，以水稀釋至刻度。按薄層掃描法測定黃芪甲甙的含量。并對結(jié)果進(jìn)行方差分析?？芍珹因素(提取時間)對結(jié)果無顯著性影響，A3為最佳條件；C因素(提取次數(shù))對結(jié)果有顯著影響，"為最佳條件；D因素(加水量)對結(jié)果無顯著性影響，D3為最佳條件。(由于D因素的離差平方和與空白項相近，故與空白項合并作為誤差處理)其最佳工藝為A3C3D3,也即加水26倍(10，8，8)加熱提取3次，第一次2小時，第2、3次各1小時。實驗例2丹參的最佳提取條件丹參的化學(xué)成分包括脂溶性成分和水溶性成分兩部分。脂溶性成分如丹參酮類、丹參素類、異丹參酮類等，水溶性成分如原兒茶醛類、原兒茶酸等。藥理實驗證明，丹參酮IlA等脂溶性成分具有明顯的抑制凝血功能，說明是活血化瘀的活性成分。故采用不同濃度的乙醇分別提取丹參，以丹參酮IlA為指標(biāo)，選擇提取丹參脂溶性成分的最適合的醇濃度。再采用正交設(shè)計方案，選擇丹參脂溶性成分的最佳提取條件。A.乙醇濃度的選擇取一定量的丹參，分別以60%、70%、80%和95%乙醇提取，以丹參酮IlA為指標(biāo)，選15擇提取的最佳濃度可見，以80%乙醇提取者，丹參嗣IIa含量最高，提取率也超過了60%，故采用80%乙醇提取。B.丹參80%乙醇提取正交試驗稱取丹參飲片4份，每份5.0g，用80%乙醇提取，提取液濾過，放至室溫，定容至100ml容量瓶中，測定各樣品中丹參酮IIa的含量，結(jié)果可知，A因素(乙醇用量)和C因素(提取次數(shù))是影響丹參酮nA提取量的主要因素，本組樣品中，2號樣品的丹參酮Ha提取量最高(A^C2)，故選用條件為以80%乙醇6倍量提取3次，每次1小時。實驗例3莪術(shù)、郁金、白術(shù)有效成分的提取莪術(shù)、郁金、白術(shù)三味藥含揮發(fā)油。莪術(shù)為活血化瘀藥，現(xiàn)代研究表明莪術(shù)注射液具有抗癌作用，其主要有效成分為揮發(fā)油。郁金為理氣活血藥，具有行氣化瘀，利膽退黃等功效，其主要有效成分為揮發(fā)油。白術(shù)具有健脾益氣燥濕利水等作用?，F(xiàn)代研究表明白術(shù)煎劑具有保肝，利膽作用。所以，上述三味藥，先提取揮發(fā)油，再收集其水煎液與群藥一起處理，以保證療效。莪術(shù)、郁金、白術(shù)揮發(fā)油提取條件的考察取莪術(shù)、郁金、白術(shù)飲片各30g，4目顆粒各30g和8目顆粒各30g，分別加6倍水，分別浸泡0.5、1、1.5小時后，提取揮發(fā)油，記錄不同提取時間的揮發(fā)油得量。結(jié)果.-藥材的浸泡時間，對揮發(fā)油提取量影響不大，最后一組實驗中還出現(xiàn)浸泡時間長(1.5小時)揮發(fā)油提取緩慢的現(xiàn)象。而藥材的粉碎度對揮發(fā)油提取的速度和提取的量影響較大。隨著提取時間的延長，粉碎較細(xì)的8目粉，不僅提取快，而且提取的量多，提取4小時就已經(jīng)提得5.5ml，而飲片和4目粉在相同條件下均比8目粉提取的速度慢且提得量少。所以，三味藥提取揮發(fā)油的條件定為采用8目粉，倍量水浸泡30分鐘提取6小時為宜。實驗例4處方中藥煎煮方法的考察除前述幾種藥物外，處方中還有柴胡、茵陳、桃仁、北豆根和甘草。柴胡為舒肝理氣藥，其主要成分為皂甙，揮發(fā)油、有機(jī)酸、柴胡醇等?，F(xiàn)代研究表明，柴胡皂甙具有明顯的解熱鎮(zhèn)痛和抗炎作用。采用水煎法皂甙可以煎出，故與群藥合煎提取。茵陳為清利肝膽的要藥，具有清濕熱退黃疸的功效。茵陳的主要成分為香豆素，黃酮類，香豆酸等，含少量的揮發(fā)油。由于柴胡茵陳含揮發(fā)性成分量少體輕，故未單獨提取揮發(fā)油，同時茵陳的有效成分并不是非常明確所以與柴胡一起采用傳統(tǒng)的水煎法提取。北豆根為方中佐藥，為清熱解毒藥，其主要有效成分為生物堿，也采用水煮的傳統(tǒng)提取方法處理。桃仁為活血化瘀藥，其主要成分為脂肪油、黃酮、苦杏仁甙等，藥理實驗表明，桃仁能明顯增加動物腦血流量改善微循環(huán)，特別對肝表面微循環(huán)有改善作用，并能促進(jìn)膽汁分16泌等，因無明確的有效成分而水煎液藥理作用明顯，故采用與群藥水煎的方法提取。甘草為方中使藥，其主要有效成分為甘草皂甙，現(xiàn)代研究表明具有保肝，抗癌等作用，也與群藥同煎煮后，采用適當(dāng)濃度的乙醇沉淀，除去部分雜質(zhì)。采用正交設(shè)計安排群藥提取條件考察實驗按處方取群藥適量，，采用上述正交設(shè)計的條件分9組進(jìn)行實驗，并分別于水浴上濃縮至100ml以內(nèi)后，放至室溫，轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，并以水稀釋至刻度，搖勻備用。將上述樣品充分搖勻，分別精密吸取藥液20ml，均以水飽和的正丁醇萃取3次(20ml、10ral、10ml)，至萃取液基本無色后，回收正丁醇，殘留物恒重，結(jié)果可見，A因素(提取時間)對結(jié)果無顯著性影響，夂為最佳條件；B因素(提取次數(shù))對結(jié)果有極顯著影響，以B3為最佳；C因素(加水量)對結(jié)果無明顯影響，確定D3為最佳。故最佳條件為A3B3C3，也即加水提取3次，提取時間分別為2、1、l小時，用水倍數(shù)分別為12、10、8倍。實驗例5煎煮液醇沉條件的選擇取柴胡、茵陳、北豆根、桃仁、甘草五味藥共21克(一付藥量)，按最佳實驗條件煎煮，煎液分別于水浴上濃縮至每ml相當(dāng)于原生藥l克(21ml)，分別加95%乙醇，使含醇量為50%、60%、70%、80%冷藏，靜置過夜，過濾后分別回收乙醇，并濃縮至稠膏狀，于8(TC條件下干燥后，按95版藥典的規(guī)定于105'C干燥3小時，于干燥器中放至室溫后稱重，實驗結(jié)果出膏率最高者為50%醇沉者，其次是60%乙醇沉淀樣品，從生產(chǎn)效率角度考慮，以50%乙醇沉淀過濾很慢，而以60%乙醇沉淀，過濾速度快得多，同時根據(jù)前面分析，群藥的有效成分以50%及60%乙醇都能溶出，而除雜質(zhì)則是60%乙醇效果更好些，所以選用60%乙醇沉淀為宜。實驗例6本發(fā)明藥物組合物門的20例肝纖維化患者進(jìn)行了如下觀察(l)測定血清IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體C3，并與健康志愿者IO人進(jìn)行對比。結(jié)果患者組IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體C3含量(g/L)的平均值分別為16.38、1.85、2.92、0.43:健康組IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體C3含量(g/L)的平均值分別為8.91、0.89、1.67、1.31。兩組比較P<0.01,說明患者組免疫功能水平較低?；颊呓M經(jīng)服用本發(fā)明顆粒劑，治療3個月后，復(fù)查血清IgG、IgA、IgM、補(bǔ)體C3含量(g/L)的平均值分別為:12.61、1.22、2.03、0.78.與療前比較P〈0.05，有顯著性差異。說明本發(fā)明顆粒劑有提高機(jī)體免疫力的功能。(2)S0D測定情況健康組血清總SOD(Nu/ml)均值為19.4土4.3;患者總SOD(Nu/ml)均值療前為14.78±7.13，療后為22.64±3.39(服藥3月)，治療前后比較P<0.05，差異顯著。說明肝纖維化患者經(jīng)本藥治療后機(jī)體代謝狀態(tài)得以改善,清除體內(nèi)有毒代謝產(chǎn)物自由基的能力提高。實驗例7采用分層隨機(jī)雙盲方法觀察本發(fā)明顆粒治療乙肝肝纖維化的臨床效果通過對209例乙型肝炎肝纖維化為期3個月、6個月的治療觀察，并與西藥秋水仙堿及中成藥復(fù)方鱉甲軟肝片對照，結(jié)果如下臨床癥狀改善根據(jù)對主要癥狀評分統(tǒng)計，結(jié)果治療組臨床癥狀改善3個月總有效率為76.47%，6個月總有效率為92.65%,較對照組的53.03%和63.64%為優(yōu)(P〈0.01)。對主要癥狀如腹脹、納呆、乏力、善太息、大便異常的改善效果比西藥對照組優(yōu)，其中對善太息、腹脹、納呆、大便異常的效果還優(yōu)于對比的中成藥。在改善患者舌象方面，本發(fā)明顆粒有明顯的優(yōu)勢，尤其是對舌質(zhì)紅、黃膩苔的消除要優(yōu)于兩種對照藥。說明本發(fā)明顆粒有較好的消除和緩解乙肝肝纖維化患者臨床癥狀的作用。改善肝功能通過對治療前后肝功能相關(guān)指標(biāo)的分析，本發(fā)明顆粒改善乙肝肝纖維化患者肝功能的效果較好，尤其是對ALT的影響明顯，優(yōu)于對照的西藥組(P〈0.01)，但對AST、ALB、GLB、A/G的影響不大。對乙肝病毒的影響經(jīng)半年治療，本發(fā)明顆粒組HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率為47.22%,HBeAg的陰轉(zhuǎn)率為35.13%,HBsAg的陰轉(zhuǎn)率為25.00%。西藥組HBV-DNA陰轉(zhuǎn)率為18.18%，HBeAg的陰轉(zhuǎn)率為12.50%，HBsAg的陰轉(zhuǎn)率為12.50%。對比的中成藥的抗乙肝病毒作用也不明顯。說明本發(fā)明顆粒有一定的抗乙肝病毒作用。逆轉(zhuǎn)肝纖維化治療前后對比觀察，本發(fā)明顆?？擅黠@減輕肝纖維化的程度，對早期的肝纖維化如S。S2期，有的可達(dá)到完全逆轉(zhuǎn)。對于已進(jìn)入早期肝硬化的S4期，亦可使纖維間隔縮小。從肝穿病理組織學(xué)比較，炎癥活動度積分治療組療前7.53土2.21，療后為4.56±3.47,炎癥減輕明顯，與對照組比較P〈0.01;肝纖維化程度積分療前為6.54±2.78，療后為4.12±2.86,肝纖維化減輕，與對照組比較P<0.01。其抗肝纖維化作用優(yōu)于對照藥物組。實驗例8本發(fā)明顆粒對大鼠四氯化碳肝纖維化模型的預(yù)防作用大鼠購回后適應(yīng)性喂養(yǎng)l周，然后按性別隨機(jī)分成6組，分組及預(yù)防用藥如下。A:模型組(20只)，各鼠灌服等容積蒸餾水；B:秋水仙堿預(yù)防對照組(10只)，每日灌服秋水仙堿1次，用量為250ug/kg;C:本發(fā)明顆粒預(yù)防大劑量組(10只)，每日灌服本發(fā)明顆粒1次，用量為6g/kg(相當(dāng)臨床用藥量的20倍)；D:本發(fā)明顆粒預(yù)防中劑量組(IO只)，每日灌服本發(fā)明顆粒l次，用量為3g/kg(相當(dāng)臨床用藥量的10倍)；E:本發(fā)明顆粒預(yù)防小劑量組(IO只)，每日灌服本發(fā)明顆粒1次，用量為1.5g/kg(相當(dāng)臨床用藥量的5倍)；F:正常對照組(9只)，同等條件下喂養(yǎng),不造模,不給預(yù)防藥。(一)對實驗過程中動物表現(xiàn)及死亡情況的觀察方法:造模前測體重，此后，每次注射CCl4前均測體重，以了解造模期間大鼠體重的變化。實驗期間仔細(xì)觀察大鼠的活動度、毛色、飲食等情況，以了解大鼠的健康狀況。18結(jié)果模型組大鼠在CCl4攻擊l周后變得毛枯無澤，飲食減少，多數(shù)伴見腹瀉，體重增加減少，有的出現(xiàn)負(fù)增長。秋水仙堿預(yù)防組及本發(fā)明顆粒預(yù)防組均較模型組輕，尤以本發(fā)明顆粒大劑量組最輕。實驗期間，各組大鼠死亡情況見表l。表l各組大鼠死亡情況分組開始實驗動物數(shù)死亡數(shù)死亡率(％)模型組(A)20840.00秋水仙堿組(B)10330.00大劑量組(c)10110.00中劑量組(D)10220.00小劑量組(E)10220.00正常組(F)900(二)肝臟大體形態(tài)觀察方法剖取肝臟后，觀察新鮮肝臟的外形、顏色等變化，并準(zhǔn)確稱其重量，然后計算肝與體重的比值。結(jié)果正常大鼠肝臟表面光滑，質(zhì)軟，顏色暗紅。模型組有5只肝臟顏色變成灰色，其中2只顏色呈土黃色，l只肝表面見白色小囊腫，部分肝與隔肌粘連。秋水仙堿預(yù)防組有2只大鼠肝呈灰黃色，2只鼠肝表面可見結(jié)節(jié)。本發(fā)明顆粒預(yù)防大劑量組有1只鼠肝呈灰色，l只肝表面見白色囊腫；中劑量組有3只大鼠肝呈灰色，并見白色囊腫；小劑量組有3只大鼠肝呈灰色，其中2只肝表面見結(jié)節(jié)再生。各組肝重量及其與體重之比見表3-2。預(yù)防各組大鼠的肝重及肝重與體重之比均大于正常大鼠(均P<0.05)，但預(yù)防各組間變化無規(guī)律性(P〉0.05)表2各組肝重及肝重與體重之比比較(X土s^組別動物數(shù)肝重量(g)肝占體重之比(%)模型組1113.94±1.745.99±0.58秋水仙堿組715.24±3.356.54±1.07大劑組912.95±1.895.74±0.57中劑組815.29±2.706.25±0.79小劑組814.23±1.515.87±0.56正常組99.68±1.053.78±0.32表示均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差，其顯著性檢驗均用t檢驗，下同。(三)肝組織HE染色光鏡觀察方法各鼠均在肝右葉取材，10%福爾馬林固定，石臘包埋，連續(xù)切片，切片厚m，HE染色，光鏡下觀察肝損傷及纖維化程度。結(jié)果l.正常大鼠肝細(xì)胞以中央靜脈為中心向周圍呈放射狀排列，肝細(xì)胞呈多面體形，胞質(zhì)內(nèi)各種細(xì)胞器豐富而發(fā)達(dá)，肝細(xì)胞核大而園，位于細(xì)胞中央，匯管區(qū)無擴(kuò)張，無病理性膠原生成。2.模型組大鼠各鼠均見肝細(xì)胞明顯濁腫、壞死、嚴(yán)重脂肪變性，匯管區(qū)擴(kuò)大，伴明顯的纖維增生，并向周圍延伸，有的包繞整個肝小葉，達(dá)肝纖維化III級者3只。說明模型的復(fù)制是成功的。3.秋水仙堿預(yù)防組各鼠均見肝細(xì)胞濁腫、脂肪變性，與模型組比較無明顯差別，其中6只還可見肝點狀、片狀壞死。匯管區(qū)擴(kuò)大，纖維增生明顯，并向周圍延伸，其中達(dá)肝纖維化III級者2只。4.本發(fā)明顆粒預(yù)防各組各鼠均見不同程度的肝細(xì)胞濁腫、脂肪變性，大劑量組僅l只，中劑量組3只，小劑量組5只大鼠可見肝壞死，但程度均較模型組輕。各鼠均有不同程度地肝纖維化，但多為1-2級，達(dá)III級者小劑量組2只。各組肝損傷程度及肝纖維化情況見表3。從表中可知，本發(fā)明顆粒大劑量組肝損傷指數(shù)明顯低于模型組(P〈0.01)。表3本發(fā)明顆粒對大鼠肝損傷及肝纖維化的影響組別動物肝損傷指數(shù)肝纖維形成肝纖維化程度(只)數(shù)(X土SD)率(%)o級l級2級3級模型組116.91±0.941000263秋水仙堿組76.14±1.071000232大劑組95.00±2.45*100020中劑組86.88±1.251000440小劑組86.93±1,131000332正常組9/09000與模型組(A)比較*P<0.01(四)肝組織Masson染色觀察及圖像分析方法新鮮肝標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林固定，石臘包埋，連續(xù)切片，切片厚4um，按Masson法染色，用MPEAS-500型圖像分析儀測量肝膠原含量，并通過計算機(jī)算出膠原占肝之百分比。在200倍光鏡下選擇纖維化相對多的地方測量，每張片測5個視野，其平均值為該樣本的百分比。結(jié)果在Masson染色下，背景呈紅色。肝膠原染成藍(lán)色，正常大鼠肝內(nèi)僅在匯管區(qū)或中央靜脈周圍可見少許藍(lán)色纖維染色，色淡而細(xì)為其特點。模型組可見匯管區(qū)擴(kuò)張，纖維由匯管區(qū)向周圍延伸，甚至包繞整個肝小葉形成假小葉，纖維粗大且染色深。秋水仙堿預(yù)防組肝纖維化與模型組比較無明顯差別。本發(fā)明顆粒預(yù)防組肝纖維化較模型組稍輕，尤以大劑量組肝纖維化程度最輕。各組肝纖維占肝之百分比見表4。秋水仙堿組與模型組比較，膠原含量減少(P〈0.05)，本發(fā)明顆粒預(yù)防各組均明顯低于模型組(P〈0.01-P〈0.001)。表4各組膠原相對含量圖像分析結(jié)果(X土s)組別動物數(shù)膠原相對含量(％)模型組118.78±5.58秋水仙堿組76.52±2.18*1大劑組92.19±1.63**中劑組82.95±0.97**小劑組84.33±2.72*正常組91.19±0.64與模型組比較*P〈0.01**P〈0.001ttP〈0.05(五)對肝功能的影響方法各動物處死前經(jīng)股動脈取血3-4ml，離心后取血清酶法檢測丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(r-GT)，雙縮脲法檢測總蛋白(TP)、溴甲酚綠法檢測白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、并計算白蛋白/球蛋白比值(A/G比值)。結(jié)果本發(fā)明顆粒大劑量組能明顯降低ALT及r-GT，與模型組比較P<0.01，但對蛋白的影響與其它各組比較差別無顯著性(均P〉0.05)。表5本發(fā)明顆粒對CCL4肝纖維化模型大鼠肝功能的影響(又士s)組另廿_動物數(shù)_ALT(IU/L)_r-GT(感)模型組11153.91±87.4858.62±17.33秋水仙堿組7142.00±103.0152.78±20.26大劑組963.00土52.43**40.73±16.83*中劑組8106.75±67.3749.84±22.17小劑組8143.25±79.9253.61±18.47正常組_^_44.44±13.99_36.08±16.56與模型組比較*P〈0.05**P<0.01表6本發(fā)明顆粒對CCL4肝纖維化模型大鼠蛋白的影響(5±s)組別_動物數(shù)T-P(g/dl)ALB(g/dl)GLB(g/dl)A/G模型組117.93±0.423.37±0.234.55±0.380.75±0.10秋水仙堿組77.66±0.483.23±0.254.43±0.370.73±0.10大劑組98.20±0.273.40±0.524.60±0.490.70±0.13中劑組88.IO土O.453.30±0.524.80±0.320.70±0.09小劑組87.90±0.823.31±0,244.79±0.480.70±0.11正常組98.20±0.563.79±0.124.63±0.520.83±0.11(六)血清肝纖維化相關(guān)指標(biāo)的檢測21方法各動物處死前經(jīng)股動脈取血3-4ml，離心后取血清檢測m型膠原前肽(PIIIP)、IV型膠原(IV-C)和層粘連蛋白(LN)的含量。三種試劑盒均由荷蘭Monosan公司生產(chǎn)，上海森雄實業(yè)有限公司分裝，均按藥盒說明書方法操作。結(jié)果見表7。表7本發(fā)明顆粒對實驗大鼠血清PIIIP、IV-C和LN含量的影響(X±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>四氯化碳是一種選擇性肝臟毒物，導(dǎo)致肝細(xì)胞急性損傷，甚而壞死。肝細(xì)胞長期反復(fù)損傷以后，肝內(nèi)網(wǎng)狀支架塌陷、聚擾、粘連，同時成纖維細(xì)胞生長因子生成過多，促使病理性膠原增生，膠原纖維的大量增生并沉積于肝臟即形成肝纖維化模型。本實驗?zāi)Ｐ痛笫蟮母尾±頇z査提示纖維組織明顯增生，并向肝小葉內(nèi)伸展，部分還形成假小葉，同時肝細(xì)胞伴不同程度的點狀、灶狀壞死，脂肪變性，說明肝纖維化模型復(fù)制是成功的。大鼠造模的同時給予本發(fā)明顆粒預(yù)防，結(jié)果三個劑量組均能降低實驗大鼠的死亡率，保護(hù)肝功能，減輕肝臟的損傷程度及肝纖維化程度，其中以大劑量組的作用更明顯，與模型組比較具有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)，說明本發(fā)明顆粒預(yù)防ccl4肝纖維化模型是有效的，這就為臨床應(yīng)用該藥治療肝纖維化提供了實驗依據(jù)。從本實驗中可以看出，秋水仙堿亦有一定的抗肝纖維化作用，但其作用較弱。實驗例8本發(fā)明顆粒對大鼠白蛋白肝纖維化模型的預(yù)防作用將白蛋白抗體陽性大鼠隨機(jī)分成5組①模型組(18只)，各鼠灌服等容積蒸餾水；②秋水仙堿預(yù)防對照組(10只)，每日灌服秋水仙堿l次，用量為250ug/kg;③本發(fā)明顆粒預(yù)防大、中、小劑量組(每組均10只)，每日灌服本發(fā)明顆粒1次，用量分別為6g/kg、3g/kg和1.5g/kg(各相當(dāng)于臨床用藥量的20倍、10倍和5倍)，另以5只正常大鼠(不經(jīng)致敏階段)同等條件下喂養(yǎng)作為對照。(一)對實驗過程中動物表現(xiàn)及死亡情況的觀察結(jié)果每次尾靜脈注射后，大鼠均呈過敏性休克樣反應(yīng)，表現(xiàn)為呼吸急促俯伏不起,側(cè)倒或仰臥，多數(shù)在30分鐘內(nèi)恢復(fù)正常，各組大鼠恢復(fù)時間似無差別，但也有少數(shù)動物因此而死亡，動物死亡多在第1、2周，尤其是第1周的死亡率最高，各組死亡率見表3-8。整個實驗期間，模型組及本發(fā)明顆粒小劑量組大鼠略顯毛枯無澤，活動度減少，各組及正常組體重增長無明顯差別。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>(二)肝臟大體形態(tài)觀察結(jié)果正常大鼠肝臟表面光滑、質(zhì)軟、顏色暗紅。模型組及各預(yù)防組大鼠肝均表面光滑、無結(jié)節(jié)，多數(shù)顏色暗紅，其中模型組4只，秋水仙堿組2只，本發(fā)明顆粒大劑量組2只，中劑量組2只，小劑量組4只大鼠肝顏色略顯灰色。各組肝重量及其與體重之比見表9。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，各組間無顯著性差異(P〉0.05)。表9各組肝重及肝重與體重之比比較(X±s)*組別動物數(shù)肝重量(g)肝占體重之比(％)模型組911.61±0.942.82±0.32秋水仙堿組712.43±1.182.96±0.38大劑組712.27±0.832.95±0.27中劑組710.46±0.862.67±0.14小劑組811.96±1.2872.90±0.26正常組511.04±0.542.73±0.27*表示均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差，其顯著性檢驗均用t檢驗，下同。(三)肝組織病理觀察結(jié)果1.正常大鼠肝細(xì)胞以中央靜脈為中心向周圍呈放射狀排列，無明顯濁腫，脂肪變性，偶可見局部炎細(xì)胞浸潤，未見壞死。匯管區(qū)無擴(kuò)張，可見少量纖維組織，無病理性膠原生成。2.模型組各鼠均見不同程度的濁腫、脂肪變性及炎細(xì)胞浸潤，但程度不重。未見明顯肝細(xì)胞壞死。纖維組織增生明顯，從匯管區(qū)向周圍延伸，包繞整過肝小葉，有的肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，出現(xiàn)假小葉。3.預(yù)防各組與模型組相比，亦見肝細(xì)胞濁腫、脂肪變性及炎細(xì)胞浸潤，但程度上無明顯差別，均未見肝細(xì)胞壞死。秋水仙堿預(yù)防組，本發(fā)明顆粒大、中劑量組的肝纖維化均較模型組輕，但三組間無明顯差別，本發(fā)明顆粒小劑量組肝纖維化與模型組相近且較重。各組肝纖維化情況見表10，表11。表io本發(fā)明顆粒對大鼠肝纖維化程度分級的影響組別動物肝纖維化程度(只)數(shù)o級l級2級3級4級模型組902133秋水仙堿組740012大劑組741020中劑組740111小劑組812113正常組550000表ll本發(fā)明顆粒對大鼠肝纖維形成率及膠原含量比的影響組別動物數(shù)肝纖維化形成率(％)膠原相對含量(％)&±s)模型組9跳007.90±3.72秋水仙堿組742.864.97±3.23*大劑組742.864.27±2.66*中劑組742.864.36±3.03*小劑組888.895.27±2.56正常組502.82±0.87與模型組比較*P〈0.05表12本發(fā)明顆粒對白蛋白肝纖維化大鼠血清PIIIP、IV-C和LN含量的影響(j土s)iiS動物數(shù)PlIIP(ng/ml)IV-C(ng/ml)LN(ng/ml)~與模型組比較*P<0.05**p<0.01***P<0.001在肝纖維化及肝硬化形成和發(fā)展過程中，免疫因素起著重要的作用，而白蛋白持續(xù)多次注入后引起血流中循環(huán)免疫復(fù)合物反復(fù)增多，可導(dǎo)致循環(huán)免疫復(fù)合物沉積于肝小葉間微血管末梢，使肝小葉周圍出現(xiàn)廣泛的進(jìn)行性的慢性炎癥病變導(dǎo)致肝細(xì)胞變性壞死，成纖維細(xì)胞增殖和膠原纖維病理性增生，且自匯管區(qū)向肝小葉周圍伸展，形成肝纖維化及肝硬化。該模型穩(wěn)定可靠，且與人類慢性乙肝后肝纖維化發(fā)病機(jī)理相類似，故廣泛應(yīng)用于抗肝纖維化藥物的篩選。PIIIP是III型膠原經(jīng)氨基端內(nèi)切酶作用水解下來的多肽，是反映早期肝纖維化程度48.96±10.3737.26±8.64**30.42±6.78***38.14±7.78**46.36±9.1425.67±5.57246.33±53.26206.57±28.90*196.98±60.72**216.33±50.42257.87±90.56132.47±49.5198.54±40.7886.73±52.6488.84±50.2689.42±38.6490.63±70.5677.57±30.62且模且自水秋自自紹紹劑劑劑常大中小正2420和活動度的良好指標(biāo)，血清IV-C含量的增加亦與肝纖維化呈正相關(guān)，而從血清中檢測這些指標(biāo)可反映肝纖維化的程度。從本實驗結(jié)果來看，模型組大鼠PIIIP、iv-c的含量均高于正常大鼠，與文獻(xiàn)結(jié)論一致。結(jié)合肝組織病理分析證實，經(jīng)本發(fā)明顆粒預(yù)防后，大、中劑量組能明顯降低肝纖維化形成率，保護(hù)肝臟及減輕肝纖維化程度，顯示了該藥對人血白蛋白肝纖維化模型的良好預(yù)防作用。實驗例9本發(fā)明顆粒對乙型肝炎病毒的抑制作用(一)本發(fā)明顆粒在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞毒性為觀察本發(fā)明顆粒對乙型肝炎病毒基因轉(zhuǎn)染的人肝癌2.2.15細(xì)胞的毒性，在接種2.2.15細(xì)胞后24小時，加2倍稀釋藥液。實驗自16mg/ml開始8;4;2;1;0.5;0.25mg/ml，同時設(shè)正常細(xì)胞對照。4天換一次藥液，維持8天，用顯微鏡觀察細(xì)胞病變，按公式計算半數(shù)有毒濃度(TC50)和最大無毒濃度(TCo)，見表1。TC50二批實驗分別為2mg/ml，2mg/ml，平均半數(shù)有毒濃度(TC50)為2mg/ml，最大無毒濃度(TC())為lmg/ml。見表4-13.(二)本發(fā)明顆粒在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)中對HBeAg和HBsAg表達(dá)的作用本發(fā)明顆粒lmg/ral;0.5mg/ml;0.25mg/ml，加入2.2.15細(xì)胞中培養(yǎng)，第8天對HBsAg和HBeAg的抑制效果見表4-14、表4-15、4-16。l.對HBsAg的抑制率本發(fā)明顆粒三批實驗對HBsAg的平均抑制率分別為lmg/ml抑制23.63±9.25%(P<0.05-.001);0.5mg/ml抑制5.27±3.14%(P>0.05)。三批實驗IC50均〉2.0mg/ml。2.對朋eAg的抑制率:三批實驗本發(fā)明顆粒各濃度組對朋eAg的平均抑制率分別為；lmg/ml抑制37.60±8.31%(P<0.01)、0.5mg/ml抑制23.33±5.75%、0.25mg/ml抑制17.90±1.66%(P>0.05)。三批實驗平均IC50為3.23±2.64mg/ml。3.選擇指數(shù)[SI]:本發(fā)明顆粒對HBeAg抑制率的SI為0.62，對HBsAg抑制率的SI無法計算。表13本發(fā)明顆粒在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)的毒性實驗實驗不同藥物濃度批次方法1684mg/ml/細(xì)胞病變210.50.250TC50(mg/ml)TCo1CPE44420000214442000044420000破壞％1001001005000002CPE44420000214442000044420000破壞％100100100500000二批平均2125<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表16本發(fā)明顆粒在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對HBsAg和HBeAg的抑制效果分析實驗毒性HBeAgHBsAg批次TC50IC50IC50mg/mlmg/mlmg/ml12>22.0022〉26.263〉21.44平均5±SD2>23.23±2.64表17本發(fā)明顆粒在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對HBeAg和HBsAg的抑制作用總結(jié)表細(xì)胞毒性(mg/ml)HBeAgHBsAgTC50TCOIC50(mg/ml)SIIC50(mg/ml)213.23±2.640.62>2結(jié)果本發(fā)明顆粒對2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)的毒性本發(fā)明顆粒加入2.2.15細(xì)胞中培養(yǎng)8天，以細(xì)胞病變?yōu)橹笜?biāo)，二批實驗平均半數(shù)中毒濃度TC50為2mg/ml，最大無毒濃度TCo為lmg/ml。本發(fā)明顆粒在2.2.15細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對HBeAg和HBsAg分泌的抑制作用本發(fā)明顆粒在2.2.15細(xì)胞中培養(yǎng)8天，對HBeAg的IC50三批實驗平均為3.23±2.64mg/ml，SI為0.62。對HBsAg最大無毒濃度lmg/ml的抑制率平均為23.63±9.25%(P〈0.05-0.01)。目前臨床用于治療乙型肝炎病毒的阿糖腺苷單磷酸(Ara-AMP)、無環(huán)鳥苷(ACV)、磷甲酸(PFA)等在2.2.15細(xì)胞中雖能抑制HBV-DNA，但對HBeAg表達(dá)抑制低于50%,不能計算IC50。本實驗未用陽性對照藥。下述實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果具體實施例方式實施例l:顆粒劑的制備黃芪510kg丹參200kg莪術(shù)200kg白術(shù)200kg郁金150kg茵陳150kg柴胡150kg桃仁150kg北豆根100kg甘草100kg取莪術(shù)、白術(shù)、郁金提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液A另器保存，藥渣A備用；將丹參加入6倍量80%乙醇提取3次，每次1小時，合并3次提取液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏狀，于6(TC烘干，得干膏粉A，藥渣B備用；將黃芪加水提取3次，時間分別為2、1、l小時，用水量分別為IO、8、8倍，合并煎液，濾過，濾液濃縮至每毫升相當(dāng)于O.5克藥材，以3000轉(zhuǎn)/分離心，除去部分雜質(zhì)，上清液濃縮至稠膏A備用；其27余柴胡、桃仁、茵陳、北豆根、甘草五味藥與丹參藥渣B及莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味藥的藥渣A合并，，加水煎煮3次，用水量分別為IO、8、8倍，時間分別為2、1、l小時，合并3次煎液，過濾，濾液與莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味的水提液A合并，濃縮至在60'C時測得相對密度為1.13，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏稠膏B，稠膏B與黃芪水提取物稠膏A合并于6(TC烘干，得干膏粉B備用；莪術(shù)、白術(shù)、郁金揮發(fā)油制成e-CD包合物，將上述干膏粉A與干膏粉B混合，粉碎成80目細(xì)粉并與揮發(fā)油e-CD包合物混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成顆粒劑，裝袋，每袋9g，一次1袋，一日3次。實施例2:膠囊劑的制備黃芪450kg丹參200kg莪術(shù)200kg白術(shù)200kg郁金120kg茵陳120kg柴胡120kg桃仁120kg北豆根80kg甘草80kg取莪術(shù)、白術(shù)、郁金提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液A另器保存，藥渣A備用；將丹參加入5倍量85%乙醇提取2次，每次3小時，合并提取液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏狀，于40'C烘干，得干膏粉A,藥渣B備用；將黃芪加水提取4次，時間為每次1小時，用水量為每次10倍，合并煎液，濾過，濾液濃縮至每毫升相當(dāng)于O.2克藥材，以3000轉(zhuǎn)/分離心，除去部分雜質(zhì)，上清液濃縮至稠膏A備用；其余柴胡、桃仁、茵陳、北豆根、甘草五味藥與丹參藥渣B及莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味藥的藥渣A合并，加水煎煮4次，用水量為每次8倍，時間為每次3小時，合并煎液，過濾，濾液與莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味的水提液A合并，濃縮至在60'C時測得相對密度為1.0，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏稠膏B，稠膏B與黃芪水提取物稠膏A合并于8(TC烘干，得干膏粉B備用；莪術(shù)、白術(shù)、郁金揮發(fā)油制成e-CD包合物，將上述干膏粉A與干膏粉B混合，碎成60目細(xì)粉并與揮發(fā)油e-CD包合物混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，加入常規(guī)輔料，裝入膠囊，即得。實施例3:片劑的制備黃芪550kg丹參250kg莪術(shù)250kg白術(shù)250kg郁金180kg茵陳180kg柴胡180kg桃仁180kg北豆根120kg甘草120kg取莪術(shù)、白術(shù)、郁金提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液A另器保存，藥渣A備用；將丹28參加入7倍量65%乙醇提取4次，每次1小時，合并提取液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏狀，于80'C烘千，得干膏粉A，藥渣B備用；將黃芪加水提取2次，時間為每次3小時，用水量為每次8倍，合并煎液，濾過，濾液濃縮至每毫升相當(dāng)于0.8克藥材，以3000轉(zhuǎn)/分離心，除去部分雜質(zhì)，上清液濃縮至稠膏A備用；其余柴胡、桃仁、茵陳、北豆根、甘草五味藥與丹參藥渣B及莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味藥的藥渣A合并，加水煎煮2次，用水量為每次10倍，時間為每次l小時，合并煎液，過濾，濾液與莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味的水溶液A合并，濃縮至在60。C時測得相對密度為1.5，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏稠膏B，稠膏B與黃芪水提取物稠膏A合并于4o。c烘干，得干膏粉B備用；莪術(shù)、白術(shù)、郁金揮發(fā)油制成e-CD包合物，將上述干膏粉A與干膏粉B混合，粉碎成100目細(xì)粉并與揮發(fā)油P-CD包合物混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成片劑。實施例4:滴丸的制備黃芪510kg丹參200kg莪術(shù)200kg白術(shù)200kg郁金150kg茵陳150kg柴胡150kg桃仁150kg北豆根100kg甘草100kg取莪術(shù)、白術(shù)、郁金提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液A另器保存，藥渣A備用；將丹參加入4倍量90%乙醇提取2次，每次3小時，合并提取液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏狀，于5(TC烘干，得干膏粉A，藥渣B備用；將黃芪加水提取4次，時間為每次2小時，用水量為每次10倍，合并煎液，濾過，濾液濃縮至每毫升相當(dāng)于O.3克藥材，以3000轉(zhuǎn)/分離心，除去部分雜質(zhì)，上清液濃縮至稠膏A備用；其余柴胡、桃仁、茵陳、北豆根、甘草五味藥與丹參藥渣B及莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味藥的藥渣A合并，加水煎煮4次，用水量為每次8倍，時間為每次3小時，合并煎液，過濾，濾液與莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味的水溶液A合并，濃縮至在60'C時測得相對密度為1.0，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏稠膏B，稠膏B與黃芪水提取物稠膏A合并于7(TC烘干，得干膏粉B備用；莪術(shù)、白術(shù)、郁金揮發(fā)油制成e-CD包合物，將上述干膏粉A與干膏粉B混合，粉碎成70目細(xì)粉并與揮發(fā)油e-CD包合物混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成滴丸。實施例5:膏劑的制備黃芪450kg丹參200kg莪術(shù)200kg白術(shù)200kg郁金120kg茵陳120kg柴胡120kg桃仁120kg北豆根80kg29莪術(shù)250kg茵陳180kg北豆根120kg莪術(shù)200kg柴胡150kg白術(shù)200kg桃仁150kg甘草80kg取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成膏劑。實施例6:口服液的制備黃芪550kg丹參250kg白術(shù)250kg郁金180kg柴胡180kg桃仁180kg甘草120kg取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成口服液。實施例7:注射液的制備黃芪510kg丹參200kg郁金150kg茵陳150kg北豆根100kg甘草100kg取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成注射液實施例8:緩釋劑的制備黃芪450kg丹參200kg白術(shù)200kg郁金120kg柴胡120kg桃仁120kg甘草80kg取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成緩釋劑實施例9:蜜丸的制備黃芪550kg丹參250kg白術(shù)250kg郁金180kg柴胡180kg桃仁180kg甘草120kg取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成蜜丸實施例10:散劑的制備黃芪450kg丹參250kg白術(shù)250kg郁金150kg柴胡150kg桃仁150kg甘草80kg。取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成散劑莪術(shù)200kg茵陳120kg北豆根80kg莪術(shù)250kg茵陳180kg北豆根120kg莪術(shù)250kg茵陳150kg北豆根80kg實施例ll:軟膠囊劑的制備黃芪500kg丹參200kg莪術(shù)200kg白術(shù)200kg郁金120kg茵陳120kg柴胡120kg桃仁120kg北豆根100kg甘草lOOkg。取上述原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成散劑。實施例12:本發(fā)明藥物組合物制劑的含量測定方法和鑒別方法含量測定方法:取實施例l顆粒制劑5g，精密稱定，置索氏提取器中，加50ml2X氫氧化鉀甲醇溶液，加熱回流提取6小時，再冷浸過夜，提取液減壓回收至干，殘渣加15ml水溶解，用氯仿正丁醇=2:1的混合溶液，萃取三次，分別為40、30、30ml，合并氯仿下丁醇=2:l的萃取液，用lX磷酸二氫鉀水溶液60ml洗滌，棄去水相，有機(jī)相減壓蒸干，加入lml甲醇溶液定溶，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲甙對照品，加甲醇制成lml含0.OOlg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液0.OOlml，對照品溶液0.002ml與0.004ml，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，常溫下將氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴10%濃硫酸乙醇溶液，再IOO'C下加熱5分鐘，取出，再薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用透明膠紙固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長入5=530咖，入p650nm，測量供試品吸收度積分值和對照品吸收度積分值，計算，即得，本藥物組合物制劑按日服用劑量計含黃芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg。鑒別方法:A、按照含量測定項下制備供試品溶液，取對照品黃芪甲甙加適量甲醇制成lml含0.001g的溶液為對照品溶液；另取黃芪藥材1.5g，置沙氏提取器中，加2%氫氧化鉀甲醇溶液提取8小時后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水15ml，再以氯仿正丁醇=2:1比例混合液萃取三次分別為40、30、30ml，合并萃取液，加1%的磷酸二氫鉀溶液60ml洗滌，棄去水相，再以60ml水洗滌一次，有機(jī)相回收至干，加lml甲醇溶解，制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.002ml，分別點于同一塊15cmX10cm硅膠G鋁板，常溫下將氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴10%濃硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取實施例l顆粒9g置于50ml圓底燒瓶中，加水250ml加熱至沸騰提取揮發(fā)油，約12小時后，收集揮發(fā)油，用石油醚洗滌揮發(fā)油提取器管壁，并加入到揮發(fā)油中，作31為供試品；另取白術(shù)對照藥材2g，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材供試品溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.002ml，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.1為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴1%香草醛硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取實施例1顆粒6g，置50ml三角瓶中，加入乙醚40ml振蕩，靜置1小時后，過濾，回收乙醚提取溶液至干，殘渣加2ml乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液備用；另取丹參對照藥材lg，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材溶液，做對照藥材供試液備用；稱取丹參酮Ha對照品0.002g，加乙酸乙酯溶液制成濃度為每ml含lmg丹參酮IIa的對照品溶液備用；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各O.005ml，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以苯乙酸乙酯二9.5:0.5的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；D、取實施例l顆粒9g，置50ml錐形瓶中，加入95X甲醇50ml，用功率150W，頻率20kHz的超聲波振蕩40分鐘后，過濾，取續(xù)濾液30ml，減壓回收溶劑置干，殘渣加蒸餾水15ml微熱溶解，用水飽和正丁醇萃取三次，體積分別為20、20、10ml,合并正丁醇萃取液，再用1%氫氧化鉀洗滌正丁醇萃取液兩次，體積分別為20、20ml，棄去堿液，正丁醇萃取液用正丁醇飽和水溶液洗至中性，棄去水層，減壓回收正丁醇萃取液干，殘渣加95X乙醇lml溶解，作為供試品溶液；另取柴胡藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.006ml，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇水=7:3:1的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；E、取實施例l顆粒5g，置50ml三角瓶中，加入乙醚40ml振蕩，靜置1小時后，過濾，棄去醚層，加入甲醇30ml，加熱回流l小時，過濾，回收甲醇溶液至干，殘渣加水40ml使溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20ml，合并正丁醇溶液，用水洗滌3次，每次20ml，將正丁醇層蒸干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.005ml,分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇甲酸=5:1:O.l的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴50%硫酸甲醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；實施例13:本組合物制成散劑的鑒別方法A、按照實施例12含量測定項下方法取散劑制備供試品溶液，取對照品黃芪甲甙加適量甲醇制成lml含0.002g的溶液為對照品溶液；另取黃芪藥材3g，置沙氏提取器中，加1%氫氧化鉀甲醇溶液提取IO小時后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水10ml，再以氯仿正丁醇=3:1.5比例混合液萃取三次分別為40、30、30ml，合并萃取液，加1X的磷酸二氫鉀溶液60ml洗滌，棄去水相，再以60ml水洗滌一次，有機(jī)相回收至干，加3ml甲醇溶解，制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.OOlml，分別點于同一塊15cmX10cm硅膠G鋁板，常溫下將氯仿甲醇水二80:30:5比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴5%濃硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取本發(fā)明藥物組合物散劑10g置于50ml圓底燒瓶中，加水200ml加熱至沸騰提取揮發(fā)油，約3小時后，收集揮發(fā)油，用石油醚洗滌揮發(fā)油提取器管壁，并加入到揮發(fā)油中，作為供試品；另取白術(shù)對照藥材lg，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材供試品溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.002ml，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.1為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴1%香草醛硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取本發(fā)明藥物組合物散劑8g，置50ml三角瓶中，加入乙醚30ml振蕩，靜置2小時后，過濾，回收乙醚提取溶液至干，殘渣加lral乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液備用；另取丹參對照藥材lg，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材溶液，做對照藥材供試液備用；稱取丹參酮IIa對照品0.003g，加乙酸乙酯溶液制成濃度為每ml含0.8mg丹參酮IIa的對照品溶液備用；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.008ml，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以苯乙酸乙酯=10:l的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；D、取本發(fā)明藥物組合物散劑10g，置50ml錐形瓶中，加入90X甲醇60ml，用功率150W，頻率20kHz的超聲波振蕩30分鐘后，過濾，取續(xù)濾液40ml，減壓回收溶劑置干，殘渣加蒸餾水10ml微熱溶解，用水飽和正丁醇萃取三次，體積分別為20ml，合并正丁醇萃取液，再用1%氫氧化鉀洗滌正丁醇萃取液兩次，體積分別為20ml，棄去堿液，正丁醇萃取液用正丁醇飽和水溶液洗至中性，棄去水層，減壓回收正丁醇萃取液干，殘渣加90X乙醇3ml溶解，作為供試品溶液；另取柴胡藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.004ml，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇水=5:2:l的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴15%硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；E、取本發(fā)明藥物組合物制劑4g，置50ml三角瓶中，加入乙醚50ml振蕩，靜置1小時后，過濾，棄去醚層，加入甲醇40ml，加熱回流l小時，過濾，回收甲醇溶液至干，殘渣加水50ml使溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次10ml，合并正丁醇溶液，用水洗滌3次，每次30ml，將正丁醇層蒸干，殘渣加甲醇lml溶解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材3g，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.003ml，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇甲酸=8:3:0.3的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴30%硫酸甲醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。實施例14:本組合物制成膠囊劑的含量測定方法取本發(fā)明藥物組合物膠囊制劑4g，精密稱定，置索氏提取器中，加60mll^氫氧化鉀甲醇溶液，加熱回流提取8小時，再冷浸過夜，提取液減壓回收至干，殘渣加10ml水溶解，用氯仿正丁醇=2:1的混合溶液，萃取三次，分別為40ml，合并氯仿下丁醇=1:0.5的萃取液，用lX磷酸二氫鉀水溶液70ml洗滌，棄去水相，有機(jī)相減壓蒸干，加入lml甲醇溶液定溶，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲甙對照品，加甲醇制成lml含0.002g的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液0.001ml，對照品溶液0.003ml與0.002ml，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，常溫下將氯仿甲醇水=80:20:10比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴6%濃硫酸乙醇溶液，再120'C下加熱4分鐘，取出，再薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用透明膠紙固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長X^530nm，XR=650nm，測量供試品吸收度積分值和對照品吸收度積分值，計算，即得，本藥物組合物膠囊制劑按日服用劑量計含黃芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg。實施例15:本組合物制成片劑的含量測定方法和鑒別方法含量測定方法取本發(fā)明藥物組合物片劑5g,精密稱定，置索氏提取器中，加45ml2%氫氧化鉀甲醇溶液，加熱回流提取6小時，再冷浸過夜，提取液減壓回收至干，殘渣加15ml水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分別為35ml，合并氯仿34下丁醇=2:1的萃取液，用1.5^磷酸二氫鉀水溶液60ml洗滌，棄去水相，有機(jī)相減壓蒸干，加入1.5ml甲醇溶液定溶，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲甙對照品，加甲醇制成lml含0.002g的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液0.002ml，對照品溶液0.002ml與0.002ml，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，常溫下將氯仿甲醇水=70:15:8比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴8%濃硫酸乙醇溶液，再9(TC下加熱6分鐘，取出，再薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用透明膠紙固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長入s-530nm，入^650nm，測量供試品吸收度積分值和對照品吸收度積分值，計算，即得，本藥物組合物片劑按日服用劑量計含黃芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg;鑒別方法取本發(fā)明藥物組合物片劑6g，置50rol三角瓶中，加入乙醚35ml振蕩，靜置1.5小時后，過濾，回收乙醚提取溶液至干，殘渣加1.5ml乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液備用；另取丹參對照藥材lg，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材溶液，做對照藥材供試液備用；稱取丹參酮Ha對照品0.002g，加乙酸乙酯溶液制成濃度為每ml含lmg丹參酮IIa的對照品溶液備用；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.004ml，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以苯乙酸乙酯=10:l的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。實施例16:本組合物制成滴丸的鑒別方法取本發(fā)明藥物組合物滴丸制劑9g置于50ml圓底燒瓶中，加水200ml加熱至沸騰提取揮發(fā)油，約3小時后，收集揮發(fā)油，用石油醚洗滌揮發(fā)油提取器管壁，并加入到揮發(fā)油中，作為供試品；另取白術(shù)對照藥材lg，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材供試品溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.002ml，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.1為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴2%香草醛硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。3權(quán)利要求1、一種藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為黃芪400～600重量份丹參150～300重量份莪術(shù)150～300重量份白術(shù)150～300重量份郁金100～200重量份茵陳100～200重量份柴胡100～200重量份桃仁100～200重量份北豆根50～150重量份甘草50～150重量份。2、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為黃疾510重量份莪術(shù)200重量份郁金150重量份柴胡150重量份北豆根100重量份丹參200重量份白術(shù)200重量份茵陳150重量份桃仁150重量份甘草100重量份。3、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為:黃芪450重量份莪術(shù)200重量份郁金120重量份柴胡120重量份北豆根80重量份丹參200重量份白術(shù)200重量份茵陳120重量份桃仁120重量份甘草80重量份。4、如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的原料藥組成為:黃芪550重量份莪術(shù)250重量份郁金180重量份柴胡180重量份北豆根120重量份丹參250重量份白術(shù)250重量份茵陳180重量份桃仁180重量份甘草120重量份。5、如權(quán)利要求l-4任一所述的藥物組合物，其特征在于取該藥物組合物原料藥，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。6、如權(quán)利要求l-4任一所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取莪術(shù)、白術(shù)、郁金提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液A另器保存，藥渣A備用；將丹參加入48倍量6090%乙醇提取24次，每次13小時，合并提取液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏，于4080'C烘干，得干膏粉A，藥渣B備用；將黃芪加水提取24次，時間為每次13小時，用水量為每次810倍，合并煎液，濾過，濾液濃縮至每體積份相當(dāng)于0.20.8重量份藥材，以3000轉(zhuǎn)/分離心，除去部分雜質(zhì)，上清液濃縮至稠膏A備用；其余柴胡、桃仁、茵陳、北豆根、甘草五味藥與丹參藥渣B及莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味藥的藥渣A合并，加水煎煮24次，用水量為每次810倍，時間為每次13小時，合并煎液，過濾，濾液與莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味的水溶液A合并，濃縮至在6(TC時測得相對密度為1.01.5，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏B，稠膏B與黃芪水提取物稠膏A合并，于408(TC烘干，得干膏粉B備用；莪術(shù)、白術(shù)、郁金揮發(fā)油制成e-CD包合物，將上述干膏粉A與干膏粉B混合，粉碎成60100目細(xì)粉并與揮發(fā)油P-CD包合物混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。7、如權(quán)利要求6所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取莪術(shù)、白術(shù)、郁金提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液A另器保存，藥渣A備用；將丹參加入6倍量80%乙醇提取3次，每次l小時，合并3次提取液，濾過，減壓回收乙醇，濃縮至稠膏狀，于6(TC烘干，得干膏粉A，藥渣B備用；將黃芪加水提取3次，時間分別為2、1、l小時，用水量分別為IO、8、8倍，合并煎液，濾過，濾液濃縮至每體積份相當(dāng)于0.5重量份藥材，以3000轉(zhuǎn)/分離心，除去部分雜質(zhì)，上清液濃縮至稠膏A備用；其余柴胡、桃仁、茵陳、北豆根、甘草五味藥與丹參藥渣B及莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味藥的藥渣A合并，加水煎煮3次，用水量分別為IO、8、8倍，時間分別為2、1、l小時，合并3次煎液，過濾，濾液與莪術(shù)、白術(shù)、郁金三味的水溶液A合并，濃縮至在6(TC時測得相對密度為1.13，加乙醇使含醇量達(dá)60%，靜置過夜，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏稠膏B，稠膏B與黃芪水提取物稠膏A合并于6(TC烘干，得干膏粉B備用；莪術(shù)、白術(shù)、郁金揮發(fā)油制成e-CD包合物，將上述干膏粉A與干膏粉B混合，粉碎成so目細(xì)粉并與揮發(fā)油e-CD包合物混勻，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝，制成片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。8、如權(quán)利要求l-4任一所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下含量測定和/或如下一種或幾種鑒別含量測定取本藥物組合物38重量份，精密稱定，置索氏提取器中，加4060體積份13%氫氧化鉀甲醇溶液，加熱回流提取48小時，再冷浸過夜，提取液減壓回收至干，殘渣加1030體積份水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分別為3040體積份，合并氯仿下丁醇=13:0.5l的萃取液，用13%磷酸二氫鉀水溶液5080體積份洗滌，棄去水相，有機(jī)相減壓蒸干，加入13體積份甲醇溶液定溶，作為供試品溶液；另精密稱取黃萬甲甙對照品，加甲醇制成1體積份含0.0010.002重量份的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液0.0010.003體積份，對照品溶液0.0010.003體積份與0.0020.005體積份，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，常溫下將氯仿甲醇水=6080:2030:510比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴515%濃硫酸乙醇溶液，再80120'C下加熱38分鐘，取出，再薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用透明膠紙固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長入sz530nm，AR=650nm，測量供試品吸收度積分值和對照品吸收度積分值，計算，即得；本藥物組合物制劑按日服用劑量計含黃芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg;A、按照含量測定項下方法制備供試品溶液，取對照品黃疾甲甙加甲醇制成l體積份含0.0010.003重量份的溶液為對照品溶液；另取黃芪藥材13重量份，置沙氏提取器中，力n13%氫氧化鉀甲醇溶液提取610小時后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水1030體積份，再以氯仿正丁醇=13:0.51.5比例混合液萃取三次分別為40、30、30體積份，合并萃取液，加13%的磷酸二氫鉀溶液60體積份洗滌，棄去水相，再以60體積份水洗滌一次，有機(jī)相回收至干，加13體積份甲醇溶解，制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.0010.002體積份，分別點于同一塊15cmX10cm硅膠G鋁板，常溫下將氯仿甲醇水=6080:2030:510比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴515%濃硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取本藥物組合物810重量份置于圓底燒瓶中，加水200300體積份加熱至沸騰提取揮發(fā)油，約13小時后，收集揮發(fā)油，用石油醚洗滌揮發(fā)油提取器管壁，并加入到揮發(fā)油中，作為供試品；另取白術(shù)對照藥材13重量份，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材供試品溶液;照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.0010.002體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.l為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴13%香草醛硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取本藥物組合物48重量份，置三角瓶中，加入乙醚3050體積份振蕩，靜置1~2小時后，過濾，回收乙醚提取溶液至干，殘渣加13體積份乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液備用；另取丹參對照藥材1重量份，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材溶液，做對照藥材供試液備用；稱取丹參酮IIa對照品0.0010.003重量份，加乙酸乙酯溶液制成濃度為每體積份含0.00080.0012重量份丹參酮IIa的對照品溶液備用；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.0030.008體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以苯乙酸乙酯=910:0.5l的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；D、取本藥物組合物810重量份，置錐形瓶中，加入90100%甲醇4060體積份，用功率150W，頻率20kHz的超聲波振蕩2050分鐘后，過濾，取續(xù)濾液2040體積份，減壓回收溶劑置干，殘渣加蒸餾水1030體積份微熱溶解，用水飽和正丁醇萃取三次，體積分別為1020體積份，合并正丁醇萃取液，再用13%氫氧化鉀洗滌正丁醇萃取液兩次，體積分別為1020體積份，棄去堿液，正丁醇萃取液用正丁醇飽和水溶液洗至中性，棄去水層，減壓回收正丁醇萃取液干，殘渣加90100%乙醇13體積份溶解，作為供試品溶液；另取柴胡藥材1重量份，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.0040.008體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇水=58:25:13的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴515%硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；E、取本藥物組合物38重量份，置三角瓶中，加入乙醚3050體積份振蕩，靜置12小時后，過濾，棄去醚層，加入甲醇2040體積份，加熱回流12小時，過濾，回收甲醇溶液至干，殘渣加水3050體積份使溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次1030體積份，合并正丁醇溶液，用水洗滌3次，每次1030體積份，將正丁醇層蒸干，殘渣加甲醇13體積份溶解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材13重量份，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.0030.008體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇甲酸=28:13:0.10.3的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴3080%硫酸甲醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。9、如權(quán)利要求8所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法包括如下含量測定和鑒別中的一種或幾種含量測定取本藥物組合物5重量份，精密稱定，置索氏提取器中，加50體積份2%氫氧化鉀甲醇溶液，加熱回流提取6小時，再冷浸過夜，提取液減壓回收至干，殘渣加15體積份水溶解，用氯仿正丁醇=2:l的混合溶液，萃取三次，分別為40、30、30體積份，合并氯仿下丁醇=2:l的萃取液，用1%磷酸二氫鉀水溶液60體積份洗滌，棄去水相，有機(jī)相減壓蒸干，加入1體積份甲醇溶液定溶，作為供試品溶液；另精密稱取黃芪甲甙對照品，加甲醇制成1體積份含0.001重量份的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，精密吸取供試品溶液0.001體積份，對照品溶液0.002體積份與0.004體積份，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，常溫下將氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴10%濃硫酸乙醇溶液，再10(TC下加熱5分鐘，取出，再薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用透明膠紙固定，照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長入3=530咖，XR=650nm，測量供試品吸收度積分值和對照品吸收度積分值，計算，即得；本藥物組合物制劑按日服用劑量計含黃芪甲甙C44H6804，不得低于2.700mg。A、按照含量測定項下方法制備供試品溶液，取對照品黃芪甲甙加甲醇制成l體積份含0.001重量份的溶液為對照品溶液；另取黃芪藥材1.5重量份，置沙氏提取器中，加2%氫氧化鉀甲醇溶液提取8小時后，冷浸一夜，回收提取溶液至干，加水15體積份，再以氯仿正丁醇=2:1比例混合液萃取三次分別為40、30、30體積份，合并萃取液，加1%的磷酸二氫鉀溶液60體積份洗滌，棄去水相，再以60體積份水洗滌一次，有機(jī)相回收至干，加l體積份甲醇溶解，制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.002體積份，分別點于同一塊15cmX10cm硅膠G鋁板，常溫下將氯仿甲醇水=75:25:5比例的溶液放置12小時后，取下層為展開劑，展開一次，取出，晾干，噴10%濃硫酸乙醇溶液，加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；B、取本藥物組合物9重量份置于圓底燒瓶中，加水250體積份加熱至沸騰提取揮發(fā)油，約12小時后，收集揮發(fā)油，用石油醚洗滌揮發(fā)油提取器管壁，并加入到揮發(fā)油中，作為供試品；另取白術(shù)對照藥材2重量份，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材供試品溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.002體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以石油醚乙酸乙酯=5:0.l為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴1%香草醛硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；C、取本藥物組合物6重量份，置三角瓶中，加入乙醚40體積份振蕩，靜置l小時后，過濾，回收乙醚提取溶液至干，殘渣加2體積份乙酸乙酯使溶解，作為供試品溶液備用；另取丹參對照藥材1重量份，粉碎，過40目篩，同法制成對照藥材溶液，做對照藥材供試液備用；稱取丹參酮IIa對照品0.002重量份，加乙酸乙酯溶液制成濃度為每體積份含0.001重量份丹參酮IIa的對照品溶液備用；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各0.005體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以苯乙酸乙酯=9.5:0.5的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；D、取本藥物組合物9重量份，置錐形瓶中，加入95%甲醇50體積份，用功率150W，頻率20kHz的超聲波振蕩40分鐘后，過濾，取續(xù)濾液30體積份，減壓回收溶劑置干，殘渣加蒸餾水15體積份微熱溶解，用水飽和正丁醇萃取三次，體積分別為20、20、10體積份，合并正丁醇萃取液，再用1%氫氧化鉀洗滌正丁醇萃取液兩次，體積分別為20、20體積份，棄去堿液，正丁醇萃取液用正丁醇飽和水溶液洗至中性，棄去水層，減壓回收正丁醇萃取液干，殘渣加95%乙醇1體積份溶解，作為供試品溶液；另取柴胡藥材l重量份，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.006體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇水=7:3:l的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；E、取本藥物組合物5重量份，置三角瓶中，加入乙醚40體積份振蕩，靜置l小時后，過濾，棄去醚層，加入甲醇30體積份，加熱回流l小時，過濾，回收甲醇溶液至干，殘渣加水40體積份使溶解，用水飽和正丁醇萃取3次，每次20體積份，合并正丁醇溶液，用水洗滌3次，每次20體積份，將正丁醇層蒸干，殘渣加甲醇l體積份溶解，作為供試品溶液；另取甘草對照藥材1重量份，同法制成對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2000年版一部附錄VIB薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各0.005體積份，分別點于同一塊硅膠G鋁板，以氯仿甲醇甲酸=5:1:0.1的溶液為展開劑，在常溫下展開，取出，晾干，噴50%硫酸甲醇溶液，加熱置斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。10、如權(quán)利要求1-4任一所述的藥物組合物在制備預(yù)防或治療肝纖維化或早期肝硬化的藥物中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種預(yù)防或治療肝纖維化或早期肝硬化的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法，該組合物由黃芪、丹參、莪術(shù)、白術(shù)、郁金、茵陳、柴胡、桃仁、北豆根、甘草十味中藥組成；該藥物組合物制備過程中對不同組分采用提取、煎煮、過濾、濃縮等方法，使有效藥物充分發(fā)揮；同時本發(fā)明還提供了對該組合物進(jìn)行成分鑒別、含量測定的質(zhì)量控制方法；大量試驗證明本品預(yù)防或治療肝纖維化或早期肝硬化療效確切，臨床使用安全有效。文檔編號A61K36/9066GK101468183SQ20071030387公開日2009年7月1日申請日期2007年12月26日優(yōu)先權(quán)日2007年12月26日發(fā)明者侯鳳祥申請人:侯鳳祥