專利名稱：表皮生長因子組合物，其方法及其應(yīng)用的制作方法
表皮生長因子組合物，其方法及其應(yīng)用發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明尤其涉及表皮生長因子(本文中稱為EGF)的穩(wěn)定組合物。 尤其是，本發(fā)明涉及包括新型重組EGF (rEGF)的穩(wěn)定EGF組合物。 更尤其是，本發(fā)明涉及包括表皮生長因子和生理學(xué)上可接受的試劑的 組合物，其中生理學(xué)上可接受的試劑包括至少一種穩(wěn)定劑，防腐劑和 增稠劑。此外，本發(fā)明還涉及該組合物在治療傷口中的應(yīng)用/用途。本 發(fā)明還描述了制備所述以rEGF為治療活性成分的穩(wěn)定組合物的方法。發(fā)明背景表皮生長因子(EGF)是分子量約62 kDa的單鏈多肽，由53個(gè) 氨基酸殘基組成，包含3個(gè)雙硫鍵。表皮生長因子(EGF)是在傷口愈 合中起非常重要作用的最有效的生物可利用實(shí)體。其與存在于細(xì)胞表 面上的EGF受體特異性結(jié)合，從而觸發(fā)細(xì)胞中的復(fù)雜生化機(jī)制，以觸 發(fā)生長。EGF尤其在水分存在下在生物學(xué)上不穩(wěn)定，在生理學(xué)上具有 非同源性。EGF具有約1小時(shí)的短壽命，而傷口部位的DNA合成卻需 要約8-12小時(shí)。EGF由于蛋白水解酶的作用而發(fā)生變性，分解，縮合 和沉淀，因此表現(xiàn)出生物活性的喪失。這一點(diǎn)是不利的，因?yàn)檫@種活 性的喪失使得表皮生長因子的水性制劑不能儲存更長的時(shí)間。EGF制 劑在傷口愈合中的應(yīng)用是本領(lǐng)域公知的。據(jù)報(bào)道，為克服這一難題， 并提供預(yù)期的傷口愈合作用，在愈合初期，EGF必須連續(xù)使用。結(jié)果， 人們開發(fā)了許多制劑，以提高EGF的穩(wěn)定性。本發(fā)明的發(fā)明者已知的現(xiàn)有技術(shù)包括CN 1515315，其涉及包含 EGF和白芨提取物的穩(wěn)定協(xié)同組合物。US 4,944,948提出了用于向傷口部位遞送hEGF，以克服上述問題的脂質(zhì)體凝膠制劑。EP 0312208公開了將各種水溶性或水可膨脹性載體用于EGF的緩 釋制劑。這使得EGF能釋放12小時(shí)或12小時(shí)以上。然而，這些制劑 由于貨架期短而不適于工業(yè)應(yīng)用。US 4,717,717主張用纖維素衍生物與EGF —起增強(qiáng)穩(wěn)定性。EP 0312208 ('208)公開了用于控制遞送活性劑的EGF的水性凝膠 制劑，其用多種水溶性聚合物作為基質(zhì)，用于在室溫下提供范圍為 1000-12，000，000 cps的粘度。US 4,944，948描述了使用中性磷脂，帶負(fù)電荷的磷脂和膽固醇的 EGF的凝膠制劑。盡管這些制劑能持續(xù)釋放EGF達(dá)12小時(shí)或12小時(shí)以上，但它們 由于在長期的儲存過程中不穩(wěn)定而不適合工業(yè)化生產(chǎn)。此外，由于'208 中所公開制劑的高粘度，其表皮細(xì)胞的遷移形成了障礙。另外，其還 對在脆弱傷口部位的應(yīng)用造成了難題。US 5，130,298和EP公開No. 398615教導(dǎo)了將EGF與金屬陽離子 混合，以預(yù)防EGF通過離子結(jié)合而降解。這使EGF在4°C的穩(wěn)定性增 加到了約2個(gè)月。該制劑同樣被證實(shí)不適合工業(yè)應(yīng)用。US 2003050238建議用酸性聚合物，如羧基乙烯基聚合物作為基 質(zhì)來解決上述貨架期和不適用于工業(yè)領(lǐng)域的問題。該專利聲稱增加了 貨架期。PCT公開No.W099/44631嘗試延長hEGF的貨架期。然而，這些 解決辦法無一成功，就其保持在0。C以上的水性環(huán)境中來說，酶的穩(wěn)定性仍然是個(gè)問題。還應(yīng)注意的是，EGF隨著時(shí)間的流逝而降解，形成被認(rèn)為是降解產(chǎn)物的多種EGF分子。這種降解由于環(huán)境因素，如可以導(dǎo)致光氧化的 光；pH的變化；離子強(qiáng)度的變化；溫度的變化；和對該分子的物理操 作而自然發(fā)生。這減少了 EGF在長期儲存中的貨架期。因此，必須開發(fā)穩(wěn)定的EGF制劑。本發(fā)明的發(fā)明者在進(jìn)行大量研 究之后開發(fā)了具有兩年穩(wěn)定性，同時(shí)保持其有效性的EGF組合物。此 外，本發(fā)明還向公眾提供了有用的選擇。在很長時(shí)間的研究之后，結(jié) 果表明，EGF，尤其rEGF的組合物用生理學(xué)上可接受的試劑，包括荷 電蛋白穩(wěn)定劑，特別是與防腐劑，增稠劑，pH調(diào)節(jié)劑和載體組合進(jìn)行 制備時(shí)，具有約2年的穩(wěn)定期。發(fā)明概述本發(fā)明涉及用于治療傷口的組合物，其中所述組合物可以包括有 效治療量的表皮生長因子和生理學(xué)上可接受的試劑，其中所述生理學(xué) 上可接受的試劑包括穩(wěn)定劑，防腐劑，增稠劑，載體/稀釋劑和任選的 pH調(diào)節(jié)劑及潤濕劑中的至少一種。穩(wěn)定劑可以是L-賴氨酸鹽酸鹽，甘 露醇和羧甲基纖維素中的一種，防腐劑可以是對羥基苯甲酸的鹽，增 稠劑可以是聚丙烯酸。主要用作pH調(diào)節(jié)劑的三乙醇胺還可以用于交聯(lián) 的目的。潤濕劑可以是甘油。生理學(xué)上可接受的試劑可以還包括a-亞 麻酸。根據(jù)實(shí)施方案，組合物可以還包括有效治療量的治療劑。所述治 療劑選自合成抗感染劑，重組生物活性成分，重組抗生素，天然產(chǎn)物， 無蛋白血提取物，免疫調(diào)節(jié)劑，丙酸氯倍他索和血管收縮劑。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，治療傷口的方法可以包括向所述傷口施予 組合物的步驟，其中所述組合物包括有效治療量的表皮生長因子(EGF)和生理學(xué)上可接受的試劑，其中所述生理學(xué)上可接受的試劑包括穩(wěn)定 劑，防腐劑和增稠劑的至少一種。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，制備用于治療傷口的組合物的方法包括將 有效治療量的生理學(xué)上可接受的試劑溶解在水中，以得到混合物，其 中所述生理學(xué)上可接受的試劑包括穩(wěn)定劑，防腐劑和增稠劑中的至少 一種；和向所述混合物中加入有效治療量的表皮生長因子，以獲得所 述組合物。本發(fā)明的組合物可以通過適當(dāng)調(diào)整各責(zé)任成分的量配制成半固體 形式，如用于局部應(yīng)用的凝膠劑，乳膏劑，軟膏劑，或適合胃腸外或 注射給藥的形式。發(fā)明詳述如要求的那樣，本發(fā)明的詳細(xì)實(shí)施方案在本文中公開；然而，應(yīng)該了解的是，所公開的實(shí)施方案僅僅是可以多種形式體現(xiàn)的本發(fā)明的 示范性例子。因此，本文中所公開的具體結(jié)構(gòu)和功能方面的細(xì)節(jié)不應(yīng) 被理解為限制，而只是作為權(quán)利要求的基礎(chǔ)和作為用于教本領(lǐng)域技術(shù) 人員將本發(fā)明以不同方式應(yīng)用于事實(shí)上任何適宜詳細(xì)結(jié)構(gòu)的代表性依 據(jù)。此外，本文所用術(shù)語和短語不希望限制本發(fā)明，而是為本發(fā)明提 供可理解的說明。本文所用的單數(shù)形式包含了所指對象的復(fù)數(shù)。本文所用術(shù)語"多 個(gè)"被定義為兩個(gè)或兩個(gè)以上。本文所用術(shù)語"另一個(gè)"被定義為至 少第二個(gè)或第二個(gè)以上。本文所用術(shù)語"包含"和/或"具有"被定義 為"包括"(即，開發(fā)性語言)。本發(fā)明涉及用于治療傷口的組合物。根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，所述組 合物包括有效治療量的表皮生長因子和生理學(xué)上可接受的試劑，其中 所述生理學(xué)上可接受的試劑包括穩(wěn)定劑，防腐劑，增稠劑，載體/稀釋劑和任選的pH調(diào)節(jié)劑及潤濕劑中的至少一種。根據(jù)實(shí)施方案，所述表 皮生長因子可以是重組表皮生長因子。所述表皮生長因子可以在約0.001%至約0.1% (w/w)的范圍內(nèi)。根據(jù)實(shí)施方案，所述穩(wěn)定劑包括L-賴氨酸鹽酸鹽，甘露醇和羧甲 基纖維素中的一種，所述防腐劑包括對羥基苯甲酸的鹽，所述增稠劑 包括聚丙烯酸。根據(jù)其它實(shí)施方案，所述防腐劑包括對羥基苯甲酸甲 酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯鈉。除了表皮生長因子外，生理學(xué)上可接受 的試劑還包括適合向按照本發(fā)明進(jìn)行治療的患者給藥的組分。例如， 生理學(xué)上可接受的試劑可以包括導(dǎo)致穩(wěn)定組合物或增加組合物效力的 組分。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，生理學(xué)上可接受的試劑還包括水，三乙 醇胺，a-亞麻酸和甘油。甘露醇可以在約0.5%至約10% (w/w)的范 圍內(nèi)。L-賴氨酸鹽酸鹽可以在約0.1%至約2% (w/w)的范圍內(nèi)。聚丙 烯酸可以在約0.25%至約3% (w/w)的范圍內(nèi)。三乙醇胺可以在約1% 至約20% (w/w)的范圍內(nèi)。對羥基苯甲酸甲酯鈉可以為約0.016%至 約0.18% (w/w)，對羥基苯甲酸丙酯鈉可以為約0.01%至約0.02% (w/w)。甘油可以為約1.0%至約2.5% (w/w)，羧甲基纖維素可以 在約0.6%至約1.6%(w/w)的范圍內(nèi)。水可以在約50%至約95%(w/v) 的范圍內(nèi)。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，組合物還可以包括約98% (w/v)的水，其 中聚丙烯酸在約0.25%至約0.8% (w/w)的范圍內(nèi)，三乙醇胺在約10/。 至約20% (v/v)的范圍內(nèi)，對羥基苯甲酸甲酯鈉為約0.18% (w/w)， 對羥基苯甲酸丙酯鈉為約0.02% (w/w)。所述組合物可以配制成半固 體藥物遞送制劑。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，組合物還可以包括約97.5%至約99%(w/v) 的水，其中羧甲基纖維素在約0.6%至約1.6% (w/w)的范圍內(nèi)。所述 組合物可以配制成膠囊。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，組合物可以還包括有效治療量的治療劑。 根據(jù)實(shí)施方案，治療劑可以包括有助于傷口愈合過程，并且適合向患 者給藥的組分。治療劑還可以包括實(shí)現(xiàn)其它功能，如增加攝氧量，增 加水分或增強(qiáng)粒細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的增殖等的組分。治療劑可以包括實(shí) 現(xiàn)除表皮生長因子所實(shí)現(xiàn)的功能之外的功能的組分。治療劑可以選自 合成抗感染劑，重組生物活性成分，重組抗生素，天然產(chǎn)物，無蛋白 血提取物，免疫調(diào)節(jié)劑，丙酸氯倍他索和血管收縮劑。根據(jù)實(shí)施方案，合成抗感染劑可以選自包括紅霉素，莫匹羅星(mupricin) ， soframycin，克林霉素磷酸酯，氟康唑和磺胺嘧啶銀的 合成物的組。合成抗感染劑可以在約0.1%至約5% (w/w)的范圍內(nèi)。 根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，合成抗感染劑可以包括在約0.05%至約0.5%(w/w)范圍內(nèi)的磺胺嘧啶銀。根據(jù)實(shí)施方案，生物活性成分可以選自透明質(zhì)酸，粒細(xì)胞集落刺 激因子和轉(zhuǎn)化生長因子-a。透明質(zhì)酸(HA)廣泛存在于自然界的微生 物，人和動(dòng)物中。其高度粘稠，潤滑，因此可以用作增濕劑。根據(jù)實(shí) 施方案，透明質(zhì)酸可以與EGF組合，用于眼前房的再內(nèi)皮化。透明質(zhì) 酸可以在約0.1%至約5% (w/v)的范圍內(nèi)。粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激 因子(GM-CSF)增強(qiáng)粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的增殖。粒細(xì)胞集落刺激因子 可以在約0.002%至約0.004% (w/w)的范圍內(nèi)。轉(zhuǎn)化生長因子-a通過 表皮生長因子和血小板衍生生長因子(PDGF)的協(xié)同作用促進(jìn)正常傷 口愈合。轉(zhuǎn)化生長因子-a可以在約0.001%至約0.1% (w/w)的范圍內(nèi)。根據(jù)實(shí)施方案，重組抗生素包括溶葡萄球菌素。溶葡萄球菌素是 由葡萄球菌(Staphylococcus)產(chǎn)生的生物抗生素。溶葡萄球菌素可以 在大腸埃希桿菌(E.Coli)中克隆和表達(dá)，純化后以適宜的濃度配制， 與有效治療濃度的EGF組合，產(chǎn)生抗細(xì)菌作用。溶葡萄球菌素可以在 約0.001%至約0.1% (w/w)的范圍內(nèi)。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，天然產(chǎn)物可以選自包括蘆薈(aloevera)，蜂 蜜，姜黃和檀香木的組。姜黃是優(yōu)良的天然抗生素。蘆薈可以在約1% 至約2°/。 (w/w)的范圍內(nèi)，蜂蜜可以在約0.1%至約1% (w/w)的范圍 內(nèi)，姜黃可以在約5%至約80%(w/w)的范圍內(nèi)，檀香木可以在約0.2% 至約1% (w/w)的范圍內(nèi)。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，組合物可以包括在約0.02% (w/w)范圍內(nèi) 的無蛋白血提取物。無蛋白血提取物改善氧的利用，并促進(jìn)細(xì)胞對營 養(yǎng)素的攝取。根據(jù)實(shí)施方案，免疫調(diào)節(jié)劑包括/3-l，3-D-葡聚糖。組合物可以還 包括有效量的維生素A，維生素C和維生素D，其中免疫調(diào)節(jié)劑包括 在約0.5%至約2% (w/w)范圍內(nèi)的/3-l,3-D-葡聚糖。j8-l，3-D-葡聚糖本 身可以引起寬泛的抗感染作用，如對金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，大腸埃希桿菌(Escherichia coli)，白色念珠菌(Candida albicans)，卡氏肺孢子蟲(Pneumocytis carinii)，單核細(xì)胞增生性李 斯年寺菌(Listeria monococytogenesis)，豐土氏禾Uff"曼原蟲(Leishmama do磨ani)和單純性皰疹(Herpes simplex)的抗體反應(yīng)。根據(jù)實(shí)施方案，血管收縮劑包括醋酸氫化可的松。組合物還可以 包括在約2%至約5。/。(w/w)范圍內(nèi)的利多卡因，在約2%至約5%(w/w) 范圍內(nèi)的氧化鋅，在約0.25%至約2.5% (w/w)范圍內(nèi)的尿囊素，其中 血管收縮劑包括在約0.15%至約0.25% (w/w)范圍內(nèi)的醋酸氫化可的 松。根據(jù)實(shí)施方案，組合物可以用于治療痔瘡和fissure直腸炎。組合 物還可以提供疼痛癥狀的減輕。根據(jù)實(shí)施方案，組合物還可以包括在約2%至約5% (w/w)范圍 內(nèi)的氧化鋅和在約0.1%至約5% (w/w)范圍內(nèi)的水楊酸，其中治療劑 包括在約0.1%至約1% (w/w)范圍內(nèi)的丙酸氯倍他索。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，組合物可以配制成局部制劑。局部制劑選 自包括凝膠劑，噴霧劑，軟膏劑，乳膏劑和洗劑的組。根據(jù)實(shí)施方案， 組合物也可以是適于口服給藥的口服制劑和適于胃腸外給藥的胃腸外 制劑。用于口服給藥的制劑可以包括膠囊劑。用于胃腸外給藥的制劑 可以包括注射劑。然而，本發(fā)明的范圍不只限于這些制劑類型，而且 還可以擴(kuò)展至本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它制劑類型。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，用于治療傷口的方法可以包括施予有效量 組合物的步驟，其中組合物包括有效治療量的表皮生長因子和生理學(xué) 上可接受的試劑，其中生理學(xué)上可接受的試劑包括穩(wěn)定劑，防腐劑， 增稠劑，載體/稀釋劑和任選的pH調(diào)節(jié)劑及潤濕劑中的至少一種。根 據(jù)實(shí)施方案，穩(wěn)定劑包括L-賴氨酸鹽酸鹽，甘露醇和羧甲基纖維素中 的一種，防腐劑包括對羥基苯甲酸的鹽，增稠劑包括聚丙烯酸。根據(jù) 其它實(shí)施方案，防腐劑包括對羥基苯甲酸甲酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯 鈉。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，生理學(xué)上可接受的試劑還可以包括作為載 體的水，三乙醇胺，a-亞麻酸和甘油(潤濕劑)。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，組合物還可以包括有效治療量的治療劑。 治療劑可以選自包括合成抗感染劑，重組生物活性成分，重組抗生素， 天然產(chǎn)物，無蛋白血提取物，免疫調(diào)節(jié)劑，丙酸氯倍他索，磺胺嘧啶 銀和血管收縮劑的組。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，組合物可以用于治療傷口，如潰瘍，例如， 糖尿病足潰瘍，角膜潰瘍，胃潰瘍，靜脈性潰瘍，動(dòng)脈性潰瘍和壓迫 性潰瘍，由癌癥治療中所用輻射導(dǎo)致的皮膚燒傷，運(yùn)動(dòng)損傷，熱損傷，化學(xué)性損傷，物理性損傷，骨髓炎(osteomyelitits)，皮炎，肌痛，關(guān) 節(jié)痛，肌肉僵硬，關(guān)節(jié)僵直，裂傷，疤痕形成，手術(shù)創(chuàng)口，由環(huán)境因 素引起的褥瘡和切口，由分娩產(chǎn)生的疤痕，由麻風(fēng)分枝桿菌感染或?qū)?致類似病癥的感染引起的感覺喪失，痔瘡和胃十二指腸潰瘍，毛囊生 長及所有其它需要修復(fù)的皮膚疾病。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，本發(fā)明提供了制備用于治療傷口的組合物 的方法。所述方法可以包括先將有效治療量的生理學(xué)上可接受的試劑 溶解在水中，以獲得混合物，其中生理學(xué)上可接受的試劑包括穩(wěn)定劑， 防腐劑和增稠劑中的至少一種。根據(jù)實(shí)施方案，穩(wěn)定劑包括L-賴氨酸 鹽酸鹽和羧甲基纖維素中的一種，防腐劑包括對羥基苯甲酸的鹽，增 稠劑包括聚丙烯酸。根據(jù)其它實(shí)施方案，防腐劑包括對羥基苯甲酸甲 酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯鈉。所述方法可以還包括向所述混合物中加 入有效治療量的表皮生長因子，以獲得用于治療傷口的組合物。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，所述方法還可以包括向所述混合物中加入有效治療量的L-賴氨酸鹽酸鹽，甘露醇和聚丙烯酸中的至少一種，以獲得混懸液?？梢韵蛟摶鞈乙褐屑尤胗行е委熈康母视?。為了使其膨脹，可以攪拌該混懸液。該混懸液的pH可以維持在約6.3-6.4。該混懸 液的pH可以通過向該混懸液中加入三乙醇胺來維持。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，所述方法還可以包括向所述組合物中加入 有效治療量的治療劑。治療劑可以選自包括合成抗感染劑，生物活性 成分，重組抗生素，天然產(chǎn)物，無蛋白血提取物，免疫調(diào)節(jié)劑，丙酸 氯倍他索和血管收縮劑的組。合成抗感染劑可以選自包括紅霉素，莫 匹羅星(mupricin) ， soframycin，克林霉素磷酸酯，氟康唑和磺胺嘧 啶銀的合成物的組，生物活性成分可以選自透明質(zhì)酸，粒細(xì)胞集落刺 激因子和轉(zhuǎn)化生長因子-a，重組抗生素包括溶葡萄球菌素，天然產(chǎn)物可 以選自包括蘆薈，蜂蜜，姜黃和檀香木的組，免疫調(diào)節(jié)劑包括e-l,3-D-葡聚糖，血管收縮劑包括醋酸氫化可的松。現(xiàn)參考以下實(shí)施例對用于治療傷口的組合物進(jìn)行描述。實(shí)施例中 的百分比表示占總組合物的百分比。這些實(shí)施例只是作為本發(fā)明的實(shí) 例提供，而不希望限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1:將約0.165%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.57%的純化水中，得到混合物。隨后向該 混合物中加入約0.458%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.579%的甘露醇和約 0.916%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.289%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.005%的EGF，得 到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例2:將約0.162%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約89.916%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.450%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.496%的甘露醇和約 2.697%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.248%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.013%的EGF，得 到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例3:將約0.157%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.017%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約87.497°/。的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.437%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約8.750%的甘露醇和約 0.875%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.187%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.079°/。的EGF，得 到用于治療傷口的組合物。這樣便獲得了 EGF的不同組合物，按照ICH指導(dǎo)原則對這些組合 物進(jìn)行熱穩(wěn)定性研究。關(guān)于含有不同百分比EGF的制劑的安全性的臨 床前研究按照公認(rèn)的指導(dǎo)原則在大鼠和兔中進(jìn)行。簡而言之，急性毒 性研究進(jìn)行了8天，亞急性毒性研究迸行了 30天，眼刺激性研究進(jìn)行 了 7天。結(jié)果表明，研究期間動(dòng)物均正常，無動(dòng)物表現(xiàn)出任何與一般行為， 中樞和自主神經(jīng)系統(tǒng)，呼吸和循環(huán)系統(tǒng)相關(guān)的毒性癥狀。整個(gè)研究期 間，傷口區(qū)域沒有出血和紅斑。對照動(dòng)物和被治療動(dòng)物的生長速率和食物消耗量正常，并且無顯 著差異。所研究的對照組和治療組的生化參數(shù)都在正常范圍內(nèi)，未觀 察到異常。統(tǒng)計(jì)學(xué)評價(jià)顯示，對照組與不同治療組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明rhEGF不影響所研究的任何參數(shù)。對照組與治療組的血液參數(shù)之 間無明顯變化。在大鼠和兔中，EGF治療組均無明顯抗體反應(yīng)。在所研究的兩個(gè) 物種中，對照組和治療組的蛋白含量均無顯著差異。在第15天和第31 天，兩個(gè)物種的介質(zhì)組和高劑量組的雄性和雌性動(dòng)物的膠原蛋白含量 均顯著增加。隨后，還在皮膚移植供區(qū)(donor site skin grafts)，燒傷和糖尿病 足潰瘍患者中對制劑進(jìn)行了測試。數(shù)據(jù)顯示，與對照組13天的愈合時(shí)間相比，試驗(yàn)組的皮膚移植供 區(qū)的愈合時(shí)間僅為7天(P<0.001)。在燒傷病例的治療中，試驗(yàn)組的 愈合時(shí)間為9天，而在對照組中觀察到的愈合時(shí)間為20天(P〈0.05)。在第7周和15周時(shí)比較了糖尿病足的愈合速率。結(jié)果表明，到第 7周時(shí)，6.25%的對照病例愈合，而治療組中則有56%的病例愈合。P <0.001表明了上述差異的顯著性。到第15周時(shí)，觀察到37.5%的對照 組病例愈合，而在試驗(yàn)組中則有88%的病例愈合。P<0.005表明了上 述差異的顯著性。對EGF在凝膠形式中的穩(wěn)定性進(jìn)行了長期試驗(yàn)(5±3°C)和加速 試驗(yàn)(25±2°C， RH 60%±5%)。通過2年的長期試驗(yàn)和6個(gè)月的加速試驗(yàn)，對該制劑的穩(wěn)定性進(jìn)行監(jiān)測。數(shù)據(jù)表明，研究期間該分子穩(wěn) 定，并且顯示活性無顯著下降。本研究在面積大于20cm2，深度約10-40 mm的傷口中進(jìn)行。組合物的范圍不僅限于上述范圍，而且還包括本領(lǐng)域技術(shù)人員公 知的其它仍可以保持EGF的相同功能活性的組合物。該組合物被用作 皮膚移植，燒傷，切口，糖尿病足潰瘍，術(shù)后傷口，褥瘡，白癜風(fēng)和 由導(dǎo)向癌癥的輻射導(dǎo)致的皮膚損傷的修復(fù)的治療藥。實(shí)施例4:將約0.163%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約90.739%的純化水中獲得混合物。隨后，向該 混合物中加入約0.454%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.537°/。的甘露醇和約 0.907%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.268%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.907%的抗生素類抗 感染劑(antibiotic infective agent)和約0.005%的表皮生長因子(EGF)， 得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例5:將約0.016%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約卯.803%的純化水，得到混合物。隨后，向該 混合物中加入約0.453%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.540%的甘露醇和約 0.908%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.270%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.908%的抗生素類抗 感染劑和約0.082%的表皮生長因子(EGF)，得到用于治療傷口的組 合物。實(shí)施例6:將約0.164%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.478。/。的純化水中，得到混合物。隨后，向該混合物中加入約0.457%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.574。/。的甘露醇和約 0.914%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.286%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.091%的透明質(zhì)酸， 然后加入有效治療量的約0.014%的表皮生長因子(EGF)，得到用于 治療傷口的組合物。實(shí)施例7:將約0.158%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.017%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約88.269%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.441%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.413%的甘露醇和約 0.882%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.206%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約3.530。/。的透明質(zhì)酸， 然后加入有效治療量的約0.079%的表皮生長因子(EGF)，得到用于 治療傷口的組合物。實(shí)施例8:將約0.165。/。的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.521%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.458%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.576%的甘露醇和約 0.915%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.288%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.014%的表皮生長因 子(EGF)，然后加入有效治療量的約0.046%的溶葡萄球菌素，得到 用于治療傷口的組合物。實(shí)施例9:將約0.164%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.424%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.457%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.570%的甘露醇和約 0.914%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.285%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.082°/。的表皮生長因 子(EGF)，然后加入有效治療量的約0.082。/。的溶葡萄球菌素，得到 用于治療傷口的組合物。實(shí)施例10:將約0.162%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約90.232%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.451%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.512%的甘露醇和 0.902%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.256%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.005%的表皮生長因 子(EGF)，然后加入有效量的約0.902%的^薈，約0.541%的維生素 E和約0.018°/。的維生素C，得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例11:將約0.154%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和0.017%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約85.752%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.429%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.288%的甘露醇和 0.858%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.144%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.013%的表皮生長因 子(EGF)，然后加入有效量的約5.145%的蘆薈，約0.858%的維生素 E和約0.343。/。的維生素C，得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例12:將約0.147。/。的對羥基苯甲酸甲酯鈉和0.016%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約81.907%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.410%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.095%的甘露醇和 0.819。/。的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.048%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.074%的表皮生長因 子(EGF)，然后加入有效量的約8.191%的蘆薈，約1.474%的維生素 E和約0.819%的維生素C，得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例13:將約0.149%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.017%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約82.757%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入有效量的約0.414%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.138%的 甘露醇和約0.828%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步 膨脹。向該混懸液中加入有效量的約2.069%的甘油。加入有效量的三 乙醇胺，使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的0.005%的 表皮生長因子(EGF)，然后加入有效量的約0.828%的蘆薈，約8.276% 的姜黃，約0.248%的檀香木和約0.273%的蜂蜜，得到用于治療傷口的 組合物。
實(shí)施例14:將約0.098%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.011%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約54.478%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入有效量的約0.273%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約2.734%的 甘露醇和約0.547%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步 膨脹。向該混懸液中加入有效量的約1.367°/。的甘油。加入有效量的三 乙醇胺，使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.049% 的表皮生長因子(EGF)，然后加入有效量的約0.984%的蘆薈，約 38.274%的姜黃，約0.492°/。的檀香木和約0.492%的蜂蜜，得到用于治 療傷口的組合物。
實(shí)施例15:將約0.164%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.553%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.457%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.577。/。的甘露醇和 約0.915。/。的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向 該混懸液中加入有效量的約2.288%的甘油。加入有效量的三乙醇胺， 使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.010%的表皮生 長因子(EGF)，然后加入有效量的約0.018%的無蛋白血提取物，得 到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例16:將約0.165%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.483°/。的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.457%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4，574%的甘露醇和 約0.915%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向 該混懸液中加入有效量的約2.287%的甘油。加入有效量的三乙醇胺， 使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.082%的表皮生 長因子(EGF)，然后加入有效量的約0.018%的無蛋白血提取物，得 到用于治療傷口的組合物。
實(shí)施例17:將約0.165%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.560%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.458%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.578%的甘露醇和約 0.916。/。的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.289%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.014。/。的表皮生長因 子(EGF)，然后加入有效量的約0.003%的GM-CSF，得到用于治療 傷口的組合物。
實(shí)施例18:將約0.165%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和0.018%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.496%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.457%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.574。/。的甘露醇和約 0.914%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.287%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.082%的表皮生長因 子(EGF),然后加入有效量的約0.003%的GM-CSF，得到用于治療 傷口的組合物。
實(shí)施例19:將約0.164%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約90.567%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.460%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.550%的甘露醇和約0.910%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向 該混懸液中加入有效量的約2.270%的甘油。加入有效量的三乙醇胺， 使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.010%的表皮生 長因子(EGF)，然后加入有效量的約0.550。/。的/3-l，3-D-葡聚糖，得到 用于治療傷口的組合物。實(shí)施例20:將約0.163%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約90.567%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.453%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.528%的甘露醇和 約0.906%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向 該混懸液中加入有效量的約2.264%的甘油。加入有效量的三乙醇胺， 使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.014%的表皮生 長因子(EGF)，然后加入有效量的約1.087%的0-l，3-D-葡聚糖，得到 用于治療傷口的組合物。實(shí)施例21 :將約0，165%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.565%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.458%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.578%的甘露醇和 約0.916%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向 該混懸液中加入有效量的約2.289%的甘油。加入有效量的三乙醇胺， 使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.005%的表皮生 長因子(EGF)，然后加入有效量的約0.005。/。的PDGF，得到用于治 療傷口的組合物。實(shí)施例22:將約0.165%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在91.424%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.457%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.571%的甘露醇和約 0.914°/。的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.286%的甘油。加入有效量的三乙醇胺，使 pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的0.082。/。的表皮生長因子(EGF)，然后加入有效量的約0.082%的PDGF，得到用于治療傷口 的組合物。實(shí)施例23:將約0.164。/。的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.286%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.456%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.564%的甘露醇， 約0.913%的聚丙烯酸，約0.018%的氧化鋅，約0.018%的水楊酸，約 0.274%的丙酸氯倍他索，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。 向該混懸液中加入有效量的約2.282%的甘油。加入有效量的三乙醇胺， 使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.005%的表皮生 長因子(EGF)，得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例24:將約0.157。/。的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.017%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約87.478%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.437%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.374%的甘露醇， 約0.876%的聚丙烯酸，約2.187%的氧化鋅，約1.750%的水楊酸，約 0.525%的丙酸氯倍他索，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。 向該混懸液中加入有效量的約2.187%的甘油。加入有效量的三乙醇胺， 使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.013%的表皮生 長因子(EGF)，得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例25:將約0.152%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.017%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約84.610%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.423%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.230%的甘露醇， 約0.846%的聚丙烯酸，約3.384%的氧化鋅，約3.384°/。的水楊酸，約 0.761%的丙酸氯倍他索，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。 向該混懸液中加入有效量的約2.115。/。的甘油。加入有效量的三乙醇胺， 使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.076%的表皮生 長因子(EGF)，得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例26:將約0.164%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.490%的純化水，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.457%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.570。/。的甘露醇和約 0.914%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.287%的甘油。加入三乙醇胺，使pH保持 在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.010%的表皮生長因子 (EGF)，然后加入有效量的約0.091%的磺胺嘧啶銀，得到用于治療 傷口的組合物。實(shí)施例27:將約0.16%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.020%的對羥 基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.360%的純化水中，得到混合物。隨后，向 該混合物中加入約0.46°/。的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.570%的甘露醇和約 0.910%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該 混懸液中加入有效量的約2.280%的甘油。加入三乙醇胺，使pH保持 在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.010%的表皮生長因子 (EGF)，然后加入有效量的約0.230%的磺胺嘧啶銀，得到用于治療 傷口的組合物。實(shí)施例28:將約0.164%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.018%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約91.228%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.456%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.561%的甘露醇和 約0.912%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向 該混懸液中加入有效量的約2.281%的甘油。加入三乙醇胺，使pH保 持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.014%的表皮生長因子 (EGF)，然后加入有效量的約0.365。/。的磺胺嘧啶銀，得到用于治療 傷口的組合物。實(shí)施例29:將約0.155%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.017%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約85.873%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.429%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.294%的甘露醇和約0.859%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向該混懸液中加入有效量的約2.147%的甘油。加入三乙醇胺，使pH保 持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.001%的表皮生長因子 (EGF)，然后加入有效量的約0.215%的醋酸氫化可的松，約2.147% 的利多卡因，約3.435%的氧化鋅和約0.429%的尿囊素，得到用于治療 傷口的組合物。實(shí)施例30:將約0.155%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.017%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約85.859%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.429。/。的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.293%的甘露醇和 約0.859%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向 該混懸液中加入有效量的約2.147%的甘油。加入三乙醇胺，使pH保 持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.005%的表皮生長因子 (EGF)，然后加入有效量的約0.215%的醋酸氫化可的松，約2.147% 的利多卡因，約3.435%的氧化鋅和約0.429%的尿囊素，得到用于治療 傷口的組合物。實(shí)施例31:將約0.151%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.017%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約83.742%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.419%的L-賴氨酸鹽酸鹽，約4.187%的甘露醇和 約0.837。/。的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。向 該混懸液中加入有效量的約2.094%的甘油。加入三乙醇胺，使pH保 持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的約0.013%的表皮生長因子 (EGF)，然后加入有效量的約0.167%的醋酸氫化可的松，約2.931% 的利多卡因，約4.187%的氧化鋅和約1.256%的尿囊素，得到用于治療 傷口的組合物。實(shí)施例32:將約0.179。/。的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.020%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約99.034%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.419%的L-賴氨酸鹽酸鹽和有效量的約0.249%的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。加入三乙醇胺，使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的在約0,099%范 圍內(nèi)的表皮生長因子(EGF)，得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例33:將約0.177%的對羥基苯甲酸甲酯鈉和約0.020%的對 羥基苯甲酸丙酯鈉溶解在約97.765%的純化水中，得到混合物。隨后， 向該混合物中加入約0.419%的L-賴氨酸鹽酸鹽和有效量的約0.736% 的聚丙烯酸，得到混懸液。攪拌，使混懸液進(jìn)一步膨脹。加入三乙醇 胺，使pH保持在約6.3-6.4。最后，加入有效治療量的在約0.884%范 圍內(nèi)的表皮生長因子(EGF)，得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例34:首先將有效量的約98.131。/。的純化水加熱至S(TC。向 該水中加入有效量的約1%的羧甲基纖維素，攪拌，使混合物膨脹。所 得混合物在12rC滅菌15分鐘。然后冷卻滅菌后的混合物。隨后加入 約0.419%的L-賴氨酸鹽酸鹽。最后，加入有效治療量的約0.45%的表 皮生長因子(EGF)，并充分混合，得到用于治療傷口的組合物。實(shí)施例35:首先將有效量的約97.381。/。的純化水加熱至8(TC。向 該水中加入有效量的約1.64%的羧甲基纖維素，攪拌，使混合物膨脹。 所得混合物在12rC滅菌15分鐘。然后冷卻滅菌后的混合物。隨后加 入約0.419%的L-賴氨酸鹽酸鹽。最后，加入有效治療量的約0.9%的表 皮生長因子(EGF)，并充分混合，得到用于治療傷口的組合物。加入成分的方法可以按相同順序或按制劑領(lǐng)域技術(shù)人員公知的可 以產(chǎn)生同樣穩(wěn)定的制劑的不同順序進(jìn)行。本發(fā)明的范圍不限于以相同 的順序加入相同賦形劑或其它具有類似功能或不同濃度的賦形劑，也 不限于可以產(chǎn)生穩(wěn)定制劑或類似效果的其它加入順序。所有組合物通過ELISA測試EGF活性，并通過藥典方法或其它經(jīng) 適當(dāng)驗(yàn)證，能清楚地證實(shí)活性的方法測試所有其它成分。組合物的EGF活性用3T3細(xì)胞系的增殖進(jìn)行測試。簡而言之，在 該方法中，已知量的3T3細(xì)胞用不同量的EGF標(biāo)準(zhǔn)品和配制的EGF在 37t:孵育5-8天。估算細(xì)胞計(jì)數(shù)，并將其與對照進(jìn)行比較。結(jié)果證明，用EGF處理的細(xì)胞與對照相比的增殖明顯更強(qiáng)。類似 地，SDS圖譜也顯示，整個(gè)研究期間維持了同樣的圖譜。組合物的范圍不只限于上述范圍，并且還包括本領(lǐng)域技術(shù)人員公 知的仍可以保持相同EGF功能活性的其它組合物。在前述說明書中描述了本發(fā)明的具體實(shí)施方案。然而，本領(lǐng)域技 術(shù)人員了解，在不超出權(quán)利要求書中所述本發(fā)明的范圍的條件下可以 進(jìn)行多種修飾和改變。因此，說明書和實(shí)施例應(yīng)被認(rèn)為具有說明性而 非限制性的意義，并且希望所有這類修飾都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。 益處，優(yōu)點(diǎn)，解決技術(shù)問題的技術(shù)方案和任何可能導(dǎo)致任何益處，優(yōu) 點(diǎn)或技術(shù)方案產(chǎn)生或變得更顯著的要素不應(yīng)被理解為任何或所有權(quán)利 要求的關(guān)鍵性的，必需的或必要的特征或要素。本發(fā)明僅受到所附權(quán) 利要求，包含本申請待決期間進(jìn)行的任何修改，及所述這些權(quán)利要求 的所有等同體的限定。
權(quán)利要求
1. 用于治療傷口的表皮生長因子組合物，所述組合物包括有效治療量的表皮生長因子和生理學(xué)上可接受的試劑，其中生理學(xué)上可接受的試劑包括穩(wěn)定劑，防腐劑，增稠劑，載體/稀釋劑和任選的pH調(diào)節(jié)劑及潤濕劑中的至少一種。
2. 權(quán)利要求1中所述的組合物，其包括在約0.001%至約1.0% (w/w)范圍內(nèi)的表皮生長因子。
3. 權(quán)利要求1中所述的組合物，其中的表皮生長因子是重組表皮 生長因子。
4. 權(quán)利要求1中所述的組合物，其中的穩(wěn)定劑包括L-賴氨酸鹽酸 鹽，甘露醇和羧甲基纖維素中的至少一種，防腐劑包括對羥基苯甲酸 的鹽，增稠劑包括聚丙烯酸，載體是水，并且pH調(diào)節(jié)劑是三乙醇胺。
5. 權(quán)利要求4中所述的組合物，其中的防腐劑包括對羥基苯甲酸 甲酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯鈉。
6. 權(quán)利要求1和4中所述的組合物，其中至少一種生理學(xué)上可接 受的試劑還包括作為潤濕劑的a-亞油酸和甘油。
7. 前述權(quán)利要求中所述的組合物，其中甘露醇在約0.5%至約10% (w/w)的范圍內(nèi)，L-賴氨酸鹽酸鹽在約0.1%至約2% (w/w)的范圍內(nèi)，聚丙烯酸在約0.25%至約3%，優(yōu)選0.25%至0.8% (w/w)的范圍 內(nèi)，三乙醇胺在約1%至20% (v/v)的范圍內(nèi)，對羥基苯甲酸甲酯鈉在 約0.016°/。至約0.18。/。(w/w)的范圍內(nèi)，對羥基苯甲酸丙酯鈉在約0.01% 至約0.02% (w/w)的范圍內(nèi)，甘油為約1%至約2.5% (w/w) ， a-亞 油酸的量為有效治療量，羧甲基纖維素在約0.6%至約1.6% (w/w)的范圍內(nèi)，水在約50%至約95% (w/v)的范圍內(nèi)，并且所述組合物被配 制成半固體制劑。
8. 權(quán)利要求1中所述的組合物，其包括約97.5%至約99% (w/v) 的水，其中羧甲基纖維素在約0.6%至約1.6% (w/w)的范圍內(nèi)，所述 組合物被配制成膠囊。
9. 權(quán)利要求1和6中所述的組合物，其還包括有效治療量的治療 劑，其中治療劑選自合成抗感染劑，重組生物活性成分，重組抗生素， 天然產(chǎn)物，無蛋白血提取物，免疫調(diào)節(jié)劑，丙酸氯倍他索和血管收縮 劑。
10. 權(quán)利要求9的組合物，其中無蛋白血提取物為約0.02°/。(w/w)。
11. 權(quán)利要求9中所述的組合物，其還包括在約0.2%至約5% (w/w)范圍內(nèi)的氧化鋅和在約0.1%至約5% (w/w)范圍內(nèi)的水楊酸，其中的治療劑包括在約0.1%至約1% (w/w)范圍內(nèi)的丙酸氯倍他索。
12. 權(quán)利要求9中所述的組合物，其中的合成抗感染劑包括紅霉 素，莫匹羅星(mupricin) ， soframycin，克林霉素磷酸酯，氟康唑和 磺胺嘧啶銀；生物活性成分選自透明質(zhì)酸，粒細(xì)胞集落刺激因子和轉(zhuǎn) 化生長因子-o:;重組抗生素包括溶葡萄球菌素；天然產(chǎn)物包括蘆薈(aloe vera),蜂蜜，姜黃和檀香木；免疫調(diào)節(jié)劑包括/3-l，3-D-葡聚糖；以及 血管收縮劑包括醋酸氫化可的松。
13. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其中合成抗感染劑在約0.1%至 約5% (w/w)的范圍內(nèi)。
14. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其中合成抗感染劑包括在約 0.05%至約0.5% (w/w)范圍內(nèi)的磺胺嘧啶銀。 .
15. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其中透明質(zhì)酸在約0.1。/。至約 5% (w/v)的范圍內(nèi)。
16. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其中溶葡萄球菌素在約0.001% 至約0.1% (w/w)的范圍內(nèi)。
17. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其中轉(zhuǎn)化生長因子-a在約 0.001%至約0.1% (w/w)的范圍內(nèi)。
18. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其中粒細(xì)胞集落刺激因子在約 0.002°/。至約0.004% (w/w)的范圍內(nèi)。
19. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其中蘆薈在約1。/。至約2。/。(w/w) 的范圍內(nèi)，蜂蜜在約0.1%至約1% (w/w)的范圍內(nèi)，姜黃在約5°/。至 約80% (w/w)的范圍內(nèi)，并且檀香木在約0.2%至約1% (w/w)的范 圍內(nèi)。
20. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其還包括有效治療量的維生素 A，維生素C和維生素D，其中0-l,3-D-葡聚糖在約0.5%至約2%(w/w) 的范圍內(nèi)。
21. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其還包括在約2%至5% (w/w) 范圍內(nèi)的利多卡因，在約2%至5。/。(w/w)范圍內(nèi)的氧化鋅和在約0.25% 至2.5。/。(w/w)范圍內(nèi)的尿囊素，其中治療劑包括在約0.15%至0.2525%(w/w)范圍內(nèi)的醋酸氫化可的松。
22. 權(quán)利要求12中所述的組合物，其中所述組合物被配制成局部 制劑。
23. 權(quán)利要求1中所述的組合物，其中所述組合物被配制成局部 制劑，口服制劑和胃腸外制劑中的至少 一 種。
24. 權(quán)利要求23中所述的組合物，其中的局部制劑包括凝膠劑， 噴霧劑，軟膏劑，乳膏劑和洗劑。
25. 權(quán)利要求23中所述的組合物，其中的口服制劑包括片劑和膠 囊劑。
26. 權(quán)利要求23中所述的組合物，其中的胃腸外制劑包括注射劑。
27. 用于治療傷口的方法，所述方法包括施予有效量的組合物的 步驟，所述組合物包括有效治療量的表皮生長因子和生理學(xué)上可接受 的試劑，其中至少一種生理學(xué)上可接受的試劑包括穩(wěn)定劑，防腐劑， 增稠劑，載體/稀釋劑和任選的pH調(diào)節(jié)劑及潤濕劑中的至少一種。
28. 權(quán)利要求27中所述的方法，其中所述組合物用于治療潰瘍， 糖尿病足潰瘍，角膜潰瘍，胃潰瘍，靜脈性潰瘍，動(dòng)脈性潰瘍，壓迫 性潰瘍，口腔潰瘍，由癌癥治療中所用輻射導(dǎo)致的皮膚燒傷，運(yùn)動(dòng)損 傷，熱損傷，化學(xué)性損傷，物理性損傷，骨髓炎(osteomyelitits)，皮 炎，肌痛，關(guān)節(jié)痛，肌肉僵硬，關(guān)節(jié)僵直，裂傷，疤痕形成，手術(shù)創(chuàng) 口，由環(huán)境因素引起的褥瘡和切口，由分娩產(chǎn)生的疤痕，由麻風(fēng)分枝 桿菌感染引起的感覺喪失，痔瘡和胃十二指腸潰瘍，毛囊生長及皮膚 疾病。
29. 權(quán)利要求28中所述的方法，其中表皮生長因子在0.001%至約 1.0% (w/w)的范圍內(nèi)。
30. 權(quán)利要求28中所述的方法，其中穩(wěn)定劑包括L-賴氨酸鹽酸鹽， 甘露醇和羧甲基纖維素中的至少一種，防腐劑包括對羥基苯甲酸的鹽，以及增稠劑包括聚丙烯酸。
31. 權(quán)利要求28中所述的方法，其中至少一種生理學(xué)上可接受的 試劑還包括作為載體的水，作為pH調(diào)節(jié)劑的三乙醇胺，作為潤濕劑的 a-亞油酸和甘油。
32. 權(quán)利要求30和31中所述的方法，其中甘露醇在約0.5%至約 10% (w/w)的范圍內(nèi)，L-賴氨酸鹽酸鹽在約0.1%至約2% (w/w)的 范圍內(nèi)，聚丙烯酸在約0.25%至約3% (w/w)的范圍內(nèi)，三乙醇胺在 約1%至20% (v/v)的范圍內(nèi)，對羥基苯甲酸甲酯鈉在約0.016%至約 0.18% (w/w)的范圍內(nèi)，對羥基苯甲酸丙酯鈉在約0.01%至約0.02%(w/w)的范圍內(nèi)，甘油為約1%至約2.5% (w/w) ， a-亞油酸的量為 有效治療量，羧甲基纖維素在約0.6%至約1.6% (w/w)的范圍內(nèi)，以 及水在約50%至約99.5% (w/v)的范圍內(nèi)。
33. 權(quán)利要求32中所述的方法，其中所述組合物還包括治療劑， 其中的治療劑選自合成抗感染劑，重組生物活性成分，重組抗生素， 天然產(chǎn)物，無蛋白血提取物，免疫調(diào)節(jié)劑，丙酸氯倍他索和血管收縮 劑。
34. 權(quán)利要求33中所述的方法，其中的合成抗感染劑包括紅霉素， 莫匹羅星(mupridn) ， soframycin，克林霉素磷酸酯，氟康唑和磺胺 嘧啶銀；生物活性成分選自透明質(zhì)酸，粒細(xì)胞集落刺激因子和轉(zhuǎn)化生 長因子-a;重組抗生素包括溶葡萄球菌素；天然產(chǎn)物包括蘆薈，蜂蜜， 姜黃和檀香木；免疫調(diào)節(jié)劑包括/3-l，3-D-葡聚糖；以及血管收縮劑包括 醋酸氫化可的松。
35. 制備用于治療傷口的組合物的方法，所述方法包括如下步驟: 將有效治療量的生理學(xué)上可接受的試劑溶解在水中得到混合物，其中 所述生理學(xué)上可接受的試劑包括穩(wěn)定劑，防腐劑，增稠劑，載體/稀釋劑和任選的pH調(diào)節(jié)劑及潤濕劑的至少一種；和向所述混合物中加入有 效治療量的表皮生長因子，獲得所述組合物。
36. 權(quán)利要求35中所述的方法，其中的穩(wěn)定劑包括L-賴氨酸鹽酸鹽，甘露醇和羧甲基纖維素中的至少一種，防腐劑包括對羥基苯甲酸 的鹽，以及增稠劑包括聚丙烯酸。
37. 權(quán)利要求35中所述的方法，其中的防腐劑包括對羥基苯甲酸 甲酯鈉和對羥基苯甲酸丙酯鈉中的至少一種。
38. 權(quán)利要求35中所述的方法，其中生理學(xué)上可接受的試劑還包 括作為載體的水，作為pH調(diào)節(jié)劑的三乙醇胺，作為潤濕劑的亞油酸和 甘油。
39. 權(quán)利要求35中所述的方法，其中的溶解步驟還包括 向所述混合物中加入有效治療量的L-賴氨酸鹽酸鹽，甘露醇和聚丙烯酸中的至少一種，得到混懸液；以及， 向所述混懸液加入有效治療量的甘油。
40. 權(quán)利要求39中所述的方法，其中L-賴氨酸鹽酸鹽在約0.1% 至約2% (w/w)的范圍內(nèi)，甘露醇在約0.5%至約10% (w/w)的范圍 內(nèi)，聚丙烯酸在約0.25%至約3%(w/w)的范圍內(nèi)，以及甘油為約1.0% 至約2.5% (w/w)。
41. 權(quán)利要求43中所述的方法，還包括攪拌所述混懸液。
42. 權(quán)利要求44中所述的方法，還包括使所述混懸液的pH保持 在約6.3至6.4。
43. 權(quán)利要求45中所述的方法，其中的保持步驟還包括向所述混懸液中加入三乙醇胺。
44. 權(quán)利要求43中所述的方法，其中三乙醇胺在約1%至約20% (v/v)的范圍內(nèi)。
45. 權(quán)利要求35中所述的方法，還包括向所述組合物中加入治 療劑。
46. 權(quán)利要求35中所述的方法，其中的治療劑選自合成抗感染劑， 生物活性成分，重組抗生素，天然產(chǎn)物，無蛋白血提取物，免疫調(diào)節(jié) 劑，丙酸氯倍他索和血管收縮劑。
47. 權(quán)利要求35中所述的方法，其中的合成抗感染劑選自包括紅 霉素，莫匹羅星(mupricin) ， soframycin，克林霉素磷酸酯，氟康唑 和磺胺嘧啶銀的合成物的組，生物活性成分選自包括透明質(zhì)酸，粒細(xì) 胞集落刺激因子和轉(zhuǎn)化生長因子-a的生物活性成分的組，重組抗生素 選自包括溶葡萄球菌素的組，天然產(chǎn)物包括蘆薈，蜂蜜和姜黃，免疫 調(diào)節(jié)劑選自包括P-l,3-D-葡聚糖的組，以及血管收縮劑包括醋酸氫化可 的松。
全文摘要
本申請?zhí)峁┝擞糜谥委焸诘慕M合物，其中該組合物可以包括有效治療量的表皮生長因子和生理學(xué)上可接受的試劑，其中生理學(xué)上可接受的試劑包括穩(wěn)定劑，防腐劑，增稠劑，載體/稀釋劑和任選的pH調(diào)節(jié)劑及潤濕劑中的至少一種。
文檔編號A61K9/00GK101217938SQ200680025189
公開日2008年7月9日 申請日期2006年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2005年5月27日
發(fā)明者克里希納·穆爾蒂·埃拉, 斯里尼瓦斯·堪納帕·韋利梅杜 申請人:博哈拉特生物技術(shù)國際有限公司