本發(fā)明屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種在微通道反應(yīng)器中制備富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物的方法。

背景技術(shù)：

生物活性肽是指來源于動植物和微生物體的、具有生物活性作用的肽鏈片段。牛乳是生物活性肽的主要來源。牛乳中所含的生物活性肽分為游離生物活性肽和待酶解生物活性肽。牛乳中游離活性肽包括胰島素及胰島素樣生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、表皮生長因子和游離神經(jīng)生長因子等。牛乳中待酶解的活性肽主要包括酪蛋白磷酸肽、類嗎啡肽、抗高血壓肽、免疫調(diào)節(jié)肽、抗血栓肽、抗菌肽等多種生物活性肽。乳蛋白活性肽具有多種生理活性功能，已經(jīng)成為食品工業(yè)重要的研究開發(fā)熱點(diǎn)。

乳脂肪球膜(milkfatglobulemembrane,mfgm)是指在哺乳動物乳中包圍脂肪球的膜或膜相關(guān)物質(zhì)。乳脂肪球膜含有特定的糖蛋白如乳鐵蛋白、黏蛋白、乳粘素和黃嘌呤氧化酶以及復(fù)合脂質(zhì)如甘油磷脂和鞘脂等。在哺乳動物乳中，脂肪約占40g/l，主要由甘三脂(總脂肪的96％，w/w)、甘二酯(總脂肪的3％，w/w)和復(fù)合脂質(zhì)(總脂肪的1％，w/w)組成。

磷脂酰絲氨酸是一類普遍存在的磷脂，通常位于細(xì)胞膜的內(nèi)層，與一系列的膜功能有關(guān)。磷脂酰絲氨酸能增加腦突刺數(shù)目、腦細(xì)胞膜的流動性及促進(jìn)腦細(xì)胞葡萄糖代謝，因而使腦細(xì)胞更活躍，如今已被越來越多地應(yīng)用于醫(yī)藥及保健領(lǐng)域。

富含mfgm的各種成分可以商業(yè)化獲得。mfgm可存在于奶油、酪乳和全脂乳中。例如lacprodanmfgm-10，它是arlafoodingredientamba(丹麥)生產(chǎn)的富含mgfm的乳清蛋白組分。由于富含乳脂肪球膜mfgm產(chǎn)品常常含有豐富的蛋白和磷脂(含有大約50％蛋白和約12％的磷脂，包括約3％左右的磷脂酰膽堿和約2.7％的鞘磷脂，w/w)，因此可以此作為基礎(chǔ)原料，運(yùn)用酶法工藝，將其開發(fā)成為富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物，并且，將該營養(yǎng)組合物應(yīng)用在食品、營養(yǎng)保健和化妝品等領(lǐng)域。

目前制備乳蛋白活性肽的方法主要分為以下兩種：

1，化學(xué)水解法：將乳蛋白與一定濃度的酸或堿溶液混合，在密閉容器中，在一定溫度和壓力下，斷裂肽鏈，然后分離純化水解產(chǎn)物。但本法需要使用大量的酸堿，且制備得到的活性肽產(chǎn)物有異味，因此化學(xué)水解法逐步被生物法所取代。

2，生物法：使用蛋白酶或者直接使用微生物(含復(fù)合蛋白酶)，在一定溫度條件下水解蛋白質(zhì)，得到生物活性肽，具有操作條件溫和，不使用有毒化學(xué)試劑，產(chǎn)品品質(zhì)好等諸多優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)成為目前生物活性肽制備的主要方法。

現(xiàn)有技術(shù)中，有關(guān)磷脂酰絲氨酸的制備方法有多種，其中以提取法和酶轉(zhuǎn)化法為主。提取法是從動物磷脂中提取磷脂酰絲氨酸，主要以動物的大腦為原料。專利cn1583766a就是以動物腦為原料提取磷脂酰絲氨酸。但由于瘋牛病等原因，其產(chǎn)品安全性遭到懷疑，現(xiàn)已被淘汰。近年來酶催化技術(shù)被廣泛應(yīng)用于磷脂酰絲氨酸的制備中，例如專利cn101230365a，就是用大豆卵磷脂為原料酶法制備磷脂酰絲氨酸，專利cn100402656c是以提取自魚肝中的磷脂為原料，專利cn101157946a以提取自魷魚中的磷脂為原料，采用磷脂酶d酶法催化魚肝中的磷脂酰膽堿或魷魚中的磷脂酰膽堿與絲氨酸反應(yīng)制備富含多不飽和雙鍵脂肪?；牧字＝z氨酸。

但是，目前酶催化制備磷脂酰絲氨酸技術(shù)都面臨著產(chǎn)品純度不高的問題，主要原因是目前酶催化反應(yīng)都是采用傳統(tǒng)的釜式反應(yīng)器，由于界面反應(yīng)的特性，受制于釜式反應(yīng)器傳熱傳質(zhì)較慢、反應(yīng)物不易與酶充分接觸而致使催化反應(yīng)不徹底，以及產(chǎn)物磷脂酰絲氨酸達(dá)到一定濃度后易被磷脂酶d水解生成磷脂酸等副產(chǎn)物，因而導(dǎo)致了最終產(chǎn)品中磷脂酰絲氨酸的含量不高，底物殘留量高且含有較高量的磷脂酸等副產(chǎn)物。因此，如何有效增加反應(yīng)體系的傳質(zhì)效果，提高催化反應(yīng)的效率，加快反應(yīng)進(jìn)程，從而縮短反應(yīng)時(shí)間，降低磷脂酸水解副產(chǎn)物的生成，一直是酶催化制備磷脂酰絲氨酸技術(shù)需要解決的關(guān)鍵難題。

微通道反應(yīng)器是一種連續(xù)流動的管道式反應(yīng)器，其中該管道內(nèi)徑尺寸一般控制在10-1000微米之間，是一種把化學(xué)或者酶催化反應(yīng)控制在微小反應(yīng)空間的裝置。

迄今為止，尚未見以富含mgfm的乳清蛋白為原料，運(yùn)用微通道反應(yīng)器，使用酶催化技術(shù)，制備富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物的工藝研究。

基于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
：

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)不足之處而提供一種將富含mgfm的乳清蛋白為原料，運(yùn)用微通道反應(yīng)器，使用酶催化技術(shù)，制備富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物的方法。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：一種制備富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物的方法，制備經(jīng)過下列步驟：

步驟一，將富含mgfm的乳清蛋白反應(yīng)液和蛋白酶溶液泵入微通道反應(yīng)器的第一混合模塊，二者混合后進(jìn)入第一反應(yīng)模塊中并迅速升溫進(jìn)行蛋白酶解反應(yīng)，制備得到乳蛋白活性肽體系；

步驟二，乳蛋白活性肽體系進(jìn)入第一高溫模塊，高溫鈍化蛋白酶活性，終止酶解反應(yīng)，反應(yīng)體系流經(jīng)第一低溫模塊后進(jìn)入第二混合模塊；

步驟三，將包含了磷脂酶d溶液的絲氨酸溶液泵入微通道反應(yīng)器的第二混合模塊，與步驟二制備得到的反應(yīng)體系充分混合，得到混合反應(yīng)體系；

步驟四，步驟三中的混合反應(yīng)體系進(jìn)入第二反應(yīng)模塊，迅速升溫至工藝要求的溫度，進(jìn)行磷脂酶d催化反應(yīng)；

步驟五，磷脂酶d催化反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)體系進(jìn)入第二高溫模塊，高溫鈍化磷脂酶d活性，終止酶解反應(yīng)；

步驟六，反應(yīng)體系離開第二高溫模塊后，進(jìn)入第二低溫模塊，迅速降溫至工藝要求的溫度，最后反應(yīng)體系流出微通道反應(yīng)器，得到富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物產(chǎn)品。

進(jìn)一步地，所述微通道反應(yīng)器包括混合模塊、反應(yīng)模塊、高溫模塊和低溫模塊，每個(gè)模塊的流體通道長度為0.1m～300m，優(yōu)選為1m～60m；每個(gè)模塊的流體通道的寬度和深度為0.5μm～10mm，優(yōu)選為0.1mm～1mm；每個(gè)模塊部分環(huán)節(jié)的流體通道寬度和深度為0.5μm～100μm。

進(jìn)一步地，所述步驟一中反應(yīng)液中各物質(zhì)的配比關(guān)系如下：富含mgfm的乳清蛋白溶液由富含mgfm的乳清蛋白與水按照重量比為1:10～15混合均勻而得到；蛋白酶溶液由復(fù)合酶與水按照重量比為1:100～500混合均勻而得到。

進(jìn)一步地，所述步驟一中，第一混合模塊的溫度為0～20攝氏度，優(yōu)選10～15度；反應(yīng)體系在混合模塊停留時(shí)間為30～1200秒，優(yōu)選30～300秒。

進(jìn)一步地，所述步驟一中，第一反應(yīng)模塊內(nèi)的反應(yīng)溫度為35～55攝氏度，優(yōu)選45～50攝氏度；反應(yīng)體系在第一反應(yīng)模塊中的停留時(shí)間為30～1200秒，優(yōu)選60～300秒。

進(jìn)一步地，所述步驟二中，第一高溫模塊的溫度為75～105攝氏度，優(yōu)選85～90攝氏度；反應(yīng)體系在第一高溫模塊中停留時(shí)間為10～1200秒，優(yōu)選15～120秒。

進(jìn)一步地，所述步驟二中，第一低溫模塊的溫度為0～20攝氏度，優(yōu)選10～15度；反應(yīng)體系在第一低溫模塊停留時(shí)間為30～1200秒，優(yōu)選30～300秒。

進(jìn)一步地，所述步驟三中，所述絲氨酸溶液由絲氨酸與水按照重量比為1:10～25，優(yōu)選10～15，混合均勻而得到。

絲氨酸的質(zhì)量與原料(富含mgfm的乳清蛋白)的重量比為1：2～10，優(yōu)選4～5；往溶液里添加鈣鹽，鈣鹽在每升反應(yīng)液中的重量份為0.05～0.3，優(yōu)選0.1～0.2；往溶液里添加磷脂酶d，磷脂酶d在每升反應(yīng)液中的重量份為0.01～0.1，優(yōu)選0.05～0.06。

進(jìn)一步地，所述步驟四中，第二混合模塊的溫度為0～20攝氏度，優(yōu)選10～15度；反應(yīng)體系在混合模塊停留時(shí)間為30～1200秒，優(yōu)選30～300秒。

進(jìn)一步地，所述步驟四中，第二反應(yīng)模塊的反應(yīng)溫度為35～55攝氏度，優(yōu)選45～50攝氏度；反應(yīng)體系在第二反應(yīng)模塊中的停留時(shí)間為30～1200秒，優(yōu)選60～300秒。

進(jìn)一步地，所述步驟五中，第二高溫模塊的溫度為75～105攝氏度，優(yōu)選85～90攝氏度；反應(yīng)體系在第二高溫模塊中停留時(shí)間為10～1200秒，優(yōu)選15～120秒。

進(jìn)一步地，所述步驟六中，第二低溫模塊的溫度為0～20攝氏度，優(yōu)選10～15度；反應(yīng)體系在第二低溫模塊(8)停留時(shí)間為30～1200秒，優(yōu)選30～300秒。

本發(fā)明還提供了上述制備的營養(yǎng)組合物在食品和營養(yǎng)保健領(lǐng)域的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1-可以大幅提高催化反應(yīng)的效率，縮短反應(yīng)時(shí)間，與釜式反應(yīng)器中的反應(yīng)相比，同樣的條件下達(dá)到95％以上的催化率，微通道反應(yīng)器可節(jié)省50％以上的時(shí)間；

2-可以通過連續(xù)流制備工藝，可分步制備得到乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸，并且大幅降低最終產(chǎn)物中的磷脂酰絲氨酸水解副產(chǎn)物磷脂酸的生成；

3-可對反應(yīng)溫度及后處理溫度進(jìn)行快速而精準(zhǔn)的控制，反應(yīng)時(shí)的溫度可保持精準(zhǔn)的恒定，降低副產(chǎn)物的產(chǎn)生，保證產(chǎn)品的品質(zhì)穩(wěn)定；

4-本發(fā)明通過使用微通道反應(yīng)器無放大效應(yīng)，易于升級放大，可以實(shí)現(xiàn)從研發(fā)到生產(chǎn)的無縫放大。

最終得到的富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物產(chǎn)品可用于高級營養(yǎng)品和保健品，也可添加入食品、藥品或化妝品中使用。

附圖說明:

圖1為本發(fā)明制備富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物的工藝流程圖。

具體實(shí)施方式

為更好地理解本發(fā)明的內(nèi)容，以下結(jié)合附圖1對本發(fā)明做進(jìn)一步地說明。

在本發(fā)明中，mgfm指的是一種物質(zhì)，其名稱為乳脂肪球膜(milkfatglobulemembrane,mfgm)。

圖1是使用連續(xù)微通道反應(yīng)器生產(chǎn)富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物的工藝流程圖，這里連續(xù)微通道反應(yīng)器內(nèi)的模塊可為多個(gè)子模塊的串聯(lián)。采用微通道反應(yīng)器制備富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物的方法，包括下列步驟：

將富含mgfm的乳清蛋白反應(yīng)液和蛋白酶溶液泵入微通道反應(yīng)器的第一混合模塊，二者混合后進(jìn)入第一反應(yīng)模塊中并迅速升溫進(jìn)行蛋白酶解反應(yīng)，制備得到乳蛋白活性肽體系。

步驟一，配置富含mgfm的乳清蛋白反應(yīng)液和蛋白酶溶液。乳清蛋白反應(yīng)液由富含mgfm的乳清蛋白與水按照重量比為1:10～15混合均勻而得到，在200～500bar的壓力下，經(jīng)過高壓均質(zhì)機(jī)處理，得到蛋白反應(yīng)液；蛋白酶溶液由復(fù)合酶與水按照重量比為1:100～500混合均勻而得到，所述復(fù)合酶由中性蛋白酶與木瓜蛋白酶或菠蘿蛋白酶組成，中性蛋白酶和木瓜蛋白酶或菠蘿蛋白酶的重量比為1:1～1.5；蛋白酶溶液在在每升混合反應(yīng)液中的重量份為1～20，優(yōu)選5～10。

富含mgfm的乳清蛋白原料可來自于奶油、酪乳和全脂乳粉的商業(yè)化加工產(chǎn)物，例如，來自arlafoodingredientsamba(丹麥)公司生產(chǎn)的富含mfgm乳清蛋白粉lacprodanmfgm-10，也可來自synlaitmilkltd(新西蘭)公司生產(chǎn)的富含mgfm乳清蛋白粉smilipidexconcentrate100，或者采用業(yè)內(nèi)通用技術(shù)手段制備得到。

所述的復(fù)合酶由食品級中性蛋白酶和木瓜蛋白酶或菠蘿蛋白酶組成。中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠蘿蛋白酶可以通過各種商業(yè)渠道獲得，例如但不限于，可以從諾維信酶制劑公司購買。

富含mgfm的乳清蛋白反應(yīng)液和蛋白酶溶液組成的反應(yīng)體系進(jìn)入微通道反應(yīng)器的第一混合模塊1充分混合后進(jìn)入第一反應(yīng)模塊2進(jìn)行酶解反應(yīng)。

富含mgfm的乳清蛋白反應(yīng)液和酶溶液通過高壓泵在0.5bar、1bar、5bar、20bar、50bar、100bar或500bar，即0.5～500bar壓力，優(yōu)選采用2～50bar壓力，進(jìn)行高壓輸送，泵入微通道反應(yīng)器的第一混合模塊1，進(jìn)行充分混合，混合溫度可以為0攝氏度、10攝氏度、15攝氏度或20攝氏度，即混合溫度范圍為0～20攝氏度，在混合模塊1停留時(shí)間為30秒、40秒、50秒、60秒、100秒、150秒、250秒或300秒，即停留時(shí)間范圍為30～300秒，以增加混合效果。此處可使用多個(gè)第一混合模塊1，或?qū)Φ谝换旌夏K1進(jìn)行多次套用。

反應(yīng)體系混合好后進(jìn)入微通道反應(yīng)器的第一反應(yīng)模塊2進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)溫度為35攝氏度、40攝氏度、45攝氏度、50攝氏度或55攝氏度，即反應(yīng)溫度范圍為35～55攝氏度，反應(yīng)體系在反應(yīng)模塊2停留時(shí)間為30秒、50秒、100秒、200秒、400秒、800秒或1200秒，即停留時(shí)間范圍為30～1200秒，為保證反應(yīng)充分徹底，此處可使用多個(gè)反應(yīng)模塊2，或?qū)Ψ磻?yīng)模塊2進(jìn)行多次套用。

蛋白酶解反應(yīng)結(jié)束后，使反應(yīng)體系流經(jīng)第一高溫模塊3以鈍化復(fù)合蛋白酶的活性。在30秒、50秒、100秒、200秒或300秒內(nèi)，即30～300秒內(nèi)迅速將反應(yīng)體系升溫至75攝氏度、80攝氏度、85攝氏度、90攝氏度、95攝氏度、100攝氏度或105攝氏度，即升溫至75～105攝氏度的范圍內(nèi)，優(yōu)選85～90攝氏度的范圍內(nèi)，以鈍化復(fù)合酶活性，反應(yīng)體系在第一高溫模塊3停留時(shí)間為30秒、50秒、100秒、200秒或300秒，即停留時(shí)間范圍為30～300秒。然后蛋白酶解反應(yīng)體系進(jìn)入第一低溫模塊4，迅速降溫。第一低溫模塊4的冷卻溫度為0攝氏度、10攝氏度、15攝氏度或20攝氏度，即冷卻溫度范圍為0～20攝氏度，反應(yīng)體系在第一低溫模塊4停留時(shí)間為100秒、200秒、300秒、400秒、800秒、1200秒、1500秒、1800秒或2200秒，即停留時(shí)間范圍為100～2200秒，為保證冷卻充分徹底，此處可使用多個(gè)低溫模塊4，或?qū)Φ蜏啬K4進(jìn)行多次套用。

步驟三，配備包含了磷脂酶d溶液的絲氨酸溶液，絲氨酸溶液中各物質(zhì)的量配比關(guān)系如下：

如果富含mgfm的乳清蛋白原料的重量份為100，則絲氨酸加入的重量份可以為10、20、30、40、50，即重量份范圍為10～50，優(yōu)選20～25；

絲氨酸加入的重量份為100；水加入的重量份可以為1000、1500、2000、2500，即重量份范圍為1000～2500，優(yōu)選1000～1500。鈣鹽加入的重量份為5、10、20、30，即重量份范圍為5～30，優(yōu)選10～20。磷脂酶d加入的重量份為1、4、6、10，即重量份范圍為1～10，優(yōu)選4～6。

本步驟中，絲氨酸來源：商品化的生物產(chǎn)品；鈣鹽：為可溶性鈣鹽，例如為氯化鈣，在水中的濃度可為0.1克每升至20克每升；磷脂酶d是一種酶，是來源于鏈霉菌和/或植物的商品化酶制劑，如sigma-aldrich公司(st.louis,mo,u.s.a.)出售的磷脂酶d(phospholipased)，該酶也可純化自鏈霉菌的發(fā)酵液。

在步驟三中，絲氨酸溶液和步驟二得到的反應(yīng)液通過0.5ˉ500bar、優(yōu)選2ˉ50bar的壓力泵入微通道反應(yīng)器的第二混合模塊5進(jìn)行充分混合，混合溫度可以為0攝氏度、10攝氏度、15攝氏度或20攝氏度，即混合溫度范圍為0～20攝氏度，在混合模塊1停留時(shí)間為30秒、40秒、50秒、60秒、100秒、150秒、250秒或300秒，即停留時(shí)間范圍為30～300秒，以增加混合效果。此處可使用多個(gè)第二混合模塊5，或?qū)Φ诙旌夏K5進(jìn)行多次套用。

步驟四，反應(yīng)體系混合好后進(jìn)入微通道反應(yīng)器的第二反應(yīng)模塊6進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)溫度為35攝氏度、40攝氏度、45攝氏度、50攝氏度或55攝氏度，即反應(yīng)溫度范圍為35～55攝氏度，反應(yīng)體系在反應(yīng)模塊2停留時(shí)間為30秒、50秒、100秒、200秒、400秒、800秒或1200秒，即停留時(shí)間范圍為30～1200秒，為保證反應(yīng)充分徹底，此處可使用多個(gè)反應(yīng)模塊6，或?qū)Ψ磻?yīng)模塊6進(jìn)行多次套用。

步驟五，磷脂酶反應(yīng)結(jié)束后，使反應(yīng)體系流經(jīng)第二高溫模塊7以鈍化磷脂酶d的活性。在30秒、50秒、100秒、200秒或300秒內(nèi)，即30～300秒內(nèi)迅速將反應(yīng)體系升溫至75攝氏度、80攝氏度、85攝氏度、90攝氏度、95攝氏度、100攝氏度或105攝氏度，即升溫至75～105攝氏度的范圍內(nèi)，優(yōu)選85～90攝氏度的范圍內(nèi)，以鈍化復(fù)合酶活性，反應(yīng)體系在第二高溫模塊7停留時(shí)間為30秒、50秒、100秒、200秒或300秒，即停留時(shí)間范圍為30～300秒。

步驟六，磷脂酶反應(yīng)體系經(jīng)第二高溫模塊7后迅速進(jìn)入第二低溫模塊8，迅速降溫。第二低溫模塊8的冷卻溫度為0攝氏度、10攝氏度、15攝氏度或20攝氏度，即冷卻溫度范圍為0～20攝氏度，反應(yīng)體系在第二低溫模塊8停留時(shí)間為100秒、200秒、300秒、400秒、800秒、1200秒、1500秒、1800秒或2200秒，即停留時(shí)間范圍為100～2200秒，為保證冷卻充分徹底，此處可使用多個(gè)低溫模塊8，或?qū)Φ蜏啬K8進(jìn)行多次套用。最后反應(yīng)體系流出微通道反應(yīng)器進(jìn)入產(chǎn)品收集裝置9，將所得反應(yīng)液精制、干燥得到富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物產(chǎn)品。

根據(jù)本方法制備得到的營養(yǎng)組合物可以作為功能性配料，運(yùn)用在食品、保健營養(yǎng)品和化妝品等諸多領(lǐng)域。

以下對本發(fā)明在具體應(yīng)用中的最佳實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)說明，需要說明的是，這些實(shí)施例并非對本發(fā)明的權(quán)利要求保護(hù)范圍進(jìn)行約束。

本發(fā)明所使用的微通道反應(yīng)器每個(gè)模塊的流體通道并無統(tǒng)一規(guī)制，長度為0.1m～300m，優(yōu)選為1m～60m，流體通道的寬度和深度為0.5μm～10mm，優(yōu)選為0.1mm～0.5mm。制造這些模塊的材料可以為不銹鋼、超硬鋼、銅、紅寶石、金剛石、陶瓷、碳化硅、金屬陶瓷復(fù)合材料或其他高分子材料。本發(fā)明中的微通道反應(yīng)器可以為商品化的微通道反應(yīng)器，例如，美國康寧公司生產(chǎn)的心型結(jié)構(gòu)g1玻璃高通量微通道反應(yīng)器，或者依據(jù)相同原理制備得到的其他商品化或非商品化微通道反應(yīng)器。

實(shí)施例1：利用微通道反應(yīng)器制備富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物

(1)裝置：微通道裝置采用自制高壓微通道反應(yīng)器，微通道長度根據(jù)流速與反應(yīng)停留時(shí)間確定，此處所用每個(gè)模塊通道長度為10m，管徑為0.1mm，換熱介質(zhì)為導(dǎo)熱油。

(2)營養(yǎng)組合物的制備：

a-微通道反應(yīng)器的準(zhǔn)備：

通過調(diào)節(jié)輸送泵的流量和微通道的通道長度控制反應(yīng)體系在各個(gè)模塊的停留時(shí)間，其中，第一混合模塊1中停留時(shí)間為30秒，第一反應(yīng)模塊2中停留時(shí)間為120秒，第一高溫模塊3中停留時(shí)間為15秒，第一低溫模塊4中停留時(shí)間為100秒。第二混合模塊5中停留時(shí)間為30秒，第二反應(yīng)模塊6中停留時(shí)間為120秒，第二高溫模塊7中停留時(shí)間為15秒，第二低溫模塊8中停留時(shí)間為100秒。

通過外循環(huán)制冷制熱油浴體系來控制反應(yīng)器各個(gè)模塊的溫度，其中，第一混合模塊1的溫度為0攝氏度，第一反應(yīng)模塊2的溫度為45攝氏度，第一高溫模塊3的溫度為80攝氏度，第一低溫模塊4的溫度為0攝氏度。第二混合模塊5的溫度為0攝氏度，第二反應(yīng)模塊6的溫度為50攝氏度，第二高溫模塊7的溫度為80攝氏度，第二低溫模塊8的溫度為0攝氏度。

b-反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：

蛋白酶解反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：將100g富含mgfm的乳清蛋白(其中蛋白含量為50％，磷脂酰膽堿含量為2.7％，磷脂酸含量為0.2％，磷脂酰絲氨酸含量為1.1％)，投入到1000ml水中，充分混合后，然后再在500bar的壓力下經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)處理，收集均質(zhì)液后，倒入在配料罐(1)中。

復(fù)合蛋白酶的準(zhǔn)備：在配料罐(2)中，將1ml中性蛋白酶，1ml木瓜蛋白酶加入3500ml水中。

絲氨酸反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：在配料罐(3)中，將20g絲氨酸，0.8g氯化鈣，10ml的磷脂酶d投入到200ml水中，充分混合。

c-酶催化反應(yīng)：將連接配料罐(1)和配料罐(2)的高壓計(jì)量泵打開，在35bar壓力下，高壓輸送，使得蛋白酶反應(yīng)體系和復(fù)合蛋白酶溶液催進(jìn)入微通道反應(yīng)器的第一混合模塊1進(jìn)行充分混合，第一混合模塊1的溫度為0攝氏度，混合液隨后進(jìn)入50組串聯(lián)第一反應(yīng)模塊2，第一反應(yīng)模塊2的溫度為45攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第一高溫模塊3，第一高溫模塊3為5個(gè)模塊，第一高溫模塊3的溫度為85攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第一低溫模塊4，第一低溫模塊4為2個(gè)模塊串聯(lián)，第一低溫模塊4的溫度為0攝氏度，然后，反應(yīng)液進(jìn)入第二混合模塊5，與此同時(shí)，將連接配料罐(3)的高壓計(jì)量泵打開，在35bar壓力下，高壓輸送，使得絲氨酸溶液進(jìn)入微通道反應(yīng)器的第二混合模塊5，與酶反應(yīng)體系進(jìn)行充分混合，第二混合模塊5的溫度為0攝氏度，混合液隨后進(jìn)入50組串聯(lián)第二反應(yīng)模塊6，第二反應(yīng)模塊6的溫度為45攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第二高溫模塊7，第二高溫模塊7為5個(gè)模塊，第二高溫模塊7的溫度為85攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第二低溫模塊8，第二低溫模塊8為2個(gè)模塊串聯(lián)，第二低溫模塊8的溫度為0攝氏度，最后，反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)入產(chǎn)品收集裝置9。

d-精制：將得到的反應(yīng)產(chǎn)物冷凍干燥，最后得到120g淡黃色固體。產(chǎn)品經(jīng)品嘗，沒有苦味，產(chǎn)品經(jīng)hplc液相檢測，產(chǎn)品中，活性肽含量為37％，磷脂酰絲氨酸含量為3.3％，磷脂酰膽堿含量為0.3％，磷脂酸含量為0.9％。

實(shí)施例2：利用微通道反應(yīng)器制備富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物

(1)裝置：微通道裝置采用自制高壓微通道反應(yīng)器，微通道長度根據(jù)流速與反應(yīng)停留時(shí)間確定，此處所用每個(gè)模塊通道長度為10m，管徑為0.3mm，換熱介質(zhì)為導(dǎo)熱油。

(2)營養(yǎng)組合物的制備：

a-微通道反應(yīng)器的準(zhǔn)備：

通過調(diào)節(jié)輸送泵的流量和微通道的通道長度控制反應(yīng)體系在各個(gè)模塊的停留時(shí)間，其中，第一混合模塊1中停留時(shí)間為30秒，第一反應(yīng)模塊2中停留時(shí)間為120秒，第一高溫模塊3中停留時(shí)間為15秒，第一低溫模塊4中停留時(shí)間為100秒。第二混合模塊5中停留時(shí)間為30秒，第二反應(yīng)模塊6中停留時(shí)間為120秒，第二高溫模塊7中停留時(shí)間為15秒，第二低溫模塊8中停留時(shí)間為100秒。

通過外循環(huán)制冷制熱油浴體系來控制反應(yīng)器各個(gè)模塊的溫度，其中，第一混合模塊1的溫度為20攝氏度，第一反應(yīng)模塊2的溫度為50攝氏度，第一高溫模塊3的溫度為90攝氏度，第一低溫模塊4的溫度為20攝氏度。第二混合模塊5的溫度為20攝氏度，第二反應(yīng)模塊6的溫度為45攝氏度，第二高溫模塊7的溫度為85攝氏度，第二低溫模塊8的溫度為20攝氏度。

b-反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：

蛋白酶解反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：將100g富含mgfm的乳清蛋白(其中蛋白含量為50％，磷脂酰膽堿含量為2.7％，磷脂酸含量為0.2％，磷脂酰絲氨酸含量為1.1％)，投入到1000ml水中，充分混合后，然后再在500bar的壓力下經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)處理，收集均質(zhì)液后，倒入在配料罐(1)中。

復(fù)合蛋白酶的準(zhǔn)備：在配料罐(2)中，將1ml中性蛋白酶，1ml菠蘿蛋白酶加入3500ml水中。

絲氨酸反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：在配料罐(3)中，將20g絲氨酸，0.8g氯化鈣，10ml的磷脂酶d投入到200ml水中，充分混合。

c-酶催化反應(yīng)：將連接配料罐(1)和配料罐(2)的高壓計(jì)量泵打開，在25bar壓力下，高壓輸送，使得蛋白酶反應(yīng)體系和復(fù)合蛋白酶溶液催進(jìn)入微通道反應(yīng)器的第一混合模塊1進(jìn)行充分混合，第一混合模塊1的溫度為20攝氏度，混合液隨后進(jìn)入50組串聯(lián)第一反應(yīng)模塊2，第一反應(yīng)模塊2的溫度為50攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第一高溫模塊3，第一高溫模塊3為5個(gè)模塊，第一高溫模塊3的溫度為90攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第一低溫模塊4，第一低溫模塊4為2個(gè)模塊串聯(lián)，第一低溫模塊4的溫度為20攝氏度，然后，反應(yīng)液進(jìn)入第二混合模塊5，與此同時(shí)，將連接配料罐(3)的高壓計(jì)量泵打開，在25bar壓力下，高壓輸送，使得絲氨酸溶液進(jìn)入微通道反應(yīng)器的第二混合模塊5，與酶反應(yīng)體系進(jìn)行充分混合，第二混合模塊5的溫度為20攝氏度，混合液隨后進(jìn)入50組串聯(lián)第二反應(yīng)模塊6，第二反應(yīng)模塊6的溫度為45攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第二高溫模塊7，第二高溫模塊7為5個(gè)模塊，第二高溫模塊7的溫度為85攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第二低溫模塊8，第二低溫模塊8為2個(gè)模塊串聯(lián)，第二低溫模塊8的溫度為20攝氏度，最后，反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)入產(chǎn)品收集裝置9。

d-精制：將得到的反應(yīng)產(chǎn)物冷凍干燥，最后得到120g淡黃色固體。產(chǎn)品經(jīng)品嘗，沒有苦味，產(chǎn)品經(jīng)hplc液相檢測，產(chǎn)品中，活性肽含量為38％，磷脂酰絲氨酸含量為3.4％，磷脂酰膽堿含量為0.2％，磷脂酸含量為0.8％。

實(shí)施例3：利用微通道反應(yīng)器制備富含乳蛋白活性肽和磷脂酰絲氨酸的營養(yǎng)組合物

(1)裝置：微通道裝置采用自制高壓微通道反應(yīng)器，微通道長度根據(jù)流速與反應(yīng)停留時(shí)間確定，此處所用每個(gè)模塊通道長度為10m，管徑為0.35mm，換熱介質(zhì)為導(dǎo)熱油。

(2)營養(yǎng)組合物的制備：

a-微通道反應(yīng)器的準(zhǔn)備：

通過調(diào)節(jié)輸送泵的流量和微通道的通道長度控制反應(yīng)體系在各個(gè)模塊的停留時(shí)間，其中，第一混合模塊1中停留時(shí)間為40秒，第一反應(yīng)模塊2中停留時(shí)間為140秒，第一高溫模塊3中停留時(shí)間為25秒，第一低溫模塊4中停留時(shí)間為150秒。第二混合模塊5中停留時(shí)間為40秒，第二反應(yīng)模塊6中停留時(shí)間為140秒，第二高溫模塊7中停留時(shí)間為25秒，第二低溫模塊8中停留時(shí)間為150秒。

通過外循環(huán)制冷制熱油浴體系來控制反應(yīng)器各個(gè)模塊的溫度，其中，第一混合模塊1的溫度為15攝氏度，第一反應(yīng)模塊2的溫度為40攝氏度，第一高溫模塊3的溫度為90攝氏度，第一低溫模塊4的溫度為15攝氏度。第二混合模塊5的溫度為20攝氏度，第二反應(yīng)模塊6的溫度為50攝氏度，第二高溫模塊7的溫度為90攝氏度，第二低溫模塊8的溫度為15攝氏度。

b-反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：

蛋白酶解反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：將100g富含mgfm的乳清蛋白(其中蛋白含量為50％，磷脂酰膽堿含量為2.7％，磷脂酸含量為0.2％，磷脂酰絲氨酸含量為1.1％)，投入到1000ml水中，充分混合后，然后再在500bar的壓力下經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)處理，收集均質(zhì)液后，倒入在配料罐(1)中。

復(fù)合蛋白酶的準(zhǔn)備：在配料罐(2)中，將1ml中性蛋白酶，1ml木瓜蛋白酶加入3500ml水中。

絲氨酸反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：在配料罐(3)中，將20g絲氨酸，0.8g氯化鈣，10ml的磷脂酶d投入到200ml水中，充分混合。

c-酶催化反應(yīng)：將連接配料罐(1)和配料罐(2)的高壓計(jì)量泵打開，在15bar壓力下，高壓輸送，使得蛋白酶反應(yīng)體系和復(fù)合蛋白酶溶液催進(jìn)入微通道反應(yīng)器的第一混合模塊1進(jìn)行充分混合，第一混合模塊1的溫度為15攝氏度，混合液隨后進(jìn)入50組串聯(lián)第一反應(yīng)模塊2，第一反應(yīng)模塊2的溫度為40攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第一高溫模塊3，第一高溫模塊3為5個(gè)模塊，第一高溫模塊3的溫度為90攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第一低溫模塊4，第一低溫模塊4為2個(gè)模塊串聯(lián)，第一低溫模塊4的溫度為15攝氏度，然后，反應(yīng)液進(jìn)入第二混合模塊5，與此同時(shí)，將連接配料罐(3)的高壓計(jì)量泵打開，在15bar壓力下，高壓輸送，使得絲氨酸溶液進(jìn)入微通道反應(yīng)器的第二混合模塊5，與酶反應(yīng)體系進(jìn)行充分混合，第二混合模塊5的溫度為20攝氏度，混合液隨后進(jìn)入50組串聯(lián)第二反應(yīng)模塊6，第二反應(yīng)模塊6的溫度為50攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第二高溫模塊7，第二高溫模塊7為5個(gè)模塊，第二高溫模塊7的溫度為90攝氏度，反應(yīng)液隨后進(jìn)入第二低溫模塊8，第二低溫模塊8為2個(gè)模塊串聯(lián)，第二低溫模塊8的溫度為15攝氏度，最后，反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)入產(chǎn)品收集裝置9。

d-精制：將得到的反應(yīng)產(chǎn)物用冷凍干燥，最后得到120g淡黃色固體。產(chǎn)品經(jīng)品嘗，沒有苦味，產(chǎn)品經(jīng)hplc液相檢測，產(chǎn)品中，活性肽含量為35％，磷脂酰絲氨酸含量為3.2％，磷脂酰膽堿含量為0.2％，磷脂酸含量為0.6％。

實(shí)施例4：與實(shí)施例1對應(yīng)的對照例。

(1)裝置：采用傳統(tǒng)釜式反應(yīng)器，錨式攪拌槳，配備夾套，換熱介質(zhì)為導(dǎo)熱油。

(2)營養(yǎng)組合物的制備：

蛋白酶解反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：將100g富含mgfm的乳清蛋白(其中蛋白含量為50％，磷脂酰膽堿含量為2.7％，磷脂酸含量為0.2％，磷脂酰絲氨酸含量為1.1％)，投入到1000ml水中，充分混合后，然后再在500bar的壓力下經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)均質(zhì)處理，收集均質(zhì)液后，倒入在第一配料罐(1)中。

復(fù)合蛋白酶的準(zhǔn)備：在第二配料罐(2)中，將1ml中性蛋白酶，1ml木瓜蛋白酶加入3500ml水中。

絲氨酸反應(yīng)體系的準(zhǔn)備：在第三配料罐(3)中，將20g絲氨酸，0.8g氯化鈣，10ml的磷脂酶d投入到200ml水中，充分混合。

反應(yīng)：將連接配料罐(1)和配料罐(2)的計(jì)量泵打開，使得反應(yīng)體系和催化劑蛋白酶溶液體系進(jìn)入釜式反應(yīng)器，攪拌器轉(zhuǎn)速為70rpm，反應(yīng)溫度為45攝氏度，反應(yīng)攪拌維持12h，然后，將連接配料罐(3)的計(jì)量泵打開將絲氨酸反應(yīng)體系進(jìn)入釜式反應(yīng)器，攪拌器轉(zhuǎn)速為70rpm，反應(yīng)溫度為45攝氏度，反應(yīng)攪拌維持12h，最后將反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)入產(chǎn)品收集裝置9。

精制：將得到的反應(yīng)產(chǎn)物用冷凍干燥，最后得到120g淡黃色固體。產(chǎn)品經(jīng)品嘗有苦味，產(chǎn)品經(jīng)hplc液相檢測，產(chǎn)品中，活性肽含量為39％，磷脂酰絲氨酸含量為2.3％，磷脂酰膽堿含量為0.5％，磷脂酸含量為1.7％。

相對于實(shí)施例1，實(shí)施例4的產(chǎn)品經(jīng)品嘗有苦味，產(chǎn)物中磷脂酰絲氨酸含量低，為2.3％，磷脂酰膽堿含量為0.5％，磷脂酸含量高，為1.7％。而實(shí)施例1的產(chǎn)物產(chǎn)品經(jīng)品嘗沒有苦味，產(chǎn)品中磷脂酰絲氨酸含量為3.3％，磷脂酰膽堿含量為0.3％，磷脂酸含量為0.9％。說明利用微通道酶催化技術(shù)，可以精確控制蛋白水解程度，避免過度水解產(chǎn)生苦味，同時(shí)相同原料可以得到更多的目標(biāo)產(chǎn)物磷脂酰絲氨酸，而且副產(chǎn)物磷脂酸的含量更低。

在此說明書中，本發(fā)明已參照其特定的實(shí)施例作了描述。但是，很顯然仍可以做出各種修改和變換而不背離本發(fā)明的精神和范圍，一個(gè)有本專業(yè)知識的普通技術(shù)人員，仍可以根據(jù)本專利所傳授的技術(shù)，在本發(fā)明的范圍內(nèi)產(chǎn)生其它的實(shí)施例，但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案的內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對以上實(shí)施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍內(nèi)。