專利名稱：一種治療肝炎的注射劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥新藥研發(fā)領(lǐng)域，涉及一種治療肝炎的注射劑及其制備方法，具體涉及一種含有胡黃連苷II單體的注射劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
肝炎在我國罹患率居高不下。慢性乙肝患者以及乙肝病毒攜帶者在我國發(fā)生率已逾10％。肝炎的發(fā)生和發(fā)展涉及到較為復(fù)雜的病理生理機(jī)制。急性肝炎的發(fā)生，多由于大量病毒侵入機(jī)體或者機(jī)體的抵抗力降低等原因。急性肝炎多為自限性疾病(依賴自身免疫系統(tǒng)清除病毒)，但約1/3的患者轉(zhuǎn)為慢性。慢性肝炎(病毒基因多已整合到人肝細(xì)胞中)患者臨床上多表現(xiàn)為肝細(xì)胞受損，血清轉(zhuǎn)氨酶反復(fù)升高，肝臟纖維結(jié)締組織反應(yīng)性增生，最后發(fā)展成肝硬化甚或肝癌。肝臟由于是脂類、蛋白質(zhì)和糖類的主要代謝器官，肝功能受損則可導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂、高膽紅素血癥、膽汁淤積等，進(jìn)一步加重了肝臟的損害，形成惡性循環(huán)。近年研究還表明，慢性乙肝患者免疫功能多發(fā)生紊亂，肝細(xì)胞的壞死主要是由自身免疫攻擊所致，而非由于病毒復(fù)制的直接損害；另外肝細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化、線粒體能量代謝紊亂、肝細(xì)胞凋亡等也參與了肝炎的發(fā)生發(fā)展過程。
胡黃連是玄參科植物胡黃連Picrorhiza scrophulariifloraPennell干燥根莖，是多年生草本植物，生長于高寒地區(qū)的巖石上及土堆中，或者淺土層的向陽處，分布于四川西部，云南西北部、西藏南部。中藥胡黃連治療肝炎有著深厚的中醫(yī)理論和實(shí)踐的基礎(chǔ)。《唐本草》謂其“大寒”，“主骨蒸勞熱，補(bǔ)脾膽，明目”?！缎滦薇静荨吩弧爸鞴钦魟跓幔a(bǔ)肝膽，明目，厚腸胃”。《雷火熗制藥性解》中，其歸經(jīng)為“入肝、膽、胃三經(jīng)”。繆希雍《本草經(jīng)疏》曰“胡黃連，善除濕熱，一切濕熱、邪熱、陰分伏熱所生諸病，莫不消除”。鑒于其歸肝、膽經(jīng)，且“善除濕熱、消積聚，補(bǔ)肝膽，助除疫毒”，并依據(jù)中醫(yī)對(duì)肝炎的辨正理解，研究從胡黃連中提取含量較高的有效成分，結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究，采用現(xiàn)代制劑制備技術(shù)將其開發(fā)出治療肝炎的有效藥物極具潛力。
據(jù)文獻(xiàn)記載，胡黃連中含有環(huán)烯醚萜苷類、葫蘆素類、酚苷類，另外還含有少量的芳香酸和D-甘露醇。其中胡黃連苷II(Picroside II)是胡黃連中含量較高的單體成分，屬于環(huán)烯醚萜苷類化合物，具有顯著的保肝降酶、抗乙肝病毒、利膽退黃、降脂和免疫調(diào)節(jié)功效，且毒性小，在體內(nèi)無蓄積，用藥安全，可用于治療急性肝炎和慢性活動(dòng)性肝炎。因此研制以胡黃連苷II為主要成分的中藥新藥具有十分廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種含有胡黃連苷II單體的注射劑。該發(fā)明為供靜脈注射給藥的劑型，相對(duì)于其他劑型療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定，能快速發(fā)揮藥物作用。同時(shí)還提供含有胡黃連苷II單體的注射劑的制備方法。該方法制備工藝簡單，能夠滿足于工業(yè)化大生產(chǎn)的需要。
本發(fā)明所述的胡黃連苷II是從玄參科植物胡黃連中提取的一種活性成
分，其為環(huán)烯醚萜苷類化合物，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下分子式C23H28O13分子量512熔 點(diǎn)214℃-215℃胡黃連苷II易溶于水、甲醇、乙醇等極性較大的溶劑。
本發(fā)明的技術(shù)方案為本發(fā)明所述的治療肝炎的注射劑，其有效成份為胡黃連苷II單體。該注射劑中各組成成份的重量比為胡黃連苷II單體90％～100％，填充劑0～9％，抗氧劑0～1％，其優(yōu)選配比為胡黃連苷II單體94.5％～100％，填充劑0～5％，抗氧劑0～0.5％。注射劑中控制胡黃連苷II單體的含量50mg～70mg/支。
本發(fā)明所述的注射劑可以是藥劑學(xué)上所述的任何一種注射液或注射粉針劑。
本發(fā)明還進(jìn)一步提供了治療肝炎的注射劑的制備方法取胡黃連苷II單體、填充劑和抗氧劑，加入注射用水，使其充分溶解，過濾，加入活性炭脫色除熱源，過濾，分裝，灌封或干燥成粉后分裝或冷凍干燥，包裝，即得。
本發(fā)明所述的胡黃連苷II單體的制備方法可采用本領(lǐng)域已公開的制備方法制備。
上述制備方法中所述的填充劑選自甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷、聚乙烯吡咯酮、甘氨酸或尿素中的任一種或多種。抗氧劑選自亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、焦硫酸鈉、硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉、維生素C或氮?dú)庵械娜我环N或多種。
上述制備方法中所述的過濾是采用微孔濾膜、超濾膜或納濾膜過濾。
根據(jù)《中藥注射劑研究的技術(shù)要求》及《中國藥典》2000年版一部附錄IB注射劑項(xiàng)下的規(guī)定，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行性狀、鑒別、檢查等研究。本發(fā)明為淺黃白色或類白色疏松塊；氣微，味極苦；易溶于乙醇，甲醇和水；略溶于丙酮，微溶于氯仿、乙醚；不溶于石油醚；具有苷類和酚羥基反應(yīng)；通過薄層、紫外、液相鑒別，鑒定出制劑中含有胡黃連苷II。各項(xiàng)檢查指標(biāo)均符合中藥注射劑有關(guān)技術(shù)要求的規(guī)定。
本發(fā)明優(yōu)選劑型為凍干粉針劑，其優(yōu)點(diǎn)(1)冷凍干燥在真空中進(jìn)行，藥物不易氧化，也減少了酸堿影響，增加了藥物的穩(wěn)定性。(2)固體制劑保持了原來凍結(jié)前的體積，加水后迅速溶解恢復(fù)藥液原有特性。(3)含水量低，便于充填惰性氣體，有利于藥品貯存；(4)產(chǎn)品劑量準(zhǔn)確、外觀優(yōu)良。經(jīng)注射劑安全性試驗(yàn)，結(jié)果表明，胡黃連苷II無溶血現(xiàn)象，無過敏、刺激性反應(yīng)。
本發(fā)明人使用實(shí)施例2方法制備的凍干粉針劑完成了以下藥效學(xué)試驗(yàn)，具體試驗(yàn)內(nèi)容如下，但本發(fā)明不限于以下試驗(yàn)例所包含的內(nèi)容。
試驗(yàn)例一胡黃連苷II凍干粉針劑對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的預(yù)防保護(hù)作用昆明種小鼠96只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、甘利欣(50mg/kg)組、凍干粉針劑小(10mg/kg)、中(20mg/kg)、大(30mg/kg)劑量組，各組均按0.1ml/10g尾靜脈注射給藥，每日1次，共7日，并于給藥后第6天，腹腔注射0.12％的CCl4花生油溶液0.1ml/10g進(jìn)行造模，造模后16小時(shí)摘眼球取血測血清ALT、AST值。試驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷血清ALT、AST的影響(x±s)

注與空白對(duì)照組比較，ALT、AST明顯升高，△△△P＜0.001；與模型對(duì)照組比較，ALT、AST明顯降低，*P＜0.05，**P＜0.01。
胡黃連苷II凍干粉針劑各劑量組與模型對(duì)照組比較，ALT值、AST值均明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，且具有較好的劑量效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果表明胡黃連苷II凍干粉針劑對(duì)CCl4誘發(fā)的小鼠急性肝損傷有明顯的預(yù)防保護(hù)作用。
試驗(yàn)例二胡黃連苷II凍干粉針劑對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的治療作用將動(dòng)物隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性藥甘利欣組、凍干粉針劑小劑量組(10mg/kg)、中劑量組(20mg/kg)、大劑量組(30mg/kg)共6組，每組10只。用0.12％的CCl4花生油溶液0.1ml/10g進(jìn)行造模，并于造模后1小時(shí)、10小時(shí)及21小時(shí)尾靜脈注射相應(yīng)藥物3次，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積生理鹽水。于造模后22小時(shí)，摘眼球取血測血清ALT、AST值。試驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2對(duì)CCl4致小鼠急性肝損傷血清ALT、AST的影響(x±s)

注與空白對(duì)照組比較，△△P＜0.01，△△△P＜0.001；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
胡黃連苷II凍干粉針劑中、大劑量組與模型對(duì)照組比較，ALT值、AST值均明顯降低，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，而小劑量組ALT值、AST值亦有降低的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。結(jié)果表明胡黃連苷II凍干粉針劑對(duì)CCl4誘發(fā)的小鼠急性肝損傷有明顯的治療作用。
試驗(yàn)三胡黃連苷II凍干粉針劑對(duì)四氯化碳致大鼠慢性肝損傷的治療作用取SD大鼠根據(jù)體重隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組(甘利欣30mg/kg)、凍干粉針劑小(7mg/kg)、中(14mg/kg)和大(28mg/kg)劑量組，共6組。除空白對(duì)照組外，其余各組大鼠均皮下注射25％CCl4花生油溶液2ml/kg，每周二、五各一次，連續(xù)8周，進(jìn)行造模。各給藥組均于造模第2周尾靜脈注射給藥，每天1次，連續(xù)6周，并于給藥6周后，各組腹腔注射劑量為30mg/kg的戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈取血，離心取血清，測血清ALT、AST、TP、ALB值。試驗(yàn)結(jié)果見表3，表4。
表3對(duì)CCl4致大鼠慢性肝損傷血清中AST、ALT含量的影響(x±s)

注與空白對(duì)照組比較，△△△P＜0.001；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.01。
表4對(duì)CCl4致大鼠慢性肝損傷血清中TP、ALB、A/G含量的影響(x±s)

注與空白對(duì)照組比較，△P＜0.05，△△△P＜0.001；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。
結(jié)果表明胡黃連苷II凍干粉針劑對(duì)CCl4致大鼠慢性肝損傷有明顯的治療作用。
試驗(yàn)例四胡黃連苷II凍干粉針劑體外抗病毒試驗(yàn)采用胡黃連苷II單體完成本試驗(yàn)。
用MTT法檢測胡黃連苷II對(duì)2.2.15細(xì)胞的毒性；用ELISA方法檢測不同濃度胡黃連苷II作用于2.2.15細(xì)胞不同時(shí)間后細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBV相關(guān)抗原——表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)的水平，計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的半數(shù)毒性濃度(TC50)和對(duì)抗原的半數(shù)抑制濃度(IC50)，以TC50和IC50的比值(即治療指數(shù))來評(píng)價(jià)藥物的有效性和安全性，TI＞2為安全有效。選用拉米夫定(3TC)作為陽性藥平行操作。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5，表6，表7，表8。結(jié)果表明胡黃連苷II體外對(duì)HBV具有較好的抑制作用。
表5胡黃連苷II對(duì)2.2.15細(xì)胞的毒性作用

注TC50＝5.2443±0.0213mg/ml；無毒濃度為2.0094±0.0392mg/ml。
表6胡黃連苷II作用于2.2.15細(xì)胞4天對(duì)乙肝病毒的抑制作用

表7胡黃連苷II作用于2.2.15細(xì)胞8天對(duì)乙肝病毒的抑制作用


注胡黃連苷II對(duì)HBsAg和HBeAg的IC50分別為1.3939±0.0305mg/ml和1.3484±0.0483mg/ml；3TC對(duì)HBsAg和HBeAg的IC50分別為24.0597±0.0969μg/ml和76.7258±0.1227μg/ml。
表8胡黃連苷II對(duì)乙肝病毒抑制作用的治療指數(shù)

判定標(biāo)準(zhǔn)為TI＞2為有效；1≤TI≤2為有毒有效；TI＜1為毒性作用上面試驗(yàn)結(jié)果表明胡黃連苷II體外對(duì)乙肝病毒具有較好的抑制作用。
具體實(shí)施例方式
發(fā)明人通過以下的實(shí)施例來進(jìn)一步詳細(xì)闡述本發(fā)明，但本發(fā)明不限于此實(shí)施范圍。
實(shí)施例1取胡黃連苷II 60.0g，加入注射用水約2800ml，65℃水浴使溶解，加入配制量2‰的活性炭(6.0g)，攪拌半小時(shí)，過濾，于濾器上加水至3000ml，繼以0.22μm微孔濾膜分級(jí)過濾，濾液以每瓶3ml定量分裝于10ml西林瓶中，冷凍干燥，回充高純度氮?dú)?，包裝，即得。
對(duì)上述制得的注射劑進(jìn)行含量測定及穩(wěn)定性考察胡黃連苷-II 照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為吸附劑；乙腈-1％的36％醋酸溶液(22∶78)為流動(dòng)相，檢測波長265nm。理論塔板數(shù)按胡黃連苷II計(jì)算，應(yīng)不低于1500。
對(duì)照品溶液的制備 取胡黃連苷II對(duì)照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml中含胡黃連苷II 0.1mg)。
供試品溶液的制備 取本品裝量差異項(xiàng)下內(nèi)容物約6mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.22μm)濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定。
穩(wěn)定性考察1)室溫留樣觀察初步穩(wěn)定性試驗(yàn)報(bào)告

注“——”表示未做檢查。
2)加速實(shí)驗(yàn)報(bào)告


注“——”表示未做檢查。
本品穩(wěn)定性好，常溫下放置6個(gè)月未發(fā)生明顯質(zhì)量變化，加速實(shí)驗(yàn)3個(gè)月未發(fā)生明顯質(zhì)量變化，初步認(rèn)為可保存2年。
實(shí)施例2取胡黃連苷II 62.0g，加入注射用水約2800ml，65℃水浴使溶解，加入配制量2‰的活性炭(6.0g)，攪拌半小時(shí)，過濾，于濾器上加水至3000ml，繼以0.45μm、0.22μm微孔濾膜分級(jí)過濾，濾液以每瓶3ml定量分裝于10ml西林瓶中，冷凍干燥，回充高純度氮?dú)?，包裝，即得。
含量測定 同實(shí)施例1所述。測定結(jié)果含胡黃連苷II 58.5mg/支。
其他同實(shí)施例1所述。
實(shí)施例3取胡黃連苷II 58.0g，加入1％甘露醇，溶于65℃注射用水約2800ml，加入配制量1.5‰的活性炭(4.5g)，攪拌半小時(shí)，過濾，于濾器上加水至3000ml，用超濾膜過濾(截留分子量1萬)，濾液以每瓶3ml定量分裝于10ml西林瓶中，滅菌，包裝，即得。
含量測定 同實(shí)施例1所述。測定結(jié)果含胡黃連苷II 55.0mg/支。
其他同實(shí)施例1所述。
實(shí)施例4取胡黃連苷II 55.0g，加入0.9％NaCL、0.2％NaHSO3，溶于65℃注射用水約2800ml，加入配制量1.5‰的活性炭(4.5g)，攪拌半小時(shí)，過濾，于濾器上加水至3000ml，繼以0.45μm微孔濾膜過濾，濾液冷凍干燥，包裝，即得。
含量測定 同實(shí)施例1所述。測定結(jié)果含胡黃連苷II 50.0mg/支。
其他同實(shí)施例1所述。
實(shí)施例5取胡黃連苷II 72.0g，加入0.5％葡萄糖、0.2％NaHSO3，溶于65℃注射用水約2800ml，加入配制量1.5‰的活性炭(4.5g)，攪拌半小時(shí)，過濾，于濾器上加水至3000ml，用超濾膜過濾(截留分子量6000)，濾液以每瓶3ml定量分裝于10ml西林瓶中，冷凍干燥，回充高純度氮?dú)猓b，即得。
含量測定 同實(shí)施例1所述。測定結(jié)果含胡黃連苷II 70.0mg/支。
其他同實(shí)施例1所述。
實(shí)施例6取胡黃連苷II 68.0g，加入0.5％葡萄糖、0.2％NaHSO3，溶于65℃注射用水約2800ml，加入配制量1.5‰的活性炭(4.5g)，攪拌半小時(shí)，過濾，于濾器上加水至3000ml，繼以0.45μm、0.22μm微孔濾膜分級(jí)過濾，濾液以每瓶3ml定量分裝于10ml西林瓶中，滅菌，包裝，即得。
含量測定 同實(shí)施例1所述。測定結(jié)果含胡黃連苷II 65.0mg/支。
其他同實(shí)施例1所述。
實(shí)施例7取胡黃連苷II 68.0g，加入1‰右旋糖酐，溶于65℃注射用水約2800ml，加入配制量1.5‰的活性炭(4.5g)，攪拌半小時(shí)，過濾，于濾器上加水至3000ml，用超濾膜過濾(截留分子量6000)，濾液冷凍干燥，包裝，即得。
含量測定 同實(shí)施例1所述。測定結(jié)果含胡黃連苷II 65.0mg/支。
其他同實(shí)施例1所述。
權(quán)利要求
1.一種治療肝炎的注射劑，其特征在于各組分的重量比為胡黃連苷II單體90％～100％，填充劑0～9％，抗氧劑0～1％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射劑，其特征在于各組分的最佳重量比為胡黃連苷II單體94.5％～100％，填充劑0～5％，抗氧劑0～0.5％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射劑，其特征在于該注射劑可以是藥劑學(xué)上所述的任何一種注射液或注射粉針劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射劑，其特征在于填充劑選自甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖苷、聚乙烯吡咯酮、甘氨酸或尿素中的任一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的注射劑，其特征在于抗氧劑選自亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、焦硫酸鈉、硫代硫酸鈉、檸檬酸鈉、維生素C或氮?dú)庵械娜我环N或多種。
6.權(quán)利要求1～5任一權(quán)利要求所述的注射劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟取胡黃連苷II單體、填充劑和抗氧劑，加入注射用水，使其充分溶解，過濾，加入活性炭脫色除熱源，過濾，分裝，灌封或干燥成粉后分裝或冷凍干燥，滅菌，包裝，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于過濾采用微孔濾膜、超濾膜或納濾膜。
8.權(quán)利要求1～7任一權(quán)利要求所述的注射劑在制備治療肝炎藥物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于在制備治療急性、慢性肝炎中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥新藥研發(fā)領(lǐng)域，涉及一種治療肝炎的注射劑及其制備方法。該注射劑含有活性成分胡黃連苷II單體及藥用輔料，各組成成份的重量比為胡黃連苷II單體90％～100％，填充劑0～9％，抗氧劑0～1％。所述注射劑可以是藥劑學(xué)上所述的任何一種注射液或注射粉針劑。本發(fā)明為靜脈給藥劑型，療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定，能快速發(fā)揮藥物作用。對(duì)肝炎具有明顯的預(yù)防和治療作用。
文檔編號(hào)A61P1/16GK101040953SQ20061006521
公開日2007年9月26日 申請(qǐng)日期2006年3月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月20日
發(fā)明者周亞偉 申請(qǐng)人:周亞偉