一種丙型肝炎病毒抑制劑、藥物組合物及其應用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種丙型肝炎病毒抑制劑、藥物組合物及其應用，所述丙型肝炎病毒抑制劑如為式（I）所示的化合物，或其晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑化合物。本發(fā)明的化合物具有更好的丙肝病毒蛋白NS5A抑制活性，具有更好藥效學/藥代動力學性能，化合物的適用性好、安全性高，可用于制備治療丙型肝炎病毒感染的藥物，具有良好的市場開發(fā)前景。
【專利說明】
-種丙型肝炎病毒抑制劑、藥物組合物及其應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，尤其設及一種丙型肝炎病毒抑制劑、藥物組合物及其 應用。
【背景技術】
[0002] HCV(Hepatitis C Virus,丙型肝炎病毒）是一種RNA病毒，其屬于黃病毒科 (Flaviviridae family)中的丙型肝炎病毒屬巧epacivirus genus)。包裹HCV病毒粒子包 含正股RNA基因組，其在單個不間斷的開放讀碼框中編碼全部已知的病毒一特異的蛋白質(zhì)。 開放讀碼框包括大約9500個核巧酸并且編碼單個約3000個氨基酸的巨大多蛋白。多蛋白包 括忍蛋白，包裹蛋白E1和E2,膜結(jié)合蛋白P7,和非結(jié)構(gòu)性蛋白NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和 NS5B。
[0003] 索非布韋是目前世界上第一個在短期內(nèi)可W徹底治愈丙肝的良藥。它W 口服途徑 直達病灶，方法簡單副作用很小，深受患者的追捧。索非布韋由美國吉利德公司生產(chǎn)，2013 年在美國上市，經(jīng)臨床試驗證實可有效治療基因1、2、3、4型丙肝，包括對肝移植、肝癌W及 HCV/HIV-1合并感染的臨床試驗。運一突破為全世界的丙肝患者帶來了福音。
[0004] 肥V感染與進行性肝病狀(包括肝硬化和肝細胞癌)有關。0(13133￥；[1'(4。11；[11；[0]1公 司丙肝藥物，又被稱為ACH-3102)是AcMllion公司開發(fā)的一種用于潛在治療丙型肝炎的新 藥，其通過抑制丙型肝炎病毒蛋白NS5A來發(fā)揮作用，目前處于注冊前的狀態(tài)。其丙肝雞尾酒 療法結(jié)合索非布韋，在未使用利己韋林情況下治療I型基因型丙肝患者的試驗中獲得了理 想的二期臨床數(shù)據(jù)，可在六周內(nèi)殺滅發(fā)現(xiàn)的病毒，運是所有兩種藥物聯(lián)用時能夠達到的最 短治療時間和最高應答率。
[0005] 美國吉利德公司去年已經(jīng)將丙肝新藥索非布韋的授權擴大至埃及，埃及是全球丙 肝發(fā)病率最高的國家。隨后同意印度生產(chǎn)索菲布韋仿制藥。截至目前，共有8家印度制藥公 司拿到了吉利德的授權，可W將索菲布韋銷往全球91個發(fā)展中國家（中國被排除在外）。索 非布韋目前在我國處于空白，一邊是大量的需求，一邊是無藥上市，面對如此尷尬的窘境， 一些大醫(yī)院正在嘗試通過視頻遠程海外醫(yī)療解決運一難題。一些等不及的患者，不得不考 慮出國看病。因此，本領域仍需要開發(fā)對丙型肝炎病毒蛋白NS5A有抑制活性或更好藥效學 性能的化合物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對W上技術問題，本發(fā)明公開了一種丙型肝炎病毒抑制劑、藥物組合物及其應 用，其具有更好的丙肝病毒蛋白NS5A抑制活性和/或具有更好藥效學/藥代動力學性能。
[0007] 對此，本發(fā)明采用的技術方案為：
[000引一種丙型肝炎病毒抑制劑，如式（I)所示的化合物，或其晶型、藥學上可接受的鹽、 水合物或溶劑化合物，
[0009]
[0010]其中，r1、r2、r3、r4、r 5、r6、r7、r8、r9、r1〇、r1i、r1 2、r13、r14、r15、r16、r"、r"、r1 9、r2〇、r2i、 r22、r23、r24、r25、r26、r27、r28、r29、r30、r31、r32、r33、r33、r34、r35、r36、r37、r38、r39、r40、r41、r42、r43、 d44 d4日 d46 n47 n48 ·η49 n50 n日1 d日2 d日3 n54 nS日 d日6 d日7 d日8 n59 n6〇 n61 n62 n63 n64 n6日 n66 IV >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > R67、R68各自獨立地為氨、気、面素或Ξ氣甲基；
[00川附加條件是 R1、R2、r3、r4、r5、r6、r7、r8、r9、r10、r11、r12、r13、r14、r15、r16、r17、r18、r19、 r20、r21、r22、r23、r24、r25、r26、r27、r28、r29、r30、r31、r32、r33、r33、r34、r35、r36、r37、r38、r39、r40、r41、 Γ)42 d43 d44 n4日 n46 n47 n48 n49 n日0 d日 1 d日2 d日3 d日4 d日日 d日6 d日7 d日8 d日9 n60 n61 n62 n63 n64 IV >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > R65、R66、R67和R68中至少一個是気代的或気。
[0012] 采用此技術方案，気在藥物分子中的形狀和體積與氨基本上相同，如果藥物分子 中氨被選擇性替換為気，気代藥物一般還會保留原來的生物活性和選擇性。同時發(fā)明人經(jīng) 過實驗證實，碳気鍵的結(jié)合比碳氨鍵的結(jié)合更穩(wěn)定，可直接影響一些藥物的吸收、分布、代 謝和排泄等屬性，從而提高藥物的療效、安全性和耐受性。
[0013] 優(yōu)選的，気在気代位置的気同位素含量至少是大于天然気同位素含量(0.015%)， 較佳地大于30 %，更佳地大于50 %，更佳地大于75 %，更佳地大于95 %，更佳地大于99 %。 [0014]具體地說，在本發(fā)明中 r1、r2、r3、r4、r5、r6、r 7、r8、r9、r1d、r1i、r12、ru、r1 4、r15、r16、 ri7、ri8、ri9、rw、r2i、r 22、r23、r24、r25、r26、r 27、r28、r29、rw、r3i、r32、r 33、r33、r34、r35、r36、r 37、r38、 r39、r40、r41、r42、r43、r44、r45、r46、r47、r48、r49、r50、r51、r52、r53、r54、r55、r56、r57、r58、r59、r60、r61、 護2、護3、護4、護5、護6、護哺護 8各気代位置中気同位素含量至少是5%，較佳地大于10%，更佳 地大于15%，更佳地大于20%，更佳地大于25%，更佳地大于30%，更佳地大于35%，更佳地 大于40%，更佳地大于45 %，更佳地大于50 %，更佳地大于55%，更佳地大于60 %，更佳地大 于65 %，更佳地大于70%，更佳地大于75 %，更佳地大于80%，更佳地大于85 %，更佳地大于 90 %，更佳地大于95 %，更佳地大于99 %。
[0015] 優(yōu)選的，式（I)中化合物至少含有一個気原子，其含気原子的個數(shù)可W是1到68中 的任意一個。
[0016] 作為本發(fā)明的進一步改進，1?1、護、護、於、護和護各自獨立地為気或氨。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，1?1、護、護、於、護、護是気。
[001 引作為本發(fā)明的進一步改進，r7、r8、r9、rw、rii、r1 2、r13、r14、r15、r16、r"、r"、r"、r 2d、 護1和R22各自獨立地為気或氨。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，R7、R8、R9、Rl0、Rll、Rl2、Rl3、Rl4、Rl5、Rl6、Rl7、Rl8、Rl9、R20、R21、R22是 気。
[0020] 作為本發(fā)明的進一步改進，r7、ris是気。
[00別]作為本發(fā)明的進一步改進，護、護、3"、護、護、護、1?16、護、1?18、1?"、護*\護1是気。
[0022] 作為本發(fā)明的進一步改進，Ri\R22是気。
[0023] 作為本發(fā)明的進一步改進，r23、r24、r25、r26、r 27、r28、r29、rw、r3i、r32、r 33、r33、r34、 R35、R36、R37、R38、R39、R 40、於1、R42、R43、R44、R45、R 46、R47 和 R48 各自獨立地為気或氨。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，R23、r24、r25、r26、r27、r28、r29、r30、r31、r32、r33、r33、r34、r35、r36、r37、 r38、r39、r40、r41、r42、r43、r44、r45、r46、r47、r4墻気。
[0025] 作為本發(fā)明的進一步改進，r23、r24、r25、r26、r 27、r28、r29、rw、r3i、r32、r 36、r37、r38、 r39、r40、r41、r42、r43、r44、r45是気。
[0026] 作為本發(fā)明的進一步改進，護3、護4、護5、於6、於 7、於墻気。
[0027] 作為本發(fā)明的進一步改進，於9、護<\護1、護2、護哺護 4各自獨立地為気或氨。
[002引在另一優(yōu)選例中，於9、護°、護1、護2、護3、護墻気。
[0029] 作為本發(fā)明的進一步改進，護5、護6、護7、護 8、護哺護嗜自獨立地為気或氨。
[0030] 在另一優(yōu)選例中，1?55、1?56、1?57、1?58、1?5 9、護〇是気。
[0031] 作為本發(fā)明的進一步改進，RS1、R62、R63、R 64、R65、R66、R6哺R68各自獨立地為気或氨。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，護1、護2、護3、護4、護5、護 6、護7、護8是気。
[0033] 作為本發(fā)明的進一步改進，所述化合物選自下述化合物或其藥學上可接受的鹽：
[0034]
[0035]
[0036] 在另一優(yōu)選例中，所述化合物不包括非気代化合物。
[0037] 本發(fā)明還公開了一種藥物組合物，其含有藥學上可接受的載體和如上所述的所述 的丙型肝炎病毒抑制劑，或其晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物、立體異構(gòu)體、前 藥或同位素變體的藥物組合物。
[0038] 作為本發(fā)明的進一步改進，所述藥學上可接受的載體包括助流劑、增甜劑、稀釋 劑、防腐劑、染料/著色劑、矯味增強劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、崩解劑、助懸劑、穩(wěn)定 劑、等滲劑、溶劑或乳化劑中的至少一種。
[0039] 作為本發(fā)明的進一步改進，所述藥物組合物為片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、 膏劑、乳劑、懸浮劑、溶液劑、栓劑、注射劑、吸入劑、凝膠劑、微球或氣溶膠。
[0040] 給予本發(fā)明藥物組合物的典型途徑包括但不限于口服、直腸、透黏膜、經(jīng)腸給藥， 或者局部、經(jīng)皮、吸入、腸胃外、舌下、陰道內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)給藥。 優(yōu)選口服給藥或注射給藥。
[0041] 本發(fā)明的藥物組合物可W采用本領域周知的方法制造，如常規(guī)的混合法、溶解法、 制粒法、制糖衣藥丸法、磨細法、乳化法、冷凍干燥法等。
[0042] 作為本發(fā)明的進一步改進，其還包含其他活性化合物，所述活性化合物為免疫調(diào) 節(jié)劑或抗病毒藥物化合物。
[0043] 作為本發(fā)明的進一步改進，所述免疫調(diào)節(jié)劑為干擾素類藥物化合物。
[0044] 作為本發(fā)明的進一步改進，所述抗病毒藥物化合物為利己韋林、金剛燒胺、NS5A的 其他抑制劑、HCV生命周期中的解旋酶、蛋白酶、聚合酶、金屬蛋白酶或內(nèi)部核糖體進入位點 祀標的抑制劑，其中，所述NS5A的其他抑制劑為雷迪帕韋或達卡他偉中至少一種。
[0045] 本發(fā)明還提供了一種制備藥物組合物的方法，包括步驟:將藥學上可接受的載體 與如上所述的丙型肝炎病毒抑制劑，或其晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物進行 混合，形成藥物組合物。
[0046] 本發(fā)明還公開了一種如上所述的丙型肝炎病毒抑制劑的用途，其特征在于：用于 制備治療丙型肝炎病毒感染的藥物中的用途。
[0047] 所述的HCV包括其多種基因型W及多種基因亞型，例如laUb、2a、2b、3a、3b、4a、 5a、6a。
[0048] 應理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術特征和在下文(如實施例）中具 體描述的各技術特征之間都可W互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
[0049] 本文中，如無特別說明，"面素"指。、0、8'、和1。更佳地，面原子選自。、(：1和化。
[0050] 本文中，如無特別說明，"気代"指化合物或基團中的一個或多個氨被気所取代;気 代可W是一取代、二取代、多取代或全取代。術語"一個或多個気代的"與"一次或多次気代" 可互換使用。
[0051] 本文中，如無特別說明，"非気代的化合物"是指含気原子比例不高于天然気同位 素含量(0.015%)的化合物。
[0052] 藥學上可接受的鹽包括無機鹽和有機鹽。一類優(yōu)選的鹽是本發(fā)明化合物與酸形成 的鹽。適合形成鹽的酸包括但并不限于:鹽酸、氨漠酸、氨氣酸、硫酸、硝酸、憐酸等無機酸； 甲酸、乙酸、Ξ氣乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、班巧酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、 巧樣酸、苦味酸、苯甲酸、甲橫酸、乙橫酸、對甲苯橫酸、苯橫酸、糞橫酸等有機酸；W及脯氨 酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一類優(yōu)選的鹽是本發(fā)明化合物與堿形成的鹽， 例如堿金屬鹽(例如鋼鹽或鐘鹽）、堿±金屬鹽(例如儀鹽或巧鹽）、錠鹽(如低級的燒醇錠鹽 W及其它藥學上可接受的胺鹽），例如甲胺鹽、乙胺鹽、丙胺鹽、二甲基胺鹽、；甲基胺鹽、二 乙基胺鹽、Ξ乙基胺鹽、叔下基胺鹽、乙二胺鹽、徑乙胺鹽、二徑乙胺鹽、Ξ徑乙胺鹽，W及分 別由嗎嘟、贓嗦、賴氨酸形成的胺鹽。
[0053] 術語"溶劑合物"指本發(fā)明化合物與溶劑分子配位形成特定比例的配合物。"水合 物"是指本發(fā)明化合物與水進行配位形成的配合物。
[0054] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0055] 第一，本發(fā)明的化合物對丙型肝炎病毒蛋白NS5A具有優(yōu)異的抑制性。
[0056] 第二，通過気化運一技術改變化合物在生物體中的代謝，使化合物具有更好的藥 代動力學參數(shù)特性。在運種情況下，可W改變劑量并形成長效制劑，改善適用性。
[0057] 第Ξ，用気取代化合物中的氨原子，由于其気同位素效應，提高化合物在動物體內(nèi) 的藥物濃度，提高了藥物療效。
[0058] 第四，用気取代化合物中的氨原子，可W抑制某些代謝產(chǎn)物，提高了化合物的安全 性。
【具體實施方式】
[0059] 下面更具體地描述本發(fā)明式（I)結(jié)構(gòu)化合物的制備方法，但運些具體方法不對本 發(fā)明構(gòu)成任何限制。本發(fā)明化合物還可W任選將在本說明書中描述的或本領域已知的各種 合成方法組合起來而方便地制得，運樣的組合可由本發(fā)明所屬領域的技術人員容易地進 行。
[0060] 通常，在制備流程中，各反應通常在惰性溶劑中，在室溫至回流溫度(如0°C~100 °C，優(yōu)選0°C~80°C)下進行。反應時間通常為0.1小時-60小時，較佳地為0.5-24小時。
[0061] 實施例1
[0062] 一種丙型肝炎病毒抑制劑，化學名為二-d3-甲基（（2S，2'S)-((2S，2'S，3aS，3a'S， 7曰5,7曰'5)-2,2'-(5,5'-(^環(huán)[8.8.2.24,7]十六-4,6，10，12，13，15-己締-5，11-二基）二 (1氨-苯并咪挫-5,2-二基））二(八氨-1氨-嗎I噪-2,1-二基））二(3-甲基-1-氧代下燒-2,1- 二基)二氨基甲酸醋，即化合物T-1，分子式如下：
[0063]
[0064] 采用W下路線進行合成：
[00 化]
[0066] 包括W下步驟：
[0067] 1、（23,3曰5,7曰5)-1-(叔下氧幾基)八氨-1氨-嗎|噪-2-簇酸(化合物1)的合成；
[006引在反應瓶中加入心八氨嗎I噪-2-簇酸（1.69g，1 Ommo 1)，加入30mL THF和30mL蒸饋 水攬拌溶解，冰浴下滴加化0H(0.68g，17mmo 1)的7mL水溶液，加畢，攬拌反應1 Omin。滴加 (Boc)20(2.84g，13mmol)，升至室溫反應12h?；疌檢測反應完畢后，加入水稀釋，用甲基叔了 基酸萃取除雜，水相用巧樣酸調(diào)PH至酸性，乙酸乙醋萃取Ξ遍，合并有機相，飽和食鹽水洗 涂，Na2S04干燥，過濾濃縮得到3.2Ig化合物 1，收率 100%。LC-MS(APCI):m/z = 268.3(M-1)-。
[0069] 2、（23,3曰5,7曰5)-叔下基-2-((2-氨基-4-漠苯基)氨甲酯)八氨-1氨-嗎|噪-1-簇酸 醋(化合物2)的合成；
[0070] 在反應瓶中加入化合物1 (2.69g，lOmmo 1)和4-漠鄰苯二胺(2.244g，12mmo 1)，加入 60mL乙臘溶解，加入縮合劑抓CI (1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽）（2.3g， 12mmol)，0°C下滴加 N，N-二異丙基乙胺（1.68g，13mmol)，加畢，升至室溫攬拌反應1小時，點 板檢測反應完畢后，濃縮除去一半乙臘，加入120mL水，室溫下攬拌過夜。過濾，濾餅用水洗 涂，真空干燥得產(chǎn)物3.6g，收率82.2% eLC-MS(APCI) :m/z = 439.1 (M+1 ) +。
[0071] 3、（23,3日5,7日5)-叔下基-2-(6-漠-1氨-苯并咪挫-2-基)八氨-1氨-嗎|噪-1簇酸醋 (化合物3)的合成；
[0072] 將化合物2 (2.19g，5mmol)用lOmL乙酸溶解，加熱至65°C攬拌反應3小時，TLC檢測 反應完畢后濃縮除去溶劑，加入乙酸乙醋稀釋，攬拌下加入2mL氨水，調(diào)PH至弱堿性，水洗， 水相用乙酸乙醋萃取，合并有機相，飽和食鹽水洗涂，濃縮，柱層析純化得到2.1?化合物3， 收率 100% dLC-MS(APCI) :m/z = 421.1(Μ+1Γ。
[0073] 4、（2R，3aS，7aS)-叔下基-2-(6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧棚燒-2-基）-1 氨- 苯并咪挫-2-基)八氨-1氨-嗎I噪-1簇酸醋(化合物4)的合成；
[0074]在干燥的反應瓶中加入化合物3(2. Ig，5mmol)、聯(lián)棚酸頻那醇醋（1.9g，7.5mmol)、 Pd(dppf )Cl2(0.366g，l .5mmol)和乙酸鐘（1.47g，15mmol)，氮氣保護下加入21mL無水二氧 六環(huán)，加熱至85°C攬拌反應4小時，TLC檢測反應完畢后加入乙酸乙醋稀釋，加入活性炭脫色 1小時，過濾，濃縮得油狀液體，柱層析純化得到3. Ig化合物4,收率100% dLC-MS(APCI) :m/z = 468.7(M+l)"〇
[00巧]5、4,16-二漠[2.2]聚二甲苯(化合物5)的合成；
[0076] 在反應瓶中加入漠素 (0.863g，20.3mmol)和鐵粉(48mg，1.86mmol)，加入16ml二氯 甲燒，室溫下攬拌反應1小時。加入原料二聚對二甲苯(2.08g，lOmmo 1)的3mL二氯甲燒溶液， 加熱至回流，緩慢滴加2.4g漠素的5ml二氯甲燒溶液，加畢，回流反應3小時，降至室溫反應 過夜。加入二氯甲燒稀釋，依次用5%的硫代硫酸鋼、水、飽和食鹽水洗涂，無水硫酸鋼干燥， 過濾濃縮，甲苯重結(jié)晶得到1.56g化合物5，收率42.6 %。1h醒R(300MHz，CDCb): δ(ppm): 2.79-3.00(m,4H),3.10-3.21(m,2H),3.44-3.54(m,2H),6.44(d J = 8.0Hz,2H),6.51(d J =2. OHz，2H)，7.14(dd，J = 8. OHz，2. OHz，2H)。
[0077] 6、（25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-二叔下基-2,2'-(5,5'-(^環(huán)[8.8.2.24,7]十 六-4,6,10,12,13，15-己締 -5,11-二基)二（1氨-苯并咪挫-5，2-二基)二(八氨-1氨-嗎I噪- 1-簇酸醋）（化合物6)的合成；
[0078] 在反應瓶中加入化合物4(2.3旨，4.92111111〇1)、化合物5(0.72旨，1.97111111〇1)、碳酸飽 (1.61旨，4.92111111〇1巧陽(1。?}13)4(1.115旨，0.1111111〇1)，氮氣保護下加入18血01。和11111水，加入 至130°C反應3小時，點板檢測反應完畢后過濾除去催化劑，加入蒸饋水，析出白色固體，過 濾干燥得粗品，柱層析純化后得到460mg化合物6，收率26.3 %。LC-MS(APCI):m/z = 888.7(M +1) +。
[00 巧]7、（25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-2,2'-(5,5'-(^環(huán)[8.8.2.24,7]十六-4,6，10， 12,13,15-己締-5,11-二基仁（1氨-苯并咪挫-5,2-二基)二(八氨-1氨-嗎I噪）（化合物7)的 合成；
[0080] 將化合物6 (460mg，0.518mmo 1)溶于4mL二氯甲燒和ImL甲醇的混合溶劑，0°C下加 入2.33ml氯化氨二氧六環(huán)，升至室溫反應1小時，TLC檢測完畢后，濃縮除去溶劑，得化合物7 粗品，不需純化直接投入到下一步。
[0081] 8、氯甲酸-d3-甲醋(化合物8)的合成；
[0082] 將Ξ光氣(2.67g，9mmol)溶于20ml甲苯中，0°C下滴加気代甲醇（1.08g，30mmol)和 Ξ乙胺(3.34g，33mmol)的20ml甲苯溶液，加畢，升至室溫反應1小時。將反應液用冰水洗涂 Ξ次，無水硫酸鋼干燥，過濾得化合物8的甲苯溶液，直接投入到下一步反應。
[0083] 9、d3-甲氧幾基-k鄉(xiāng)氨酸(化合物9)的合成；
[0084] 將1^-鄉(xiāng)氨酸（2.81g，24mmol)溶于20mL二氧六環(huán)中，加入1N氨氧化鋼（2.9g， 72mmol)水溶液，滴加上步所得化合物8的甲苯溶液，室溫下反應過夜。TLC檢測反應完畢后 加入稀鹽酸調(diào)PH至酸性，用乙酸乙醋萃取Ξ次，合并有機相，飽和食鹽水洗涂，無水硫酸鋼 干燥，過濾濃縮得到3.56g化合物9，收率83.3%。LC-MS(APCI):m/z = 179.1 (M+1) +。
[00 化]10、二-d3-甲基（（25,2'5)-((25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-2,2'-(5,5'-(^環(huán) [8.8.2.2氣7]十六-4,6,10,12,13,15-己締-5,11-二基）二（1 氨-苯并咪挫-5,2-二基））二 (八氨-1氨-嗎I噪-2，1-二基））二（3-甲基-1-氧代下燒-2，1-二基)二氨基甲酸醋，即化合物 Τ-1的合成；
[0086] 在反應瓶中加入化合物9(98.53mg，0.553mmo 1)、冊ΒΤ(74.7mg，0.553mmo 1)和邸Cl (106. Img，0.553mmo 1)，用3mL乙臘溶解，室溫下反應5分鐘得到活化后的溶液1。將化合物7 (200mg，0.24mmo 1)溶于5mL DMF中，加入DI陽A(223.3mg，1.73mmo 1)得到溶液2。將溶液 1 加 入到溶液2中，室溫下攬拌反應3小時，TLC檢測反應完畢后加入蒸饋水，析出白色固體，抽 濾，濾餅干燥后柱層析純化得到120mg化合物T-1，收率49.8 %。
[0087] 1h NMR(300MHz，CDCl3)Sl0.87(s，2H)，7.94(dd，J = 31.7,9.3Hz，2H)，7.61-7.30 (m,4H),6.82-6.54(m，6H),5.54-5.37(m，4H),4.27(dd，J=20.0,10.細z，4H),3.60-3.23 (m，4H)，3.01(d，J=5.7Hz，2H)，2.95(s，2H)，2.88(s，2H)，2.77(s，4H)，2.51(s，2H)，2.41- 2.28(m，2H)，2.02(ddd，J = 35.3,20.2,9.3Hz，4H)，1.76(s，10H)，0.97(dt，J=11.6,5.7Hz, 6H)，0.85(dd，J = 6.9,3.細z，細）。LC-MS(APCI):m/z = 1008.3(M+l) +。
[0088] 實施例2
[0089] 二甲基（（25,2'5)-((25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-2,2'-(5,5'-(^環(huán) [8.8.2.24,7]十六-4,6,10，12,13,15-己締-5,11-二基）二（1 氨-苯并咪挫-5,2-二基））二 (八氨-1氨-嗎I噪-2,1-二基））二(3-d3-甲基-1-氧代-d5-下燒-2,1-二基)二氨基甲酸醋，即 化合物T-2,其分子式為
[0093 ] 在實施例1的基礎上，具體包括W下步驟：
[0094] 1、氯甲酸甲醋(化合物10)的合成；
[0095] 將Ξ光氣(0.3g，Immo 1)溶于2mL甲苯中，0°C下滴加甲醇(96.12mg，3mmol)和Ξ乙 胺(334mg，3.3mmol)的2mL甲苯溶液，加畢，升至室溫反應1小時。將反應液用冰水洗涂Ξ次， 無水硫酸鋼干燥，過濾得化合物10的甲苯溶液，直接投入到下一步反應。
[0096] 2、甲氧幾基-d8A-鄉(xiāng)氨酸(化合物11)的合成；
[0097] 將気代k鄉(xiāng)氨酸（300mg，2.4mmol)溶于3mL二氧六環(huán)中，加入1N氨氧化鋼（288mg， 7.2mmol)水溶液，滴加上步所得化合物8的甲苯溶液，室溫下反應過夜。TLC檢測反應完畢后 加入稀鹽酸調(diào)抑至酸性，用乙酸乙醋萃取Ξ次，合并有機相，飽和食鹽水洗涂，無水硫酸鋼 干燥，過濾濃縮得到280mg化合物 11，收率63.8 %。LC-MS(APCI): m/z = 184.1 (M+1) +。
[009引 3、二甲基（（25,2'5)-((25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-2,2'-(5,5'-(^環(huán) [8.8.2.2氣7]十六-4,6,10,12,13,15-己締-5,11-二基）二（1 氨-苯并咪挫-5,2-二基））二 (八氨-1氨-嗎隙-2,1-二基））二(3-d3-甲基-1-氧代-d5-下燒-2,1-二基)二氨基甲酸醋(化 合物T-2)的合成；
[0099] 在反應瓶中加入化合物11 (140mg，0.764mmol)、冊BT( 103.2mg，0.764mmol)和邸CI (146. Img，0.764mmo 1)，用2mL乙臘溶解，室溫下反應5分鐘得到活化后的溶液1。將化合物7 (276.53mg，0.332mmol)溶于5mL DMF中，加入DI陽A(309mg，2.39mmol)得到溶液2。將溶液 1 加入到溶液2中，室溫下攬拌反應3小時，TLC檢測反應完畢后加入蒸饋水，析出白色固體，抽 濾，濾餅干燥后柱層析純化得至IjgOmg化合物T-2，收率26.9 %。1h NMR( 300MHz，CDC13) δ 10.86 (d，J=13.5Hz，2H)，8.02-7.83(m，2H)，7.42(ddd，J = 31.6,25.6,9.6Hz，4H)，6.68(t，J = 18.7Hz，細），5.52(d，J=11.7Hz，2H)，5.46-5.31(m，2H)，4.31(d，J = 5.9Hz，2H)，3.74(d，J =15.1Hz，6H)，3.59-3.25(m，4H)，3.02(s，2H)，2.95(s，2H)，2.88(s，2H)，2.77(s，4H)，2.51 (s，2H)，2.36(s，2H)，1.93(d，J=12.7Hz，2H)，1.85-1.69(m，10H)〇LC-MS(APCI):m/z = 1018.4(M+1)+。
[0100] 實施例3
[0101] 二甲基（（25,2'5)-((25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-2,2'-(5,5'-(^環(huán) [8.8.2.2氣7]十六-4,6,10，12,13,15-己締-5,11-二基)二（1氨-d3-苯并咪挫-5,2-二基）） 二(八氨-1氨-嗎I噪-2,1-二基））二(3-甲基-1-氧代-下燒-2,1-二基)二氨基甲酸醋，即化合 物T-3,分子式如下：
[0102]
[0103] 采用W下路線合成得到：
[0104]
[0105] 在實施例1的基礎上，包括W下步驟：
[0106] 1、4-漠-3，5，6-Ξ気代鄰苯二胺(化合物12)的合成；
[0107] 在反應瓶中加入4-漠鄰苯二胺（374mg，2mmo 1)、濃鹽酸（0.33mL，4mmo 1)和5mL重 水，攬拌溶解后置于微波反應器中，140°C反應0.5小時，降至室溫后，加 IN氨氧化鋼調(diào)PH至 堿性，用乙酸乙醋萃取Ξ次，合并有機相，飽和食鹽水洗涂，濃縮得粗品，柱層析純化得 365mg 化合物 12,收率 97.6%DLC-MS(APCI):m/z = 191.4(M+l) +。
[0108] 2、（2R,3aS,7aS)-叔下基-2-( (2-氨基-4-漠-3,5,6-Ξ気代苯基)氨甲酯)八氨-1 氨-嗎I噪-1-簇酸醋(化合物13)的合成；
[0109] 在反應瓶中加入化合物1 (1.62g，6mmo 1)和化合物12(1.37g，7.2mmo 1)，加入36mL 乙臘溶解，加入縮合劑抓口（1.38旨，7.2111111〇1)，0°(3下滴加01?64(1.01旨，7.8111111〇1)，加畢，升 至室溫攬拌反應1小時，TLC檢測反應完畢后，濃縮除去一半乙臘，加入72mL水，室溫下攬拌 過夜。過濾，濾餅用水洗涂，真空干燥得產(chǎn)物2.19g，收率81 %。LC-MS(APCI): m/z = 442.1 (M+ 1) +。
[0110] 3、（2R，3aS，7aS)-叔下基-2-(6-漠-5,7,8-Ξ 気代-1 氨-苯并咪挫-2-基）八氨-1 氨-嗎I噪-1簇酸醋(化合物14)的合成；
[0111] 將化合物13 (2.19g，5mmol)用lOmL乙酸溶解，加熱至65°C攬拌反應3小時，TLC檢測 反應完畢后濃縮除去溶劑，加入乙酸乙醋稀釋，攬拌下加入2mL氨水，調(diào)PH至弱堿性，水洗， 水相用乙酸乙醋萃取，合并有機相，飽和食鹽水洗涂，濃縮，柱層析純化得到2.18g化合物 14,收率 100%DLC-MS(APCI):m/z = 424.2(M+l) +。
[0112] 4、（2R，3aS，7aS)-叔下基-2-(6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧棚燒-2-基）-5，7， 8-立気代-1氨-苯并咪挫-2-基)八氨-1氨-嗎隙-1簇酸醋(化合物15)的合成；
[011引在干燥的反應瓶中加入化合物14(2.1g，5mmol)、聯(lián)棚酸頻那醇醋（1.9g， 7.5mmo 1)、Pd(dppf)C12(0.366g，1.5mmo 1)和乙酸鐘（1.47g，15mmo 1)，氮氣保護下加入2ImL 無水二氧六環(huán)，加熱至85°C攬拌反應4小時，TLC檢測反應完畢后加入乙酸乙醋稀釋，加入活 性炭脫色1小時，過濾，濃縮得油狀液體，柱層析純化得到3. Ig化合物15,收率100% "LC-MS (APCI):m/z = 471.2(M+l)"0
[0114] 5、（25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-二叔下基-2,2'-(5,5'-(^環(huán)[8.8.2.24,7]十 六-4，6，10，12，13，15-己締-5，11-二基)二巧，7，8-Ξ 気代-1 氨-苯并咪挫-5，2-二基)二(八 氨-1氨-嗎I噪-1-簇酸醋）（化合物16)的合成；
[0115] 在反應瓶中加入化合物15(1.85旨，3.93111111〇1)、化合物5(0.58旨，1.57111111〇1)、碳酸飽 (1.28g，3.92mmo 1)和Pd(PI%3)4(90.7mg，0.08mmo 1)，氮氣保護下加入 15mL DMF和 1 血水，加 入至130°C反應3小時，TLC檢測反應完畢后過濾除去催化劑，加入蒸饋水，析出白色固體，過 濾干燥得粗品，柱層析純化后得到480mg化合物16，收率34.3% eLC-MS(APCI) :m/z = 894.5 (Μ+1Γ。
[0116] 6、（25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-2,2'-(5,5'-(^環(huán)[8.8.2.24,7]十六-4,6，10， 12，13，15-己締-5，11-二基)二（5，7，8-Ξ気代-1氨-苯并咪挫-5，2-二基)二(八氨-1氨-嗎I 噪）（化合物17)的合成；
[0117] 將化合物16(480mg，0.537mmol)溶于4血二氯甲燒和ImL甲醇的混合溶劑，0°C下加 入2.OmL氯化氨二氧六環(huán)，升至室溫反應1小時，TLC檢測完畢后，濃縮除去溶劑，得化合物17 粗品，不需純化直接投入到下一步。
[011 引 7、二甲基（（25,2'5)-((25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-2,2'-(5,5'-(^環(huán) [8.8.2.24'7]十六-4,6,10,12,13,15-己締-5,11-二基)二（1氨-d3-苯并咪挫-5,2-二基）） 二(八氨-1氨-嗎I噪-2,1-二基））二(3-甲基-1-氧代-下燒-2,1-二基)二氨基甲酸醋，即化合 物T-3的合成；
[0119] 在反應瓶中加入Moc-k鄉(xiāng)氨酸（388.9mg，2.22mmol)、H0BT(300mg，2.22mmol)和 EDCI (425.6mg，2.22mmol)，用5mL乙臘溶解，室溫下反應5分鐘得到活化后的溶液1。將化合 物 17(802.2mg，0.965mmol)溶于lOmL DMF中，加入DIPEA(898.3mg，6.95mmol)得到溶液2。將 溶液1加入到溶液2中，室溫下攬拌反應3小時，TLC檢測反應完畢后加入蒸饋水，析出白色固 體，抽濾，濾餅干燥后柱層析純化得到400mg化合物T-3，收率41.2 %。
[0120] 1h NMR(300MHz，CDCl3)Sl0.85(d，J=13.0Hz，2H)，6.77-6.60(m，6H)，5.53-5.37 (m，4H)，4.44-4.13(m，4H)，3.77(d，J = 21.4Hz，7H)，3.45(dd，J = 21.0,8.0Hz，4H)，3.03(s， 2H)，2.96(s，2H)，2.86(d J= 18.3Hz，2H),2.71 (dJ = 42.0Hz，4H) ,2.52(8，2H),2.37(s, 2H),2.08-1.90(m，4H)，l.72(s，12H)，0.98(dt，J=10.6,5.5Hz，6H),0.89-0.83(m，6H)〇LC- MS(APCI):m/z = 1008.3(M+l)"〇
[0121] 實施例4
[0122] 二甲基（（25,2'5)-((25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-2,2'-(5,5'-(^環(huán) [8.8.2.24,7]十六-5,7,8,12,13,15-d6-4,6,10,12,13,15-己締-5,11-二基)二（1氨-d3-苯 并咪挫-5,2-二基））二(八氨-1氨-嗎I噪-2,1-二基））二(3-甲基-1-氧代-下燒-2,1-二基)二 氨基甲酸醋，即化合物T-4，分子式如下：
[0123]
[0124] 采用W下路線合成得到：
[0125]
[0126] 包括W下步驟：
[0127] 1、4，16-二漠-5,7,8，12，13，15-(16[2.2]聚二甲苯(化合物18)的合成；
[0128] 在反應瓶中加入原料化合物5( 109.8mg，0.3mmol)、MoCls(8.2mg，0.03mmol)和2mL 気代苯，微波80°C下反應1.5小時，降至室溫后，過濾除去催化劑，濃縮得粗品，柱層析純化 得化合物100mg化合物18，收率:91.7%。LC-MS(APCI):m/z = 373.3(M+l) +。
[0129] 2、（25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'5)-二叔下基-2,2'-(5,5'-(^環(huán)[8.8.2.24,7]十 六-5，7，8，12，13，15-d6-4，6，10，12，13，15-己締-5，11-二基）二（1氨-苯并咪挫-5，2-二基） 二(八氨-1氨-嗎I噪-1-簇酸醋）（化合物19)采用的合成；
[0130] 在反應瓶中加入化合物4(1.85旨，3.93111111〇1)、化合物18(0.58旨，1.57111111〇1)、碳酸飽 (1.28邑，3.92111111〇1)和?(1?；?)4(90.7111邑，0.08111111〇1)，氮氣保護下加入15111101。和1血水，加 入至130°C反應3小時，TLC檢測反應完畢后過濾除去催化劑，加入蒸饋水，析出白色固體，過 濾干燥得粗品，柱層析純化后得到480mg化合物19，收率34.1 % dLC-MS(APCI ) :m/z = 894.5 (Μ+1Γ。
[0131] 3、（25,2'5,3曰5,3曰'5,7曰5,7曰'8)-2,2'-(5,5'-(^環(huán)[8.8.2.24,7]十六-5,7,8， 12，13，15-(16-4,6，10，12，13，15-己締-5，11-二基)二（1氨-苯并咪挫-5,2-二基)二(八氨-1 氨-嗎I噪）（化合物20)的合成；
[0132] 將化合物16(480mg，0.537mmol)溶于4血二氯甲燒和ImL甲醇的混合溶劑，0°C下加 入2. OmL氯化氨二氧六環(huán)，升至室溫反應1小時，TLC檢測完畢后，濃縮除去溶劑，得化合物20 粗品，不需純化直接投入到下一步。
[0133] 4、二甲基（（2S，2'S)-((2S，2'S，3aS，3a'S，7aS，7a'S)-2,2'-(5,5'-(S 環(huán) [8.8.2.24,7]十六-5,7,8，12，13，15-(16-4,6，10，12，13，15-己締-5，11-二基)二（1氨-(13-苯 并咪挫-5,2-二基））二(八氨-1氨-嗎I噪-2,1-二基））二(3-甲基-1-氧代-下燒-2,1-二基)二 氨基甲酸醋，即化合物T-4)的合成；
[0134] 在反應瓶中加入MocA-鄉(xiāng)氨酸（98.53mg，0.553mmo 1)、冊BT(74.7mg，0.553mmo 1) 和邸Cl(106. Img，0.553mmol)，用3血乙臘溶解，室溫下反應5分鐘得到活化后的溶液1。將化 合物20(200111旨，0.24111111〇1)溶于5血01。中，加入01?64(223.3111旨，1.73臟〇1)得到溶液2。將溶 液1加入到溶液2中，室溫下攬拌反應3小時，TLC檢測反應完畢后加入蒸饋水，析出白色固 體，抽濾，濾餅干燥后柱層析純化得到78mg化合物T-4，收率32.4 %。
[013引 1h NMR(300MHz，CDCl3)δl0.88(s，2H)，8.00(d，J = 9.細z，lH)，7.88(s，lH)，7.62- 7.33(m，4H)，5.54-5.38(m，4H)，4.41-4.22(m，4H)，3.75(d，J=16.2Hz，6H)，3.44(dd，J= 24.4，10.4Hz，4H)，3.03(s，2H)，2.96(s，2H)，2.87(d，J = 9.3Hz，2H)，2.79(d，J = 6.細z， 4H)，2.52(s，2H)，2.36(d，J= 11.9Hz，2H)，1.94(d，J= 14.3Hz，4H)，1.76(dJ= 10.7Hz, IIH),1.02-0.94(m，6H),0.89-0.81(m,細）0LC-MS(APCI):m/z=1008.7(M+1)+。
[0136] 實施例5
[0137] 對W上實施例的化合物進行生物活性評價。
[0138] 為了驗證本文所述的化合物對HCV的作用，發(fā)明人采用HCV復制子系統(tǒng)（HCV Replicon System)作為評價模型。自Sciencel999年首次報道W來，肥V復制子系統(tǒng)已經(jīng)成 為研究HCV RNA復制、致病性和病毒持續(xù)性的最重要的工具之一，例如已經(jīng)利用復制子成功 地證明了肥V RNA復制所必須的5'-NCR最小區(qū)域，并且HCV復制子系統(tǒng)已經(jīng)成功地被用作抗 病毒藥物的評價模型。本發(fā)明的發(fā)明人按照Science ,1999,285(5424) ,110-3，W及 J. Virol，2003，77(5)，3007-19所描述的方法進行驗證。
[0139] (1)檢測化合物抗HCV la和化基因型復制子活性
[0140] 應用HCV-la和HCV-化穩(wěn)定轉(zhuǎn)染復制子細胞檢測化合物丙型肝炎病毒基因型la和 化復制子的抑制活性。本實驗將WNS5A抑制劑BMS-790052作為陽性對照化合物。
[0141] 步驟一:對化合物進行1:3系列稀釋8個濃度點，雙復孔，加入96孔板中。設置DMS0 為無加化合物對照。細胞培養(yǎng)液中的DMS0最終濃度為0.5 %。
[0142] 步驟二：將HCV-la和化細胞分別懸浮在含10%FBS的培養(yǎng)液中，W每孔8,000個細 胞的密度種到含有化合物的96孔板中。細胞在5%C02、37°C條件下培養(yǎng)3天。
[0143] 步驟用〔日11111日1'斗111〇1'。1'〇111日旨日)測定化合物對61'化復制子細胞毒性。
[0144] 步驟四：用化ight-Glo(Promega)檢測巧光素酶測定化合物抗丙型肝炎病毒活性。
[0145] 步驟五:采用GraphPad Prism軟件分析數(shù)據(jù)，擬合曲線并計算EC日日值和CC加值。
[0146] 對實施例1~實施例4的化合物按照如上步驟進行分析計算EC50值和CC50值，結(jié)果 如表1所示。
[0147] (2)測定化合物抗感染性病型肝炎病毒(GT2a)活性
[0148] 該感染模型參考已報道文獻（A novel luciferase and GFP dual reporter virus for rapid and convenient evaluation of HCV rep 1ication. Virus Res 2011.155:406)。用HCVcc(M0I = 0.2)感染Huh-7.5.1細胞后，化合物處理3天(8個濃度，3倍 稀釋，雙復孔）?？共《净钚詫巧光素酶法測定。同時測定化合物對化h7.5.1細胞活性。本 實驗將WNS5A抑制劑BMS-790052作為陽性對照化合物。采用GraphPad軟件計算ECso。
[0149] 對實施例1~實施例4的化合物按照上述步驟進行分析計算ECso,結(jié)果如表1所示。
[0150] 表1實施例1~實施例4的生物活性評價分析表
[0151]
[0152] 如表1所示，證明本發(fā)明的化合物可抑制HCV的多個基因型，并通過抑制HCV NS5A 蛋白的機制，發(fā)揮了優(yōu)越的抗丙肝病毒作用。
[0153] (3)代謝穩(wěn)定性評價
[0154] 微粒體實驗：人肝微粒體：0.5mg/mL，Xenotech ;大鼠肝微粒體：0.5mg/mL， Xenotech;輔酶(NADPH/NADH): lmM，Sigma Life Science;氯化儀:5mM，lOOmM憐酸鹽緩沖劑 (抑為7.4)。
[0155] 儲備液的配制:精密稱取一定量的化合物實施例1-4的粉末，并用DMS0分別溶解至 5mM。
[0156] 憐酸鹽緩沖液（100mM，pH7.4)的配制：取預先配好的0.5M憐酸二氨鐘150mL和 700mL的0.5M憐酸氨二鐘溶液混合，再用0.5M憐酸氨二鐘溶液調(diào)節(jié)混合液抑值至7.4，使用 前用超純水稀釋5倍，加入氯化儀，得到憐酸鹽緩沖液（lOOmM)，其中含lOOmM憐酸鐘，3.3mM 氯化儀，pH為7.4。
[0157] 配制NADPH再生系統(tǒng)溶液(含有6.5mM NADP，16.5mM G-6-P，3U/mL G-6-P D，3.3mM 氯化儀），使用前置于濕冰上。
[0158] 配制終止液:含有50ng/mL鹽酸普糞洛爾和2(K)ng/mL甲苯橫下脈（內(nèi)標）的乙臘溶 液。取25057.化L憐酸鹽緩沖液(pH7.4)至50mL離屯、管中，分別加入812.化L人肝微粒體，混 勻，得到蛋白濃度為0.625mg/mL的肝微粒體稀釋液。取25057.化L憐酸鹽緩沖液(pH7.4)至 50血離屯、管中，分別加入812.扣L SD大鼠肝微粒體，混勻，得到蛋白濃度為0.625mg/mL的肝 微粒體稀釋液。
[0159] 樣品的解育：用含70%乙臘的水溶液將相應化合物的儲備液分別稀釋至0.25mM， 作為工作液，備用。分別取39祉L的人肝微粒體或者大鼠肝微粒體稀釋液加入96孔解育板中 (N=2)，分別加入化L 0.25mM的的工作液中，混勻。
[0160] 代謝穩(wěn)定性的測定：在96孔深孔板的每孔中加入30化L預冷的終止液，并置于冰 上，作為終止板。將96孔解育板和NADPH再生系統(tǒng)置于37°C水浴箱中，100轉(zhuǎn)/分鐘震蕩，預解 5min。從解育板每孔取出80化解育液加入終止板，混勻，補充20化NADPH再生系統(tǒng)溶液，作 為Omin樣品。再向解育板每孔加入80化的NADPH再生系統(tǒng)溶液，啟動反應，開始計時。相應化 合物的反應濃度為ΙμΜ，蛋白濃度為0.5mg/mL。分別于反應10、30、90min時，各取100化反應 液，加入終止板中，滿旋3min終止反應。將終止板于5000Xg，4°C條件下離屯、lOmin。取10化1 上清液至預先加入10化L蒸饋水的96孔板中，混勻，采用LC-MS/MS進行樣品分析。
[0161 ]數(shù)據(jù)分析:通過LC-MS/MS系統(tǒng)檢測相應化合物及內(nèi)標的峰面積，計算化合物與內(nèi) 標峰面積比值。通過化合物剩余量的百分率的自然對數(shù)與時間作圖測得斜率，并根據(jù)W下 公式計算tl/2和化int，其中V/M即等于1/蛋白濃度。
[0162]
[0163] 對實施例1-4的化合物按照上述步驟進行分析，結(jié)果如表2所示。
[0164] 表2實施例1-4的化合物代謝穩(wěn)定性的測定結(jié)果表
[01 化]
[0166] 如表2所示，本發(fā)明化合物在人肝微粒體與大鼠肝微粒體實驗中都表現(xiàn)出優(yōu)異的 代謝穩(wěn)定性。
[0167] (4)大鼠藥代動力學實驗
[0168] 實驗目的:研究大鼠給予Odalasvir、化合物T-1后，考察本發(fā)明化合物的藥代動力 學行為。
[0169] 實驗動物；
[0170] 種類及品系：SD大鼠等級:SPF級
[0171] 性別及數(shù)量:雄性，6只
[0172] 體重范圍：180~220g(實際體重范圍為187~197g)
[0173] 來源:上海西普爾必凱實驗動物有限公司
[0174] 實驗及動物合格證號:SCXK(滬)2013-0016
[0175] 實驗過程：
[0176] 在血樣采集之前，預先在抓TA-K2抗凝管中加入20L的2M氣化鋼溶液（醋酶抑制 劑），于80度烘箱內(nèi)烘干后，置于4度冰箱存放。
[0177] 大鼠，雄性，體重187~197g，隨機分為2組，于實驗前一天下午開始禁食過夜但可 自由飲水，給藥后地給食物。A組給予Odalasvir 3mg/kg，B組給予式T-1化合物3mg/kg，分別 于給藥后15min、30min、l、2、3、5、8、10h從大鼠眼眶靜脈取血100-200L左右，置于經(jīng)抓TA-K2 抗凝的0.5mL的化pendorf管中，立即混勻，抗凝后，盡快將試管輕輕顛倒混勻5-6次后，血取 好后放置在冰盒中，30min內(nèi)把血樣本在4000巧m，10min，4°C條件下離屯、分離血漿，收集全 部血漿后立即于-20°C保存。所有時間點樣品采集后測定每個時間點的血漿中的血藥濃度。
[0178] 根據(jù)上述所得的給藥后平均血藥濃度-時間數(shù)據(jù)，采用Winnonin軟件，按非房室統(tǒng) 計矩理論求算雄性SD大鼠分別i . g給予Odalasvir (3mg/kg)、式T-1化合物（3mg/kg)后的藥 代動力學相關參數(shù)，詳見表3。
[0179] 表3大鼠給予Odalasvir及式T-1化合物后藥代參數(shù)
[0180]
[0181 ] 如表3所示，與Odalasvir相比，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)化合物T-1具有比Odalasvir更優(yōu)的 活性，并且具有優(yōu)異的藥代動力學性質(zhì)，因此更適合作為抑制丙型肝炎病毒蛋白NS5A的化 合物，進而適合制備治療丙型肝炎病毒感染的藥物。
[0182] 應理解，運些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，實施例中未 注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說 明，否則份數(shù)和百分比為重量份和重量百分比。
[0183] W上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進一步詳細說明，不能認定 本發(fā)明的具體實施只局限于運些說明。對于本發(fā)明所屬技術領域的普通技術人員來說，在 不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可W做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發(fā)明的 保護化圍。
【主權項】
1. 一種丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:如式（I)所示的化合物，或其晶型、藥學上可 接受的鹽、水合物或溶劑化合物，其中，ri、r2、r3、r4、r5、r6、r 7、r8、r9、ri〇、rii、ri2、ri3、ri 4、r15、ri6、ri7、r"、ri9、r2〇、r 2i、r22、 r23、r24、r25、r26、r27、r28、r29、r30、r31、r32、r33、r33、r34、r35、r36、r37、r38、r39、r40、R"、r42、r43、r44、 d4日 d46 d47 d48 n49 n日〇 d日 1 d日2 d日3 d日4 d日日 d日6 d日7 d日8 d日9 n60 n61 n62 n63 n64 n6日 n66 n67 IV >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > R68各自獨立地為氨、気、面素或Ξ氣甲基； 附加條件是 R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、r8、r9、r10、r11、r12、r13、r14、r15、r16、r17、r18、r19、r20、 r21、r22、r23、r24、r25、r 26、r27、r28、r29、r3〇、r 31、r32、r33、r33、r34、r 35、r36、r37、r38、r39、r 4〇、r41、r42、 d43 η44 η4日 η46 η47 η48 η49 η日〇 D日1 d日2 d日3 d日4 η日日 d日6 η日7 η日8 η日9 η60 n61 n62 n63 n64 n6日 IV >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > IV > IV >lv >lv > R66、R67和R68中至少一個是気代的或気。2. 根據(jù)權利要求1所述的丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:1?1、護、護、於、護和護各自獨 立地為気或氨。3. 根據(jù)權利要求1所述的丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:r7、r8、r9、rw、rii、ri 2、ri3、 護、1?15、1?16、護、1?18、1?"、護°、護哺護2各自獨立地為気或氨。4. 根據(jù)權利要求1所述的丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:r8、r9、rw、rii、ri 2、ri3、ri6、 護、1?18、1?19北。、32堪気。5. 根據(jù)權利要求1所述的丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:R23、R24、R25、R 26、R"、R28、 R29、R30、護1、R32、R33、R 33、R34、R35、R36、R37、R 38、R39、R40、於1、R42、R43、R 44、R45、R46、R47和R48各自獨 立地為気或氨。6. 根據(jù)權利要求1所述的丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:R23、R24、R25、R 26、R"、R28、 r29、r30、r31、r32、r36、r37、r38、r39、r40、r41、r42、r43、r44、r45是気。7. 根據(jù)權利要求1所述的丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:於9、護\護1、護2、護哺護4各 自獨立地為気或氨。8. 根據(jù)權利要求1所述的丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:護5、護6、護7、護 8、護哺護皆 自獨立地為気或氨。9. 根據(jù)權利要求1所述的丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:r6i、r62、r63、r 64、r65、r66、r67 和R68各自獨立地為気或氨。10.根據(jù)權利要求1所述的丙型肝炎病毒抑制劑，其特征在于:所述化合物選自下述化 合物或其藥學上可接受的鹽：11. 一種藥物組合物，其特征在于:其含有藥學上可接受的載體和如權利要求1~10任 意一項所述的丙型肝炎病毒抑制劑，或其晶型、藥學上可接受的鹽、水合物或溶劑合物、立 體異構(gòu)體、前藥或同位素變體的藥物組合物。12. 根據(jù)權利要求11所述的藥物組合物，其特征在于：其還包含其他活性化合物，所述 活性化合物為免疫調(diào)節(jié)劑或抗病毒藥物化合物。13. -種如權利要求1~10任意一項所述的丙型肝炎病毒抑制劑的用途，其特征在于： 用于制備治療丙型肝炎病毒感染的藥物中的用途。
【文檔編號】A61P31/14GK106083829SQ201610017674
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年1月12日 公開號201610017674.1, CN 106083829 A, CN 106083829A, CN 201610017674, CN-A-106083829, CN106083829 A, CN106083829A, CN201610017674, CN201610017674.1
【發(fā)明人】王義漢, 趙九洋
【申請人】深圳市塔吉瑞生物醫(yī)藥有限公司