專利名稱：膠原質(zhì)－聚乙烯基吡咯烷酮制備的慢性關(guān)節(jié)炎癥調(diào)控組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)制備的慢性關(guān)節(jié)炎癥調(diào)控組合物，回顧了墨西哥人口中的關(guān)節(jié)炎病癥情況，闡述了該組合物被認(rèn)為是免疫學(xué)調(diào)控的原因，并且研究了其作為免疫調(diào)控組成組合物的參數(shù)。因而，本申請(qǐng)的范圍為生物制藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎是一種自身免疫系統(tǒng)疾病，在墨西哥人口中呈現(xiàn)高發(fā)情況(0.3％；范圍在0.1-0.6)其癥狀表現(xiàn)在慢性彌漫性炎癥、滑液增生或腫大、軟骨纖維化和關(guān)節(jié)軟骨退化、次級(jí)軟骨退化。(Feldmann M，Brennan FM，Maini RN.Ann Rev Immunol 1996；14397-9)不同種類和數(shù)量的滲透滑液組織的活性細(xì)胞，通過細(xì)胞表面黏附分子(CAMs)的細(xì)胞-細(xì)胞直接接觸，前炎癥因子過度表達(dá)的失衡造成了關(guān)節(jié)組織物質(zhì)退化，并導(dǎo)致了這種疾病的破壞特征，通過這些研究形成了類風(fēng)濕的病理學(xué)。
從免疫學(xué)上說，類風(fēng)濕滑液組織特征在于前炎癥因子(包括白細(xì)胞間介素-1β(IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF-α)的過度表達(dá)，這些起到協(xié)同作用，它們被認(rèn)為是所謂的“類風(fēng)濕因子”或者致關(guān)節(jié)炎淋巴因子(arthritogenic cytokines)IL-6，IL-8，IL-10，IL-15，IL-17，IL-18，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)、血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)(Gowen M，Wood DD，Ihrie EJ，McGuire MKB，Russell RG.Nature 1983；306378-81；Moreland L W.J Rheumatol 1999；26Suppl577-15；Manicourt DH，TrikiR，F(xiàn)ukuda K，et al.Arthritis Rheum 1993；36490-9；Dolhain RJEM，Tak PP，Brennan FM，Chantry D，Turner M，et al.Lancet 1989；2244-7；Brennan FM，Maini RN，F(xiàn)eldmann M.Cytokine expression in chronic inflammatory disease.BrMed Bull 1995；51368-84；HildnerK，F(xiàn)inotto S，Becker C，et al.Clin Exp Immunol 1999；118137-46；Minghetti PP，Blackburn WD Jr.JRheumatol 2000；27653-60；Furuzawa-Carballeda J，Alcocer-Varela J.Scand J Immunol 1999；50215-22)。致關(guān)節(jié)炎淋巴因子不僅存在于類風(fēng)濕滑膜潤(rùn)液中，還存在于滑膜組織中(Gowen M，Wood DD，Ihrie EJ，McGuire MKB，Russell RG..Nature 1983；306378-81；Beutler BA.J Rheumatol1999；26Suppl5716-21；Black RA，Rauch ChT，Kozlosky CJ.Nature 1997；385729-33；Moreland LW.JRheumatol 1999；26Suppl577-15；Wakisaka S，Suzuki N，Takeba Y，et al.Clin Exp Immunol1998；114119-28；Kiener HP，Hofbauer R，Tohidast-Adrad M，et al.Arthritis Rheum 2000；43164-74；Manicourt DH，Triki R，F(xiàn)ukuda K，et al.Arthritis Rheum 1993；36490-9；Dolhain RJEM，Tak PP，Dijkmans BAC et al.Br J Rheumatol 1998；37502-8；Manicourt D-H，Poilvache P，Van EgerenA，et al.Arthritis Rheum 2000；43281-8；Brennan FM，Chantry D，Turner M，et al.Inhibitory effect of TNF-αantibodies on synovial cell interleukin-1 production in rheumatoid arthritis.Lancet 1989；2244-7； BrennanFM，Maini RN，F(xiàn)eldmannM. Br Med Bull 1995；51368-84；Hildner K，F(xiàn)inotto S，Becker C，et al.Clin ExpImmunol 1999；118137-46；Minghetti PP，Blackburn WD Jr.J Rheumatol 2000；27653-60；Furuzawa-Carballeda J，Alcocer-Varela J. Scand J Immunol 1999；50215-22；Dolhain RJEM，Tak PP，DijkmansBAC，et al.Br J Rheumatol 1998；37502-8)。
另一方面，抗炎癥淋巴因子如IL-2，IL-4和IFN-γ并沒有在關(guān)節(jié)中發(fā)現(xiàn)(Firestein GS，Xu W-D，Townsend K，et al.J Exp Med 1988；1681573-86；SalmonM，Gaston JSH.Br Med Bulletin 1995；51332-45)。
前炎癥因子具有調(diào)節(jié)作用，損傷的機(jī)理與炎癥集中和形成關(guān)節(jié)翳有關(guān)，由于這些因子對(duì)表面細(xì)胞隔膜表達(dá)的特異性受體發(fā)揮了直接作用。在這些受體中，選擇素家族(Chapman PT，Haskard DO.Br Med Bull 1995；51296-311)、整合素家族的成員，包括β1亞單位或極遲抗原(VLA)，β2亞單位或者白細(xì)胞間介素(leukointegrins)和β3亞單位(El-Gabalawy H，Canvin J，Gouping M，et al.ArthritisRheum 1996；391913-21)或黏附素家族(cytoadhesin family)以及免疫球蛋白基因總科(Chapman PT，Haskard DO.Br Med Bull 1995；51296-311)。
對(duì)于類風(fēng)濕B型(synoviocytes)關(guān)節(jié)滑液或者滑液組織的免疫組織化學(xué)化驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，部分黏結(jié)分子表達(dá)的改變從選擇素家族中ELAM-1和PEXCAM的升高已經(jīng)得到證實(shí)。他們受到致關(guān)節(jié)炎淋巴因子(arthritogenic cytokines)的上調(diào)(Dolhain RJEM，Tak PP，Dijkmans BAC，et al，Br J Rheumatol1998；37502-8；Chapman PT，Haskard DO.Br Med Bull 1995；51296-311；El-Gabalawy H，Canvin J，Gouping M，et al.Arthritis Rheum 1996；391913-21；Youssef PP，Triantafillou S，Parker A，et al.JRheumatol 1997；242291-8)。
通過整合素家族中α6β1的減少，可能導(dǎo)致IL-1β和TNF-α的過度表達(dá)；而αvβ5整合素還沒有表達(dá)，及α1-5β1整合素和αL，αM，αxand αd白細(xì)胞間介素(leukointegrins)相對(duì)于正?；航M織比較，表達(dá)已經(jīng)增加了(El-Gabalawy H，Canvin J，Gouping M，et al.Arthritis Rheum 1996；391913-21；YoussefPP，Triantafillou S，Parker A，et al.J Rheumatol 1997；242291-8；Pirila L，Heino J.J Rheumatol1996；231691-8；Cicuttini FM，Martin M，Boyd AW.J Rheumatol 1994；21406-12)。
免疫球蛋白總科中的VCAM-1和ICAM-1表達(dá)的增加已經(jīng)得到證實(shí)。增加的細(xì)胞黏附分子表達(dá)通過前炎癥因子來調(diào)控(Cicuttini FM，Martin M，Boyd AW.J Rheumatol 1994；21406-12)。
同樣，在類風(fēng)濕病理生理學(xué)，鈣離子依賴或非依賴蛋白酶(MMPs)在關(guān)節(jié)破壞和關(guān)節(jié)翳形成中起到了很重要的作用。在風(fēng)濕滑膜中確定的高濃度的鈣非依賴蛋白酶是組織蛋白酶(cathepsinL)、天冬氨酸蛋白酶(cathepsin D)和嗜中粒細(xì)胞胰蛋白酶。同時(shí)，除了MMP-9和-10，MMP-1，-2，-3和13在滑液組織中都有過度表達(dá)(Keyszer GM，Heer AH，Kriegsmann J，et al.Arthritis Rheum1995；38976-84；Owen CA，Campbell MA，Boukedes SS，Campbell EJ.J Immunol 1995；1555803-10；Koolwijk P，Miltenburg AMM，Van Erck MGM，ef al.J Rheumatol 1995；22385-93；Maeda S，Sawai T，Uzuki M，et al.Ann Rheum Dis 1995；54970-5；Hembry RM，Bagga MR，Reynolds JJ，Hamblen DL.AnnRheum Dis 1995；5425-32；Tetlow LC，Woolley DE.Ann Rheum Dis 1995；54896-903)。
類風(fēng)濕患者的滑膜液體和血清化驗(yàn)表明主要的MMP-3，-1和-9的含量與對(duì)比試驗(yàn)比較表現(xiàn)出重要的數(shù)量差別。蛋白酶濃度與滑液炎癥程度直接相關(guān)(Ishiguro N，Ito T，Obata K-I，et al.JRheumatol 1996；231599-604；Watanabe Y，Shimamori N，Yamaguchi R，et al.Clin Exp Rheumatol1997；15255-61)。
蛋白酶表達(dá)受前炎癥因子(如IL-1β和TNFα)上調(diào)(Shingu M，Miyauchi S，Nagai Y，et al.Br JRheumatol 1995；34101-6；West-Mays JA，Strissel KJ，Sadow PM，F(xiàn)ini ME.Proc Natl Acad Sci1995；926768-72；Migita K，Eguchi K，Kawabe Y，et al.Immunol 1996；89553-7；Cawston TE，Curry VA，Summers CA，et al.Arthritis Rheum 1998；411760-9)，同時(shí)，對(duì)于整合素和它們的配體如帶有纖維連接蛋白的αv或α4、帶有組織相容性復(fù)合物的β2-微球蛋白、帶有VLA-4的VCAM-1等(Larjava H，Lyons J，Salo R，et al.J Cell Physiol 1993；157190-200；Romanic AM，Madri JA.J Cell Biol1994；1251165-78；Tremble P，Chiquet-Ehrismann R，Werb Z.Mol Biol Cell 1994；54390-3；Rükonen T，Westermarck J，Koivisto L，et al.JBiol Chem 1995；27013548-52；Migita K，Eguchi K，Tominaga M，et al.Biochem Biophys Res Comm 1997；239621-5；Sarkissian V，Lafyatis R.JImmunol 1999；1621772-9)。抑制生化蛋白酶的表達(dá)和/或活性由IL-4，IL-6，IL-10 and INF-γ來調(diào)控(Prontera C，Crescenzi G，RotilioD.Exp Cell Res 1996；224183-8；Lacraz S，Nicod LP，Chicheportiche R，et al.J Clin Invest 1995；962304-10；Busiek DF，Baragi V，Nehring LC，et al.J Immunol 1995；1596484-91；Overall ChM Regulation oftissue inhibitor of matrix metalloproteinases.InInhibition of matrix metalloproteinases.Therapeuticpotential. EditoresGreenwald RA，Golub LM 1994；73259-64)，或者通過非特異性抑制劑的α1-抗胰蛋白酶或者α2-巨球蛋白酶和特異性抑制劑，如金屬蛋白酶的組織抑制劑(TIMPs)(Hayakawa T，Yamashita K，Tanzawa K，et al.FEBS Lett 1992；29829-32)。TIMPs以高度緊密相連、非共價(jià)的和不可逆的方式與基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs前體和活性體形成了等摩爾比的復(fù)合物(1∶1)(Bodden MK，Windsor LJ，Caterina NM，et al.Analysis of the TIMP-1/FIB-CL complex.InInhibition of matrixmetalloproteinases.Therapeutic potential.EditorsGreenwald RA，Golub LM.1994；85-95)。TIMP-1和TIMP-3在所有的類風(fēng)濕滑膜組織中分布。然而TIMP-2并沒有檢測(cè)到(Hembry RM，Bagga MR，Reynolds JJ，Hamblen DL.Ann Rheum Dis 1995；5425-32)。
骨關(guān)節(jié)炎或者關(guān)節(jié)退行性疾病是最為普遍的風(fēng)濕病。退行性關(guān)節(jié)病對(duì)于不同性別同樣流行，并具有放射學(xué)影像特征，無論是否帶有明顯癥狀，這是在60或70年代就廣為人們所知的。骨關(guān)節(jié)炎影響了2.3％(范圍在1.7-2.9之間)的墨西哥人口。
世界衛(wèi)生組織和美國整形外科學(xué)院，對(duì)于關(guān)節(jié)退行性疾病的標(biāo)準(zhǔn)為骨關(guān)節(jié)炎是機(jī)械運(yùn)動(dòng)和生理引起的軟骨正常連接的松動(dòng)以及軟骨組織的退化。雖然這可能是由多種誘因?qū)е?，包括基因、成長(zhǎng)、代謝和外傷；骨關(guān)節(jié)炎包括了所有活動(dòng)關(guān)節(jié)的組織。最終，骨關(guān)節(jié)炎通過細(xì)胞和基質(zhì)的形貌、生化、分子和生理機(jī)械功能的改變得到確認(rèn)，并且導(dǎo)致軟化、纖維化、關(guān)節(jié)軟骨的潰瘍和缺失、軟骨的硬化癥和骨質(zhì)象牙化、骨贅以及軟骨囊腫。臨床實(shí)踐證據(jù)，骨關(guān)節(jié)炎的特征在于關(guān)節(jié)疼痛、壓痛、活動(dòng)受限、骨質(zhì)摩擦、偶然滲出液和不同程度的局部炎癥(Ramos NF.Enfermedad articulardegenerativa.InEnfermedades Reumáticas.Criterios y Diagnóstico. Editorial McGraw-HillInteramericana.la.Edición，Tomo II；1999，págs437-63；Pelletier J-P，Martel-Pelletier J，Abramson SB.Osteoarthritis，an inflammatory disease.Arthritis Rheum 2001；44123 7-47)。
在臨床上，骨關(guān)節(jié)炎還表現(xiàn)在關(guān)節(jié)炎疼痛、關(guān)節(jié)壓痛、殘疾、骨質(zhì)摩擦、偶然滲出液和非全身性的不同程度的局部炎癥。
骨關(guān)節(jié)炎的病理特征在于不規(guī)則的軟骨損壞(在受力區(qū)域的軟骨損壞更為常見)、軟骨硬化癥、軟骨囊腫、邊緣化骨贅、血流速升高(metaphisiary blood influx)和不同程度的滑膜炎。
組織學(xué)而言，骨關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)在早期關(guān)節(jié)表面破裂、關(guān)節(jié)軟骨聚集、端軟骨破裂，以及不同程度的晶體沉淀，以及后期血管線性侵害。它同樣表現(xiàn)在傷口修復(fù)，特別是骨贅和隨后的整體軟骨破壞、硬化癥和軟骨的壞死。
生理機(jī)械運(yùn)動(dòng)上，骨關(guān)節(jié)炎表現(xiàn)在組織性狀的改變、包括壓縮功能、滑動(dòng)功能、軟骨水壓滲透性、水體聚集和過度腫脹。軟骨的這些變化通常伴隨著骨的硬化。
生化角度來說，骨關(guān)節(jié)炎特征在于多聚糖濃度的降低，可能是多聚糖體積和聚集程度的變化，膠原質(zhì)的大小和組織的改變，增加基質(zhì)大分子的代謝(Lark MW，Bayne EK，F(xiàn)lanagan J，et al.J ClinInvest 1997；10093-106；Ramos NF.Enfermedad articular degenerativa.In Enfermedades Reumáticas.Criterios y Diagnóstico.Editorial McGraw-Hill Interamericana la.Edición，Tomo II；1999，págs437-63；Rowan AD，Koshy PJT，Shingleton WD，et al.Arthritis Rheum 441620-32)。
從治療學(xué)上說，骨關(guān)節(jié)炎現(xiàn)在還沒有特別有效的療法(Felon DT.Arthritis Rheum 2001；441477-80)。
免疫學(xué)上說，骨關(guān)節(jié)炎與前炎癥因子、黏附分子和蛋白酶過度表達(dá)有關(guān)，質(zhì)量上與在類風(fēng)濕中檢測(cè)的相似，但數(shù)量上與風(fēng)濕性關(guān)節(jié)相比濃度較低。(Pelletier J-P，Martel-Pelletier J，Abramson SB.Osteoarthritis，an inflammatory disease.Arthritis Rheum 2001；441237-47；Scan J Immunol 1999；50215-22；Rowan AD，Koshy PJT，Shingleton WD，et al.Arthritis Rheum 441620-32；Scan J Immunol1999；50215-22；；Cronstein BN，Weissman R.Arthritis Rheum 1993；36147-57；Pelletier J-P，Martel-Pelletier J，Abramson SB.Arthritis Rheum 2001；44123 7-47；Keyszer GM，Heer AH，Kriegsmann J.et al.Arthritis Rheum 1995；38976-84；Okada Y，Naka K，Kawamura K，et al.Lab Invest 1995；72311-22；Keyszer GM，Heer AH，Kriegsmann J，et al.Arthritis Rheum 1995；38976-84；Okada Y，Naka K，Kawamura K，et al.Lab Invest 1995；72311-22；Prontera C，Crescenzi G，Rotilio D.Biochem Biophys ResComm 1997；239621-5；Lacraz S，Nicod LP，Chicheportiche R，et al.J Clin Invest 1995；962304-10；Overall ChM.Regulation of tissue inhibitor of matrix metalloproteinases.InInhibition of matrixmetalloproteinases.Therapeutic potential.EditoresGreenwald RA，Golub LM，1994；73259-64；HaywoodL，Mc Williams DF，Pearson CI，Gill SE，GanesanA，Wilson D，Walsh DA.Inflammation and angiogenesisin osteoarthritis.Arthritis Rheum 2003；482173-7)骨關(guān)節(jié)炎是一種對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)人口存在重要影響的疾病，在十多項(xiàng)造成65歲以上人群肢體不健全的疾病中占據(jù)首要位置。對(duì)于該病沒有特別的治療方法，最常見的療法是采用撲熱息痛、非類固醇類抗炎藥(NSAIDS)或者兩者并用，這種方法能夠有效控制癥狀，但這些都沒有對(duì)病情產(chǎn)生根本的改變。
于是，為了改善罹患類風(fēng)濕病人的生活質(zhì)量，從膠原質(zhì)-PVP的藥理背景出發(fā)(對(duì)一些前炎癥因子、黏附分子和蛋白酶進(jìn)行負(fù)調(diào)控)，這種生物藥可以輔助以免除生理機(jī)械運(yùn)動(dòng)損害所致的軟骨退化；這是通過調(diào)控炎癥過程，不產(chǎn)生間接或副作用，增加關(guān)節(jié)空腔內(nèi)的黏度達(dá)到的。
目前類風(fēng)濕的治療主要集中于減輕癥狀。非藥劑措施，如減輕體重、肌肉強(qiáng)化訓(xùn)練、支撐、關(guān)節(jié)保護(hù)，這些措施具有潛在的結(jié)構(gòu)改善作用。藥劑治療包括單純的止痛劑、非特異性的非類固醇類抗炎藥(NSAIDS)、環(huán)化氧化酶-2(Cox-2)特異性抑制劑、內(nèi)關(guān)節(jié)糖質(zhì)皮質(zhì)激素，這些藥可直接消除疼痛和炎癥。透明質(zhì)酸化合物(透明質(zhì)酸鹽、透明質(zhì)酸)或者高分子量的透明質(zhì)酸注射液療法(透明質(zhì)酸補(bǔ)充治療)，是對(duì)于那些對(duì)傳統(tǒng)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)治療方法無效，而又期望延遲或者避免關(guān)節(jié)替換治療患者的治療方法。
近幾十年來對(duì)于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病理生理學(xué)的研究進(jìn)展，提供了更多的機(jī)會(huì)集中研究退化過程。
在炎癥抑制和慢性風(fēng)濕滑膜炎的治療方法中，非類固醇類抗炎藥(NSAIDS)修飾前列腺素、凝血噁烷、環(huán)前列腺素，抗瘧藥(水合氯喹、氯喹)穩(wěn)定溶酶體胞膜，環(huán)磷酰胺和其烷基取代物導(dǎo)致了增生細(xì)胞的凋亡。
(硝基)咪唑硫嘌呤是一種具有抗炎效果的細(xì)胞毒素免疫抑制劑，可阻止NK和B細(xì)胞功能以及IL-6合成(Choy E，Kingsley G.Br Med Bulletin 1995；51472-92)。低劑量的甲氨蝶呤通過內(nèi)皮細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和損壞的纖維原細(xì)胞增加了腺苷釋放，通過β2整合素黏附抑制作用，并且導(dǎo)致了修飾白細(xì)胞遷移的結(jié)果。
同樣的，甲氨蝶呤通過胸苷酸合成酶和甲酰胺核糖核酸轉(zhuǎn)化控制阻止了分化細(xì)胞的細(xì)胞增殖。通過阻止IL-1和其它前炎癥因子合成的機(jī)理，腎上腺皮質(zhì)類脂醇，如強(qiáng)的松、地塞米松直接阻止了ICAM-1和E-選擇素在活性內(nèi)皮細(xì)胞的表達(dá)(Chapman PT，HaskardDO.Br Med Bull 1995；51296-311)。
生物學(xué)治療方法包括抗CAMs抗體控制，抑制白細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，如鼠抗ICAM-1抗體可以避免炎癥細(xì)胞向關(guān)節(jié)空腔內(nèi)轉(zhuǎn)移。這些治療方法避免了因子效應(yīng)，如壓制抗IL-6，TGF-β1或TNF-α的抗體(KavanaughA，NicholsL，Davis L，RothleinR，Lipsky P.Arthritis Rheum 1993；4948-51).Paleolog EM，Hunt M，Elliott MJ，F(xiàn)eldmann M Maini RN，Woody JN.Arthritis Rheum 1996；391082-91；Brennan FM，Browne KA，Green PA，Jaspar J-M，Maini RN，F(xiàn)eldmann M.Br J Rheumatol 1997；36643-50；Perkins DJ，St Clair EW，Misukonis MA，Weinberg B.Arthritis Rheum 1998；412205-10；BreedveldFC，Van del Lubbe P.Monoclonal Br Med Bulletin 1995；51493-502)。
然而，考慮到如下因素，長(zhǎng)期臨床治療結(jié)果并非理想，包括治療費(fèi)用、不同的副作用和弱代謝型藥代動(dòng)力學(xué)(降低服用cA2的間隔時(shí)間)、產(chǎn)生cA2的抗球蛋白，以及其它因子的另外作用可以影響這些抗體的治療效果。
生物制劑療法減小了前炎癥因子的產(chǎn)生，包括免疫T細(xì)胞、單克隆抗體(主要組織相容性抗原-DR)或者免疫T細(xì)胞輔助分子，如CD28，CD4，CD6，CD5，or IL-2R(Breedveld FC，Van del LubbeP.Br Med Bulletin 1995；51493-502)。
那些生物劑療法產(chǎn)生外周免疫耐受，通過口服蛋白質(zhì)，主要是由非山黧豆中毒的雞胸軟骨或者從鯊魚軟骨分離的II型膠原質(zhì)，溶解在0.1M乙酸中，每天早晨進(jìn)餐前20分鐘服用，持續(xù)三月(Thompson HSG，Staines NA.Clin Exp Immunol 1985；64581-6；Trentham DE，Dynesius-Trentham RA，Orav EJ，Combitchi D， Lorenzo C，Sewell KL，Hafler DA，Weiner HL.Science 1993；2611727-30)；或者是I型和III型膠原質(zhì)，其中，通過三種膠原蛋白的共同表位或者對(duì)活化的關(guān)節(jié)細(xì)胞中I型或II型主要組織相容性復(fù)合物的限制，這些蛋白質(zhì)活化了CD4+無能細(xì)胞，并傾向于因子釋放，致鈍活化細(xì)胞(Zhang ZJ，Lee ChSY，Lider O，Weiner HL.J Immunol 1990；1452489-94)。
最后，關(guān)節(jié)替換輔助治療或者其它處理包括血漿透析、白血球透析或全身性淋巴放射治療(Thompson HSG，Staines NA.Clin Exp Immunol 1985；64581-6；Trentham DE，Dynesius-Trentham RA，Orav EJ，Combitchi D，Lorenzo C，Sewell KL，Hafler DA，Weiner HL.Science 1993；2611727-30；ZhangZJ，Lee ChSY，Lider O，Weiner J Immunol 1990；1452489-94；Barinaga M Science 1993；2611669-70)。
附圖簡(jiǎn)要說明

圖1表明了膠原質(zhì)-PVP對(duì)于滑液組織中I和III型膠原質(zhì)含量的影響。3、5、7天時(shí)，類風(fēng)濕患者滑液組織施用(+)或者不施用(-)膠原質(zhì)-PVP的聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)。Col標(biāo)準(zhǔn)I型膠原質(zhì)。
圖2為在非類風(fēng)濕人群滑液組織中III型膠原質(zhì)的相對(duì)百分?jǐn)?shù)。電泳圖譜灰度掃描分析表明，對(duì)非類風(fēng)濕人群滑液培養(yǎng)物中添加膠原質(zhì)-PVP沒有改變I/III型膠原質(zhì)的比例。
圖3為類風(fēng)濕患者滑液組織III型膠原質(zhì)的相對(duì)百分?jǐn)?shù)。然而，類風(fēng)濕患者滑液組織施藥7天時(shí)α1(III)條帶有1.7倍增加，并且為時(shí)間依賴的方式(p＜0.009，施藥和未施藥組織對(duì)比)。作為對(duì)比的是，I型膠原質(zhì)僅為細(xì)條帶。在參照組和施用膠原質(zhì)-PVP組中，培養(yǎng)第5天(*p＝0.009)和培養(yǎng)第7天時(shí)(*p＝0.00007)表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差別。這是由5名非類風(fēng)濕人群和10名類風(fēng)濕患者的滑液組織經(jīng)掃描電鏡SEM平均觀察的結(jié)果，每個(gè)樣品均重復(fù)兩遍。
圖4為在滑液組織培養(yǎng)物中，膠原質(zhì)-PVP對(duì)于膠原酶活性和TIMP-1表達(dá)的影響?？偰z原酶活性。培養(yǎng)3、5、7天的*p＝0.008，*p＝0.055和*p＝0.05的數(shù)據(jù)具有特別的統(tǒng)計(jì)學(xué)重要性。
圖5為AR鈣依賴溶膠原活性。
圖6為非鈣依賴的溶膠原活性。膠原質(zhì)-PVP實(shí)驗(yàn)組與未施藥的培養(yǎng)物對(duì)比，在培養(yǎng)3、5、7天表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)上顯著不同*p＝0.008，*p＝0.006和*p＝0.002。35℃膠原酶活性提高到cpm/24h/μg的DNA。數(shù)據(jù)為10名類風(fēng)濕患者的滑液組織培養(yǎng)物SEM的平均情況，每個(gè)均重復(fù)兩次。
圖7在非類風(fēng)濕人群滑液組織的MMP-1免疫反應(yīng)性細(xì)胞。
圖8在類風(fēng)濕患者滑液組織的MMP-1免疫反應(yīng)性細(xì)胞。
圖9在非類風(fēng)濕人群滑液組織的TIMP-1免疫反應(yīng)性細(xì)胞。
圖10在類風(fēng)濕患者滑液組織的TIMP-1免疫反應(yīng)性細(xì)胞。
圖11無論是否采用膠原質(zhì)-PVP(培養(yǎng)7天，*p＝0.04)，滑液組織上清TIMP-1。數(shù)據(jù)為5名非類風(fēng)濕和10名類風(fēng)濕患者的滑液組織培養(yǎng)物SEM的平均情況，每個(gè)均重復(fù)兩次，每個(gè)組織至少觀察了兩個(gè)切面。
圖12為膠原質(zhì)-PVP對(duì)于滑膜組織培養(yǎng)中前炎癥因子表達(dá)的影響。非類風(fēng)濕人群血管和基質(zhì)細(xì)胞的IL-8免疫反應(yīng)活性細(xì)胞。
圖13為類風(fēng)濕患者滑膜組織的IL-8免疫反應(yīng)活性細(xì)胞*p＜0.05。
圖14為非類風(fēng)濕人群血管和基質(zhì)細(xì)胞的TNF-α免疫反應(yīng)活性細(xì)胞。
圖15為類風(fēng)濕患者滑膜組織的TNF-α免疫反應(yīng)活性細(xì)胞(*p＜0.05)。數(shù)據(jù)為5名非類風(fēng)濕人群10名類風(fēng)濕患者的滑液組織培養(yǎng)物SEM的平均情況，每個(gè)均重復(fù)了兩遍，至少兩面可以觀察。
圖16為7天時(shí)TNF-α的產(chǎn)生(*p＝0.03)。數(shù)據(jù)為10名類風(fēng)濕患者的滑液組織培養(yǎng)物SEM的平均情況，每個(gè)均重復(fù)了兩遍。
圖17為類風(fēng)濕患者血管和基質(zhì)細(xì)胞的IL-1β免疫反應(yīng)活性細(xì)胞(*p＜0.05)。數(shù)據(jù)為5名非類風(fēng)濕人群10名類風(fēng)濕患者的滑液組織培養(yǎng)物SEM的平均情況，每個(gè)均重復(fù)了兩遍，至少兩面可以觀察。
圖18為類風(fēng)濕滑膜組織培養(yǎng)上清的IL-1β濃度(*p＝0.05)。數(shù)據(jù)為10名類風(fēng)濕患者的滑液組織培養(yǎng)物SEM的平均情況，每個(gè)均重復(fù)了兩遍。

發(fā)明內(nèi)容
由于上述提及的藥物、免疫學(xué)療法、生物學(xué)療法或者其它可選的方法，不僅沒有令人滿意的結(jié)果而且還產(chǎn)生了損害效果或者嚴(yán)重的副作用。正因?yàn)槿绱?，我們建議重視生物藥，對(duì)類風(fēng)濕和骨關(guān)節(jié)炎患者采用膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮治療(Fibroquel，Reg.No.210M95 SSA)。這是因?yàn)?，給T淋巴培養(yǎng)添加外細(xì)胞母體蛋白質(zhì)，能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞應(yīng)答，口服II型膠原質(zhì)，或者I型或III型膠原質(zhì)，調(diào)控了類風(fēng)濕的外周免疫系統(tǒng)，所以如上所述，膠原質(zhì)-PVP具有抗炎特性。(Easter DW，Hayt DB，Ozkan AN JSurg Res 1988；45370-5；Rybski JA，Lause DB，Reese AC.JLeuk Biol 1989；4535-45；Rüeg CR，Chiquet-Ehrismann R，Alkan SS.Tenascin，Proc Natl Acad Sci USA 1989；867437-41；Furuzawa-Carballeda J，Alcocer-Varela J，Díaz de León L.Ann NY Acad Sci 1999；878508-602；Thompson HSG，Staines NA.Clin Exp Immunol 1985；64581-6；Trentham DE，Dynesius-Trentham RA，Orav EJ，Combitchi D，Lorenzo C，Sewell KL，Hafler DA，Weiner HL.Science 1993；2611727-30)(ZhangZJ，Lee ChSY，Lider O，Weiner HL.JImmunol 1990；1452489-94)膠原質(zhì)-PVP是一種豬胃蛋白酶I型膠原質(zhì)和穩(wěn)定pH值檸檬酸緩沖液的γ輻照混合物。在37℃和中性的培養(yǎng)液中，膠原質(zhì)-PVP沒有形成像其它膠原質(zhì)那樣的凝膠，而它的電泳特性、物化性能、藥理學(xué)性能則可通過蛋白質(zhì)和PVP的共價(jià)鍵來調(diào)控?；铙w和離體實(shí)驗(yàn)都表明膠原質(zhì)和PVP各自并沒有膠原質(zhì)-PVP所表現(xiàn)的特性(Chimal-MonroyJ，Bravo-Ruiz T，Krtzsch-Gómez FE，Díaz deLeónL.Rev Biomed 1997；881-8)。
這種生物藥證明了可以調(diào)控膠原質(zhì)的新陳代謝、前炎癥因子表達(dá)，有助于皮膚和其他組織傷口愈合。
由Wistar鼠和人體實(shí)驗(yàn)得到早先的數(shù)據(jù)，與對(duì)照組對(duì)比，對(duì)于外科傷口造成的內(nèi)部損傷，膠原質(zhì)-PVP處理的傷口在手術(shù)7天之后刺激了粒狀組織的增加，并且28天時(shí)皮膚組織狀態(tài)更好。改善還表現(xiàn)在傷口區(qū)域的皮膚附件(皮脂腺和毛囊)具有與正常皮膚相同的膠原質(zhì)束狀排列(Krtzsch-Gómez FE，Guerrero-Padilla E，Díaz de León L.J Cell Biochem 1993；Suppl，17E137R506)。
鼠類損傷實(shí)驗(yàn)對(duì)Wistar鼠進(jìn)行了股骨破裂實(shí)驗(yàn)，最初三天患處注射了0.2ml膠原質(zhì)-PVP。骨愈合參數(shù)表明，30天時(shí)67％的動(dòng)物骨骼完全修復(fù)，而對(duì)照組中只有20％。組織學(xué)分析表明在膠原質(zhì)-PVP的實(shí)驗(yàn)組中，早期為軟骨組織間葉細(xì)胞的骨代謝，以及后期為造骨細(xì)胞和梁骨的代謝(16天和23天)。
同樣的，還觀察到骨橋接素(osteopontin)和骨連接素表達(dá)(osteonectin)較高，而同時(shí)I型膠原質(zhì)和fibronectina在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中相似。結(jié)果表明膠原質(zhì)-PVP調(diào)控了間葉細(xì)胞生長(zhǎng)因子和外細(xì)胞基質(zhì)蛋白的表達(dá)、刺激軟骨細(xì)胞和骨連接素細(xì)胞的遷移、增殖、分化，促進(jìn)骨胳修復(fù)(AlmazánDíaz A，de la Cruz García JC，Lira Romero JM，Arrellin G，Chimal Monroy J，Díaz de León L，F(xiàn)uruzawa-Carballeda J，Krtzsch Gómez F Rev Mex Ortop Traum 1996；10142-52；Chimal-Monroy J，Bravo-Ruiz T，F(xiàn)uruzawa-Carballeda GJ.Lira RJM，De la Cruz GJC，Almazán DA，Krtzsch-Gómez FE，Arrellín RG，Díaz de León L.Ann NYAcadSci 1998；857232-6)。
人體骨修復(fù)同樣的，對(duì)20位脛骨骨折病人(10位實(shí)驗(yàn)者和10位對(duì)照者)進(jìn)行I級(jí)臨床實(shí)驗(yàn)，研究了膠原質(zhì)-PVP效應(yīng)。研究包括早期缺損愈合，且進(jìn)行了最初7天數(shù)據(jù)評(píng)估。在第1、7、30天，0.2ml膠原質(zhì)-PVP或者安慰劑注入傷口內(nèi)部。30天時(shí)，采用膠原質(zhì)-PVP的患者中80％消除了疼痛，其余20％存在中等疼痛。作為對(duì)照，使用安慰劑的患者中，50％疼痛減輕，而另50％仍處于中等疼痛。同樣的，膠原質(zhì)-PVP的小組在患處沒有出現(xiàn)炎癥，而對(duì)照組中存在50％。除此之外，與對(duì)照組相比，膠原質(zhì)-PVP組的血清堿性磷酸酶含量升高。
30天時(shí)，參照Meller標(biāo)準(zhǔn)，X射線照相骨修復(fù)表明，30天和90天時(shí)膠原質(zhì)-PVP小組100％處于I級(jí)和II級(jí)，而對(duì)照組中，30天和90天時(shí)I級(jí)的比例為50％和100％。
膠原質(zhì)-PVP的小組中骨修復(fù)是得當(dāng)?shù)?，所有的患者承受了兩腿治療，并且沒有膝關(guān)節(jié)和腳踝的活動(dòng)限制。所有這些病人在12周以前都能夠逐漸行走，沒有一人需要針對(duì)性康復(fù)治療。對(duì)照組中也存在骨修復(fù)，但是在12周中，他們沒有額外的幫助就難以忍受兩腿治療。其中四人由于肌肉萎縮需要針對(duì)性康復(fù)治療。
總之，膠原質(zhì)-PVP通過上調(diào)骨橋接素、骨連接素、堿性磷酸鹽促進(jìn)骨骼修復(fù)過程，這些因素促進(jìn)了間葉細(xì)胞組織向軟骨、隨后軟骨、肥大軟骨細(xì)胞最后骨骼組織的分化擴(kuò)散。這種調(diào)控是由于下調(diào)前炎癥因子表達(dá)(主要是IL-1和TNF-α)、黏附分子(ELAM-1，VCAM-1或ICAM-1)和一些蛋白酶，最終由于控制了前列腺素合成而減輕了早期疼痛(De la Cruz Garcia。JC.Tesis.UNAM.1997)。
膠原質(zhì)-PVP對(duì)于脛骨假關(guān)節(jié)病的效果采用1ml膠原質(zhì)-PVP對(duì)年齡段從6-72歲的脛骨假關(guān)節(jié)病患者進(jìn)行6周治療。治療后，膠原質(zhì)-PVP組中，16名患者(51.6％)的骨骼修復(fù)非常良好(參照Meller標(biāo)準(zhǔn)，III級(jí))，12名患者(38.7％)為良好(II級(jí))只有3名(9.68％)為I級(jí)。
與此同時(shí)，對(duì)照組中沒有患者觀察到骨骼修復(fù)。組織學(xué)分析表明膠原質(zhì)-PVP組中造骨細(xì)胞的活性達(dá)到相當(dāng)程度。此外，這些患者的疼痛也減少了，可能是由于前炎癥因子的調(diào)控，通過Cox(產(chǎn)生前列腺素)，于是患者患處的肌肉力量加強(qiáng)了(Bermúdez-Hickey R，Nésme- W，Ruiz-Flores L，Suárez E，Rev Mex Ortop Traum 1999；13148-51)。臨床實(shí)踐表明真皮纖維化與慢性炎癥有關(guān)。
膠原質(zhì)-PVP對(duì)于肥大軟骨創(chuàng)傷或變形的治療1-3月中，每周對(duì)人的肥大軟骨創(chuàng)口或者硬皮癥患處進(jìn)行皮損內(nèi)注射生物藥，消除了瘙癢、疼痛、紅斑、腫大和滲透性炎癥。使得患處皮膚恢復(fù)下常。更重要的是，這種藥物促進(jìn)了細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)代謝，主要是I型和II型膠原質(zhì)，并且下調(diào)IL-1β、TNF-α、PDGF和VCAM-1的表達(dá)程度(Krtzsch-Gómez FE，F(xiàn)uruzawa-Carballeda J，Reyes-Márquez R，J Invest Dermatol，1998；111828-834.Furuzawa-Carballeda J，Krtzsch E，Espinosa-Morales R，AlcaláM，Barile-Fabris L.Clinical andExperimental Dermatology.2005；3083-86)。
膠原質(zhì)-PVP對(duì)于硬皮癥皮膚損傷的效果膠原質(zhì)-PVP免疫調(diào)節(jié)作用在硬皮癥皮膚損傷中同樣得到證實(shí)，三個(gè)月內(nèi)對(duì)患處采用上述的劑量配方，組織和皮膚的外觀得到改善。組織學(xué)上，膠原質(zhì)-PVP療法恢復(fù)了皮膚附件和真皮乳頭層中III型膠原質(zhì)，及I/III型膠原質(zhì)的比例，同時(shí)減少了I型膠原質(zhì)束(Barile L，F(xiàn)uruzawa-Carballeda J，Krtzsch-Gómez FE，Espinosa-Morales R，Alcalá M，Díaz de León L.Clin Exp Rheumatol 1998；16370)。
免疫組織化學(xué)同樣發(fā)現(xiàn)，膠原質(zhì)-PVP下調(diào)IL-1β和ELAM-1表達(dá)水平。基于這些結(jié)果，IL-1β和ELAM-1降低了皮膚纖維化病變中一些前炎癥因子、黏附分子和膠原質(zhì)代謝的水平，同時(shí)抑制了慢性炎癥，我們認(rèn)為這種生物藥物對(duì)類風(fēng)濕患者的滑液組織炎癥具有同樣的治療效果。
安全性研究淋巴增生研究分析表明，當(dāng)在植物血凝素(PHA)或在膠原質(zhì)-PVP和PHA的無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時(shí)，純化的淋巴細(xì)胞產(chǎn)生顯著的增殖。進(jìn)一步的，當(dāng)這些細(xì)胞僅在膠原質(zhì)-PVP中培養(yǎng)時(shí)，并沒有觀察到超過通常水平的增殖。這些結(jié)果表明該生物藥物本身并不能刺激淋巴細(xì)胞增殖。
基因毒性研究將淋巴細(xì)胞上清埋入顯微鏡玻片的瓊脂夾層凝膠中，進(jìn)行單細(xì)胞凝膠電泳SCGE或者“彗星實(shí)驗(yàn)”，在堿性條件下進(jìn)行短時(shí)間的細(xì)胞溶解和電泳實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞溶解分離了除核酸之外的細(xì)胞內(nèi)容物，在少量的非組蛋白存在下DNA保持了高度螺旋；而在堿性條件下，DNA展開解旋。
在電流中核酸向陽極運(yùn)動(dòng)，DNA損傷增多的細(xì)胞遷移率增加，表現(xiàn)出“彗尾”。在本工作中，DNA損傷分析表明，無論是否存在膠原質(zhì)-PVP的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基，都沒有導(dǎo)致DNA遷移率的差別。因此，這些數(shù)據(jù)表明接觸膠原質(zhì)-PVP不會(huì)導(dǎo)致基因毒性效果。
實(shí)驗(yàn)室研究在健康的志愿者和肥大軟骨細(xì)胞損傷或硬皮癥患者中，進(jìn)行了安全性、隨訪、臨床評(píng)價(jià)和實(shí)驗(yàn)室研究。在使用膠原質(zhì)-PVP治療前后，血液實(shí)驗(yàn)(白細(xì)胞指數(shù)、血液化學(xué)、血清鈣水平)、驗(yàn)?zāi)蚍治觥⒏喂δ軠y(cè)試都沒有差別。這些實(shí)驗(yàn)表明該治療方法不會(huì)導(dǎo)致任何不利的直接臨床反應(yīng)。
抗豬膠原質(zhì)或抗膠質(zhì)-PVP抗體用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)對(duì)所有的血清樣品進(jìn)行了豬I型膠原質(zhì)或者膠原質(zhì)-PVP的反應(yīng)性檢測(cè)。用110名未受該生物藥物治療的健康志愿者的血清樣品作為陰性參比以建立反應(yīng)性的基線。37名系統(tǒng)性硬皮病(SSc)患者的血清樣品作為陽性參比，因?yàn)樵缦葓?bào)道明確了一些患者中存在外周人抗膠質(zhì)抗體。
44名采用膠原質(zhì)-PVP治療個(gè)體的血清樣品，用于測(cè)試膠原質(zhì)-PVP的血清反應(yīng)性，這些樣品對(duì)不同劑量的膠原質(zhì)-PVP作圖(少于5，6-10，11-20，21-100和高于100劑量)。同樣的，血清樣品的反應(yīng)性還參照Dunnett測(cè)試采用至少兩種不同的稀釋濃度進(jìn)行平均組分析比較。在健康人體和SSc患者中，豬I型膠質(zhì)抗體存在重要的差別(p＜0.05)；膠原質(zhì)-PVP抗體沒有表現(xiàn)出積極的聯(lián)系(即使考慮了劑量大小、劑量次數(shù)或者患者年齡的因素)。
另一方面，PVP的安全性使得其在藥劑配方、食品、化妝品、清潔劑和工業(yè)許多方面都有應(yīng)用；其特殊的物理化學(xué)性質(zhì)(N-乙烯基-吡咯烷酮的均聚物)是生物學(xué)上惰性和安全的。許多研究都表明了其無害。在膠原質(zhì)-PVP中使用的是低分子量PVP(Robinson et al.1990)。
采用低分了量的PVP來制備膠原質(zhì)-PVP是為了其可以被腎臟排泄出去。靜脈注射或者高劑量口服、皮下或者肌肉注射之后，都沒有不良反應(yīng)的報(bào)導(dǎo)(Robinson BV，Sullivan FM，Bazelleca JF，Schwartz SL.PVP.Acritical review of the kinetics and toxicology of polyvinylpyrrolidone (Povidone).Lewis Publishers，Inc.1990)。
類風(fēng)濕患者滑液組織培養(yǎng)的早期臨床化驗(yàn)?zāi)z原質(zhì)-PVP對(duì)于類風(fēng)濕患者滑液組織的影響為了評(píng)價(jià)膠原質(zhì)-PVP對(duì)細(xì)胞新陳代謝或者細(xì)胞濃度的影響，我們測(cè)量了DNA含量。采用試劑組和參照組對(duì)比，沒有表現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差別(表1)。值得注意的是，在非類風(fēng)濕人群滑膜的DNA含量比類風(fēng)濕患者的低8-10倍。而參照組和膠原質(zhì)-PVP的培養(yǎng)物中沒有差別。
表1膠原質(zhì)-PVP對(duì)于非類風(fēng)濕人群和類風(fēng)濕患者滑膜組織DNA的影響

該結(jié)果描述了5名非類風(fēng)濕人群和10名類風(fēng)濕患者的滑液組織DNA含量的平均值±(ug/ml)，每個(gè)樣品均在四倍滑液組織勻漿中。(-)未使用膠原質(zhì)-PVP；(+)使用1％膠原質(zhì)-PVP非類風(fēng)濕人群和類風(fēng)濕患者滑液組織的組織學(xué)研究采用1％膠原質(zhì)-PVP培養(yǎng)的非類風(fēng)濕人群滑液組織，3天和7天時(shí)觀察形態(tài)沒有出現(xiàn)變化的組織結(jié)構(gòu)。給非類風(fēng)濕人群滑液組織施以膠原質(zhì)-PVP，沒有改變其組織結(jié)構(gòu)、纖維膠質(zhì)厚度或者I/III型膠原質(zhì)的比例。
然而，類風(fēng)濕患者滑液組織的組織學(xué)研究表明，培養(yǎng)3天和7天時(shí)，炎癥細(xì)胞含量增加以及多數(shù)I型膠原質(zhì)的纖維化。作為對(duì)比的是，培養(yǎng)在1％膠原質(zhì)-PVP中的，III型膠原質(zhì)得到恢復(fù)，與正?；航M織相似。
非類風(fēng)濕人群和類風(fēng)濕患者滑液組織培養(yǎng)物中I/III型膠原質(zhì)的比例為了確認(rèn)I/III型膠原質(zhì)的比例變化，滑膜混合物每個(gè)培養(yǎng)點(diǎn)的兩倍勻漿物都進(jìn)行了間斷凝膠電泳(interrupted gel electrophoresis)和電泳圖譜灰度掃描分析(densitometric analysis)。在還原條件下，鏈間的二硫鍵解離，釋放的α1(III)膠原質(zhì)單體要比α1(I)膠原質(zhì)1的鏈段遷移的慢。
類風(fēng)濕患者滑液組織上清的溶膠原活性類風(fēng)濕患者的病情發(fā)展過程中，炎癥處的蛋白水解活性增加。這樣，采用特異性基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-1抗血清，詳細(xì)檢測(cè)了10名患者和5名非類風(fēng)濕人群的滑液組織的免疫組織化學(xué)。與非類風(fēng)濕人群的滑液組織相比，類風(fēng)濕患者M(jìn)MP-1的分布表現(xiàn)為相當(dāng)高的范圍(圖7、圖8)。
另一方面，類風(fēng)濕患者膠原質(zhì)-PVP處理的培養(yǎng)的上清與對(duì)照組相比，總體溶膠原活性的水平降低了1.6倍(p＜0.05；圖4)。通過3H-膠原質(zhì)在CaCl2緩沖液中和EDTA緩沖液中的降解差別(總?cè)苣z原活性-鈣依賴膠原酶)，對(duì)處理過的滑液組織培養(yǎng)物上清中的鈣依賴膠原酶(MMPs)進(jìn)行了測(cè)量。
與未處理的對(duì)比，在生化復(fù)合物處理的培養(yǎng)物上清中，這種水解蛋白酶活性呈現(xiàn)為較低的水平(圖5)。蛋白酶的膠原酶活性不需要鈣來穩(wěn)定，其穩(wěn)定性(推測(cè)的彈性蛋白酶和/或G組織蛋白酶)比未處理的低2.2倍(p＜0.008；圖6)。特別值得重視的是鈣依賴和非鈣依賴的溶膠原蛋白酶有相同的活性水平。這表明，在類風(fēng)濕患者發(fā)病機(jī)理上，非鈣依賴的酶與鈣依賴的酶在同樣程度上參與了作用。
類風(fēng)濕患者滑液組織培養(yǎng)物的TIMP-1濃度用抗TIMP-1染色的類風(fēng)濕滑膜切片表明，在膠原質(zhì)-PVP處理的類風(fēng)濕患者滑液組織的血管和基質(zhì)細(xì)胞中，具有強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)性(圖10)。膠原質(zhì)-PVP對(duì)于非類風(fēng)濕人群滑膜沒有任何影響(圖9)。然而，對(duì)比組織上清的TIMP-1水平與7天的施藥培養(yǎng)物相比，糖蛋白水平要高1.7倍(p＝0.04；圖11)。
非類風(fēng)濕人群和類風(fēng)濕患者滑液組織的黏附分子的表達(dá)為了研究膠原質(zhì)-PVP是否能夠調(diào)控ICAM-1和VCAM-1分子、炎癥因子，進(jìn)行了滑膜檢驗(yàn)。對(duì)于對(duì)照組和膠原質(zhì)-PVP組，非類風(fēng)濕人群培養(yǎng)物中的ICAM-1的表達(dá)式相似的(11-17％；表2)。然而，在類風(fēng)濕患者的治療組中，ICAM-1和VCAM-1分子都表現(xiàn)出更低的強(qiáng)度水平和免疫免疫反應(yīng)性(表2)。
對(duì)于在血管(p＝0.03)和基質(zhì)細(xì)胞中(p＝0.04)培養(yǎng)7天的ICAM-1呈現(xiàn)統(tǒng)計(jì)上顯著的水平，而且施藥培養(yǎng)與正常的滑膜組織培養(yǎng)相比，其陽性ICAM-1細(xì)胞的百分比是相似的(表2)。除此之外，施藥培養(yǎng)的VCAM-1在血管和基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)呈現(xiàn)持續(xù)的下調(diào)(p＜0.05；表2)。
表2膠原質(zhì)-PVP對(duì)于非類風(fēng)濕人群和類風(fēng)濕患者滑液組織中血管細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞分子表達(dá)的影響

在5名非類風(fēng)濕人群和10名類風(fēng)濕患者滑液組織中，結(jié)果表明了平均(±)分子表達(dá)程度(免疫反應(yīng)性細(xì)胞的比例由免疫組織化學(xué)決定)，每個(gè)樣品都重復(fù)了兩遍，每個(gè)組織至少觀察了兩個(gè)切面(-)沒有膠原質(zhì)-PVP；(+)1％膠原質(zhì)-PVP；(ND)沒有試驗(yàn)；(*)p＜0.05；培養(yǎng)0對(duì)比7天?；航M織培養(yǎng)產(chǎn)生的病炎癥因子在類風(fēng)濕中，許多因素都導(dǎo)致了滑膜炎癥，因子比如IL-1，TNF-α，IL-6和IL-8作為調(diào)整因子具有特殊的重要性。為了研究膠原質(zhì)-PVP在這些因子表達(dá)上的作用，我們通過免疫組織化學(xué)研究了滑膜中的這些蛋白質(zhì)。結(jié)果表明，與非類風(fēng)濕和類風(fēng)濕施藥培養(yǎng)物相比，類風(fēng)濕患者未處理的滑膜組織培養(yǎng)物中的IL-8表達(dá)水平特別高(圖12、圖13)。與此同時(shí)，在類風(fēng)濕施藥培養(yǎng)物和對(duì)照組中，IL-6沒有表現(xiàn)出任何差別(表2)。
由于溶膠原活性，CAMs和TIMP-1的表達(dá)水平受到膠原質(zhì)-PVP處理而下調(diào)，我們認(rèn)為IL-1β和TNF-α產(chǎn)生也獲得了調(diào)控。對(duì)非類風(fēng)濕組織培養(yǎng)物外加生物藥沒有對(duì)血管或基質(zhì)細(xì)胞的TNF-α的表達(dá)產(chǎn)生任何影響(圖14)。
與未施藥的培養(yǎng)物相比，TNF-α表達(dá)受類風(fēng)濕組織中的膠原質(zhì)-PVP而下調(diào)達(dá)到了統(tǒng)計(jì)學(xué)上明顯的水平(p＜0.05；圖15)。不僅如此，上清中TNF-α的表達(dá)也受類膠原質(zhì)-PVP的調(diào)控而降低(4倍，p＜0.02；圖16)。同樣的，IL-1β表達(dá)受類風(fēng)濕組織中的膠原質(zhì)-PVP下調(diào)而降低到了p＜0.05；圖17，而上清中為3倍；p＜0.03；圖18。
膠原質(zhì)-PVP對(duì)于Cox-1表達(dá)的影響Cox-1是一種構(gòu)成酶，參與合成前列腺素的花生四烯酸新陳代謝。前列腺素可能通過加速局部血流和加強(qiáng)中介物質(zhì)的效果(如導(dǎo)致血管通透性的緩激肽和IL-1)來參與影響滑液炎癥。在血管中，免疫組織化學(xué)表明，與未施藥的培養(yǎng)物相比，膠原質(zhì)-PVP對(duì)于Cox-1在類風(fēng)濕組織的表達(dá)具有負(fù)調(diào)控作用(表2)。然而，生物藥對(duì)非類風(fēng)濕組織沒有顯示出作用。
Fas/Apo95的表達(dá)和通過原位缺口轉(zhuǎn)移(ISNT)對(duì)滑液細(xì)胞凋亡中DNA鏈斷裂的檢測(cè)Fas抗原在滑液細(xì)胞的表面表達(dá)，并受到競(jìng)爭(zhēng)抗Fas刺激的時(shí)候，調(diào)控Fas表達(dá)的滑液細(xì)胞凋亡。而凋亡缺陷與類風(fēng)濕密切相關(guān)，F(xiàn)as/FasL系統(tǒng)的功能似乎對(duì)消除類風(fēng)濕滑膜增生不起作用。于是，我們實(shí)驗(yàn)研究Fas抗體是否在滑膜和凋亡細(xì)胞中表達(dá)。
我們發(fā)現(xiàn)在膠原質(zhì)-PVP治療的類風(fēng)濕滑膜中，F(xiàn)as/Apo95主要上調(diào)控血管細(xì)胞(表2)。當(dāng)我們對(duì)類風(fēng)濕滑膜組織應(yīng)用原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)凋亡的細(xì)胞，TUNEL凋亡法表明在血管和基質(zhì)細(xì)胞中施用膠原質(zhì)-PVP獲得了上調(diào)(50％，表2)(Furuzawa-Carballeda J，Rodríguez-Calderón R，Díaz de León L，Alcocer-Varela J.Clin Exp Immunol2002；130140-9)對(duì)類風(fēng)濕患者的I期臨床試驗(yàn)表3中總結(jié)了病人第一次和最后一次膠原質(zhì)-PVP劑量的人口統(tǒng)計(jì)和臨床特征表3人口統(tǒng)計(jì)和病史基線和3個(gè)月的研究


*第7周早期中斷治療。HMR忠者在每個(gè)階段后進(jìn)行臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查。
**p＜0.05安全性在長(zhǎng)期治療中，膠原質(zhì)-PVP是安全且可耐受的，除了在注射初期5分鐘內(nèi)的疼痛，沒有發(fā)現(xiàn)其它不利作用。
臨床效果3個(gè)月對(duì)8個(gè)疼痛的關(guān)節(jié)持續(xù)皮下給藥(膠原質(zhì)-PVP)表明，關(guān)節(jié)腫脹和關(guān)節(jié)壓痛迅速改善(采用Ritchie標(biāo)準(zhǔn)(RI)，RIΔ-10.2≌-46.4％；關(guān)節(jié)腫脹計(jì)數(shù)Δ-10.7≌-71.8％)這些改善在長(zhǎng)期治療中保持下來。
此外，相似和明顯差別還表現(xiàn)在其它疾病行為上，比如晨僵和視覺模擬疼痛評(píng)分(VAS)(晨僵Δ-32.3≌-68.6％；視覺模擬疼痛評(píng)分Δ-39.9≌-63.8％；)。
病人在病情活動(dòng)指數(shù)(DAS)方面也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的改善(DASΔ-1.35≌-70.5％，p＜0.02)。這種改善也采用百分之二十、五十、七十美國風(fēng)濕病學(xué)院改善標(biāo)準(zhǔn)ACR來評(píng)價(jià)(ACR20，ACR50和ACR70)。三個(gè)月80.0％的患者(8/10名)獲得ACR20的改善。同樣的，此時(shí)有60.0％(6/10名)患者獲得ARC50改善，20.0％(2/10名)獲得了ACR70改善。通過三個(gè)月的膠原質(zhì)-PVP治療，身體功能狀況(西班牙語為HAQ-DI)也表現(xiàn)出重要改善。(HAQ-DIΔ-0.5≌-48.5％；p＜0.05，1對(duì)比13周；)
合并用藥在三個(gè)月的實(shí)驗(yàn)中，所有的患者無需改變他們口服甲氨蝶呤和同時(shí)服用的非類固醇類抗炎藥(NSAIDS)的劑量(表3)。
實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)紅血球沉降速率(ESR)、血液常數(shù)(血色素、血球容積計(jì)、血液化學(xué)、紅血球數(shù)、白細(xì)胞和血小板)、C反應(yīng)蛋白質(zhì)或者風(fēng)濕因子，這些指標(biāo)都沒有變化。在基礎(chǔ)狀態(tài)和施藥以后，沒有患者表現(xiàn)出雙鏈DNA和核蛋白抗體的陽性。
基礎(chǔ)狀態(tài)和施藥以后對(duì)比，放射線分析表明沒有差別。然而，值得注意的是沒有發(fā)生關(guān)節(jié)腔變窄、骨骼腐蝕或者軟骨退化。
離體研究評(píng)價(jià)了聚合的I型膠原質(zhì)-PVP抗炎癥和凋亡效應(yīng)，以及類風(fēng)濕患者滑液組織中膠原質(zhì)的代謝。
基于這些結(jié)果，我們認(rèn)為將膠原質(zhì)-PVP添加入類風(fēng)濕滑膜培養(yǎng)物，可以調(diào)控膠原質(zhì)代謝，原因是這種生物藥減少溶膠原活性和TIMP-1產(chǎn)生，并且增加III型膠原質(zhì)含量和調(diào)整TIMP-1至正?；さ乃健?br> 如Krtzsch-Gómez和Barile等人所述，(Krtzsch-Gómez FE，F(xiàn)uruzawa-Carballeda J，Reyes-Márquez R，Quiróz-Hernández E，Díaz de León L.J Invest Dermatol 1998；111828-34；Barile L，F(xiàn)uruzawa-Carballeda J，Krtzsch-Gómez FE，Espinosa-Morales R，Alcalá M，Díaz de León L.Clin ExpRheumatol 1998；16370)膠原質(zhì)-PVP調(diào)控慢性炎癥過程，可能是降低IL-1β，TNF-α，IL-8水平和細(xì)胞黏附分子，同時(shí)導(dǎo)致Cox-1活化。此外，細(xì)胞黏合物通過細(xì)胞內(nèi)外基質(zhì)作用產(chǎn)生信號(hào)調(diào)控了MMP的表達(dá)；(Larjava H，Lyons J，Salo R，Makela M，Koivisto L，Birkedal-Hansen H，Akiyama SK，YamadaKM，Heino J..J Cell Physiol 1993；157190-200；Romanic AM，Madri JA.J Cell Biol 1994；1251165-78；Tremble P，Mol Biol Cell 1994；54390-3；Rükonen T，Westermarck J，Koivisto L，Broberg A，Khri VM，Heino.J Biol Chem 1995；27013548-52)這表明，細(xì)胞黏附分子也可以參與類風(fēng)濕組織破壞。同樣的，抑制IL-1β和TNF-α水平可以通過滑膜培養(yǎng)物的凋亡刺激滑液細(xì)胞凋亡，后者可能是由于阻止了滑液細(xì)胞的外圍生長(zhǎng)，以至于導(dǎo)致增生或者關(guān)節(jié)翳以及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)的破壞(Furuzawa-Carballeda J.Rodríguez-Calderón R，Díaz de León L，Alcocer-Varela J.Clin Exp Immunol 2002；130140-9)。
總之，我們闡述了對(duì)滑膜組織培養(yǎng)物添加膠原質(zhì)-PVP導(dǎo)致下調(diào)，但并非風(fēng)濕癥滑膜炎癥參數(shù)抑制劑。這項(xiàng)研究致力于將膠原質(zhì)-PVP作為一種類風(fēng)濕輔助治療法。最后可以肯定的是，I型膠原質(zhì)是系統(tǒng)發(fā)生的的、最古老的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白。它具有非常低的抗原性并且相對(duì)而言易于代謝。進(jìn)一步的，它可以刺激細(xì)胞形成新的組織，這意味著膠原質(zhì)具有非常有意義的特征(PohunlováH，Adam M Biomaterials 1995；1667-71)。
1981年，食品藥品監(jiān)督局批準(zhǔn)了注射劑形式的再造純化牛膠原質(zhì)(Zyderm；Collagen Corp.，PaloAlto，CA)，作為增大軟組織的醫(yī)學(xué)試劑(Clark DP，Hanke CW，Swanson NA.J Am Acad Dermatol1989；21992-8)。目前的興趣集中在對(duì)膠原質(zhì)注射劑賦予更廣闊的臨床用途以及發(fā)展新的產(chǎn)品。目前為止，大多數(shù)的膠原質(zhì)注射劑或者膠原質(zhì)灌輸劑都由牛皮膚或者腱端肽膠原質(zhì)分離得到(Zyderm，Zyplast and Atelocollagen Soo Ch，Rahbar G，Moy RL.J Dermatol Surg Oncol 1993；19431-434；Charriere G，Bejot M，Schnitzler L，Ville G，Hartmann DJ.J Am Acad Dermatol 1989；211203-1208)。然而，目前本研究使用的是聚合的豬I型膠原質(zhì)。它具有抗炎特性(Krtzsch-Gómez FE，F(xiàn)uruzawa-Carballeda J，Reyes-Márquez R，Quiróz-Hernández E，Díaz de León L.J Invest Dermatol 1998；111828-34；Barile L，F(xiàn)uruzawa-Carballeda J，Krtzsch-Gómez FE，Espinosa-Morales R.AlcaláM，Díaz de LeónL.Clin Exp Rheumatol 1998；16370)。
膠原質(zhì)-PVP胃蛋白酶分解的豬I型皮膚膠原質(zhì)，由于其為弱免疫原。我們推薦豬I型膠原質(zhì)，考慮到豬是原始動(dòng)物種群之一，且其作為異種移植物源在實(shí)踐、倫理和安全方面的原因，以及與人膠原質(zhì)的較高的同源性(Weiss RA.Science 1999；2851221-1222；Paradis K，Langford G.Long Z，Heneine W，Sandstrom P，Switzer WM，Chapman LE，Lockey Ch，Onions D，Otto E Science 1999；1236-1241；Beard HK，F(xiàn)aulk WP，Conochie LB，Glynn LE.Progr Allergy 1977；2245-106)。
另一方面，電泳數(shù)據(jù)表明膠原質(zhì)-PVP與PVP共價(jià)鍵相連。這種與PVP的共價(jià)鍵接增加了膠原質(zhì)的穩(wěn)定性同時(shí)減少了膠原質(zhì)的抗原性。由于其獨(dú)特的化學(xué)性質(zhì)，低分子量PVP表現(xiàn)出生物學(xué)惰性和安全性(Clark DP，Hanke CW，Swanson NA.J Am Acad Dermatol 1989；21992-8；Soo Ch，Rahbar G，Moy RL.J Dermatol Surg Oncol 1993；19431-434)。此外，N-乙烯基-吡咯烷酮的均聚物或者PVP使得這種生物藥物性能與膠原質(zhì)或PVP單獨(dú)表現(xiàn)出的性能不同。
與牛膠原質(zhì)灌輸對(duì)比，我們沒有發(fā)現(xiàn)關(guān)于膠原質(zhì)-PVP的任何副作用，而那些早先報(bào)導(dǎo)的副作用包括，過敏反應(yīng)、輕微的紅斑、風(fēng)疹、局部滲出和產(chǎn)生特異性的抗I型膠原質(zhì)抗體(McClelland M，DeLustro F.J Urol 1996；1552068-73；DeLustro F，F(xiàn)ries J，Kang A.J Dermatol Surg Oncol1988；14(Suppl I)57-65；Singh G，F(xiàn)ries JF.Ann Int Med 1994；120524；Lewy RI.Ann Iht Med1994；120525)。1996年Sieper的針對(duì)施用膠原質(zhì)的研究，施用膠原質(zhì)-PVP我們沒有發(fā)現(xiàn)任何副反應(yīng)或者實(shí)驗(yàn)征數(shù)的升高(如，C反應(yīng)性蛋白質(zhì)、紅血球沉降速率、風(fēng)濕因子)(Sieper J，Kary S，Srensen H，Alten R，Eggens U，Hüge W，Hiepe F，Kühne A，Listing J，Ulbrieh N，Braun J，Zink A，Mitchison NA.Arthritis Rheum 1996；3941-9)。
膠原質(zhì)-PVP的施用療程與Tarkowski療程相似(1999)，其證實(shí)了三天/三周治療的效果，在7、14、21天時(shí)，采取等量霍亂毒素B亞單位-II型膠原質(zhì)結(jié)合物引入鼠的患處，與每天接受非結(jié)合的II型膠原質(zhì)或者參照的霍亂毒素B相比，顯著減輕了關(guān)節(jié)炎(Tarkowski A，Sun J-B，Holmdahl R，Holmgren J，Czerkinsky C.Arthritis Rheum 1999；421628-34)。
參照劑量(1.7mg膠原質(zhì))、給藥途徑(皮下)和給藥周期，我們認(rèn)為膠原質(zhì)-PVP也可以產(chǎn)生類似免疫致耐分子同樣作用，與其它的給藥途徑相比，更加有效且具有更低的毒性?；谀z原質(zhì)-PVP的背景，我們認(rèn)為能夠調(diào)控細(xì)胞因了分泌(Furuzawa-Carballeda J，Cabral AR，Zapata- M，Aleocer-Varela J.J Rheumatol 2003；30256-9)。
采用ACR標(biāo)準(zhǔn)，施用1.6ml膠原質(zhì)-PVP3個(gè)月，80.0％反饋了20％比率的改善(60.0％反饋達(dá)到ACR50水平，20.0％反饋達(dá)到ACR70水平)。這個(gè)結(jié)果與依那西普II期實(shí)驗(yàn)結(jié)果相似(MorelandLW，Baumgartner S，Schiff MH，et al.N Engl J Med 1997；337141-7)。
在大多數(shù)情況下，超過12周保持了持續(xù)改善，這可被認(rèn)為是采用長(zhǎng)期治療更為有效的證據(jù)。這是考慮到令人鼓舞的結(jié)果，及這種療法不存在已知的副反應(yīng)、進(jìn)一步的試驗(yàn)陸續(xù)證實(shí)其有效性、最佳劑量、施用裝置、安慰劑對(duì)比試驗(yàn)研究和其它給藥途徑得到許可。
對(duì)于類風(fēng)濕患者施用膠原質(zhì)-PVP。雙盲安慰劑-對(duì)照試驗(yàn)研究肌肉給藥的效果研究是基于有計(jì)劃的、長(zhǎng)期的、雙盲安慰劑-對(duì)照試驗(yàn)，包括30名病程中的類風(fēng)濕患者(ACR標(biāo)準(zhǔn))。采用固定劑量甲氨蝶呤的患者都采用了Freyberg療法，6個(gè)月中采用0.4ml肌肉注射膠原質(zhì)-PVP(3.33mg膠原質(zhì))或者0.4ml安慰劑。
初期終點(diǎn)包括病情活動(dòng)指數(shù)(DAS)和改善是通過美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)來確定(ACR20，50和70)，參照5個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)中的3值的平均變化，包括Ritchie指數(shù)(RI)、關(guān)節(jié)壓痛計(jì)數(shù)、西班牙健康評(píng)價(jià)問卷(HAQ-DI)、視覺模擬疼痛評(píng)分(VAS)以及紅血球沉降速率(ESR)或者C反應(yīng)蛋白(CRP)。
使用Mann Whitney U雙尾測(cè)試進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。膠原質(zhì)-PVP是安全和耐受良好的。6個(gè)月使用膠原質(zhì)-PVP的患者對(duì)比安慰劑組具有統(tǒng)計(jì)上明顯的進(jìn)步(p＜0.05)，包括關(guān)節(jié)壓痛計(jì)數(shù)(8.1±3.7對(duì)比17.9±4.8)，RI(10.7±3.3對(duì)比17.8±5.4)，晨僵(9.4±4.6對(duì)比37.8±6.7)，風(fēng)濕因子(207.7±179.1對(duì)比518.8±293.2)，C反應(yīng)蛋白(2.7±3.9對(duì)比28.1±24.5)，HAQ(46.7±15.6對(duì)比18.8±13.7)，DAS(3.5±0.7對(duì)比4.8±0.9)，ACR20(100對(duì)比77.8％)，ACR50(67.6對(duì)比11.1％)和ACR70(33.3對(duì)比0％)。血清或血液參數(shù)都沒有改變。沒有不良現(xiàn)象產(chǎn)生。
總結(jié)膠原質(zhì)-PVP具有重要的炎癥下調(diào)的作用，引導(dǎo)凋亡，并可能通過外周免疫耐受來調(diào)節(jié)類風(fēng)濕患者滑液組織的膠原質(zhì)代謝。這種共聚物對(duì)細(xì)胞代謝的影響超過細(xì)胞增殖。這意味著由于III型膠原質(zhì)的相對(duì)比例增加，即使膠原質(zhì)的總量沒有改變，則在用藥的滑膜中I膠原質(zhì)減少。同樣的，由于修飾ECM蛋白代謝的鈣依賴膠原酶、主要的膠原質(zhì)和重新恢復(fù)III型膠原質(zhì)的含量，膠原質(zhì)-PVP抑制了分解活性。上述表達(dá)的信息表明引入膠原質(zhì)-PVP降低膠原質(zhì)活性可歸因于減少風(fēng)濕滑膜炎癥、炎癥細(xì)胞對(duì)軟骨和骨質(zhì)入侵以及它們的損傷和退化。進(jìn)一步的，膠原質(zhì)-PVP引起類風(fēng)濕組織TIMP-1增加，意味著ECM代謝的減少可以通過MMPs被TIMP-1閉鎖的機(jī)理。
結(jié)果，由于膠原質(zhì)-PVP對(duì)細(xì)胞黏合分子下調(diào)和其阻止細(xì)胞接觸的效果，該藥物避免了炎癥細(xì)胞的入侵和纖維化。由于這些信息，我們認(rèn)為膠原質(zhì)-PVP免疫調(diào)節(jié)效果集中在通過減少白細(xì)胞對(duì)關(guān)節(jié)滑液的輸送，調(diào)控基質(zhì)和內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)。
最后，該共聚物下調(diào)三種類風(fēng)濕前炎癥因子IL-8，TNF-αand IL-β。生理學(xué)上，它們可以導(dǎo)致活化Cox-1，并增加PGE2合成，以及關(guān)節(jié)軟骨和骨質(zhì)再吸收。同樣的，在鼠類活體和離體實(shí)驗(yàn)中，前述的因子已與類風(fēng)濕病情起始和發(fā)作相關(guān)。廣為人知的，TNF-α和IL-1β能夠引起其它一些因子的合成和釋放，比如GM-CSF，IL-6和IL-8，并且所有這些都增加MMP的產(chǎn)生和活性，減少類風(fēng)濕滑膜的毛細(xì)血管中ELAM-1，VCAM-1和ICAM-1的表達(dá)。
總之，用膠原質(zhì)-PVP對(duì)類風(fēng)濕患者的八個(gè)或更多的疼痛關(guān)節(jié)進(jìn)行皮下注射，當(dāng)他們同時(shí)接受低劑量的甲氨蝶呤和/或NSAIDs，改善了病忠指數(shù)(DAS)并且在以下5種指標(biāo)中有3個(gè)得到改善(ACR20)，這五個(gè)指標(biāo)包括Ritchie指數(shù)(RI)、關(guān)節(jié)壓痛計(jì)數(shù)、西班牙健康評(píng)價(jià)問卷(HAQ-DI)、視覺模擬疼痛評(píng)分(VAS)以及蛋白質(zhì)癥候。
膠原質(zhì)-PVP治療沒有刺激血液或者血清的改變，該共聚物具有生物共聚物的優(yōu)勢(shì)，目前為止沒有對(duì)病人產(chǎn)生任何危險(xiǎn)，即使患者在長(zhǎng)時(shí)間(多于12個(gè)月)使用過程中，也沒有刺激抗I型膠原質(zhì)或者抗膠原質(zhì)-PVP抗體或者抗SSA/SSB或者抗DNA抗體的產(chǎn)生。膠原質(zhì)-PVP對(duì)于類風(fēng)濕短期治療是一種安全和有效的生物分子。
權(quán)利要求
1.下調(diào)前炎癥因子表達(dá)的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮生物復(fù)合物。
2.如權(quán)利要求1所述的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮，其下調(diào)前炎癥細(xì)胞黏附分子的表達(dá)。
3.如權(quán)利要求1所述的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮，其調(diào)控膠原質(zhì)的新陳代謝。
4.如權(quán)利要求1所述的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮，其上調(diào)細(xì)胞凋亡。
5.如權(quán)利要求1所述的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮，其作為致耐分子調(diào)控外周的免疫應(yīng)答。
6.如權(quán)利要求1所述的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮，其調(diào)控慢性周期性炎癥。
7.如權(quán)利要求1所述的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮，其對(duì)于短期的類風(fēng)濕治療有效。
8.如權(quán)利要求1所述的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮，其改善類風(fēng)濕患者的生活質(zhì)量。
9.含有如權(quán)利要求1-9所述的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮特征的藥物組成，用于治療骨關(guān)節(jié)炎。
10.膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮生物復(fù)合物的應(yīng)用，用于制備治療骨關(guān)節(jié)炎的藥物。
11.如權(quán)利要求1所述的膠原質(zhì)-聚乙烯基吡咯烷酮生物復(fù)合物的應(yīng)用，用于制備治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種由膠原質(zhì)－聚乙烯基吡咯烷酮組成的慢性關(guān)節(jié)炎癥的下調(diào)組合物。罹患類風(fēng)濕或骨關(guān)節(jié)炎的患者通過膠原質(zhì)－PVP來調(diào)控膠原質(zhì)的代謝，這種生物復(fù)合物可以下調(diào)溶膠原活性，上調(diào)III型膠原質(zhì)含量和使組織TIMP－1恢復(fù)正?；航M織的水平。如前所述，慢性炎癥過程可以由膠原質(zhì)－PVP的作用調(diào)控，其可以下調(diào)IL－1β，TNF－α，IL－8和細(xì)胞黏合分子，因?yàn)樗羞@些分子都能導(dǎo)致溶膠原酶的活化和表達(dá)；同時(shí)通過黏附導(dǎo)致滑液細(xì)胞的增殖和遷移，機(jī)理包括細(xì)胞黏附分子和Cox－1活化和介入。此外，對(duì)于貼壁細(xì)胞，細(xì)胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)－黏合素的相互作用產(chǎn)生信號(hào)，調(diào)控MMPs表達(dá)，表明細(xì)胞黏附分子也可以參與類風(fēng)濕組織受損。另一方面，對(duì)于TNF－α和IL－1β的下調(diào)可以刺激滑膜細(xì)胞凋亡。還會(huì)阻止滑液細(xì)胞增殖，形成關(guān)節(jié)翳，以及關(guān)節(jié)損害。
文檔編號(hào)A61P29/00GK101014361SQ200580022213
公開日2007年8月8日 申請(qǐng)日期2005年5月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月27日
發(fā)明者弗納多埃德加·克洛茲格門茲, 伽達(dá)魯普簡(jiǎn)尼特·弗茹扎瓦卡巴勒達(dá) 申請(qǐng)人:埃斯皮股份有限公司