一種軟組織工程多孔支架及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種軟組織工程多孔支架及其制備方法，由羧甲基纖維素鈉、殼聚糖和聚乙烯基吡咯烷酮復(fù)合制得，其中羧甲基纖維素鈉與聚乙烯基吡咯烷酮的質(zhì)量比為1:50～1:0.1，羧甲基纖維素鈉與殼聚糖的質(zhì)量比為1:50～1:0.1，多孔支架厚度為0.8～2.6mm，孔隙率為35.0%～87.0%，拉伸強(qiáng)度為1.4MPa～68.98MPa；該支架的制備方法環(huán)保無(wú)毒、制備工藝過(guò)程簡(jiǎn)單、成本低廉，制備得到的支架生物相容性好，能替代人工皮膚，用作皮膚敷料和皮膚組織工程材料，幫助皮膚大面積和深度燒傷的患者，在自體皮不夠的情況下恢復(fù)因皮膚創(chuàng)傷喪失的生理功能。
【專利說(shuō)明】
-種軟組織工程多孔支架及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種軟組織工程多孔支架及其制備方法，該多孔的軟組織工程支架可 被應(yīng)用于皮膚組織工程，屬于生物醫(yī)學(xué)材料領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 組織工程化皮膚是指由細(xì)胞或細(xì)胞外基質(zhì)或由兩者共同結(jié)合組成的皮膚產(chǎn)品，是 應(yīng)用生命科學(xué)和工程學(xué)的原理與技術(shù)將種子細(xì)胞與適當(dāng)?shù)闹Ъ懿牧舷嘟Y(jié)合構(gòu)建出的用于 修復(fù)、維護(hù)和改善損傷皮膚組織功能和形態(tài)的生物替代物。近年來(lái)，伴隨細(xì)胞生物學(xué)、分子 生物學(xué)及生物材料學(xué)的迅速發(fā)展，組織工程學(xué)也取得了巨大的進(jìn)展，其中皮膚組織工程學(xué) 的發(fā)展尤為引人注目。部分組織工程化皮膚產(chǎn)品甚至取得美國(guó)食品與藥品管理局(FDA)的 許可而應(yīng)用于臨床，在外構(gòu)建組織工程化皮膚的過(guò)程中，種子細(xì)胞所賴W存在的支架材料 一直是研究的熱點(diǎn)之一。傳統(tǒng)的支架制造方法包括相分離法、致孔劑析孔法和發(fā)泡法等。但 運(yùn)些工藝可控性差，難W構(gòu)建結(jié)構(gòu)復(fù)雜、供多細(xì)胞生長(zhǎng)的支架微觀結(jié)構(gòu)。
[0003] 殼聚糖(CS)是一種天然高分子聚合物，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，易成膜，有良好的生物相容 性，無(wú)毒，具有抗凝血等多種生物活性和優(yōu)良的抗菌性，同時(shí)還具有防止傷口感染，促進(jìn)肉 芽生長(zhǎng)和皮膚再生，但是純的殼聚糖膜降解性差、在實(shí)際應(yīng)用中存在著力學(xué)性能差、脆性大 W及不適用于酸性環(huán)境等問(wèn)題。
[0004] 簇甲基纖維素鋼(CMC)作為含有多徑基及簇基的高分子多糖，對(duì)皮膚及粘膜無(wú)刺 激性，在體內(nèi)不會(huì)產(chǎn)生免疫抗原反應(yīng)及熱源反應(yīng)，無(wú)致突變性，可降解，是一種組織相容性 良好的體內(nèi)植入生物材料，其本身就具有一定的吸水吸濕能力。
[0005] 聚乙締基化咯燒酬(PVP)是由聚合度可變化的線型NVP基團(tuán)組成的聚合物，是N- 締控聚合體中性質(zhì)最好和使用最廣泛的聚合物，它具有生物適配性、低毒、易成膜及可粘 性等特點(diǎn)，又具有很好的復(fù)配能力，對(duì)鹽、酸和熱溶液保持一定的惰性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供一種軟組織工程多孔支架，由簇甲基纖維素鋼、殼聚糖、聚乙締基化咯 燒酬復(fù)合制得，簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬的質(zhì)量比為1:50~1:0.1，簇甲基纖維 素鋼與殼聚糖的質(zhì)量比為1:50~1:0.1，多孔支架的厚度為0.8~2.6mm，孔隙率為35.0%~ 87.0%，拉伸強(qiáng)度為 1.4MPa ~68.98MPa。
[0007] 本發(fā)明的另一目的在于提供所述軟組織工程多孔支架的制備方法，具體包括W下 步驟： (1) 將簇甲基纖維素鋼和聚乙締基化咯燒酬按照質(zhì)量比為1:50~1:0.1的比例混勻后， 加水，充分?jǐn)埌?，得溶液A，其中水的加入量與簇甲基纖維素鋼粉體和聚乙締基化咯燒酬粉 體的總質(zhì)量的比例為5~30mL/g; (2) 按照簇甲基纖維素鋼與殼聚糖的質(zhì)量比為1:50~1:0.1的比例，將殼聚糖加入到10 ~30mL濃度為0.5~5mol/L酸溶液中，攬拌均勻，得到溶液B; (3) 將溶液A緩慢加入到溶液B中，并不斷攬拌，待出現(xiàn)白色片狀時(shí)，加入1~2mL濃度為1 ~6mo 1/L的鹽酸溶液，充分?jǐn)埌瑁涟咨瑺钕е?，加?~10血甘油溶液，繼續(xù)攬拌至 液體均勻穩(wěn)定； (4) 將步驟(3)得到的溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾餅脫泡、流延成膜； 巧)將步驟(4)得到的產(chǎn)物在-30~-50°C的條件下冷凍15~25小時(shí)，再在-10~-50°C干 燥10~20小時(shí)； (6) 將步驟巧)得到的產(chǎn)物進(jìn)行交聯(lián)； (7) 將步驟(6)得到的交聯(lián)產(chǎn)物進(jìn)行清洗、冷凍干燥，即得到多孔軟組織工程支架。
[0008] 優(yōu)選的，步驟(2)中所述酸溶液為乙酸溶液、乳酸溶液、蘋果酸溶液、巧樣酸溶液中 的一種或任意比例的幾種混合。
[0009] 優(yōu)選的，步驟(3)所述甘油溶液為甘油與水按照體積比為1:100~1:10混合，攬拌 均勻得到。
[0010] 優(yōu)選的，步驟(4)所述脫泡在400~500毫米隸柱的負(fù)壓下進(jìn)行。
[0011] 優(yōu)選的，步驟(6)所述交聯(lián)劑為質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%~15%的憐酸Ξ苯醋或質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%~ 15%的氨氧化鋼，交聯(lián)時(shí)間為2~20小時(shí)。
[001 ^ 優(yōu)選的，步驟(7)所述冷凍干燥溫度為-40~-10°C，7令凍干燥時(shí)間為10~20小時(shí)。
[0013] 本發(fā)明支架生物相容性好，能替代人工皮膚，用作皮膚敷料和皮膚組織工程支架 材料，幫助皮膚大面積和深度燒傷的患者，在自體皮不夠的情況下恢復(fù)因皮膚創(chuàng)傷喪失的 生理功能;本發(fā)明所述支架的制備方法環(huán)保無(wú)毒、制備工藝過(guò)程簡(jiǎn)單、成本低廉。
【附圖說(shuō)明】
[0014] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1得到的多孔支架的掃描電鏡圖； 圖2為本發(fā)明實(shí)施例6得到的多孔支架的掃描電鏡圖。
[0015] 具體的實(shí)施方式 W下是結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0016] 實(shí)施例1 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架，由簇甲基纖維素鋼、殼聚糖和聚乙締基化咯燒酬 復(fù)合制得，簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬的質(zhì)量比為1:3,簇甲基纖維素鋼與殼聚糖 的質(zhì)量比為1:1。
[0017] 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架的制備方法，具體包括W下步驟： (1) 按照簇甲基纖維素鋼和聚乙締基化咯燒酬按照1:3的質(zhì)量比例，稱取Ig簇甲基纖維 素鋼粉體和3g聚乙締基化咯燒酬粉體混勻后，加入20mL水?dāng)埌?0分鐘混合均勻，得到溶液 A； (2) 按照簇甲基纖維素鋼和殼聚糖1:1的質(zhì)量比例，稱取Ig殼聚糖粉體加入到lOmL濃度 為0.5mol/L的乙酸溶液中，在常溫下攬拌10分鐘，得到溶液B; (3) 將溶液A緩慢加入到溶液B中，并不斷攬拌，待液體中出現(xiàn)白色片狀時(shí)，加入ImL濃度 為Imol/L鹽酸，充分?jǐn)埌?，至白色片狀消失之后，加入ImL甘油溶液，繼續(xù)攬拌至液體均勻穩(wěn) 定，得到溶膠溶液，其中甘油溶液為甘油與水按照體積比例為1:80混合； (4) 將步驟(3)得到的產(chǎn)物200目過(guò)濾，置于400毫米隸柱的負(fù)壓下脫泡，流延成膜； 巧)將步驟(4)得到的產(chǎn)物在-40°C下冷凍2化后，在-10°C冷凍干燥15小時(shí)； (6) 將步驟巧)得到的產(chǎn)物使用4%的NaOH溶液進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)10小時(shí)； (7) 將步驟(6)得到的交聯(lián)產(chǎn)物放入水浴鍋中，溫度為55°C，每1.5小時(shí)進(jìn)行一次換水處 理，重復(fù)3次，取出后用去離子水清洗，再進(jìn)行-10°C冷凍干燥20小時(shí)，即得軟組織工程多孔 支架。
[001引本實(shí)施例所制備的多孔支架的厚度分布在0.9mm~2.3mm之間，符合皮膚膜的基本 特性;通過(guò)拉伸實(shí)驗(yàn)測(cè)的多孔支架的拉伸強(qiáng)度為1.4MPa，力學(xué)性能良好;如圖1所示為本實(shí) 施例所制備的多孔支架的掃描電鏡圖片，從圖中可知支架表面有孔;通過(guò)BET測(cè)得孔隙率為 35.0%，吸水率為 224.780/0。
[0019] 本實(shí)施例所制備的多孔支架進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如下表1所示，結(jié)合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T14233.3-2005相關(guān)規(guī)定：（1)濃度在0.05-0.3g/mL時(shí)，細(xì)胞增殖度(RGR)均在90-110之 間，細(xì)胞毒性為0或1級(jí)；（2)濃度在0.05-0.2g/mL時(shí)，細(xì)胞增殖度(RGR)均在100-112之間，細(xì) 胞毒性為0級(jí);濃度在0.2-0.4g/mL時(shí)，細(xì)胞增殖度均在75-100之間，細(xì)胞毒性為1級(jí)；（3)支 架濃度在0.05-0.2g/mL時(shí)，細(xì)胞增殖度(RGR)均在75-95之間，細(xì)胞毒性為1級(jí);濃度在0.2~ 0.4g/mL時(shí)，細(xì)胞增殖度(RGR)均在95-120之間，細(xì)胞毒性為0級(jí)或1級(jí)。結(jié)合上表1可W得出 實(shí)施例1所得的多孔支架無(wú)細(xì)胞毒性。
[0020] 表1多孔軟組織工程支架材料的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
[0021] 實(shí)施例2 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架，由簇甲基纖維素鋼、殼聚糖和聚乙締基化咯燒酬 復(fù)合制得，簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬的質(zhì)量比為1:0.1，簇甲基纖維素鋼與殼聚 糖的質(zhì)量比為1:1.25。
[0022] 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架的制備方法，具體包括W下步驟： (1) 將簇甲基纖維素鋼和聚乙締基化咯燒酬按照1:0.1的質(zhì)量比例，稱取Ig簇甲基纖維 素鋼粉體和O.lg聚乙締基化咯燒酬粉體混勻后，加入33mL水?dāng)埌?5分鐘混合均勻，得到溶 液A; (2) 按照簇甲基纖維素鋼與殼聚糖的質(zhì)量比為1:1.25,稱取1.25g殼聚糖粉體加入到 20mL濃度為3mol/L的乳酸溶液中，在常溫下攬拌30分鐘，得到溶液B; (3) 將溶液A緩慢加入到溶液B中，并不斷攬拌，待液體中出現(xiàn)白色片狀時(shí)，加入2mL濃度 為4mo 1/L的鹽酸，充分?jǐn)埌瑁涟咨瑺钕е?，加?mL甘油溶液，繼續(xù)攬拌至液體均勻 穩(wěn)定，甘油溶液為甘油與水按照體積比例為1:10混合； (4) 將步驟(3)得到的產(chǎn)物200目過(guò)濾，置于450毫米隸柱的負(fù)壓下脫泡，流延成膜； (5) 將步驟(4)得到的產(chǎn)物在-30°C下冷凍20h后，在-20°C冷凍干燥10小時(shí)； (6) 將步驟巧)得到的產(chǎn)物使用1%的NaO田容液進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)2小時(shí)； (7) 將步驟(6)得到的交聯(lián)產(chǎn)物放入水浴鍋中，溫度為55°C，每1.5小時(shí)進(jìn)行一次換水處 理，重復(fù)6次，取出后用去離子水清洗，再進(jìn)行-30°C冷凍干燥15小時(shí)，即得軟組織工程多孔 支架。
[0023] 本實(shí)施例所制備的多孔支架的厚度分布在0.8mm~1.6mm之間，符合皮膚膜的一個(gè) 基本特性;通過(guò)拉伸實(shí)驗(yàn)測(cè)的多孔支架的拉伸強(qiáng)度為15MPa，力學(xué)性能良好;通過(guò)BET檢測(cè)測(cè) 得孔隙率為50%，吸水率為394.29%。
[0024] 實(shí)施例3 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架，由簇甲基纖維素鋼、殼聚糖和聚乙締基化咯燒酬 復(fù)合制得，簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬的質(zhì)量比為1:50,簇甲基纖維素鋼與殼聚 糖質(zhì)量比為1:0.1。
[0025] 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架的制備方法，具體包括W下步驟： (1) 將簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬按照1:50的質(zhì)量比例，稱取Ig簇甲基纖維 素鋼粉體和50g聚乙締基化咯燒酬粉體混勻后，加入255mL水?dāng)埌?0分鐘混合均勻，得到溶 液A; (2) 按照簇甲基纖維素鋼和殼聚糖1:0.1的質(zhì)量比例，稱取O.lg殼聚糖粉體加入到15mL 濃度為2mol/L的巧樣酸溶液中，在常溫下攬拌30分鐘，得到溶液B; (3) 將溶液A緩慢加入到溶液B中，并不斷攬拌，待液體中出現(xiàn)白色片狀時(shí)，加入1.5mL濃 度為6mol/L的鹽酸，充分?jǐn)埌?，至白色片狀消失之后，加入lOmL甘油溶液，繼續(xù)攬拌至液體 均勻穩(wěn)定，得到溶膠溶液，其中甘油溶液為甘油與水按照體積比例為1:50混合； (4) 將步驟(3)得到的產(chǎn)物200目過(guò)濾，置于420毫米隸柱的負(fù)壓下脫泡，流延成膜； 巧)將步驟(4)得到的產(chǎn)物在-50°C下冷凍1化后，在-40°C冷凍干燥20小時(shí)； (6) 將步驟巧)得到的產(chǎn)物使用15%的NaOH溶液進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)20小時(shí)； (7) 將步驟(6)得到的交聯(lián)產(chǎn)物放入水浴鍋中，溫度為55°C，每1.5小時(shí)進(jìn)行一次換水處 理，重復(fù)6次，取出后用去離子水清洗，再進(jìn)行-20°C冷凍干燥10小時(shí)，即得軟組織工程多孔 支架。
[0026] 本實(shí)施例所制備的多孔支架的厚度主要分布在0.8mm~2.4mm之間，符合皮膚膜的 一個(gè)基本特性;通過(guò)拉伸實(shí)驗(yàn)測(cè)的多孔支架的拉伸強(qiáng)度為28MPa，力學(xué)性能良好;通過(guò)多孔 支架的掃描電鏡圖片可知支架表面有孔;通過(guò)BET檢測(cè)測(cè)得孔隙率為65%，吸水率為吸水率 為 358.9^)。
[0027] 實(shí)施例4 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架，由簇甲基纖維素鋼、殼聚糖和聚乙締基化咯燒酬 復(fù)合制得，簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬的質(zhì)量比為1:0.5,簇甲基纖維素鋼與殼聚 糖質(zhì)量比為1:50。
[0028] 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架的制備方法，具體包括W下步驟： (1) 將簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬按照1:0.5的質(zhì)量比例，稱取Ig簇甲基纖維 素鋼粉體和0.5g聚乙締基化咯燒酬粉體混勻后，加入30mL水?dāng)埌?0分鐘混合均勻，得到溶 液A; (2) 按照簇甲基纖維素鋼和殼聚糖1:50的質(zhì)量比例，稱取50g殼聚糖粉體加入到30mL濃 度為5mol/L的蘋果酸溶液中，在常溫下攬拌30分鐘，得到溶液B; (3) 將溶液A緩慢加入到溶液B中，并不斷攬拌，待液體中出現(xiàn)白色片狀時(shí)，加入1.8mL濃 度為5mol/L的鹽酸，充分?jǐn)埌瑁涟咨瑺钕е?，加?血甘油溶液，繼續(xù)攬拌至液體均 勻穩(wěn)定，得到溶膠溶液，其中甘油溶液為甘油與水按照體積比例為1:100混合； (4) 將步驟(3)得到的產(chǎn)物200目過(guò)濾，置于500毫米隸柱的負(fù)壓下脫泡，流延成膜； (5) 將步驟(4)得到的產(chǎn)物在-45°C下冷凍16h后，在-30°C冷凍干燥18小時(shí)； (6) 將步驟巧)得到的產(chǎn)物使用15%的憐酸Ξ苯醋溶液進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)10小時(shí)； (7) 將步驟(6)得到的交聯(lián)產(chǎn)物放入水浴鍋中，溫度為55°C，每1.5小時(shí)進(jìn)行一次換水處 理，重復(fù)4次，取出后用去離子水清洗，再進(jìn)行-40°C冷凍干燥12小時(shí)，即得軟組織工程多孔 支架。
[0029] 本實(shí)施例所制備的多孔支架的厚度主要分布在1.0mm~2.6mm之間，符合皮膚膜的 一個(gè)基本特性;通過(guò)拉伸實(shí)驗(yàn)測(cè)的多孔支架的拉伸強(qiáng)度為68.9MPa，力學(xué)性能良好;通過(guò)多 孔支架的掃描電鏡圖片可知支架表面有孔;通過(guò)實(shí)驗(yàn)測(cè)得孔隙率為87%，吸水率為657.34%。
[0030] 實(shí)施例5 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架，由簇甲基纖維素鋼、殼聚糖和聚乙締基化咯燒酬 復(fù)合制得，簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬的質(zhì)量比為1:20,簇甲基纖維素鋼與殼聚 糖質(zhì)量比為1:10。
[0031] 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架的制備方法，具體包括W下步驟： (1) 將簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬按照1:20的質(zhì)量比例，稱取Ig簇甲基纖維 素鋼粉體和20g聚乙締基化咯燒酬粉體混勻后，加入210mL水?dāng)埌?0分鐘混合均勻，得到溶 液A; (2) 按照簇甲基纖維素鋼和殼聚糖1:10的質(zhì)量比例，稱取lOg殼聚糖粉體加入到20mL濃 度為Imol/L的蘋果酸和Imol/L的巧樣酸W質(zhì)量比1:1混合的混合溶液中，在常溫下攬拌30 分鐘，得到溶液B; (3) 將溶液A緩慢加入到溶液B中，并不斷攬拌，待液體中出現(xiàn)白色片狀時(shí)，加入1.5mL濃 度為2mol/L的鹽酸，充分?jǐn)埌?，至白色片狀消失之后，加?mL甘油溶液，繼續(xù)攬拌至液體均 勻穩(wěn)定，得到溶膠溶液，其中甘油溶液為甘油與水按照體積比例為1:20混合； (4) 將步驟(3)得到的產(chǎn)物200目過(guò)濾，置于480毫米隸柱的負(fù)壓下脫泡，流延成膜； (5) 將步驟(4)得到的產(chǎn)物在-35°C下冷凍1她后，在-50°C冷凍干燥12小時(shí)； (6) 將步驟巧)得到的產(chǎn)物使用10%的憐酸Ξ苯醋溶液進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)2小時(shí)； (7) 將步驟(6)得到的交聯(lián)產(chǎn)物放入水浴鍋中，溫度為55°C，每1.5小時(shí)進(jìn)行一次換水處 理，重復(fù)4次，取出后用去離子水清洗，再進(jìn)行-35°C冷凍干燥14小時(shí)，即得軟組織工程多孔 支架。
[0032] 本實(shí)施例所制備的多孔支架的厚度分布在0.8mm~1.6mm之間，符合皮膚膜的一個(gè) 基本特性;通過(guò)拉伸實(shí)驗(yàn)測(cè)的多孔支架的拉伸強(qiáng)度為49MPa，力學(xué)性能良好;通過(guò)多孔支架 的掃描電鏡圖片可知支架表面有孔;通過(guò)BET實(shí)驗(yàn)測(cè)得孔隙率為70%，吸水率為650.70%。
[0033] 實(shí)施例6 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架，由簇甲基纖維素鋼、殼聚糖和聚乙締基化咯燒酬 復(fù)合制得，簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬的質(zhì)量比為1:10,簇甲基纖維素鋼與殼聚 糖質(zhì)量比為1:30。
[0034] 本實(shí)施例所述軟組織工程多孔支架的制備方法，具體包括W下步驟： (1)將簇甲基纖維素鋼與聚乙締基化咯燒酬按照1:10的質(zhì)量比例，稱取Ig簇甲基纖維 素鋼粉體和lOg聚乙締基化咯燒酬粉體混勻后，加入220mL水?dāng)埌?0-30分鐘混合均勻，得到 溶液A; (2) 按照簇甲基纖維素鋼和殼聚糖1:30的質(zhì)量比例，稱取30g殼聚糖粉體加入到25mL濃 度為4mol/L的乙酸和4mol/L的乳酸W質(zhì)量比1:2混合后的混合溶液中，在常溫下攬拌5-30 分鐘，得到溶液B; (3) 將溶液A緩慢加入到溶液B中，并不斷攬拌，待液體中出現(xiàn)白色片狀時(shí)，加入1.2mL濃 度為3mol/L的鹽酸，充分?jǐn)埌?，至白色片狀消失之后，加?血甘油溶液，繼續(xù)攬拌至液體均 勻穩(wěn)定，得到溶膠溶液，其中甘油溶液為甘油與水按照體積比例為1:40混合； (4) 將步驟(3)得到的產(chǎn)物200目過(guò)濾，置于430毫米隸柱的負(fù)壓下脫泡，流延成膜； (5) 將步驟(4)得到的產(chǎn)物在-35°C下冷凍22h后，在-35°C冷凍干燥16小時(shí)； (6) 將步驟巧)得到的產(chǎn)物使用1%的憐酸Ξ苯醋溶液進(jìn)行交聯(lián)，交聯(lián)18小時(shí)； (7) 將步驟(6)得到的交聯(lián)產(chǎn)物放入水浴鍋中，溫度為55°C，每1.5小時(shí)進(jìn)行一次換水處 理，重復(fù)5次，取出后用去離子水清洗，再進(jìn)行-15°C冷凍干燥18小時(shí)，即得軟組織工程多孔 支架。
[0035] 本實(shí)施例所制備的多孔支架的厚度分布在0.9mm~1.8mm之間，符合皮膚膜的一個(gè) 基本特性;通過(guò)拉伸實(shí)驗(yàn)測(cè)的多孔支架的拉伸強(qiáng)度為37MPa，力學(xué)性能良好;如圖2所示為本 實(shí)施例制備的多孔支架的掃描電鏡圖片，由圖中可知支架表面有孔;通過(guò)BET實(shí)驗(yàn)測(cè)得孔隙 率為58%，吸水率為394.29%。
[0036] W上所述僅為本發(fā)明的實(shí)施方式，并不用W限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原 則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種軟組織工程多孔支架，其特征在于，由羧甲基纖維素鈉、殼聚糖、聚乙烯基吡咯 烷酮復(fù)合制得，羧甲基纖維素鈉與聚乙烯基吡咯烷酮的質(zhì)量比為1:50~1:0.1，羧甲基纖維 素鈉與殼聚糖的質(zhì)量比為1:50~1:0.1。2. 權(quán)利要求1所述軟組織工程多孔支架的制備方法，其特征在于，具體包括以下步驟： (1) 將羧甲基纖維素鈉與聚乙烯基吡咯烷酮按照質(zhì)量比為1:50~1:0.1的比例混勻后， 加水，充分?jǐn)嚢?，得溶液A，其中水的加入量與羧甲基纖維素鈉和聚乙烯基吡咯烷酮的總質(zhì) 量的比例為5~30mL/g; (2) 按照羧甲基纖維素鈉與殼聚糖的質(zhì)量比為1:50~1:0.1的比例，將殼聚糖加入到10 ~30mL濃度為0.5~5mol/L酸溶液中，攪拌均勻，得到溶液B; (3) 將溶液A緩慢加入到溶液B中，并不斷攪拌，待出現(xiàn)白色片狀時(shí)，加入1~2mL濃度為1 ~6mol/L的鹽酸溶液，充分?jǐn)嚢瑁涟咨瑺钕е?，加?~IOmL甘油溶液，繼續(xù)攪拌至 液體均勻穩(wěn)定； (4) 將步驟(3)得到的溶液進(jìn)行過(guò)濾，濾餅脫泡、流延成膜； (5) 將步驟(4)得到的產(chǎn)物在-30~-50 °C的條件下冷凍15~25小時(shí)，再在-10~-50°C干 燥10~20小時(shí)； (6) 將步驟(5)得到的產(chǎn)物進(jìn)行交聯(lián)； (7) 將步驟(6)得到的交聯(lián)產(chǎn)物進(jìn)行清洗、冷凍干燥，即得到軟組織工程多孔支架。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述軟組織工程多孔支架的制備方法，其特征在于，步驟(2)中的酸 溶液為乙酸溶液、乳酸溶液、蘋果酸溶液、檸檬酸溶液中的一種或任意比例的幾種混合。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述軟組織工程多孔支架的制備方法，其特征在于，步驟(3)甘油溶 液為甘油與水按照體積比1:100~1:10混合。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述軟組織工程多孔支架的制備方法，其特征在于，步驟(4)脫泡在 400~500毫米汞柱的負(fù)壓下進(jìn)行。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述軟組織工程多孔支架的制備方法，其特征在于，步驟(6)的交聯(lián) 劑為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%~15%的磷酸三苯酯溶液或質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%~15%的氫氧化鈉溶液，交聯(lián)時(shí) 間為2~20小時(shí)。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述軟組織工程多孔支架的制備方法，其特征在于，步驟(7)冷凍干 燥溫度為-40~-10°C，時(shí)間為10~20小時(shí)。
【文檔編號(hào)】A61L27/56GK105920680SQ201610385542
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年6月3日
【發(fā)明人】冷崇燕, 王立麗, 賴大春
【申請(qǐng)人】昆明理工大學(xué)