專(zhuān)利名稱(chēng)：小花棘豆總生物堿和氮己環(huán)酮衍生物的制藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及小花棘豆總生物堿和氮己環(huán)酮衍生物的制備方法，以及它們作為抗心率失常和抗高血壓藥物的應(yīng)用。
小花棘豆為棘豆科植物Oxytropis Glabra Lam.，文獻(xiàn)報(bào)道它含有毒的生物堿，能引起人和動(dòng)物中毒[1]。到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)關(guān)于小花棘豆的總生物堿和氮己環(huán)酮衍生物有抗心率失常和抗高血壓作用，也沒(méi)有小花棘豆的總生物堿和氮己環(huán)酮衍生物作為藥物應(yīng)用的報(bào)道。
本發(fā)明的目的，是尋找小花棘豆具有抗心律失常和抗高血壓的有效成分，追蹤有效成分中具有抗心律失常和抗高血壓的單體化合物；開(kāi)發(fā)效成分和單體化合物及其衍生物的醫(yī)藥用途。
本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)小花棘豆總生物堿具有抗心律失常和抗高血壓的作用；首次從該總生物堿中分離得到一個(gè)氮己環(huán)酮類(lèi)單體化合物(化合物A)藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，總生物堿提和化合物A均具有非常明顯的抗心律失常和抗高血壓作用，其有效的劑量是口服3～300mg/kg，腹腔和靜脈注射具有同樣的藥理作用，但劑量要低3～7倍。以總生物堿或化合物A作為主要成分，可制成新抗心律失常和抗高血壓藥物。
本發(fā)明將小花棘豆用有機(jī)溶劑提取得到總生物堿、將總生物堿用硅膠柱層析進(jìn)行分離得到單體化合物A，藥理研究表明，總生物堿和化合物A在動(dòng)物體內(nèi)外，均具有明顯的抗心律失常和抗高血壓作用，這些都是沒(méi)有先例的。
本發(fā)明的單體化合物A經(jīng)過(guò)現(xiàn)代光譜學(xué)(質(zhì)譜、核磁、紅外和紫外等)測(cè)定，其結(jié)構(gòu)式如下圖，名稱(chēng)3，3，5，5-四甲基-氮己環(huán)酮3，3，5，5-tetramethyl-nitrilohexacyclenone。
3，3，5，5-四甲基-氮己環(huán)酮3，3，5-tetramethyl-nitrilohexacyelenone本發(fā)明還需指出，化合物A的無(wú)機(jī)酸(如鹽酸，硫酸，硝酸等)或有機(jī)酸(檸檬酸、酒石酸等)所成的鹽，具有同樣的抗心律失常和抗高血壓的藥用作用。由于總生物堿和化合物A經(jīng)口服和靜脈注射均有良好的抗心律失常和抗高血壓的作用，因此本發(fā)明發(fā)現(xiàn)和認(rèn)定總生物堿和化合物A可以與藥物載體制成液體制劑(如口服液，注射劑，液鼻滴)，固體制劑(如片劑，膠囊劑，緩釋劑)和外用制劑(如貼劑，噴霧劑等)。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，總生物堿口服50～1000mg/kg，在麻醉大鼠和貓的模型上，具有非常明顯的抗心律失常和抗高血壓降壓效果?；衔顰靜脈注射10～200mg/kg在麻醉的大鼠和貓的模型上，也具有非常明顯的抗心律失常和抗高血壓降壓效果。維持的時(shí)間均大于8小時(shí)。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，，化合物A在濃度為2×10-4-8×10-2mg/ml的范圍內(nèi)，均能緩慢地松弛豚鼠的平滑肌，至1～5分鐘內(nèi)完全松弛，其松弛的時(shí)間可以保持6～8小時(shí)(每間隔10分鐘沖洗一次)。
本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)，總生物堿口服50～1000mg/kg，化合物A口服10～200mg/kg對(duì)抗心律失常有非常顯著得效果。
實(shí)施例實(shí)施例1小花棘豆總生物堿和化合物A的制備小花棘豆藥材1KG粉碎過(guò)60目篩，篩過(guò)物用10倍量的PH＝2～3鹽酸水提取，酸水用氫氧化鈉堿化至PH＝8～9，減水用氯仿提取5次，合并氯仿液，減壓蒸干得到總生物堿50g?？偵飰A呈深褐色，不溶于水，易溶于氯仿、乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑，對(duì)生物堿試劑(碘化鉍鉀，硅鎢酸等)和硫酸苯酚試劑呈現(xiàn)陽(yáng)性，經(jīng)硅膠薄層層析(TLC)檢查，在展開(kāi)劑氯仿/甲醇/氨水(10/1/0.1)系統(tǒng)中，顯示出5個(gè)斑點(diǎn)，其Rf值分別是0.13、0.24、0.47、0.55、0.81。
將總生物堿10g，經(jīng)過(guò)硅膠柱層析(柱床φ50×100mm)，洗脫劑氯仿/甲醇/氨水(10/1/0.1)，用TLC進(jìn)行定性檢查合并。得到單體化合物A。
實(shí)施例2化合物A的結(jié)構(gòu)鑒定化合物A為白色粉末，熔點(diǎn)43～58℃(分解)，沸點(diǎn)205℃，能溶于丙酮，甲醇，乙醇和水元素分析C(％)69.48，H(％)10.96，0(％)10.12；分子式C9H17NO。
MS(+FAB)m/z156.23，149.2，102.2，98.2，83.1，74.0。確證其分子量為155.23。
IR(KBr)cm-13319.13，2911.01，1728.98，1625.68，1726，26，1728.13，1726.23，2317.12。
UVλMcOHMAXnm264.3(ε13256)。
1H-NMR(DMSO，TMS，400MHz)δppm1.47[S，12H，(CH3)4，3’和5’位]；2.62[S，4H，(CH2)2，2和6位]；9.68(S，1H，NH，4位)。
13C-NMR(DMSO-D6，TMS，400MHz)δppm27.21[(CH3)4，3’和5’位]；49.78[(CH2)2，2和6位]；59.12[C，3和5位]；204.29[C＝0，1位]。
實(shí)施例3化合物A鹽的制備本別取化合物A 5g(32.21mmol)，分別置于配備有回流冷凝管、攪拌器、內(nèi)部溫度計(jì)和滴液漏斗的300ml三口圓底燒瓶中，加入200ml丙酮，在攪拌、80℃的水浴中令其完全溶解，慢慢滴加等摩爾量的鹽酸，硫酸，檸檬酸和酒石酸溶液，當(dāng)?shù)渭油耆?，靜止10分鐘，回收丙酮溶液至干，殘?jiān)?00ml氯仿溶液，在過(guò)濾，分別放置5小時(shí)，過(guò)濾結(jié)晶，分別得到化合物A的鹽酸鹽，硫酸鹽，檸檬酸鹽和酒石酸鹽的結(jié)晶。
實(shí)施例4總生物堿和化合物A對(duì)豚鼠回腸平滑基的作用。
精密稱(chēng)取總生物堿和化合物A1g左右，用蒸餾水溶解，制成約10mg/ml的樣品溶液。取豚鼠回腸部，用預(yù)冷的臺(tái)氏營(yíng)養(yǎng)液沖洗腸管，剪成長(zhǎng)5cm，用蛙心夾夾住，置灌流槽中，下端固定于槽的底部，上端蛙心夾用線(xiàn)連接二道生理記錄儀的拉力換能器，記錄回腸段的自動(dòng)節(jié)律收縮，浴槽中的臺(tái)氏營(yíng)養(yǎng)液恒溫35℃，回腸段掛上取時(shí)加1.5g的拉力，平衡20分鐘后，每10min換一次臺(tái)氏營(yíng)養(yǎng)液。先記錄一段回腸正常收縮的曲線(xiàn)，以異丙腎上腺素為陽(yáng)性對(duì)照藥，記錄回腸的收縮曲線(xiàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1總生物堿和化合物A對(duì)豚鼠回腸平滑基的作用
實(shí)施例5總生物堿和化合物A對(duì)兔主動(dòng)脈條的作用將新西蘭白兔胸主動(dòng)脈，放入與冷的LOCK氏液，洗凈血污，制成主動(dòng)脈條。取2cm的主動(dòng)脈條，用蛙心夾夾住置于恒溫的38℃灌流槽中，通入氧氣，用線(xiàn)連接二道生理記錄儀的拉力換能器，用生理記錄儀記錄血管條的收縮力，動(dòng)脈條在灌流浴槽中平衡60分鐘開(kāi)始試驗(yàn)。其中，每間隔10分鐘更換一次LOCK液，加入1.3×10-6mg/ml腎上腺素，待到收縮高度不在變時(shí)，沖洗4次，30分鐘后，加入不同濃度的總生物堿和化合物A作用10分鐘，然后再加入濃度為1.3×10-6mg/ml腎上腺素，，結(jié)果見(jiàn)表2。本試驗(yàn)表明，總生物堿和化合物A在一定濃度范圍，可以是腎上腺素對(duì)血管的收縮力，明顯地降低。
表2不同樣品對(duì)兔主動(dòng)脈條的作用
實(shí)施例6化合物A對(duì)大鼠的降血壓作用化合物A對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，將血壓換能器連接到計(jì)算機(jī)控制的三通道生理藥理記錄系統(tǒng)，分離大鼠的右股靜脈并插管，供注射藥物用。待血壓平穩(wěn)后(即血壓收縮曲線(xiàn)平直后)開(kāi)始靜脈給藥。其結(jié)果見(jiàn)

圖1。表明化合物A在50mg/kg可以明顯地降低高血壓大鼠的收縮壓和舒張壓。
圖1.化合物A(靜脈給藥50mg/kg)對(duì)貓的降壓作用
實(shí)施例7總生物堿對(duì)貓的降血壓作用取2.5～3.2kg的貓6只，經(jīng)口服給總生物堿250mg/kg，測(cè)定收縮壓和舒張壓，正常貓不給藥作為對(duì)照組，結(jié)果表明，它們均有非常顯著抗高血壓作用。見(jiàn)圖2圖2總生物堿口服(250mg/kg)對(duì)貓的降壓作用
實(shí)施例7總生物堿和化合物A對(duì)大鼠心動(dòng)過(guò)速的影響將動(dòng)物分成5組，每組10只，分別為對(duì)照組、心得安組(10mg/kg)、病理組(三碘甲狀腺原素0.5mg/kg)、總生物堿組(250mg/kg)和化合物A(50mg/kg)組，各每天皮下注射1次，給藥1周。在麻醉的條件分別測(cè)定各組的心律，結(jié)果如表3。結(jié)果表明總生物堿和化合物A均能顯著地降低高甲狀腺心動(dòng)過(guò)速模型的大鼠心律，并且與優(yōu)于心得安組。
表3總生物堿和化合物A對(duì)大鼠心動(dòng)過(guò)速的影響
**與病理組比較P＜0.01參考文獻(xiàn)[1]陳紹淑，趙保玉，何生虎，等；中國(guó)獸醫(yī)科技1994(34)12 77-79
權(quán)利要求
1.小花棘豆Oxytropis Glabra Lam.及其總生物堿和單體化合物3，3，5，5-四甲基-氮己環(huán)酮3，3，5，5-tetramethyl-nitrilohexacyclenone(化合物A)，作為抗心率失常和抗高血壓防治藥物的應(yīng)用。 3，3，5，5-四甲基-氮己環(huán)酮3，3，5，5-tetramethyl nitrilohexacyc lenone
2.根據(jù)權(quán)力1要求的總生物堿的提取方法和抗心率失常和抗高血壓防治藥物的應(yīng)用；根據(jù)權(quán)力1要求的化合物A作為抗心率失常和抗高血壓防治藥物的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的藥物應(yīng)用，其特征是抗心律失常和高血壓的防治藥物，經(jīng)口服和注射均有抗心律失常和抗高血壓的作用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述及的含有藥物載體的總生物堿和化合物A的藥物組合物。其中包括總生物堿和化合物A與鹽酸、硫酸、檸檬酸和酒石酸成鹽的藥物組合物。
5.根據(jù)權(quán)力1～4所述及的總生物堿和化合物A的藥物組合物的制劑，包括液體制劑(注射劑，口服液，滴鼻液)、固體制劑(片劑，膠囊劑、顆粒劑和緩釋劑等)，外用制劑(如貼劑，噴霧劑等)，氣溶膠劑和涂布劑等，上述各種制劑的產(chǎn)品。
6.權(quán)利要求5所述的藥物載體為構(gòu)成固體藥物的輔料包括崩解劑、稀釋劑、黏合劑、潤(rùn)滑劑等和構(gòu)成液體藥物的輔料包括溶媒、pH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、抗氧劑、金屬絡(luò)合劑、防腐劑、矯味劑等。
全文摘要
本發(fā)明涉及小花棘豆Oxytropis Glabra Lam.總生物堿和氮己環(huán)酮衍生物的制備方法，以及它們作為抗心率失常和抗高血壓藥物的應(yīng)用。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)小花棘豆總生物堿具有抗心律失常和抗高血壓的作用；首次從該總生物堿中分離得到一個(gè)氮己環(huán)酮類(lèi)單體化合物A，經(jīng)過(guò)現(xiàn)代光譜學(xué)(質(zhì)譜、核磁、紅外和紫外等)測(cè)定確定了它的結(jié)構(gòu)，其分子式為C
文檔編號(hào)A61P9/12GK1985821SQ20051013194
公開(kāi)日2007年6月27日 申請(qǐng)日期2005年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月22日
發(fā)明者趙洪, 黃桂蘭, 陶立杰 申請(qǐng)人:楊興