專利名稱：一種采用聚酰胺分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法與用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種從植物中分離純化藥用活性成分的綠色化學制備方法，更具體涉及一種采用聚酰胺分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法與用途。
背景技術：
在中國，荷葉資源豐富，價廉易得，藥效明確，為不可多得的可以精深加工和綜合開發(fā)利用的大宗天然藥食兩用植物資源。但在產(chǎn)地，大量荷葉被作為廢棄物而未被合理利用，造成資源的極大浪費，也帶來一定程度的環(huán)境污染。
睡蓮科植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn)，為一種藥食兩用植物，在我國南北方均有種植，種植歷史長達3000多年，目前盛產(chǎn)于福建、江西、湖北、湖南和浙江等省份，尤其以福建建寧出產(chǎn)的白蓮(建蓮)和湖南洞庭湖地區(qū)出產(chǎn)的紅蓮(湘蓮)聞名遐爾于海內(nèi)外。
荷葉(Nelumbo nucifera leaf)為蓮的干燥葉，又名蓮葉或藕葉，入選中國衛(wèi)生部“既是食品，又是藥品”的植物名錄，民間廣泛用作食物和藥物，臨床醫(yī)學上也常以粗加工的復方制劑用于肥胖癥和高脂血癥的治療，療效明顯，但較少對諸如荷葉黃酮和荷葉生物堿等有效部位群進行深入研究。
傳統(tǒng)醫(yī)學認為，荷葉性味寒，具有清暑利濕、減肥降脂、清心去熱、止血利水的活性，可開發(fā)制成袋泡茶、飲料、沖劑、膠囊等保健食品?，F(xiàn)代藥理研究表明，荷葉所含的黃酮和生物堿等成分的生物活性較高，為荷葉中主要的藥用活性成分，含量可分別達1.5％和0.3％。荷葉黃酮和荷葉生物堿具有明顯的減肥、降脂、抑菌、抗病毒、解毒、戒毒、抗氧化等功能[孔文琦等，《中藥研究與信息》，2005，7(6)22-24]。這些研究成果將為荷葉在食品、藥品中的應用提供科學依據(jù)。研究荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法與用途，對于荷葉的精深加工和系列產(chǎn)品開發(fā)具有一定的指導意義。
目前，提取荷葉黃酮的主要方法有水提取法[陳海光等，《食品科學》，2002，23(1)69-72]、水提取后采用大孔樹脂富集吸附法[蔡為榮等，《江蘇食品與發(fā)酵》，2002，24(4)1-5；趙駿等，《中藥材》，2005，28(9)832-834]等。提取荷葉生物堿常用的方法有酸性水溶液提取法[陳海光等，《食品與機械》，2001，17(5)16-17；蔣益虹，《浙江大學學報(農(nóng)業(yè)與生命科學版)》2004，30(5)519-523；]、酸性水提取后采用大孔樹脂富集吸附法[趙駿等，《中藥材》，2003，26(9)669-670]。
由于荷葉化學成分復雜，既含有易溶于乙醇等極性溶劑的生物堿、黃酮等醇溶性藥用活性成分，也含有易溶于水或緩沖液的蛋白質(zhì)、酶、多糖等水溶性生物大分子雜質(zhì)和鞣質(zhì)、有機酸、低聚糖等水溶性生物小分子雜質(zhì)，甚至還含有易溶于石油醚等非極性溶劑的葉綠素、脂類、樹膠等脂溶性雜質(zhì)成分。
采用水提取方法制備的荷葉提取物，雖然含有荷葉生物堿和荷葉黃酮等主要藥用活性成分，但是也有大量的蛋白質(zhì)、多糖、鞣質(zhì)、葉綠素和有機酸等雜質(zhì)成分存在，產(chǎn)品明顯存在易吸濕、保存困難、生物堿和黃酮的純度不高、藥效不明顯、產(chǎn)品的品質(zhì)和市場競爭力不足等缺陷。
水提取后采用大孔樹脂富集吸附法，雖然有助于荷葉提取物中生物堿和黃酮的純度提高，但是由于荷葉提取物中尚存的蛋白質(zhì)、多糖以及其它生物大分子雜質(zhì)，將嚴重影響大孔吸附樹脂對荷葉生物堿和荷葉黃酮的分離純化效率和單位樹脂飽和吸附量，甚至導致大孔吸附樹脂的不可再生，將嚴重影響大孔吸附樹脂的使用壽命，導致荷葉提取物產(chǎn)品收率較低、制備成本居高不下。
由于聚酰胺對富含羥基的黃酮類物質(zhì)具有選擇性吸附的作用，且其吸附能力取決于被吸附物質(zhì)羥基的多少，故已經(jīng)成為黃酮類物質(zhì)良好的吸附劑。利用聚酰胺分離純化黃酮和生物堿，能獲得普通大孔樹脂無法達到的產(chǎn)物純度。
本發(fā)明利用聚酰胺對黃酮的特異性吸附特點，進行荷葉黃酮和荷葉生物堿的進一步分離純化，分別制備高純度的荷葉黃酮和荷葉生物堿產(chǎn)品，具有明顯的創(chuàng)新性，可提供一種設備簡單、分離純化效果好、產(chǎn)品收率高、生產(chǎn)成本低的荷葉黃酮和荷葉生物堿制備方法，國內(nèi)外未見文獻報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一在于提供一種低成本、高收率、高品質(zhì)、適合于工業(yè)生產(chǎn)的荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法。
本發(fā)明的目的之二在于將所制備的荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物、樹脂分離純化后的荷葉提取物、聚酰胺分離純化后的荷葉黃酮和荷葉生物堿，進一步制成臨床上可適用的任何一種具有減肥、降血脂、抑菌、抗病毒或者抗氧化作用的口服藥劑，如膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
本發(fā)明的采用聚酰胺分離純化的荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法是這樣實現(xiàn)的包括荷葉粗提物的極性有機溶劑提取或水提取步驟，荷葉粗提物的膜分離除雜步驟，荷葉粗提物的大孔吸附樹脂分離純化步驟，其特征在于以荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物或者樹脂分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，然后采用聚酰胺富集吸附荷葉黃酮，未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉生物堿產(chǎn)品。對上述步驟中吸附在聚酰胺上的荷葉黃酮進行回收，先用水洗去極性雜質(zhì)和色素，再用極性有機溶劑水溶液洗脫荷葉黃酮，洗脫液經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉黃酮產(chǎn)品。
所述的極性有機溶劑提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～20倍荷葉干重(W/W)的30～65％的極性有機溶劑水溶液，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。
所述的水提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～30倍荷葉干重(W/W)的水，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。
所述的膜分離除雜方法是以極性有機溶劑提取或水提取的荷葉粗提物為原料，加水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下經(jīng)膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。
所述的大孔吸附樹脂分離純化方法是以荷葉粗提物或者膜分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用大孔吸附樹脂富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4～8倍樹脂量的30～60％的極性有機溶劑水溶液以1～3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成樹脂分離純化后的荷葉提取物。
所述的聚酰胺分離純化荷葉生物堿的制備方法是以荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物或者樹脂分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷葉黃酮，未被聚酰胺吸附部分，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉生物堿產(chǎn)品。
所述的聚酰胺分離純化荷葉黃酮的制備方法是以荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物或者樹脂分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷葉黃酮，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用6～10倍樹脂量的40～70％終濃度的極性有機溶劑水溶液以1～3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉黃酮產(chǎn)品。
上述極性有機溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮中的一種或幾種混合溶劑，優(yōu)先選用甲醇或丙酮。這主要基于甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮等極性有機溶劑的提取效果相當，但相對于其它極性有機溶劑而言，甲醇或丙酮的沸點更低、能耗更小，能顯著降低產(chǎn)品的制備成本。
上述膜分離除雜過程可選用10000截留分子量～0.22μm膜孔徑的分離膜。
上述膜分離除雜過程的分離膜材料可以是無機陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜中的一種或幾種混合膜材料，優(yōu)先選用聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
上述大孔吸附樹脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、D101、DK110、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818中的一種或幾種混合樹脂，優(yōu)先選用HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818。
本發(fā)明制備工藝的主要優(yōu)點之一在于組合采用極性有機溶劑提取、膜分離除雜、大孔吸附樹脂富集和聚酰胺分離純化的方法，不僅能工業(yè)化生產(chǎn)不同純度與級別的荷葉提取物，而且能進一步工業(yè)化生產(chǎn)較高純度與級別的荷葉黃酮和荷葉生物堿產(chǎn)品，用于后續(xù)的減肥、降脂功能產(chǎn)品的制備，更能真正地安全、簡便、合理、經(jīng)濟地實現(xiàn)荷葉的全組分綜合利用和系列產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)，充分體現(xiàn)出綠色化學生產(chǎn)的理念和循環(huán)經(jīng)濟的策略，具有理論新穎、技術合理、操作安全、工藝簡便、經(jīng)濟可行、環(huán)境友好等優(yōu)點。
本發(fā)明制備工藝的主要優(yōu)點之二在于采用中藥現(xiàn)代化生產(chǎn)技術提取荷葉主要藥用活性成分制成國際通行的各種純度與級別的荷葉提取物，以及較高純度與級別的荷葉黃酮和荷葉生物堿產(chǎn)品，具有現(xiàn)代中藥產(chǎn)品的“三高”、“三小”和“三便”等優(yōu)點，能適應和滿足現(xiàn)代中醫(yī)臨床用藥需求，符合國家倡導的中藥現(xiàn)代化及國際化的產(chǎn)業(yè)政策。
具體實施例方式
本發(fā)明采用聚酰胺分離純化的荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法，包括荷葉粗提物的極性有機溶劑提取或水提取步驟，荷葉粗提物的膜分離除雜步驟，荷葉粗提物的大孔吸附樹脂分離純化步驟，其特征在于以荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物或者樹脂分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，然后采用聚酰胺富集吸附荷葉黃酮，未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉生物堿產(chǎn)品。對上述步驟中吸附在聚酰胺上的荷葉黃酮進行回收，先用水洗去極性雜質(zhì)和色素，再用極性有機溶劑水溶液洗脫荷葉黃酮，洗脫液經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉黃酮產(chǎn)品。
極性有機溶劑提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～20倍荷葉干重(W/W)的30～65％的極性有機溶劑水溶液，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。
上述極性有機溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮中的一種或幾種混合溶劑，優(yōu)先選用甲醇或丙酮。這主要基于甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮等極性有機溶劑的提取效果相當，但相對于其它極性有機溶劑而言，甲醇或丙酮的沸點更低、能耗更小，能顯著降低產(chǎn)品的制備成本。
水提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～30倍荷葉干重(W/W)的水，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。
膜分離除雜方法是以極性有機溶劑提取或水提取的荷葉粗提物為原料，加水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下經(jīng)膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。
上述膜分離除雜過程可選用10000截留分子量～0.22μm膜孔徑的分離膜。
上述膜分離除雜過程的分離膜材料可以是無機陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜中的一種或幾種混合膜材料，優(yōu)先選用聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
大孔吸附樹脂分離純化方法是以荷葉粗提物或者膜分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用大孔吸附樹脂富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4～8倍樹脂量的30～60％的極性有機溶劑水溶液以1～3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成樹脂分離純化后的荷葉提取物。
上述大孔吸附樹脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、D101、DK110、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818中的一種或幾種混合樹脂，優(yōu)先選用HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818。
聚酰胺分離純化荷葉生物堿的制備方法是以荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物或者樹脂分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷葉黃酮，未被聚酰胺吸附部分，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉生物堿產(chǎn)品。
聚酰胺分離純化荷葉黃酮的制備方法是以荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物或者樹脂分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷葉黃酮，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用6～10倍樹脂量的40～70％終濃度的極性有機溶劑水溶液以1～3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉黃酮產(chǎn)品。
本發(fā)明所述的荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物、樹脂分離純化后的荷葉提取物、聚酰胺分離純化后的荷葉黃酮和荷葉生物堿的用途是可按照常規(guī)的制劑方法制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑。所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
本發(fā)明各制備物的理化參數(shù)測定方法如下(1)荷葉黃酮的含量測定采用高效液相色譜法，以槲皮素為對照。色譜條件色譜柱選用Waters Nova-Pak C18柱(Φ3.9×15mm，4μm)，預柱C18(3.9mm×15mm)，流動相為甲醇∶0.2％磷酸水溶液(45∶55)，流速1.0mL/min，柱溫34℃，檢測波長365nm，進樣量20μL。樣品的測定取待測液4mL(或待測物粉末0.1g，溶于4mL溶劑中)，加甲醇6mL及12mol/L鹽酸1mL，搖勻后置80℃水浴回流水解1h。而后將水解液轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，用50％甲醇稀釋至刻度，作為HPLC待測液。HPLC測定過程中采用外標法定量，以槲皮素為對照，計算水解后各苷元的含量，統(tǒng)一用因子2.51計算荷葉黃酮含量。
(2)荷葉黃酮的定性判斷采用鋁鹽比色法，以蘆丁為對照。將試樣溶液稀釋到一定的倍數(shù)，取1mL到試管中，加入0.1mL 5％NaNO2溶液，搖勻，5min后加入0.1mL 10％Al(NO3)3溶液，6min后再加入1mL 1mol/L NaOH溶液，混勻，10min后若產(chǎn)生紅色或紫紅色表明存在荷葉黃酮，以試劑作為空白。
(3)荷葉生物堿的含量測定采用高效液相色譜法，以荷葉堿為對照。色譜條件為色譜柱選用Waters Nova-Pak C18柱(Φ3.9×15mm，4μm)，預柱C18(3.9mm×15mm)，流動相為甲醇∶H2O∶二乙胺(75∶25∶0.01，pH值9.0～10.5)，流速1.0mL/min，柱溫34℃，檢測波長270nm，進樣量20μL。
(4)荷葉生物堿的的定性判斷采用碘-碘化鉀比色法，以荷葉堿為對照。將試樣溶液稀釋到一定的倍數(shù)，取1mL到試管中，加入1～2滴碘-碘化鉀試劑溶液，搖勻，放置5min，若產(chǎn)生棕色或褐色沉淀表明存在荷葉生物堿，以試劑作為空白。
(5)多糖含量的測定采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖或D-半乳糖為對照。
(6)蛋白質(zhì)含量的測定采用FoLin-酚法測定，以小牛血清白蛋白為對照。
(7)含水量采用快速水分測定儀測定。
本發(fā)明口服藥劑制備方法如下(1)噴霧干燥條件為進料液濃度10～20波美度(60℃)，PG-5型噴霧干燥機進口溫度160～250℃，出口溫度60～110℃，離心轉(zhuǎn)頭工作壓力1.6～3.0kgf/cm2。
(2)冷凍干燥條件為干燥溫度-10～-60℃，升華溫度35～70℃，壓力0.05～0.18mbar，干燥時間20～40h。
(3)真空干燥條件干燥溫度45～75℃，壓力-0.06～-0.095MPa，干燥時間15～50h。
(4)膠囊劑制備按照常規(guī)的制劑方法，選擇1號硬膠囊，每粒內(nèi)容物裝填量約0.30g，于NJP-1000B型全自動硬膠囊充填機上進行藥粉充填，于JPB-25II B型平板式自動泡罩包裝機上進行鋁箔泡罩包裝，可制成臨床適用的荷葉提取物口服膠囊劑。
(5)顆粒劑制備按照常規(guī)的制劑方法，于SHK-220型高效濕法混合制粒機上造粒，于JXD-30A型顆粒自動包裝機上進行包裝，可制成臨床適用的荷葉提取物口服顆粒劑。
(6)滴丸劑制備按照常規(guī)的制劑方法，調(diào)整TZDW-1型通用滴丸機的溫度控制系統(tǒng)，使滴頭溫度保持在50～85℃，液體石蠟等冷卻劑的溫度保持在-4～40℃；取荷葉提取物及其1～9倍重量的甘油明膠，置于加熱器中，在攪拌條件下加熱制成混懸液，將其置于滴丸機的滴頭罐內(nèi)，通過滴頭滴入冷卻劑中，由滴丸機出口將收縮成型的滴丸取出，去掉表面的冷卻劑，干燥成荷葉提取物口服滴丸劑。
本發(fā)明制備方法的實施例陳述如下實施例1以福建省建寧產(chǎn)荷葉為原料，將鮮荷葉水洗、干燥(風干、烘干或曬干均可)、粉碎、過16～20目篩得荷葉粉末，將3.0kg荷葉粉末放入提取罐中，用荷葉粉末10倍干重(W/W)的40％甲醇水溶液，于63℃條件下提取3次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的提取率為96.7％，荷葉生物堿的提取率為95.9％。
接著，先將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05，然后采用截留分子量為10000聚砜膜，在1.0MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮回收率為95.2％，荷葉生物堿回收率為95.6％，蛋白質(zhì)去除率為96.1％，多糖去除率為96.9％。
對膜分離純化后的荷葉提取物，采用HZ806大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用8倍樹脂量的60％乙醇水溶液，以3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，回收溶劑后即得樹脂分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的回收率96.2％，荷葉生物堿的回收率95.8％。
加適量水，將樹脂分離純化后的荷葉提取物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.19，然后采用200目聚酰胺富集吸附荷葉黃酮至飽和，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用10倍樹脂量的60％乙醇水溶液以3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，真空濃縮回收溶劑，經(jīng)噴霧干燥后即得荷葉黃酮產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉黃酮產(chǎn)品含水量4.6％，荷葉黃酮純度64.0％、荷葉黃酮總收率68.8％。
上述步驟中未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)真空濃縮回收溶劑后，進一步采用噴霧干燥處理后即得荷葉生物堿產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉生物堿產(chǎn)品含水量3.8％，荷葉生物堿純度85.5％、荷葉生物堿總收率78.5％。
實施例2將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末20倍干重(W/W)的30％甲醇水溶液，于50℃條件下提取2次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的提取率為93.4％，荷葉生物堿的提取率為92.3％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.18，然后采用截留分子量為60000的聚偏氟乙烯膜，在0.6MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮回收率為95.8％，荷葉生物堿回收率為95.9％，蛋白質(zhì)去除率為94.6％，多糖去除率為96.2％。
對膜分離純化后的荷葉提取物，采用HZ801大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用6倍樹脂量的45％乙醇水溶液以1倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，回收溶劑后即得樹脂分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的回收率97.2％，荷葉生物堿的回收率98.3％。
加適量水，將樹脂分離純化后的荷葉提取物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.13，然后采用120目聚酰胺富集吸附荷葉黃酮至飽和，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用6倍樹脂量的50％乙醇水溶液以1倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，真空濃縮回收溶劑，經(jīng)冷凍干燥后即得荷葉黃酮產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉黃酮產(chǎn)品含水量5.9％，荷葉黃酮純度63.7％、荷葉黃酮總收率64.1％。
上述步驟中未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)真空濃縮回收溶劑后，進一步采用冷凍干燥處理后即得荷葉生物堿產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉生物堿產(chǎn)品含水量5.8％，荷葉生物堿純度84.1％、荷葉生物堿總收率78.7％。
實施例3將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末17倍干重(W/W)的65％甲醇水溶液，于80℃條件下回流提取1小時，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的提取率為92.7％，荷葉生物堿的提取率為91.2％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.30，然后采用膜孔徑為0.22μm的無機陶瓷膜，在0.2MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖等大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮回收率為96.2％，荷葉生物堿的回收率為96.4％，蛋白質(zhì)去除率為93.1％，多糖去除率為95.4％。
對膜分離純化后的荷葉提取物，采用HZ816大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用8倍樹脂量的30％乙醇水溶液以2倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，回收溶劑后即得樹脂分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的回收率95.4％，荷葉生物堿的回收率95.9％。
加適量水，將樹脂分離純化后的荷葉提取物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.12，然后采用60目聚酰胺富集吸附荷葉黃酮至飽和，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用9倍樹脂量的40％終濃度的乙醇水溶液以2倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，真空濃縮回收溶劑，經(jīng)真空干燥后即得荷葉黃酮產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉黃酮產(chǎn)品含水量5.1％，荷葉黃酮純度63.1％、荷葉黃酮總收率64.4％。
上述步驟中未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)真空濃縮回收溶劑后，進一步采用真空干燥方式處理后即得荷葉生物堿產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉生物堿產(chǎn)品含水量4.2％，荷葉生物堿純度85.0％、荷葉生物堿總收率79.3％。
實施例4以福建省建寧產(chǎn)荷葉為原料，將鮮荷葉水洗、干燥(風干、烘干或曬干均可)、粉碎、過16～20目篩得荷葉粉末，將3.0kg荷葉粉末放入提取罐中，用荷葉粉末20倍干重(W/W)的65％乙醇水溶液，于80℃條件下提取1小時，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的提取率為92.1％，荷葉生物堿的提取率為90.4％。
先將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.15，然后采用截留分子量為80000聚偏氟乙烯膜，在0.4MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮回收率為96.0％，荷葉生物堿回收率為96.1％，蛋白質(zhì)去除率為94.1％，多糖去除率為95.8％。
對膜分離純化后的荷葉提取物，采用D101大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4倍樹脂量的40％甲醇水溶液以2倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，回收溶劑后即得樹脂分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的回收率96.3％，荷葉生物堿的回收率96.4％。
加適量水，將樹脂分離純化后的荷葉提取物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.14，然后采用120目聚酰胺富集吸附荷葉黃酮至飽和，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用8倍樹脂量的45％甲醇水溶液以2倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，真空濃縮回收溶劑，經(jīng)冷凍干燥后即得荷葉黃酮產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉黃酮產(chǎn)品含水量6.1％，荷葉黃酮純度63.5％、荷葉黃酮總收率67.7％。
上述步驟中未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)真空濃縮回收溶劑后，進一步采用冷凍干燥方式處理后即得荷葉生物堿產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉生物堿產(chǎn)品含水量5.8％，荷葉生物堿純度84.2％、荷葉生物堿總收率82.0％。
實施例5將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末30倍干重(W/W)的自來水，于50℃條件下提取2次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的提取率為92.1％，荷葉生物堿的提取率為90.5％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.30，然后采用膜孔徑為0.22μm的無機陶瓷膜，在0.2MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮回收率為96.3％，荷葉生物堿的回收率為96.2％，蛋白質(zhì)去除率為93.4％，多糖去除率為95.3％。
對膜分離純化后的荷葉提取物，采用DK110大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用6倍樹脂量的30％甲醇水溶液以3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，回收溶劑后即得樹脂分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的回收率93.9％，荷葉生物堿的回收率94.7％。
加適量水，將樹脂分離純化后的荷葉提取物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.13，然后采用30目聚酰胺富集吸附荷葉黃酮至飽和，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用10倍樹脂量的40％甲醇水溶液以3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，真空濃縮回收溶劑，經(jīng)真空干燥后即得荷葉黃酮產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉黃酮產(chǎn)品含水量4.9％，荷葉黃酮純度63.4％、荷葉黃酮總收率64.5％。
上述步驟中未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)真空濃縮回收溶劑后，進一步采用真空干燥方式處理后即得荷葉生物堿產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉生物堿產(chǎn)品含水量4.8％，荷葉生物堿純度84.9％、荷葉生物堿總收率78.3％。
實施例6將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末10倍干重(W/W)的38％乙醇水溶液，于50℃條件下提取3次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的提取率為94.7％，荷葉生物堿的提取率為95.1％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05，然后采用截留分子量為20000的聚砜膜，在0.8MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮回收率為95.4％，荷葉生物堿回收率為95.9％，蛋白質(zhì)去除率為94.8％，多糖去除率為96.4％。
對膜分離純化后的荷葉提取物，采用AB-8大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用6倍樹脂量的60％甲醇水溶液以1倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，回收溶劑后即得樹脂分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的回收率95.7％，荷葉生物堿的回收率96.4％。
加適量水，將樹脂分離純化后的荷葉提取物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.14，然后采用200目聚酰胺富集吸附荷葉黃酮至飽和，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用6倍樹脂量的60％甲醇水溶液以1倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，真空濃縮回收溶劑，經(jīng)噴霧干燥后即得荷葉黃酮產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉黃酮產(chǎn)品含水量3.6％，荷葉黃酮純度63.4％、荷葉黃酮總收率70.3％。
上述步驟中未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)真空濃縮回收溶劑后，進一步采用噴霧干燥方式處理后即得荷葉生物堿產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉生物堿產(chǎn)品含水量3.4％，荷葉生物堿純度85.4％、荷葉生物堿總收率78.7％。
實施例7以福建省建寧產(chǎn)荷葉為原料，將鮮荷葉水洗、干燥(風干、烘干或曬干均可)、粉碎、過16～20目篩得荷葉粉末，將3.0kg荷葉粉末放入提取罐中，用荷葉粉末14倍干重(W/W)的30％丙酮水溶液，于50℃條件下提取3次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的提取率為94.6％，荷葉生物堿的提取率為93.8％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.30，然后采用膜孔徑為0.22μm的聚偏氟乙烯膜，在0.3MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮回收率為96.2％，荷葉生物堿回收率為96.3％，蛋白質(zhì)去除率為93.6％，多糖去除率為95.1％。
對膜分離純化后的荷葉提取物，采用D113大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4倍樹脂量的30％丙酮水溶液以1倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，回收溶劑后即得樹脂分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的回收率95.8％，荷葉生物堿的回收率96.1％。
加適量水，將樹脂分離純化后的荷葉提取物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.13，然后采用30目聚酰胺富集吸附荷葉黃酮至飽和，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用6倍樹脂量的40％丙酮水溶液以1倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，真空濃縮回收溶劑，經(jīng)真空干燥后即得荷葉黃酮產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉黃酮產(chǎn)品含水量5.2％，荷葉黃酮純度63.1％、荷葉黃酮總收率64.0％。
上述步驟中未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)真空濃縮回收溶劑后，進一步采用真空干燥方式處理后即得荷葉生物堿產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉生物堿產(chǎn)品含水量4.5％，荷葉生物堿純度84.7％、荷葉生物堿總收率77.5％。
實施例8將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末10倍干重(W/W)的65％丙酮水溶液，于80℃條件下回流提取2次，每次1小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的提取率為93.2％，荷葉生物堿的提取率為92.1％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.21，然后采用截留分子量為50000的聚砜膜，在0.5MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮回收率為95.2％，荷葉生物堿回收率為96.2％，蛋白質(zhì)去除率為95.0％，多糖去除率為96.1％。
對膜分離純化后的荷葉提取物，采用HZ802大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4倍樹脂量的60％丙酮水溶液以2倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，回收溶劑后即得樹脂分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的回收率93.6％，荷葉生物堿的回收率94.3％。
加適量水，將樹脂分離純化后的荷葉提取物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.13，然后采用200目聚酰胺富集吸附荷葉黃酮至飽和，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用8倍樹脂量的60％丙酮水溶液以2倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，真空濃縮回收溶劑，經(jīng)噴霧干燥后即得荷葉黃酮產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉黃酮產(chǎn)品含水量3.9％，荷葉黃酮純度63.6％、荷葉黃酮總收率68.4％。
上述步驟中未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)真空濃縮回收溶劑后，進一步采用噴霧干燥處理后即得荷葉生物堿產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉生物堿產(chǎn)品含水量3.5％，荷葉生物堿純度85.8％、荷葉生物堿總收率77.0％。
實施例9將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末20倍干重(W/W)的自來水，于80℃條件下提取2小時，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的提取率為90.8％，荷葉生物堿的提取率為90.1％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.16，然后采用截留分子量為100000的無機陶瓷膜，在0.3MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮回收率為96.0％，荷葉生物堿回收率為96.2％，蛋白質(zhì)去除率為94.1％，多糖去除率為95.7％。
對膜分離純化后的荷葉提取物，采用HZ803大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用8倍樹脂量的45％丙酮水溶液以3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，回收溶劑后即得樹脂分離純化后的荷葉提取物。經(jīng)測定，荷葉黃酮的回收率93.8％，荷葉生物堿的回收率94.2％。
加適量水，將樹脂分離純化后的荷葉提取物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.15，然后采用120目聚酰胺富集吸附荷葉黃酮至飽和，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用10倍樹脂量的50％丙酮水溶液以3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，真空濃縮回收溶劑，經(jīng)冷凍干燥后即得荷葉黃酮產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉黃酮產(chǎn)品含水量5.9％，荷葉黃酮純度63.8％、荷葉黃酮總收率64.2％。
上述步驟中未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)真空濃縮回收溶劑后，進一步采用噴霧干燥、冷凍干燥、氣流干燥、微波干燥或真空干燥方式處理后即得荷葉生物堿產(chǎn)品。經(jīng)測定，荷葉生物堿產(chǎn)品含水量4.7％，荷葉生物堿純度84.6％、荷葉生物堿總收率76.0％。
關于本發(fā)明荷葉提取物用途的說明將實施例1制備的荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物、樹脂分離純化后的荷葉提取物、荷葉黃酮和荷葉生物堿分別進行噴霧干燥，然后直接充填制成臨床使用的口服減肥降脂膠囊劑，進行動物藥效學評價。
1材料雌性小鼠(體重14～16g)，由福建醫(yī)科大學動物中心提供?；A飼料，購自福建醫(yī)科大學動物中心。高脂飼料(基礎飼料92.5％、食鹽2％、蛋黃粉2％、豬油3％、膽固醇0.5％)，本所自制。總膽固醇(TCH)試劑盒(CHOD-PAP法)，浙江東歐生物工程有限公司。甘油三酯(TG)試劑盒(GPO-PAP法)，浙江東歐生物工程有限公司。丙二醛(MDA)試劑盒(TBA法)，南京建成生物工程研究所。膽固醇，上海試一化學試劑有限公司。
2實驗方法將70只小鼠以基礎飼料飼養(yǎng)5天后隨機分為A、B、C、D、E、F、G七組，每組10只，小鼠自由進食和飲水。其中給藥組A、B、C、D和E分別為荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物、樹脂分離純化后的荷葉提取物、聚酰胺分離純化后的荷葉黃酮和荷葉生物堿，F(xiàn)組作為高脂陽性對照組，G組作為正常陰性對照組。A～F組采用高脂飼料造模，G組以基礎飼料飼養(yǎng)，各組小鼠均在飼養(yǎng)7天后開始給藥，各藥物均配成1g/mL，給藥量均為0.6ml/只·天，其中F組和G組改成生理鹽水。分別給藥42天，禁食12h后摘眼球取血并解剖，進行各項生化指標的測定。TCH、TG和MDA均用相應的試劑盒并嚴格按照說明書測定。數(shù)據(jù)用SPSS軟件進行，采用Independent-Sample T Test方法對各組數(shù)據(jù)進行均值、標準誤計算以及顯著性檢驗。
3降脂動物藥效學結(jié)果不同提取物對小鼠血漿總膽固醇、甘油三酯和MDA含量的影響見表1。
給藥42天后，高脂陽性對照組小鼠血漿的膽固醇比正常陰性對照組顯著提高了96.7％，說明本實驗條件下小鼠高膽固醇模型已建模成功。同時發(fā)現(xiàn)，給藥組A、B、C、D和E的小鼠血漿膽固醇含量均顯著低于高脂陽性對照組，以A組效果最好，膽固醇含量顯著減少了34.3％，B、C、D和E組膽固醇含量也顯著減少25％以上，說明不同純度的荷葉黃酮和荷葉生物堿樣品均有明顯的降血脂、降膽固醇效果。
表1不同純度的荷葉黃酮和荷葉生物堿對小鼠血漿總膽固醇、甘油三酯和丙二醛含量(X±SD)的影響n＝10
A、B、C、D和E給藥組分別為荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物、樹脂分離純化后的荷葉提取物、荷葉黃酮和荷葉生物堿樣品；F高脂陽性對照組；G正常陰性對照組。與高脂陽性對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
以上實施例旨在進一步舉例描述本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。
本發(fā)明構(gòu)思新穎，工藝簡單，提取效率高，生產(chǎn)成本低，藥效明顯，而且所制的荷葉黃酮和荷葉生物堿，明顯具有現(xiàn)代中藥產(chǎn)品的“三高”、“三小”和“三便”的優(yōu)點，能適應和滿足現(xiàn)代中醫(yī)臨床用藥需求，符合國家倡導的中藥現(xiàn)代化及國際化的產(chǎn)業(yè)政策，具有較大的推廣價值，可產(chǎn)生顯著的經(jīng)濟效益和社會效益。
權利要求
1.一種采用聚酰胺分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法，包括荷葉粗提物的極性有機溶劑提取或水提取步驟，荷葉粗提物的膜分離除雜步驟，荷葉粗提物的大孔吸附樹脂分離純化步驟，其特征在于以荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物或者樹脂分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，然后采用聚酰胺富集吸附荷葉黃酮，未被聚酰胺吸附部分，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉生物堿產(chǎn)品。
2.根據(jù)權利要求1所述的采用聚酰胺分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法，其特征在于，進一步制取荷葉黃酮的方法是對上述步驟中吸附在聚酰胺上的荷葉黃酮進行回收，先用水洗去極性雜質(zhì)和色素，再用極性有機溶劑水溶液洗脫荷葉黃酮，洗脫液經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉黃酮產(chǎn)品。
3.根據(jù)權利要求1所述的采用聚酰胺分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法，其特征在于所述的極性有機溶劑提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～20倍荷葉干重(W/W)的30～65％的極性有機溶劑水溶液，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。所述的水提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～30倍荷葉干重(W/W)的水，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。所述的膜分離除雜方法是以極性有機溶劑提取或水提取的荷葉粗提物為原料，加水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下經(jīng)膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。所述的大孔吸附樹脂分離純化方法是以荷葉粗提物或者膜分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用大孔吸附樹脂富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4～8倍樹脂量的30～60％的極性有機溶劑水溶液以1～3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成樹脂分離純化后的荷葉提取物。所述的聚酰胺分離純化荷葉生物堿的制備方法是以荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物或者樹脂分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷葉黃酮，未被聚酰胺吸附部分，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉生物堿產(chǎn)品。
4.根據(jù)權利要求2所述的采用聚酰胺分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法，其特征在于所述的極性有機溶劑提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～20倍荷葉干重(W/W)的30～65％的極性有機溶劑水溶液，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。所述的水提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～30倍荷葉干重(W/W)的水，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。所述的膜分離除雜方法是以極性有機溶劑提取或水提取的荷葉粗提物為原料，加水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下經(jīng)膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的荷葉提取物。所述的大孔吸附樹脂分離純化方法是以荷葉粗提物或者膜分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用大孔吸附樹脂富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4～8倍樹脂量的30～60％的極性有機溶劑水溶液以1～3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標物質(zhì)，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成樹脂分離純化后的荷葉提取物。所述的聚酰胺分離純化荷葉黃酮的制備方法是以荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物或者樹脂分離純化后的荷葉提取物為原料，加適量水，將其攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.1～1.2，然后采用聚酰胺富集吸附荷葉黃酮，先用不少于4倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)和色素，再用6～10倍樹脂量的40～70％終濃度的極性有機溶劑水溶液以1～3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫荷葉黃酮，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉黃酮產(chǎn)品。
5.根據(jù)權利要求1、2、3或4所述的荷葉提取物的制備方法，其特征在于所述極性有機溶劑是甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮中的一種或幾種混合溶劑，優(yōu)先選用甲醇或丙酮。
6.根據(jù)權利要求1、2、3或4所述的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，其特征在于膜分離除雜過程選用10000截留分子量～0.22μm膜孔徑的分離膜。
7.根據(jù)權利要求1、2、3或4所述的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，其特征在于膜分離除雜過程的分離膜材料可以是無機陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜中的一種或幾種混合膜材料，優(yōu)先選用聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
8.根據(jù)權利要求1、2、3或4所述的采用大孔吸附樹脂分離純化的荷葉提取物的制備，其特征在于大孔吸附樹脂可以是HZ801、AB-8、HZ806、D101、DK110、D113、HZ802、HZ803、HZ816、HZ818中的一種或幾種混合樹脂，優(yōu)先選用HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818。
9.一種如權利要求1、2、3或4所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途。
10.根據(jù)權利要求9所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途，其特征在于所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
11.根據(jù)權利要求5所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途。
12.根據(jù)權利要求11所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途，其特征在于所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
13.根據(jù)權利要求6所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途。
14.根據(jù)權利要求13所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途，其特征在于所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
15.根據(jù)權利要求7所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途。
16.根據(jù)權利要求15所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途，其特征在于所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
17.根據(jù)權利要求8所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途。
18.根據(jù)權利要求17所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途，其特征在于所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
全文摘要
本發(fā)明提供一種采用聚酰胺分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法與用途。包括聚酰胺分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法，其特征在于以荷葉粗提物、膜分離除雜的荷葉提取物或樹脂分離純化的荷葉提取物為原料，加水攪成懸浮液，聚酰胺吸附荷葉黃酮，未被吸附部分經(jīng)減壓回收溶劑真空濃縮成荷葉生物堿；吸附在聚酰胺上的荷葉黃酮用水洗去極性雜質(zhì)和色素并用極性有機溶劑水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)減壓回收溶劑真空濃縮成荷葉黃酮；該法所制荷葉粗提物、荷葉提取物、荷葉黃酮和荷葉生物堿有制備減肥、降脂、抑菌、抗病毒或抗氧化作用口服藥劑的用途。本發(fā)明構(gòu)思新穎，工藝簡單，提取效率高，能滿足現(xiàn)代中醫(yī)臨床用藥需求，具有較大推廣性。
文檔編號A61K36/62GK1923829SQ200610069039
公開日2007年3月7日 申請日期2006年9月21日 優(yōu)先權日2006年9月21日
發(fā)明者陳劍鋒, 陳浩, 郭養(yǎng)浩 申請人:福州大學