專(zhuān)利名稱(chēng)：用于治療局部缺血性損傷的4－[(2,4－二氯－5－甲氧苯基)氨基]－6－烷氧基－3－氰 ...的制作方法
背景技術(shù)：
在美國(guó)，中風(fēng)是導(dǎo)致死亡的第三大原因以及導(dǎo)致殘疾的主要原因，每年大約有750,000人發(fā)生中風(fēng)。這個(gè)數(shù)字中大約有80％為局部缺血性中風(fēng)，并且大約15-20％最主要是大腦出血性中風(fēng)。直至今天，被認(rèn)可有效治療急性局部缺血性腦梗塞的只有通過(guò)靜脈注射t-PA，即重組組織型纖維蛋白酶原激活劑的血栓溶解療法。該療法的有效性非常有限。它必須在癥狀出現(xiàn)后的三小時(shí)窗口期內(nèi)給藥，然而大部分患者實(shí)際上都在耽擱后才尋求和/或得到治療。另外，t-PA治療增加了引發(fā)腦內(nèi)出血，即一種潛在的破壞性并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。在用t-PA治療前必須排除出血的存在性，治療期間和治療后必須仔細(xì)維持和監(jiān)視血壓?，F(xiàn)在，沒(méi)有一種神經(jīng)保護(hù)性療法能有利的用于治療局部缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)或腦外傷。因此，非常需要治療中風(fēng)以及與血管滲透相關(guān)的其它疾病的新方法。
發(fā)明描述根據(jù)本發(fā)明提供了具有式(I)結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中X為N、CH；n為選自1-3的整數(shù)；和
R′和R獨(dú)立地為具有1至3個(gè)碳原子的烷基，需滿(mǎn)足的條件是當(dāng)n為1時(shí)，X不為N。
具有1至3個(gè)碳原子的烷基實(shí)例包括甲基、乙基、正丙基和異丙基。
在本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施例中，R′是甲基。
在本發(fā)明的其它優(yōu)選實(shí)施例中，R是甲基或乙基。
在本發(fā)明另外的其它優(yōu)選實(shí)施例中，n是2或3。
在本發(fā)明的一些優(yōu)選實(shí)施例中X優(yōu)選為N。
在另外的其它優(yōu)選實(shí)施例中X為CH。
藥學(xué)上可接受的鹽是衍生自所述有機(jī)和無(wú)機(jī)酸的那些鹽乙酸、乳酸、羧酸、檸檬酸、肉桂酸、酒石酸、琥珀酸、反丁烯二酸、馬來(lái)酸、丙二酸、扁桃酸、蘋(píng)果酸、草酸、丙酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、羥乙酸、丙酮酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、水楊酸、苯甲酸和類(lèi)似的已知可接受酸。
本發(fā)明的具體化合物包括4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-1-哌嗪基)-丙氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[3-(4-乙基-1-哌嗪基)丙氧基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-乙氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[2-(4-乙基-1-哌嗪基)乙氧基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)-甲氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[2-(1-甲基哌啶-4-基)-乙氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(1-甲基哌啶-4-基)-丙氧基]-喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[(1-乙基哌啶-4-基)甲氧基]-6-甲氧基喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)-丙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)-甲氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(4-乙基哌嗪-1-基)-丙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(1-甲基哌啶-4-基)-丙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-乙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基-6-乙氧基-7-[2-(1-甲基哌啶-4-基)-乙氧基]喹琳-3-腈；和4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-丙基-1-哌嗪基)-丙氧基]-3-氰基喹琳類(lèi)；及其藥學(xué)上可接受的鹽。
還提供了式I化合物的制備方法，其中X為CH和所有其它基團(tuán)如上定義，該方法包括(a)任選在堿如氫化鈉或鈉存在時(shí)，將下式的喹啉與下式的醇反應(yīng) 其中R′如本文中所定義的其中R和n如上所定義的，或(b)任選在適宜的堿如氫化鈉或鹽酸吡啶存在時(shí)，將下式的喹琳與下式的苯胺反應(yīng)
其中R，R′和n如上所定義的，和Y是氯或溴，或(c)將下式的化合物環(huán)化成所需的喹琳，優(yōu)選在脫水情況下，如在乙腈、丁腈、甲苯或二甲苯中，以醇或胺堿類(lèi)作為催化劑，在適宜的溫度如80-110℃下使用三氯氧磷進(jìn)行，正如US 06/496,191中所述。
本發(fā)明化合物如下圖所示制備。本發(fā)明化合物制得自(a)商業(yè)可得的原料(b)能以文獻(xiàn)中所述方法制得的已知原料或(c)本文流程和實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所述的新中間體。
反應(yīng)在適于所用試劑和材料以及適于有效轉(zhuǎn)化的溶劑中進(jìn)行。有機(jī)合成領(lǐng)域的技術(shù)人員可知，存在于分子上的各種官能團(tuán)必須與計(jì)劃進(jìn)行的化學(xué)轉(zhuǎn)化相符。當(dāng)沒(méi)有特別指定時(shí)，合成步驟的順序、保護(hù)基團(tuán)的選擇和脫保護(hù)條件對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。另外，在一些例子中，原料上的取代基可能與某些反應(yīng)條件不相容。對(duì)所給取代基作適當(dāng)?shù)南拗茖?duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。反應(yīng)在適宜的惰性氣氛下進(jìn)行。
式I化合物如流程1所述制備。在碘化鈉存在時(shí)，直接或在溶劑如乙二醇二甲醚中，通過(guò)處理7-(3-氯丙氧基)-4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳，1，與N-烷基哌嗪如N-甲基哌嗪、N-乙基哌嗪或N-丙基哌嗪易于制得式I化合物，其中R′是Me，X是N和n是3。這些化合物的制備在文獻(xiàn)[Boschelli，D.H.，等人的J.Med.Chem.，44，3965(2001)]中已有報(bào)道。
在碘化鈉存在時(shí)，直接或在溶劑如乙二醇二甲醚中，通過(guò)處理7-(2-氯乙氧基)-4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)-氨基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳，2，與N-甲基或N-乙基哌嗪易于制得式I的類(lèi)似化合物，其中R′是Me，X是N和n是2。這些化合物的制備在文獻(xiàn)[Ye，F(xiàn).，等人的221th National Meeting of the American Chemical Society，San Diego，California(April，2001)]中已有報(bào)道。
流程1 或者式I化合物能經(jīng)由7-氟-3-氰基喹琳中間體制得。該關(guān)鍵中間體的制備列于流程2中。能在溫度60至120℃，直接或在溶劑如甲苯的存在下，式3的苯胺類(lèi)能與二乙基(乙氧基亞甲基)-丙二酸鹽反應(yīng)。隨后優(yōu)選在溶劑系統(tǒng)如二苯醚和聯(lián)苯3∶1的混合物中，在溫度升至260℃時(shí)，加熱環(huán)化得到式4化合物。優(yōu)選在堿性條件，如氫氧化鈉在含醇溶劑如乙醇中水解酯基，并加熱得到式5化合物。在通入氨氣或優(yōu)選加入氨水溶液后，用活化劑如1，1-羧二咪唑處理完成酸基到伯酰胺的轉(zhuǎn)化。用試劑如氰尿酰氯在溶劑如N，N-二甲基甲酰胺中，對(duì)式6化合物的伯酰胺基進(jìn)行脫水得到式7化合物?；蛘撸跍囟?0至120℃，直接或在溶劑如甲苯中，用乙基(乙氧基亞甲基)氰基乙酸酯處理式3的苯胺類(lèi)。隨后優(yōu)選在溶劑系統(tǒng)如二苯醚和聯(lián)苯3∶1的混合物中，在溫度升至260℃時(shí)，加熱環(huán)化得到式7化合物。將7用氯化劑如三氯氧磷反應(yīng)得到式8化合物。在鹽酸吡啶的存在下，用2，4-二氯-5-甲氧基苯胺處理式8化合物，得到關(guān)鍵的7-氟中間體9。
流程2 流程3中圖示了另一條得到式8化合物的途徑，其中R′是Et。使用流程2中的條件，將4-芐氧基-3-對(duì)氟苯胺轉(zhuǎn)化為式10化合物。用苯甲硫醚和三氟乙酸除去芐基得到式11的6-羥基衍生物。用三苯膦、二乙基偶氮二羧酸酯酯和乙醇處理11得到式8化合物，其中R′是乙基。
流程3 如流程4中所示，在堿如鈉或氫化鈉存在下，將式9化合物與式12的醇反應(yīng)得到本發(fā)明的式I化合物。該反應(yīng)可以在溶劑如二甲基甲酰胺甲酰胺或二甲亞砜中，在最佳溫度120℃至140℃下進(jìn)行。
流程4 本發(fā)明的化合物經(jīng)一些標(biāo)準(zhǔn)的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)評(píng)估表明，本發(fā)明化合物能抑制Src激酶并能有效的預(yù)防血管滲透。
Src激酶試驗(yàn)用ELISA法測(cè)定Src(部分純化的酶制劑購(gòu)自UpstateBiotechnologies，Lake Placid，NY)酪氨酸激酶活性的抑制。具有含Tyr15的cdc2底物肽的Boehr inger Mannheim酪氨酸激酶試驗(yàn)試劑盒(Roche Diagnostics，Basel，Switzerland)能有效的用于試驗(yàn)。辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合的磷酸酪氨酸抗體經(jīng)由顯色反應(yīng)能有效的用于檢測(cè)磷酸肽。
反應(yīng)條件將測(cè)定當(dāng)時(shí)新鮮制得的各種化合物5μl，作為在10mMHEPES pH7.5，10％DMSO中的溶液加入反應(yīng)孔中。將35μl含Src、緩沖液和肽/牛血清白蛋白混合物的反應(yīng)混合物加入反應(yīng)孔中，在30℃孵化10分鐘(反應(yīng)緩沖液50mM Tris HCI pH7.5，10mMMgCI2，0.1mMEGTA，0.5mM Na3VO4)。加入10μl ATP(500uM)使反應(yīng)開(kāi)始，在30℃孵化1小時(shí)，加入20μl 0.5M EDTA使反應(yīng)停止。將具有磷酸肽的反應(yīng)混合物隨后移至涂有抗生蛋白鏈菌素的微孔板上，并使其結(jié)合20分鐘。將未結(jié)合的肽和反應(yīng)混合物潷析，并用PBS將板洗滌六次。將試劑盒中所提供的HRP結(jié)合的磷酸酪氨酸抗體與板孵化1小時(shí)，隨后潷析。用PBS將板洗滌六次。加入底物并測(cè)定405nm時(shí)的吸光度。
或者，使用基本上如所述的除Delfia法(Perkin-Elmer)之外的進(jìn)行試驗(yàn)，用銪結(jié)合的磷酸酪氨酸抗體代替HRP-結(jié)合的磷酸酪氨酸抗體，用Pierce Super block代替牛血清白蛋白，并在激酶反應(yīng)和抗體結(jié)合后洗滌6次。使用銪熒光檢測(cè)反應(yīng)程度。
經(jīng)測(cè)定的活性以％抑制表示，其通過(guò)下式計(jì)算(1-Abs/Abs(max))×100＝％抑制。使用多種濃度的試劑，能測(cè)定IC50(給出50％抑制的濃度)。如表1中所示，本發(fā)明化合物體外抑制了src激酶。不依賴(lài)貼壁的Src-轉(zhuǎn)化的成纖維細(xì)胞增殖試驗(yàn)以一種含有一個(gè)CMV啟動(dòng)子控制的v-Src/Huc-Src融合基因(其中人c-Src的催化區(qū)插入如下v-Src基因中v-Src催化區(qū)的位置)的質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的Rat2成纖維細(xì)胞克隆和質(zhì)粒構(gòu)建來(lái)自pSrcHis(Wendler和Boschelli，Oncogene 4231-236；1989)的Prague Cv-Src基因用Ncol和BamH1切除，用T4 DNA聚合酶處理，并克隆至已經(jīng)通過(guò)用T4 DNA聚合酶沖洗處理的pTRE(Clontech)的R1位。用含v-Src∷huc-Src融合片斷(如下)的Bg12-Xbal片斷代替編碼v-Src的羧基末端-250氨基酸的Bg12-Xbal片斷，來(lái)創(chuàng)建PrC v-Src∷hu c-Src融合。人c-Src的部分克隆通過(guò)使用寡核苷酸對(duì)5′-CGCCTGGCCAACGTCTGCCCCACGTCCAAGCCGCAGACTCAGGGCCTG-3′(SEQ ID NO1)和5′-CCAACACACAAGCAGGGAGCAGCTGGGCCTGCAGGTACTCGAAGGTGGGC-3′(SEQ ID NO2)從胸互補(bǔ)DNA文庫(kù)中擴(kuò)增，并被克隆至pCRScript(Stratagene)中。用這些寡核苷酸(多核細(xì)胞啟動(dòng)子v-src核苷酸734至人c-Src核苷酸742和人c-Src核苷酸1551至v-Src和人c-Src ORFs中的v-src核苷酸1543)擴(kuò)增克隆中人c-Src的催化區(qū)。通過(guò)PCR(198堿基對(duì)v-src 5′片斷5′-GTGCCTATTGCCTCTCCGTTTCTGAC-3′(SEQ ID NO3)(引發(fā)劑1)至5′-ACGTGGGGCAGACGTTGGCCAGGCG-3′)(SEQ ID NO4)(252堿基對(duì)3′v-src片斷，5′-CAGCTGCTCCCTGCTTGTGTGTTGG-3′(SEQ ID NO5)(v-src ORF中的殘基1543-1567)至5′-ATGAATTCTCTAGAGGAAGACGCCATCATATTCCAAGCAG-3′(SEQ ID NO6)來(lái)自v-src ATG的殘基1769-1794插入Xba1和EcoR1限制位點(diǎn)(引發(fā)劑4))擴(kuò)增兩個(gè)v-Src序列。使用引發(fā)劑1和4來(lái)產(chǎn)生三-片斷PCR擴(kuò)增，和v-Src∷人c-Src融合片段的融合，和擴(kuò)增自Prague C v-Src基因的5′和3′片斷，和來(lái)自Rous sarcoma病毒的3′非翻譯區(qū)。該反應(yīng)產(chǎn)生了結(jié)構(gòu)內(nèi)v-Src∷人c-Src的基因融合(v-Src的氨基酸殘基V244至氨基末端上的人c-Src的C 248和人c-Src的A517至v-Src的Q515)。該基因融合片斷編碼v-Src SH2區(qū)的羧基末端三分之一和通過(guò)v-Src羧基末端尾部側(cè)插入被融合至人c-Src催化區(qū)的SH2-催化區(qū)聯(lián)結(jié)子。從天然存在的臨近融合片斷5′端的Bg12位點(diǎn)和經(jīng)設(shè)計(jì)片斷的3′端上的Xbal位點(diǎn)來(lái)切除片斷，用以創(chuàng)建如上所述的全長(zhǎng)v-Src∷人-Src融合基因。通過(guò)測(cè)定DNA序列來(lái)確認(rèn)構(gòu)建體整體。使用類(lèi)似的方法克隆基因至其它表達(dá)質(zhì)粒如plRES(Clontech)中，以在研究中使用。
使用這些經(jīng)轉(zhuǎn)化的Rat2成纖維細(xì)胞測(cè)量src依賴(lài)性懸浮生長(zhǎng)。
第一天，超低聚簇板(Corning Costar，Acton，MA)接種10,000細(xì)胞/孔?；蛘?，將超低聚簇板(Costar 3474)用Sigmacote(Sigma，St.Louis，MO)處理，用70％乙醇沖洗，在罩中干燥后接種5000細(xì)胞。第二天，連續(xù)加入化合物從10mmol兩倍稀釋至0.009mmol，第五天加入MTS試劑(Promega，Madison，WI)，(100μl MTS/培養(yǎng)基混合物+100μl培養(yǎng)基已在細(xì)胞上)，并測(cè)定490nm的吸光度。結(jié)果分析如下，得到對(duì)于增殖(mmol單位)的IC50如下％抑制＝(吸光度490nm樣品-空白)/(吸光度490nm無(wú)化合物對(duì)照組-空白)×100％。如表1中所示，本發(fā)明化合物抑制了src依賴(lài)性細(xì)胞增殖。
表1.酶活性和細(xì)胞活性的抑制
在病灶局部缺血的暫時(shí)性模型中腹膜內(nèi)注射給藥實(shí)施例1提供了神經(jīng)保護(hù)在暫時(shí)性病灶局部缺血的鼠模型中測(cè)試實(shí)施例1。Wistar鼠在再灌注48小時(shí)后，用如Longa等人的Stroke 1989，2084中所記載的管腔內(nèi)縫合法進(jìn)行90分鐘的大腦中動(dòng)脈(MCA)阻塞。在局部缺血開(kāi)始發(fā)作之后的85分鐘，對(duì)動(dòng)物給藥實(shí)施例1的化合物(1.5，5，15或45mg/kg ip)。隨后再灌注，在48小時(shí)過(guò)后評(píng)估動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)缺陷和體重減輕/增加。在MCA阻塞后48小時(shí)處死，之后測(cè)量梗塞面積。5和45mg/kg劑量的實(shí)施例1顯著改善了中風(fēng)引起的神經(jīng)缺陷的康復(fù)。在實(shí)施例1的最高劑量時(shí)發(fā)現(xiàn)腦組織中梗塞面積的減少，但是僅在45mg/kg ip劑量時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。用實(shí)施例1進(jìn)行治療時(shí)發(fā)現(xiàn)動(dòng)物體重恢復(fù)的改善。
在病灶局部缺血的暫時(shí)性模型中靜脈注射給藥實(shí)施例1提供了神經(jīng)保護(hù)Wistar鼠在再灌注48小時(shí)后，用如Longa等人的Stroke1989，2084中所記載的管腔內(nèi)縫合法進(jìn)行90分鐘的大腦中動(dòng)脈(MCA)阻塞。在MCA阻塞30分鐘后，將在20mM檸檬酸鹽/0.85％鹽水，pH 3中的實(shí)施例1的靜脈制劑以3，10和30mg/kg(靜脈注射)給藥。隨后再灌注，在48小時(shí)過(guò)后評(píng)估動(dòng)物的神經(jīng)系統(tǒng)缺陷和體重減輕/增加。腦組織梗塞面積分別減少了22％、53％和42％。中風(fēng)后體重減輕也顯著被減少。另外，如表2中所示，在所有三個(gè)劑量時(shí)中風(fēng)引起的神經(jīng)缺陷均顯著被減少。因此，本發(fā)明化合物提供了病灶局部缺血后的神經(jīng)保護(hù)。
表2
治療窗在暫時(shí)性病灶局部缺血模型中，三種研究被用來(lái)檢查治療窗。在進(jìn)行完如上所述的再灌注之后，Wistar鼠被用來(lái)進(jìn)行90分鐘的MCA阻塞。在中風(fēng)后的第30分鐘、90分鐘、3小時(shí)、4小時(shí)、5小時(shí)和6小時(shí)以10mg/kg快速灌注給藥實(shí)施例1。通過(guò)組織染色法測(cè)量梗塞面積。在局部缺血性損傷后的30分鐘和4小時(shí)之間以單一劑量10mg/kg給藥實(shí)施例1，腦組織梗塞被顯著減少(以治療載體的a％)。在中風(fēng)后5小時(shí)以單一劑量10mg/kg給藥實(shí)施例1，得到統(tǒng)計(jì)學(xué)上對(duì)于神經(jīng)缺陷的顯著保護(hù)(以治療載體的百分?jǐn)?shù))，以及在中風(fēng)后1至5小時(shí)以單一劑量10mg/kg給藥實(shí)施例1，得到統(tǒng)計(jì)學(xué)上對(duì)于局部缺血引起的體重減輕的顯著保護(hù)(以治療載體的a％)。因此，本發(fā)明化合物相較于先前所用的治療方法，顯示出優(yōu)良的治療窗。
局部缺血后的血管滲透Wistar鼠在再灌注24小時(shí)后，用如Longa等人的Stroke1989，2084中所記載的管腔內(nèi)縫合法進(jìn)行90分鐘的大腦中動(dòng)脈(MCA)阻塞。在局部缺血發(fā)生后的30分鐘以3、10和30mg/kg(iv)快速靜脈推注給藥實(shí)施例1的化合物。處死前2小時(shí)，對(duì)動(dòng)物靜脈注射鹽水中的2％偶氮藍(lán)。用鹽水灌注大腦并分離出紋狀體。提取偶氮藍(lán)并用基于外標(biāo)準(zhǔn)的熒光分光計(jì)定量。通過(guò)偶氮藍(lán)外滲物減少60％可證明減少了局部缺血性紋狀體中的血管滲透。因此，本發(fā)明化合物能減少與局部缺血性損傷相關(guān)的血管滲透。
永久性病灶局部缺血永久性病灶局部缺血的兩個(gè)鼠模型還可用來(lái)評(píng)估實(shí)施例1。在一個(gè)極度嚴(yán)重的模型(頸內(nèi)動(dòng)脈的管腔內(nèi)縫合)和相對(duì)較短的結(jié)果(28小時(shí))中顯示很少有效或無(wú)效。
通過(guò)對(duì)模型中所產(chǎn)生的感覺(jué)運(yùn)動(dòng)皮層的梗塞范圍來(lái)定量評(píng)估中風(fēng)后21天中的神經(jīng)學(xué)缺陷，實(shí)施例1的化合物提供了中風(fēng)后的神經(jīng)學(xué)結(jié)果的顯著改善。Wistar鼠(n＝5/每組)被用來(lái)進(jìn)行病灶性局部缺血性中風(fēng)模型，該模型能導(dǎo)致如Chen et al等人的(Stroke 17738，1986)中所記載的感覺(jué)運(yùn)動(dòng)皮層的大范圍局部缺血。在中風(fēng)發(fā)生后90分鐘、4小時(shí)后、24和28小時(shí)后，以10mg/kg將實(shí)施例1或載體以靜脈推注給藥(總劑量40mg/kg)。評(píng)估在中風(fēng)發(fā)生后第1、2，、4、7、9、11、14、16、18和21天時(shí)的感覺(jué)運(yùn)動(dòng)缺陷(姿勢(shì)反射、視覺(jué)和觸覺(jué)的前肢置位和后肢置位測(cè)試)。21天后，通過(guò)測(cè)定斜線(xiàn)之間差別的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義以及對(duì)照最終神經(jīng)學(xué)結(jié)果的廣義回歸模型來(lái)評(píng)估結(jié)果。到第21天，用實(shí)施例1處理的受試者與對(duì)照組相比較，在行為評(píng)分中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著改善。因此，本發(fā)明的化合物提供了神經(jīng)缺陷的長(zhǎng)期改善。
由于疾病、損傷或其它創(chuàng)傷引起的血管滲透可能發(fā)生在許多組織和器官中，包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心肺系統(tǒng)、胃腸道系統(tǒng)和腎臟系統(tǒng)中。本發(fā)明的化合物能有效地抑制由疾病、損傷或其它創(chuàng)傷引起的血管滲透。特別的是，能抑制腦血管疾病發(fā)作后大腦和脊椎中的血管滲透。血管滲透是腦血管疾病發(fā)作后引起血管滲漏和/或水腫的主要原因，并經(jīng)常能導(dǎo)致神經(jīng)障礙和殘疾。包括但不限制于暫時(shí)性和急性局部缺血的腦血管疾病可根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療。急性疾病包括但不限制于中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷、脊椎創(chuàng)傷、普通缺氧或包括胎兒低氧、低血糖、低血壓的低氧，以及在關(guān)節(jié)復(fù)位、高融合術(shù)和低氧癥過(guò)程中觀察到的類(lèi)似損傷。中風(fēng)包括但不限制于，病灶和全身性局部缺血、暫時(shí)性腦局部缺血發(fā)作和其它與腦缺血相關(guān)的腦血管問(wèn)題。本發(fā)明還能有效的用于腦出血、內(nèi)或外顱動(dòng)脈栓塞或血栓引起的梗塞、圍產(chǎn)期窒息、心動(dòng)停止和癲癇持續(xù)狀態(tài)，尤其是流入腦部的血被一時(shí)停止的地方。伴隨血管滲漏的腦血管疾病包括但不限制于伴隨神經(jīng)炎癥的腦炎和腦膜炎，其通過(guò)血管滲漏損傷到周?chē)M織。全身性疾病如糖尿病、多發(fā)性硬化癥、腎臟疾病和動(dòng)脈粥樣硬化也可能導(dǎo)致血管滲透性增加。本發(fā)明的化合物還能有效的用于抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)之外的由于局部組織/器官局部缺血引起的血管滲透，包括但不限制于心肌缺血和局部缺血性腸疾病。
本發(fā)明化合物提供了對(duì)患者的神經(jīng)保護(hù)。本文中所指的神經(jīng)保護(hù)，是指防止神經(jīng)細(xì)胞死亡或凋亡的保護(hù)。度量細(xì)胞死亡或凋亡程度的是梗塞面積；即壞死或死亡大腦組織的面積。能用顯象技術(shù)和患者的臨床狀態(tài)來(lái)評(píng)估局部缺血發(fā)作后的梗塞面積。與不用本發(fā)明試劑情況下的類(lèi)似局部缺血發(fā)作中出現(xiàn)的梗塞面積相比，本發(fā)明化合物減少了患者的梗塞面積。
本發(fā)明化合物減少或抑制了與血管滲透相關(guān)的神經(jīng)變性和/或神經(jīng)毒性可能導(dǎo)致的癥狀，包括但不限制于視力缺損、說(shuō)話(huà)障礙、記憶缺陷、認(rèn)知缺損或功能障礙，以及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)損傷，包括但不限制于麻痹。根據(jù)本發(fā)明可以抑制或預(yù)防上述由損傷或疾病引起的神經(jīng)學(xué)性缺陷。因而，本發(fā)明提供了治療、預(yù)防、抑制或減輕哺乳動(dòng)物，尤其是人類(lèi)中，與上述所列血管滲漏或滲透相關(guān)疾病的方法，該方法包括提供治療有效量，尤其是血管滲透抑制量的本發(fā)明化合物給需要的哺乳動(dòng)物尤其是人類(lèi)患者。
本發(fā)明還包括了能用于治療或調(diào)節(jié)血管滲透的藥物組合物，該組合物包括了至少一種式I的化合物，它們的混合物，和/或它們藥學(xué)可接受的鹽，及其藥學(xué)上可接受的載體。所述組合物根據(jù)可接受的制藥方法進(jìn)行制備，如Remingtons Pharmaceutical Sciences，17thedition，ed.Alfonso R，Gennaro，Mack Publishing Company，Easton，PA(1985)中所記載的方法。藥學(xué)上可接受的載體包括與制劑中其它活性成分相容以及生物學(xué)上可接受的那些載體。
液體載體可用于制備溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑和酏劑以及靜脈溶液劑。本發(fā)明的活性成分能溶于或混懸于藥學(xué)上可接受的液體載體如水、有機(jī)溶劑及其混合物中。液體載體中還能含有其它適宜的藥學(xué)添加劑如增溶劑、乳化劑、緩沖劑、防腐劑、甜味劑、矯味劑、助懸劑、增稠劑、色素、粘度調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、氣味調(diào)節(jié)劑、抗養(yǎng)化劑和消泡劑。
適于口服、靜脈和非胃腸道給藥的液體載體的實(shí)例包括水(特別是含有上述添加劑如纖維素衍生物，優(yōu)選羧甲基纖維素鈉溶液)、鹽水、葡萄糖溶液、葡萄糖-鹽水和葡萄糖-水溶液、醇(包括一元醇和多元醇如乙二醇)以及它們的衍生物。所用的液體載體以無(wú)菌形式用于非胃腸道和靜脈給藥。在一些情況下通過(guò)添加HCI、氫氧化鈉和磷酸調(diào)節(jié)液體制劑的PH值。本發(fā)明優(yōu)選的組合物是液體藥物組合物，即在等滲、生理學(xué)上相容的緩沖系統(tǒng)中的滅菌溶液或混懸液。
本發(fā)明的液體藥物組合物能通過(guò)例如肌內(nèi)注射、腹腔注射、靜脈注射或皮下注射給藥。本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選對(duì)患者通過(guò)腹腔注射或靜脈注射給藥。更優(yōu)選的是，該組合物通過(guò)如快速靜脈注射、靜脈滴注、重復(fù)緩慢推注或滴注的方式靜脈內(nèi)給藥。
口服給藥可以以液體或固體組合物形式給藥。本發(fā)明化合物也可通過(guò)口服或胃腸外給藥，單獨(dú)或與常規(guī)的藥學(xué)載體相結(jié)合?？捎玫墓腆w載體包括一種或多種作為調(diào)味劑、潤(rùn)滑劑、增溶劑、助懸劑、填充劑、助流劑、助壓劑、粘合劑或片劑崩解劑或包衣材料的物質(zhì)。在散劑中，載體是細(xì)粉化的固體其與細(xì)粉化的活性成分相混合，在片劑中，活性成分與具有必要可壓性的載體以適宜的比例壓成所需的形狀和大小。散劑和片劑中優(yōu)選含有高達(dá)99％的活性成分。適宜的固體載體包括，例如磷酸鈣、硬脂酸鎂、滑石粉、蔗糖、乳糖、糊精、淀粉、明膠、纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷、低熔點(diǎn)蠟和離子交換樹(shù)脂。
藥物組合物優(yōu)選以單位劑型存在，如作為片劑、膠囊劑、散劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、栓劑、安瓿或丸劑。在所述劑型中，組合物被再分成含適量活性成分的單位劑量；單位劑型可以是經(jīng)包裝的組合物，例如經(jīng)包裝的散劑、安瓿或管形瓶中經(jīng)冷凍干燥的粉末或結(jié)塊，或管形瓶、安瓿、載藥注射器或含有液體的囊劑。單位劑型可以是，例如膠囊劑或片劑本身，或是適宜量的任何所述經(jīng)包裝的組合物。
提供給患者的劑量可以依據(jù)給藥對(duì)象、給藥目的如預(yù)防或治療、患者狀態(tài)、給藥方式等等的不同而有所不同?！逯委熡行Я俊迨侵缸阋灾委熁蚋纳萍膊』驌p傷癥狀的量。一般而言，單一劑量(或劑型)將含有大約1mg/kg至大約30mg/kg，優(yōu)選大約1mg/kg至大約10mg/kg本發(fā)明化合物。可預(yù)計(jì)的是，一些患者需要倍劑量給藥。治療中所使用的劑量必須由主治醫(yī)師主觀決定。該變量包括患者的特殊情況、大小、年齡和反應(yīng)模式。
本發(fā)明所提供的優(yōu)點(diǎn)多于先前已知的治療中風(fēng)和其它與血管滲透相關(guān)的其它疾病的方法。特別是，雖然優(yōu)選在局部缺血性損傷之后盡快治療患者，但本發(fā)明化合物甚至在局部缺血性損傷發(fā)生后大約18-24小時(shí)時(shí)仍可以有效的防止一些患者中神經(jīng)變性和神經(jīng)學(xué)缺陷的發(fā)生。而且，在局部缺血發(fā)作后直至大約72小時(shí)或更長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)或重復(fù)給藥本發(fā)明化合物的話(huà)，患者的預(yù)后治療可以持續(xù)并改善。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)例包括在局部缺血發(fā)作后的大約6至24小時(shí)之間給藥化合物。進(jìn)一步的實(shí)例包括在局部缺血發(fā)作后的大約18至24小時(shí)之間給藥化合物。
本文中所用的提供是指直接給藥化合物或本發(fā)明組合物，或給藥前藥、衍生物或在體內(nèi)能形成等效量活性化合物或物質(zhì)的類(lèi)似物。
本發(fā)明包括式I化合物的前藥。本文中所用的″前藥″，是指在體內(nèi)通過(guò)代謝(如通過(guò)水解)能可逆的轉(zhuǎn)化為式I化合物的化合物?，F(xiàn)有技術(shù)中已知各種形式的前藥，例如在Bundgaard，(ed.)的Design ofProdrugs，Elsevier(1985)；Widder，等人的(ed.)，Methods inEnzymology，vol.4，Academic Press(1985)；Krogsgaard-Larsen等人的(ed).″Design and Application of Prodrugs，Textbook ofDrug Design and Development，Chapter 5，113-191(1991)；undgaard等人的Journal of Drug Deliver Reviews，81-38(1992)，Bundgaard，J.的Pharmaceutical Sciences，77285etseq.(1988)；和Higuchi and Stella(eds.)的Prodrugs as NovelDrug Delivery Systems，American Chemical Society(1975)中討論的。
通過(guò)與以下特定實(shí)施例相結(jié)合更完全的描述本發(fā)明，但所述實(shí)施例不用于解釋為對(duì)本發(fā)明范圍的限制。
參考實(shí)施例1乙基7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-喹琳羧酸酯將3-氟-4-甲氧基苯胺(3.00g，21.26mmol)和二乙基乙氧基-亞甲基丙二酸酯(4.59g，21..26mmol)的混合物在110℃加熱1小時(shí)，然后冷卻至室溫。加入己烷，過(guò)濾收集固體。將該原料混懸于45mL二苯醚和聯(lián)苯為3∶1的混合物中，加熱回流混合物2小時(shí)，得到一褐色溶液。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并加入己烷。用己烷洗滌過(guò)濾收集到的最終固體，得到2.62g，mp＞300℃的白色固體乙基7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-喹琳羧酸酯。
MS265.9(M+H)+元素分析C13H12FNO4計(jì)算值C，58.87；H，4.56；N，5.28。
實(shí)測(cè)值C，58.66；H，4.16；N，5.14。
參考實(shí)施例27-F氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-喹琳羧酸將乙基7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-喹琳羧酸酯(2.2g，8.30mmol)，13.2mL lN氫氧化鈉和40mL乙醇的混合物加熱回流3小時(shí)，然后冷卻至室溫。加入水，將混合物用乙酸酸化。用水洗滌過(guò)濾收集到的最終固體，得到1.90g，mp為265-267℃的白色固體7-f氟-6-甲氧基-4-氧-1，4，-二氫-3-喹琳羧酸。
MS238.1(M+H)+元素分析C11H8FNO4-1-2H2O計(jì)算值C，51.04；H，4.03；N，5.41。
實(shí)測(cè)值C，50.98；H，3.95；N，5.33。
參考實(shí)施例37-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-喹琳羧酰胺在14mL N，N-二甲基甲酰胺中，將7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-喹琳羧酸(1.0g，4.21mmol)和1，1′-羧二咪唑(1.51g，9.28mmol)的混合物，在65℃加熱2小時(shí)，隨后冷卻至室溫，并倒入200mL冰水浴上的氨水溶液中。將該溶液在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，直至濃縮至少量。在用乙酸酸化之后，加入冰水。用水洗滌過(guò)濾收集到的最終固體，得到821mg，mp＞300℃的白色固體7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-喹琳羧酰胺。
MS236.8(M+H)+元素分析C11H9FN2O3-0.2H2O計(jì)算值C，55.09；H，3.94；N，11.68。
實(shí)測(cè)值C，55.00；H，3.63；N，11.49。
參考實(shí)施例47-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-氰基喹啉在15mL N，N-二甲基甲酰胺中，將7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4，-二氫-3-喹琳羧酰胺(700mg，3.0mmol)和氰尿酰氯(341mg，1.65mmol)的混合物，在65℃加熱6小時(shí)，隨后冷卻至室溫，并另外加入206mg氰尿酰氯。將混合物在65℃加熱4小時(shí)，隨后在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物倒入冰水中，用飽和的碳酸氫鈉中和。用水和己烷洗滌過(guò)濾收集到的固體，得到610mg粗產(chǎn)物。用快速柱色譜法提純，以二氯甲烷中的3％甲醇至10％甲醇梯度洗脫，得到272mg，mp為147-149℃的7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-氰基喹琳。
MS216.8(M-H)-元素分析C11H7FN2O2-0.1二氯甲烷計(jì)算值C，58.80；H，3.19；N，12.36。
實(shí)測(cè)值C，59.06；H，2.96；N，11.97。
得到參考實(shí)施例4的另一種方法7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-氰基喹啉在甲苯中，將3-氟-4-甲氧基苯胺(15.31g，108mmol)和乙基(乙氧基-亞甲基)氰基乙酸酯(18.36g，108mmol)的混合物，在100-110℃加熱4.5小時(shí)，隨后冷卻至室溫。加入乙烷和乙酸乙酯為1∶1的混合物，將混合物在冰浴上冷卻。用己烷洗滌收集到的固體，第-批收得26.10g和第二批收得1.24g。將2.0g該原料加入18mL二苯醚和聯(lián)苯為3∶1的混合物中，加熱回流。將該混合物加熱回流4小時(shí)，隨后冷卻并倒入己烷中。過(guò)濾收集固體，并用乙酸乙酯洗滌，得到624mg褐色固體7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4，-二氫-3-氰基喹琳。濃縮濾液，將殘?jiān)苡诩尤氲囊宜嵋阴ズ图和橹小Ｊ占玫淖罱K固體，得到1.07g黃色固體7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-氰基喹琳。
參考實(shí)施例54-氯-7-氟-6-甲氧基-3-氰基喹琳將7-氟-6-甲氧基-4-氧-1，4-二氫-3-氰基喹琳(1.0g，4.59mmol)和14g三氯氧磷的混合物加熱回流30分鐘，隨后真空濃縮。殘?jiān)谔妓釟溻c水溶液和乙酸乙酯之間分層。有機(jī)層用硫酸鎂干燥完全，并在硅膠柱上過(guò)濾和濃縮。用快速柱色譜法提純，以乙酸乙酯∶己烷為1∶5至乙酸乙酯∶己烷為1∶1梯度洗脫，得到631mg，mp為160-162℃的4-氯-7-氟-6-甲氧基-3-氰基喹琳。
MS236.9(M+H)+元素分析C11H6CIFN2O計(jì)算值C，55.83；H，2.56；N，11.84。
實(shí)測(cè)值C，55.66；H，2.84；N，11.91。
參考實(shí)施例64-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-氟-6-甲氧基-3-氰基喹啉在45mL 2-乙氧乙醇中，將4-氯-7-氟-6-甲氧基-3-氰基喹琳(4.12g，18mmol)，2，4-二氯-5-甲氧基苯胺(4.56g，24mmol)(Theodoridis，G.；Pestic.Sci.1990，30，259)和鹽酸吡啶(2.31g，19.9mmol)的混合物，在120℃加熱3小時(shí)，隨后冷卻至室溫。將反應(yīng)混合物加入碳酸氫鈉水溶液中，并攪拌20分鐘。過(guò)濾收集固體，得到4.89g，mp＞260℃的4-[(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)氨基]-7-氟-6-甲氧基-3-氰基喹琳。
HRMS理論值392.03634；實(shí)測(cè)值392.03556(M+H)+元素分析C18H12C12FN3O2-2.0H20計(jì)算值C，50.48；H，3.77；N，9.81。
實(shí)測(cè)值C，50.41；H，2.82；N，9.78。
參考實(shí)施例76-芐氧基-7-氟-4-氧-1，4-二氫-3-氰基喹啉將4-芐氧基-3-對(duì)氟苯胺(6.06g，27.9mmol)(US 5,622,967)和乙基(乙氧基亞甲基)氰基乙酸酯(5.08g，30.0mmol)的混合物在120℃加熱45分鐘，隨后冷卻至室溫。在245℃時(shí)，將該固體加入二苯醚和聯(lián)苯為3∶1的混合物中。將混合物在245℃時(shí)加熱3小時(shí)，隨后冷卻，過(guò)濾收集固體，并用己烷和二乙醚洗滌，得到2.60g，mp＞250℃的6-芐氧基-7-氟-4-氧-1，4-二氫-3-氰基喹琳。
MS293.1(M-H)-參考實(shí)施例86-芐氧基-4-氯-7-氟-3-氰基喹琳將6-芐氧基-7-氟-4-氧-1，4-二氫-3-氰基喹琳(645mg，2.19mmol)和10mL三氯氧磷的混合物在115℃加熱1.5小時(shí)，隨后真空濃縮。殘?jiān)帽彼芤禾幚?，過(guò)濾收集最終固體。用快速柱色譜法提純，以己烷中的1％乙酸乙酯至6％乙酸乙酯梯度洗脫，得到284mg，mp為159-160℃的6-芐氧基-4-氯-7-氟-3-氰基喹琳。
MS313.13(M+H)+
元素分析C17H10ClFN2O計(jì)算值C，65.15；H，3.06；N，8.82。
實(shí)測(cè)值C，65.29；H，3.22；N，8.96。
參考實(shí)施例94-氯-7-氟-6-羥基-3-氰基喹琳在12mL三氟乙酸中，將6-芐氧基-4-氯-7-氟-3-氰基喹琳(733mg，2.34mmol)和1mL苯甲硫醚的混合物加熱回流9小時(shí)，隨后真空濃縮。殘?jiān)帽幚恚S后添加氨水溶液堿化至pH9-10。過(guò)濾收集最終的固體，并用二乙醚洗滌。用乙酸乙酯中的10％甲醇提取濾液。有機(jī)層用硫酸鎂干燥完全，過(guò)濾和真空濃縮。殘?jiān)c最初得到的固體結(jié)合，將該原料溶于乙酸乙酯中的5％甲醇中，并在硅膠上吸附。用快速柱色譜法提純，以己烷至己烷中的乙酸乙酯量增加至乙酸乙酯中的5％甲醇梯度洗脫，得到260mg，mp＞250℃的4-氯-7-氟-6-羥基-3-氰基喹琳。
MS220.9(M-H)-元素分析C10H4ClFN2O計(jì)算值C，53.96；H，1.81；N，12.58。
實(shí)測(cè)值C，54.23；H，2.02；N，12.06。
參考實(shí)施例104-氯-6-乙氧基-7-氟-3-氰基喹琳0℃時(shí)，往15mL四氫呋喃中的4-氯-7-氟-6-羥基-3-氰基喹琳(185mg，0.83mmol)，三苯膦(392mg，1.49mmol)和乙醇(153mg，3.32mmol)混合物中加入二乙基偶氮二羧酸酯(260mg，1.80mmol)。將混合物在0℃保持45分鐘，隨后在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)混合物真空濃縮，并用快速柱色譜法提純，以己烷中的1％乙酸乙酯至5％乙酸乙酯梯度洗脫，得到mp為165-166℃的4-氯-6-乙氧基-7-氟-3-氰基喹琳。
MS251.0(M+H)+元素分析C12H8ClFN2O計(jì)算值C，57.50；H，3.22；N，11.18。
實(shí)測(cè)值C，57.24；H，3.41；N，11.09。
參考實(shí)施例114-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-氟-3-氰基喹琳接著參考實(shí)施例6的步驟，將所提供的4-氯-6-乙氧基-7-氟-3-氰基喹琳(197mg，0.78mmol)，2，4-二氯-5-甲氧基苯胺(220mg，1.14mmol)和鹽酸吡啶(120mg，1.04mmol)的混合物，用快速柱色譜法提純，以二氯甲烷至二氯甲烷中1％甲醇梯度洗脫，得到183mg，mp 184-186℃的4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-氟-3-氰基喹琳。
MS406.0(M+H)元素分析C19H14Cl2FN3O2-0.5H2O計(jì)算值C，54.96；H，3.64；N，10.12。
實(shí)測(cè)值C，54.99；H，3.59；N，10.05。
實(shí)施例14-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-1-哌嗪基)丙氧基]-3-氰基喹琳在4mL N-甲基哌嗪中，將7-[3-氯丙氧基]-4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳(656mg，1.40mmol)和碘化鈉(210mg，1.40mmol)的混合物，在80℃加熱20小時(shí)。反應(yīng)混合物真空濃縮，并在乙酸乙酯和碳酸氫鈉飽和水溶液之間分層。有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥完全，過(guò)濾和真空濃縮。殘?jiān)弥V法提純，以二氯甲烷中的30％甲醇洗脫。收集含產(chǎn)物的流分，真空濃縮。在殘?jiān)屑尤攵颐?，過(guò)濾收集淡粉色固體，得到560mg(75％)4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-1-哌嗪基)丙氧基]-3-氰基喹琳mp為116-120℃；MS(ES)m/z為530.2，532.2(M+1)。
實(shí)施例24-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[3-(4-乙基-1-哌嗪基)丙氧基]-6-甲氧基-3-氧基喹琳在5mL乙二醇二甲醚中，將7-[3-氯丙氧基]-4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6甲氧基-3-氰基喹琳(3.50g，7.50mmol)，碘化鈉(1.12g，7.50mmol)和4.8mLN-乙基哌啶的混合物，在95℃加熱20小時(shí)。反應(yīng)混合物真空濃縮，并在乙酸乙酯和碳酸氫鈉飽和水溶液之間分層。有機(jī)層用飽和的碳酸氫鈉洗滌，隨后用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥完全，過(guò)濾和真空濃縮。在殘?jiān)屑尤攵颐?，過(guò)濾收集白色固體，得到1.80g(44％)4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[3-(4-乙基-1-哌嗪基)-丙氧基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳mp為102-104℃；MS(ES)m/z為544.3，546.4(M+1)。
實(shí)施例34-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基]-3-氰基喹琳根據(jù)實(shí)施例1所用的制備方法，通過(guò)7-[2-氯乙氧基]-4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳和N-甲基哌啶反應(yīng)制得mp為165-167℃；MS(ES)m/z為516.0，518.2(M+1)。
實(shí)施例44-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[2-(4-乙基-1-哌嗪基)乙氧基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳根據(jù)實(shí)施例1所用的制備方法，通過(guò)7-[2-氯乙氧基]-4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳和N-乙基哌啶反應(yīng)制得mp為101-105℃；MS(ES)m/z為530.4，532.4(M+1)。
實(shí)施例54-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基-3-氰基喹琳在135℃時(shí)，向4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-氟-6-甲氧基-3-氰基喹琳(600mg，1.53mmol)和1-甲基哌啶-4-甲醇(395mg，3.06mmol)在10mL N，N-二甲基甲酰胺的溶液中，逐份加入氫化鈉(362mg，9.06mmoi)。45分鐘后將反應(yīng)混合物倒入飽和的碳酸氫鈉中。在攪拌15分鐘后，過(guò)濾收集固體。殘?jiān)每焖僦V法提純，以二氯甲烷中的5％甲醇至25％甲醇梯度洗脫。用二乙醚研磨，得到396mg，mp為200-202℃的4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]-3-氰基喹琳。
MS501.3(M+H)+元素分析C25H26Cl2N4O3-0.8H2O計(jì)算值C，58.21；H，5.39；N，10.86。
實(shí)測(cè)值C，58.19；H，5.23；N，10.67。
實(shí)施例64-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[2-(1-甲基哌啶-4-基)乙氧基]-3-氰基喹琳在5mL N，N-二甲基甲酰胺中，將氫化鈉(128mg，3.2mmol)和1-甲基-4-哌啶乙醇(180mg，1.25mmol)[EP 0581538]的混合物，在110℃加熱1小時(shí)。加入4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-氟-6-甲氧基-3-氰基喹琳(200mg，0.51mmol)，并將反應(yīng)混合物在135℃加熱5小時(shí)。在隨后的4小時(shí)之后在130℃時(shí)，將另外的128mg氫化鈉加入反應(yīng)混合物中。反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分層。有機(jī)層用硫酸鈉干燥完全，過(guò)濾和真空濃縮。殘?jiān)帽由V法提純，以二氯甲烷中的20％甲醇洗脫，得到105mg，mp為190-191℃的4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[(2-(1-甲基哌啶-4-基)乙氧基]-3-氰基喹琳。
MS515.19(M+H)+元素分析C26H28Cl2N4O3-1.0H2O計(jì)算值C，58.53；H，5.67；N，10.50。
實(shí)測(cè)值C，58.65；H，5.57；N，10.34。
實(shí)施例7和8以類(lèi)似于實(shí)施例5的方法和相應(yīng)的醇制得。
實(shí)施例74-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(1-甲基哌啶-4-基)丙氧基]喹琳-3-腈MP144-145℃；Mass spec.529.2(ES+)
實(shí)施例84-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[(1-乙基哌啶-4-基)甲氧基]-6-甲氧基喹琳-3-腈MP192-195℃；Mass spec.515.2(ES+)實(shí)施例94-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(4-甲基哌啶-1-基)丙氧基]喹琳-3-腈在5mL N，N-二甲基甲酰胺中，將4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-氟-3-喹琳-腈(200mg，0.49mmol)，3-(4-甲基-哌啶-1-基)丙醇(155mg，0.98mmol)(WO 20047212)和氫化鈉(196mg，4.6mmol)的混合物，在125℃加熱3小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入飽和的碳酸氫鈉中并攪拌1小時(shí)。用二氯甲烷中的10％甲醇提取水溶液。有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥完全，并真空濃縮。殘?jiān)帽由V法提純，以二氯甲烷中的15％甲醇洗脫。用己烷研磨，得到116mg，mp為137-138℃的淡褐色固體4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(4-甲基哌啶-1-基)丙氧基]-喹琳-3-腈。
MS542.0(M-H)-元素分析C27H31Cl2N5O3-0.6H2O計(jì)算值C，58.40；H，5.84；N，12.61。
實(shí)測(cè)值C，58.31；H，5.71；N，12.43。
實(shí)施例104-[(2，4-二氨-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]喹琳-3-腈在5mL N，N-二甲基甲酰胺中，將4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-氟-3-喹琳-腈(200mg，0.49mmol)，1-甲基哌啶-4-甲醇(188mg，0.98mmol)(WO 20047212)和氫化鈉(196mg，4.6mmol)的混合物，在125℃加熱3小時(shí)。將反應(yīng)混合物倒入飽和的碳酸氫鈉中并攪拌1小時(shí)。過(guò)濾收集固體，用水洗滌和真空干燥。固體用薄層色譜法提純，以二氯甲烷中的15％甲醇洗脫。用二乙醚研磨，得到67mg，mp為182-186℃的淡褐色固體4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)甲氧基]喹琳-3-腈。
MS513.0(M-H)-元素分析C26H28Cl2N4O3-1.4H2O計(jì)算值C，57.76；H，5.74；N，10.36。
實(shí)測(cè)值C，57.65；H，5.43；N，10.15。
實(shí)施例114-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(4-乙基哌啶-1-基)丙氧基]喹琳-3-腈在5mL N，N-二甲基甲酰胺中，將4-[(2，5-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-氟-3-喹琳-腈(200mg，0.49mmol)和3-(4-乙基-哌啶-1-基)丙醇(241mg，0.98mmol)的混合物，在125℃加熱5分鐘。加入氫化鈉(60％)(98mg，2.45mmol)，并將混合物在125℃加熱1小時(shí)。加入另外的氫化鈉(98mg，2.45mmol)，將混合物在125℃加熱2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并倒入飽和的碳酸氫鈉中攪拌1小時(shí)。用二氯甲烷中的10％甲醇提取水溶液。有機(jī)層用硫酸鈉干燥完全，并真空濃縮。殘?jiān)帽由V法提純，以二氯甲烷中的12％甲醇展開(kāi)。用二乙醚和己烷研磨，得到146mg，mp為127-130℃的淡褐色固體4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(4-乙基哌啶-1-基)-丙氧基]喹琳-3-腈。
MS558.3(M+H)+元素分析C28H33Cl2N5O3-1.5H2O計(jì)算值C，57.44；H，6.20；N，11.96。
實(shí)測(cè)值C，57.44；H，6.24；N，11.79。
實(shí)施例124-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(1-甲基哌啶-4-基)丙氧基]喹琳-3-腈在5mL N，N-二甲基甲酰胺中，將4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-氟-3-喹琳-腈(200mg，0.49mmol)和3-(1-甲基-4-哌啶基)丙醇(154mg，0.98mmol))的混合物，在125℃加熱5分鐘。加入氫化鈉(60％)(98mg，2.45mmol)，并將混合物在125℃加熱1小時(shí)。加入另外的氫化鈉(98mg，2.45mmol)，將混合物在125℃加熱2小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并倒入飽和的碳酸氫鈉中攪拌1小時(shí)。收集沉淀物，用水洗滌并真空干燥。殘?jiān)帽由V法提純，以二氯甲烷中的15％甲醇展開(kāi)。用二乙醚研磨，得到146mg，mp為148-151℃的米色固體4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(1-甲基哌啶-4-基)丙氧基]喹琳-3-腈。
MS543.2(M+H)+元素分析C28H32C12N4O3-1.8H2O計(jì)算值C，58.39；H，6.23；N，9.73。
實(shí)測(cè)值C，58.40；H，6.16；N，9.64。
實(shí)施例134-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙氧基]喹琳-3-腈在5mL N，N-二甲基甲酰胺中，將4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-氟-3-喹琳-腈(200mg，0.49mmol)和2-(4-甲基-1-哌嗪基)乙醇(141mg，0.98mmol)的混合物，加熱至100℃。逐份加入氫化鈉(60％)(196mg，4.9mmol)，并將混合物在125℃加熱3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并用25mL水處理。攪拌混合物2小時(shí)。收集沉淀物，用水洗滌并真空干燥。殘?jiān)每焖僦V法提純，以二氯甲烷中的5％甲醇至15％甲醇梯度洗脫。用二乙醚研磨，得到123mg，mp為141-143℃的米色固體4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-乙氧基]喹琳-3-腈。
MS530.2(M+H)+元素分析C26H29Cl2N5O3計(jì)算值C，58.87；H，5.51；N，13.20。
實(shí)測(cè)值C，58.48；H，5.45；N，12.95。
實(shí)施例144-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[2-(1-甲基哌啶-4-基)乙氧基]喹琳-3-腈在5mL N，N-二甲基甲酰胺中，將4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-氟-3-喹琳-腈(200mg，0.49mmol)和1-甲基-4-哌啶乙醇(140mg，0.98mmol))的混合物，加熱至100℃。逐份加入氫化鈉(60％)(162mg，4.05mmol)，并將混合物在125℃加熱3小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并用25mL水處理。收集沉淀物，用水洗滌并真空干燥。殘?jiān)每焖僦V法提純，首先以二氯甲烷洗脫，隨后以二氯甲烷中的5％甲醇至30％甲醇梯度洗脫。用二乙醚研磨，得到121mg，mp為174-176℃的米色固體4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[2-(1-甲基哌啶-4-基)乙氧基]喹琳-3-腈。
MS529.1(M+H)+元素分析C27H30Cl2N4O3計(jì)算值C，61.25；H，5.71；N，10.58。
實(shí)測(cè)值C，61.40；H，5.84；N，10.35。
實(shí)施例154-[(2，4-二氯-5-甲氧基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-丙基-1-哌嗪基)丙氧基]-3-氰基喹琳根據(jù)實(shí)施1的制備方法，將7-[3-氯乙氧基]-4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳和N-丙基哌嗪反應(yīng)制得mp為97-101℃；MS(ES)m/z為558.2，560.2(M+1)。
權(quán)利要求
1.一種提供患者腦血管局部缺血性疾病發(fā)作后神經(jīng)保護(hù)的方法，包括提供一種治療有效量的式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中X為N，CHn為選自1-3的整數(shù)；和R′和R獨(dú)立地為具有1至3個(gè)碳原子的烷基，需滿(mǎn)足的條件是當(dāng)n為1時(shí)，X不為N。
2.一種抑制患者腦血管局部缺血性疾病發(fā)作后神經(jīng)缺陷的方法，包括提供一種治療有效量的式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中X為N，CHn為選自1-3的整數(shù)；和R′和R獨(dú)立地為具有1至3個(gè)碳原子的烷基，需滿(mǎn)足的條件是當(dāng)n為1時(shí)，X不為N。
3.一種減少患者腦血管局部缺血性疾病發(fā)作后梗塞面積的方法，包括提供一種治療有效量的式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中X為N，CHn為選自1-3的整數(shù)；和R′和R獨(dú)立地為具有1至3個(gè)碳原子的烷基，需滿(mǎn)足的條件是當(dāng)n為1時(shí)，X不為N。
4.一種抑制遭受腦血管疾病發(fā)作痛苦的患者腦血管局部缺血后血管滲透的方法，包括給藥一種治療有效量的式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中X為N，CHn為選自1-3的整數(shù)；和R′和R獨(dú)立地為具有1至3個(gè)碳原子的烷基，需滿(mǎn)足的條件是當(dāng)n為1時(shí)，X不為N。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中R′為甲基。
6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的權(quán)利要求，其中R為甲基或乙基。
7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的權(quán)利要求，其中X為N。
8.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的權(quán)利要求，其中X為CH。
9.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其中化合物為4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基-1-哌嗪基)-丙氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[3-(4-乙基-1-哌嗪基)丙氧基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-乙氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[2-(4-乙基-1-哌嗪基)乙氧基]-6-甲氧基-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)-甲氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[2-(1-甲基哌啶-4-基)-乙氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(1-甲基哌啶-4-基)-丙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[(1-乙基哌啶-4-基)甲氧基]-6-甲氧基喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)-丙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)-甲氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(4-乙基哌嗪-1-基)-丙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(1-甲基哌啶-4-基)-丙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[2-(4-甲基-1-哌嗪基)-乙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[2-(1-甲基哌啶-4-基)-乙氧基]喹琳-3-腈；或4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-丙基-1-哌嗪基)-丙氧基]-3-氰基喹琳；以及藥學(xué)上可接受的鹽。
10.權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)的方法，其中在局部缺血發(fā)作之后大約6小時(shí)至大約24小時(shí)之間給藥。
11.權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)的方法，其中有效治療量為大約1mg/kg至大約30mg/kg。
12.權(quán)利要求1至11任一項(xiàng)的方法，包括靜脈給藥式I化合物。
13.權(quán)利要求1至12任一項(xiàng)的方法，其中患者為人類(lèi)。
14.權(quán)利要求1至13任一項(xiàng)的方法，其中局部缺血發(fā)作是暫時(shí)的。
15.權(quán)利要求1至13任一項(xiàng)的方法，其中局部缺血發(fā)作是急性的。
16.權(quán)利要求1至15任一項(xiàng)的方法，其中局部缺血性疾病是中風(fēng)、頭部創(chuàng)傷、脊椎創(chuàng)傷、普通缺氧或低氧。
17.權(quán)利要求1至15任一項(xiàng)的方法，其中局部缺血性疾病發(fā)生在顱內(nèi)出血、圍產(chǎn)期窒息、心動(dòng)停止或癲癇持續(xù)狀態(tài)期間。
18.一種具有如下結(jié)構(gòu)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽 其中X為N，CHn為選自1-3的整數(shù)；和R′和R獨(dú)立地為具有1至3個(gè)碳原子的烷基，
19.權(quán)利要求18的化合物，其中R′為甲基。
20.權(quán)利要求18或19的化合物，其中R為甲基或乙基。
21.如下化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基)-甲氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[2-(1-甲基哌啶-4-基)-乙氧基]-3-氰基喹琳；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(1-甲基哌啶-4-基)-丙氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-7-[(1-乙基哌啶-4-y1)甲氧基]-6-甲氧基喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[(1-甲基哌啶-4-基)-甲氧基]喹琳-3-腈；4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[3-(1-甲基哌啶-4-基)-丙氧基]喹琳-3-腈；或4-[(2，4-二氯-5-甲氧苯基)氨基]-6-乙氧基-7-[2-(1-甲基哌啶-4-基)-乙氧基]喹琳-3-腈。
22.一種藥物組合物，包括權(quán)利要求18至21中任一項(xiàng)定義的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
23.一種藥物組合物，包括如權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)定義的血管滲透抑制量的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。
24.權(quán)利要求21中的組合物為經(jīng)靜脈劑型。
25.權(quán)利要求18至21中任一項(xiàng)要求的化合物的制備方法，包括如下步驟之一(a)下式的喹啉與下式的醇反應(yīng) 其中R′如權(quán)利要求18所定義，其中R和n如權(quán)利要求18所定義，或(b)下式的喹啉與下式的苯胺反應(yīng) 其中R，R′如權(quán)利要求18所定義和Y是鹵素，或(c)將下式化合物環(huán)化成所需的喹啉 其中R，R′和n如權(quán)利要求18所定義。
26.權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)的化合物在制備用于提供患者腦血管局部缺血性疾病發(fā)作后神經(jīng)保護(hù)的藥物、抑制患者腦血管局部缺血性疾病發(fā)作后神經(jīng)缺陷的藥物、減少患者腦血管局部缺血性疾病發(fā)作之后梗塞面積的藥物或抑制遭受腦血管疾病發(fā)作痛苦的患者腦血管局部缺血后血管滲透的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
式(I)的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽能有效的用于抑制由疾病、損傷或其它創(chuàng)傷引起的血管滲透，其中，X為N、CH；n為選自1－3的整數(shù)；和R′和R獨(dú)立地為具有1至3個(gè)碳原子的烷基，需滿(mǎn)足的條件是當(dāng)n為1時(shí)，X不為N。
文檔編號(hào)A61K31/4706GK1750824SQ200480004674
公開(kāi)日2006年3月22日 申請(qǐng)日期2004年2月19日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月21日
發(fā)明者D·H·博謝利, M·M·扎萊斯卡, F·C·博謝利, K·T·阿恩特 申請(qǐng)人:惠氏公司