專利名稱：：具有抗腫瘤活性的2－取代的18a－高雌－1,3,5(10)－三烯－3－基氨基磺酸酯的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯及其在制備具有抗腫瘤活性的藥物中的應用。
背景技術：
：微管是存在于大多數(shù)真核細胞中的細胞器，且在其中負責多種功能如有絲分裂、細胞內(nèi)運動、細胞遷移和細胞形態(tài)的表現(xiàn)。微管是由微管蛋白組成的聚合物，該微管蛋白又代表由α-單元及β-單元組成的二聚體。這些雜二聚體與兩個鳥苷三磷酸(GTP)分子相結合，其中一個GTP穩(wěn)固結合，另一個是可替換的。該雜二聚體以頭尾排列的方式聚合形成絲狀高分子，即所謂的原絲，原絲又堆積成管狀細胞器——微管。微管恒定地生成及降解。生成與降解之間的平衡依賴于新的GTP-微管蛋白亞型的有效性(availability)及第二個被結合的GTP的水解速率。在正端，新的亞單元得以培育，相反地，在負端，亞單元向外部擴散。已知細胞毒性物質(zhì)如秋水仙堿、長春堿、長春新堿、紫杉醇、埃坡霉素(epothilone)、鬼臼毒素、五加前胡素(steganicin)、combretastatin及2-甲氧基雌二醇可影響微管的生成或降解(微管蛋白聚合和微管蛋白解聚)，從而可以階段特異性的方式影響細胞的分裂。這主要涉及快速增長的腫瘤細胞，其生長很大程度上不受細胞內(nèi)調(diào)節(jié)機制的影響。這類活性成分通常適用于治療惡性腫瘤。此外，F(xiàn)otsis等在Nature1994368，237-239中報道2-甲氧基雌二醇可抑制腫瘤的生長和血管生成。Cushman等在J.Med.Chem.199538，2041-2049中研究了2-甲氧基雌二醇的細胞毒性作用以及微管蛋白聚合抑制作用，此外，還在J.Med.Chem.1997，40，2323-2334中報道2-烷氧基-6-肟基雌二醇衍生物能抑制微管蛋白聚合以及[3H]-秋水仙堿與微管蛋白結的合。此處涉及的2-烷氧基-6-肟基雌二醇衍生物在抑制微管蛋白聚合方面具有與活性比2-甲氧基雌二醇更高的2-乙氧基雌二醇相當?shù)幕钚?。WO93/05064涉及到下式化合物多環(huán)化合物，其中，R1和R2各自獨立地為氫原子或甲基，條件是R1與R2基團中至少一個為氫原子；且基團-O-多環(huán)化合物為3-甾醇，其硫酸酯可被具有甾體硫酸酯酶活性的酶水解。未明確公開在甾體骨架的2位被特異性取代的化合物。US6,011,024基于WO93/05064并涵蓋例如其中主要的氨基磺酸酯官能團與六元環(huán)結合的所有化合物。依然未明確揭示在甾體骨架2位被特異性地取代的化合物。WO96/05216涉及C2-未取代的雌-1，3，5(10)-三烯-氨基磺酸酯衍生物。WO96/05217涉及含下列通式活性成分的藥物組合物其中R＝NH2；R3＝C1-5烷氧基、OH；R8、R9及R10各自獨立地為H、OH；R9和R10一起組成＝O。此處所揭示的藥物組合物可用于女性避孕、更年期HRT以及婦科和男性科(andrological)疾病如乳腺癌或前列腺癌。WO97/14712涉及下述通式的甾體氨基磺酸酯衍生物其中R1代表?；⑼檠豸驶?、氨羰基、磺?；虬被酋；?；R2可代表氫原子或金屬原子；R7及R8各自獨立地代表H、OH和C1-5烷氧基；R13、R12及R11各自獨立地代表H或OH。WO98/42729涉及其中在C2位可由烷氧基取代的16-鹵素-取代的1，3，5(10)-三烯-3-單氨基磺酸酯以及3，17β-雙氨基磺酸酯。16-鹵素取代既可增加硫酸酯酶抑制作用又可增加相應氨基磺酸酯衍生物的雌激素活性。除3-氨基磺酸酯官能團外，17-氨基磺酸酯官能團的引入使雌激素活性顯著降低。WO98/24802涉及抑制雌酮硫酸酯酶的氨基磺酸酯，并明確提及2-甲氧基雌酮氨基磺酸酯。作為潛在的治療應用，在說明書中提及乳腺癌，但未提及前列腺癌。同樣，WO99/33858中也記載了下式的雌酮硫酸酯酶抑制劑其中R1和R2各自獨立地代表H、烷基或一起組成哌啶、嗎啉、哌嗪；R3＝H、CN、NO2、CO2R4；R8＝H、NO2、NR6R7。在其說明書中，乳腺癌作為可能的治療學應用被提及。WO99/64013涉及具有細胞信號調(diào)節(jié)劑(如TNFα)的氨基磺酸酯衍生物藥物組合物。在該組合中，2-甲氧基雌酮氨基磺酸酯作為優(yōu)選的氨基磺酸酯而提出明確的權利要求，但許多其它甾體-3-氨基磺酸酯同樣落在該通式范圍中。對于該發(fā)明的藥物組合物或包含于其中的甾體-3-氨基磺酸酯(優(yōu)選為具有至少一個2-烷氧基取代基)的作用機制，該發(fā)明記載1)抑制腫瘤細胞中的葡萄糖吸收；2)抑制腫瘤血管生成；3)微管的降解；4)誘導凋亡。WO00/76487涉及可抑制TNFα-誘導的芳香化酶活性的物質(zhì)。同樣地，其對2-烷氧基雌酮-3-氨基磺酸酯、優(yōu)選為2-甲氧基雌酮氨基磺酸酯提出權利要求。WO01/18028描述了非雌激素類雌酮硫酸酯酶抑制劑N-?；?18a-取代的甾體-3-基氨基磺酸酯，如16α-氟-2-甲氧基-18a-高雌二醇-(N-乙?；被撬狨?或16α-氟-2-甲氧基-18a-高雌酮-(N-乙酰基氨基磺酸酯)。在Cancer2000，85，983-994中，對2-甲氧基雌二醇、多西他賽(docetaxel)和紫杉醇誘導的肝細胞瘤中的細胞凋亡以及其與活性氧的相關性進行了比較。Potter等在Int.J.Cancer2000，85，584-589中研究了2-甲氧基雌酮氨基磺酸酯與2-甲氧基雌酮相比對乳腺癌細胞及誘導的乳腺腫瘤生長的作用，并發(fā)現(xiàn)2-甲氧基雌酮氨基磺酸酯在治療乳腺癌方面具有顯著的治療前景。Potter等在MolecularandCellularEndocrinology2000，160，61-66中研究了2-甲氧基雌酮和2-甲氧基雌酮-3-氨基磺酸酯在MCF-7乳腺癌細胞中對脫氧葡萄糖吸收的抑制作用，其中以10μm即可抑制葡萄糖吸收25至49％(也可用2-甲氧基雌二醇和2-甲氧基雌酮)，因此，由于該類化合物能抑制葡萄糖吸收，從而可能具有抑制乳腺癌的治療前景。Potter等在CancerResearch2000，60，5441-5450中記載了2-甲氧基雌酮-氨基磺酸酯以及2-乙氧基雌酮氨基磺酸酯作為對乳腺癌細胞具有體外抗癌活性并從而可任選地在體內(nèi)具有活性的新型抗微管蛋白活性化合物。在J.SteroidBiochem.andMol.Biol.1999，69，227-238中報道了抑制甾體硫酸酯酶活性是治療激素依賴性乳腺癌的重要出發(fā)點。該文章明確提及2-甲氧基雌酮氨基磺酸酯、17-去氧雌酮氨基磺酸酯以及雌酮氨基磺酸酯。無論單環(huán)或雙環(huán)，非甾體氨基磺酸酯都能抑制甾體硫酸酯酶，但不如相應的甾體衍生物有效。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的在于制備可有效抑制微管蛋白聚合的其它可用化合物。因此，根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的目的是通過通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯以及其藥物學可接受的鹽在制備藥物、特別是用于治療通過抑制微管蛋白聚合可對其產(chǎn)生積極影響的腫瘤疾病的藥物中的應用而實現(xiàn)的其中R2代表C1-C5烷基、C1-C5烷氧基或基團-O-CnFmHo，其中n＝1、2、3、4、5或6，m＞1且m+o＝2n+1，R14和R15各自代表氫原子或一起組成亞甲基或額外的鍵，R16代表氫原子，R17代表氫原子、羥基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基或基團-CnFmHo，其中n＝1、2、3、4、5或6，m＞1且m+o＝2n+1，或代表基團SO3NHX，X代表氫原子、C1-C5烷基或C1-C5?；?，其中在甾體骨架的B環(huán)和D環(huán)中，虛線也可以最多形成兩個雙鍵。出人意料的是，已確定本發(fā)明的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯在體外對微管蛋白聚合的抑制比2-甲氧基雌二醇本身高很多。本發(fā)明化合物可抑制腫瘤細胞的增殖，并且同樣具有體內(nèi)抗腫瘤活性。此外，本發(fā)明化合物具有良好的口服生物利用度。烷基可定義為直鏈或支鏈、飽和或不飽和的烷基基團。作為具有1-5個碳原子的直鏈或支鏈烷基的代表，可提及例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、1-乙基丙基、1-甲基丁基、1，1-二甲基丙基、2-甲基-丁基、1，2-二甲基丙基、3-甲基丁基、2，2-二甲基丙基。例如，烯丙基、乙烯基、丙烯基、丁烯基及乙炔基、丙炔基或丁炔基代表不飽和烷基。?；侵溉缂柞；?、乙酰基、丙?；?、丁?；?、異丁酰基或戊?；?。C1-C5烷氧基可由甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基或叔丁氧基或戊氧基所代表，而且該基團可被氟化。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選使用以下通式I化合物，其中R2代表甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或2，2，2-三氟乙氧基；R14和R15各自代表H或一起組成亞甲基；R16代表氫原子；R17代表氫原子、羥基、OC1-C1烷基或基團-CnFmHo，其中n＝1、2、3、4、5或6，m＞1且m+o＝2n+1，或代表基團SO3NHX，X代表氫原子、甲基、乙?；?、丙酰基或丁?；渲性阽摅w骨架的B環(huán)和D環(huán)中，虛線也可以形成8，9-雙鍵或16，17-雙鍵。根據(jù)本發(fā)明，特別優(yōu)選為分別使用下述化合物。1、17β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯2、17α-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯3、2，17β-二甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯4、2，17α-二甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯5、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯6、17β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(1)7、17β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基(N-乙?；?-氨基磺酸酯8、17α-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯9、2-乙氧基-17β-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(2)10、2-乙氧基-17β-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基(N-乙?；?-氨基磺酸酯11、2-乙氧基-17α-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯12、2，17β-二甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(5)13、17β-乙氧基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯14、2-甲氧基-17β-(1-丙氧基)-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯15、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(4)16、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基(N-乙酰基)-氨基磺酸酯17、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯18、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基(N-乙?；?-氨基磺酸酯19、2-乙基-17β-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯20、17β-乙氧基-2-乙基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯21、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙氨基磺酸酯22、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙-(N-乙?；?-氨基磺酸酯(3)23、2-乙氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙氨基磺酸酯(3)24、2-乙氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙-(N-乙?；?-氨基磺酸酯(6)25、2-乙基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙氨基磺酸酯(6)26、2-乙基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙-(N-乙?；?-氨基磺酸酯此外，本發(fā)明的主題為通式I的化合物及其藥物學可接受的鹽，其中R2代表C1-C5烷基、C1-C5烷氧基或基團-O-CnFmHo，其中n＝1、2、3、4、5或6，m＞1且m+o＝2n+1，R14和R15各自代表氫原子或一起組成亞甲基，R16代表氫原子，R17代表氫原子、羥基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基或基團-CnFmHo，其中n＝1、2、3、4、5或6，m＞1且m+o＝2n+1，X代表氫原子、C1-C5烷基，其中在甾體骨架的B環(huán)和D環(huán)中，虛線也可以形成最多兩個雙鍵。不同的烷基、不飽和烷基、和可氟化的C1-C5烷氧基與那些所列用于本發(fā)明應用中的基團相同。根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選使用以下通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯，其中R2代表甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或2，2，2-三氟乙氧基；R14和R15各自代表H或一起組成亞甲基；R16代表氫原子；R17代表氫原子、羥基、或OC1-C5烷基，X代表氫原子、甲基，其中在甾體骨架的B環(huán)和D環(huán)中，虛線也可以形成8，9-雙鍵或16，17-雙鍵。根據(jù)本發(fā)明，尤其優(yōu)選下述化合物1、17β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯2、17α-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯3、2-乙氧基-17β-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯4、2-乙氧基-17α-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯5、2，17β-二甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯6、17β-乙氧基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯7、2-甲氧基-17β-(1-丙氧基)-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯8、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯9、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯10、2-乙基-17β-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯11、17β-乙氧基-2-乙基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯具體實施方式藥理學資料1、微管蛋白聚合的抑制在多種模型中測試了本發(fā)明的化合物。本發(fā)明通式I的化合物的卓越之處在于其對微管蛋白聚合的抑制遠高于2-甲氧基雌二醇。微管蛋白聚合的影響的體外試驗按如下方法進行根據(jù)Shelanski等(Shelanski等Proc.Natl.Acad.Sci.USA1973，70，765-8)，微管蛋白從豬腦中經(jīng)循環(huán)裝配/釋放(cyclicassembling/disassembling)而純化。使用的緩沖系統(tǒng)包括以下成分20mmol的PIPES(1，4-哌嗪-二乙烷-磺酸，pKa6.8)、80mmol的NaCl、0.5mmol的MgCl2、1mmol的EGTA(乙二醇-雙-(2-氨基亞乙基)-四乙酸)。為測試活性成分，使用的蛋白濃度為1mg/ml(約10-5mmol的微管蛋白)。根據(jù)Lowry法(Lowry等，J.Biol.Chem.1951，193，265-75)用牛血清白蛋白作為標準品進行蛋白的測定。在0.25mmol的GTP存在下加熱樣品至37℃以實施微管蛋白的裝配。通過比濁法在波長340nm處測定微管蛋白的形成。通常在20分鐘后達到平衡狀態(tài)，其中微管蛋白的裝配物(assemblate)濃度(對應于微管濃度)不再增大且濁度值不再增加。通過在開始裝配或平衡狀態(tài)時加入活性成分對其進行測試。用濁度曲線與對照的偏差來表征其活性。為了監(jiān)測活性和評估所測定的濁度值，通常在用1％的乙酸雙氧鈾水溶液進行負染色后，實施該裝配物的透射電子顯微鏡研究(CEM902A，Zeiss/Oberkochen)。表12.細胞增殖的抑制本發(fā)明的化合物的特征是對細胞增殖的有效抑制。在96孔微量滴定板上進行以下細胞系的細胞培養(yǎng)1.MaTu/ADR多重耐藥性人乳腺腫瘤細胞(EpoGmbHBerlin)，5000個細胞/孔；2.HCT116人結腸腫瘤細胞(ATCCCCL-247)，3000個細胞/孔；3.NCl-H460人非小細胞肺癌細胞(ATCCHTB-177)，3000個細胞/孔；4.DU145人前列腺腫瘤細胞(ATCCHTB-81)，5000個細胞/孔；5.HMVEC人原代皮膚微血管內(nèi)皮細胞，7500個細胞/孔。在細胞孵化培養(yǎng)箱中于37℃下溫育24小時后，用結晶紫對微量滴定板內(nèi)的細胞進行著色(參比板)，而測試板上的細胞用測試物質(zhì)在濃度為0.1-10μm下以及只用DMSO溶劑(溶劑對照)溫育4天。通過用結晶紫對細胞染色來測定細胞增殖。結晶紫的消光在595nm處用光度測定法進行測定。在將消光值對參比板(0％)、溶劑對照(100％)歸一化后測定測試板上細胞數(shù)量的變化百分數(shù)。由物質(zhì)濃度來確定細胞生長的半數(shù)最高抑制率(IC50)，其中細胞數(shù)目為溶劑對照的細胞數(shù)的50％。表2劑量通常，當每日劑量含每公斤體重5μg至50mg的本發(fā)明化合物時可獲得滿意的效果。對于較大的哺乳動物例如人，推薦的每日劑量為每公斤體重10μg至30mg。根據(jù)病人的年齡及體質(zhì)，本發(fā)明化合物的適宜劑量為每公斤體重每日0.005到50mg，必要時該每日劑量可給藥一次或多次。然而，基于雌激素氨基磺酸酯的特殊的儲庫效應，本發(fā)明的化合物也可以大于每日一次的間隔給藥?；谛禄衔锏乃幬镏苿┑呐渲埔勒毡绢I域已知的方式實施，通過將活性物質(zhì)與通常用于制劑的載體、填充劑、影響分解的物質(zhì)、粘合劑、潤濕劑、潤滑劑、吸收劑、稀釋劑、矯味劑、著色劑等一同處理，并轉化為所需的給藥形式。此處可參見文獻Remington’sPharmaceuticalScience，15thEdition，MackPublishingCompany，EastPennsylvania(1980)。對于口服給藥，尤其適合的是片劑、包衣片、膠囊、丸劑、散劑、顆粒劑、錠劑、混懸劑、乳劑或溶液劑。對于非胃腸道給藥，注射和輸液制劑均可。對于關節(jié)內(nèi)注射，可應用相應的晶體混懸劑。對于肌肉注射，可應用水性和油性注射液或混懸劑以及相應的儲庫型制劑。對于直腸給藥，該新化合物可以栓劑、膠囊、溶液劑(如以灌腸劑的形式)以及軟膏的形式用于全身和局部治療。對于該新化合物的肺部給藥，其可以氣霧劑和吸入劑的形式應用。對于局部施用，可應用明膠、軟膏、油膏(fattyointment)、乳膏、糊劑、散劑、乳劑(milk)和酊劑。為達到足夠的藥理作用，在這些制劑中，通式I的化合物的劑量應為0.01％-20％。本發(fā)明包括本發(fā)明通式I的化合物在制備藥物、尤其是用于治療通過抑制微管蛋白聚合能對其產(chǎn)生積極影響的腫瘤疾病的藥物中的應用。本發(fā)明通式I的化合物優(yōu)選用于制備治療男性及女性性腺、男性和女性生殖器官包括乳腺的腫瘤的藥物，尤其是前列腺癌或乳腺癌。本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其含有至少一種本發(fā)明特別優(yōu)選的任選地為藥物學/藥理學相容性鹽的形式的化合物，不含或含藥物學相容性的輔料和/或載體。這些藥物組合物和藥物可用于口服、直腸、陰道、皮下、經(jīng)皮、靜脈內(nèi)或肌肉內(nèi)給藥。除通常使用的載體和/或稀釋劑之外，它們還包含至少一種本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物。本發(fā)明的藥物利用常用的固體或液體載體或稀釋劑以及與預期的給藥方式及劑量相應的常用藥用輔料，并以已知的方法進行制備。優(yōu)選的制劑包含適用于口服給藥的調(diào)劑形式。這種調(diào)劑形式為例如片劑、薄膜衣片劑(filmtablet)、包衣片劑、膠囊、丸劑、散劑、溶液劑或混懸劑或其它儲庫方式。包含至少一種本發(fā)明化合物的藥物組合物優(yōu)選為口服給藥。也可考慮使用非胃腸道制劑如注射溶液劑。另外，作為制劑也可提及如栓劑以及用于陰道給藥的制劑。相應的片劑可通過下述方法得到，例如將活性成分與已知輔料例如惰性稀釋劑如葡萄糖、糖、山梨醇、甘露醇、聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑如玉米淀粉或海藻酸；粘合劑如淀粉或明膠；潤滑劑如硬脂酸鎂或滑石粉；和/或用于達到儲庫效果的物質(zhì)如羧基聚亞甲基(carboxylpolym乙基ene)、羧甲基纖維素、醋酸纖維素酞酸酯、或聚醋酸乙烯酯相混合。片劑也可由若干層組成。相應地，包衣片劑可通過以常用的片劑包衣劑例如聚乙烯基吡咯烷酮或蟲膠、阿拉伯膠、滑石、氧化鈦或糖將片芯包衣制備，片芯的制備與片劑類似。就此而言，包衣片劑的殼也可由若干層組成，其中可應用上述提及的片劑輔料。含有本發(fā)明通式I的化合物的溶液劑或混懸液可包含其他口味改善劑(taste-improvingagent)如糖精、環(huán)拉酸鹽(cyclamate)或糖，以及例如矯味劑如香草或柑橘提取物。另外它們還可包含助懸輔料如羧甲基纖維素鈉或防腐劑如對羥基苯甲酸。含有本發(fā)明通式I的化合物的膠囊可通過例如將如通式I的化合物與惰性載體如乳糖或山梨醇相混合后裝入明膠膠囊中來制備。適宜的栓劑可例如通過與用于該目的的載體如中性脂肪或聚乙二醇或其衍生物混合來制備。為治療前列腺癌，本發(fā)明的化合物可以與下列一種或多種活性成分聯(lián)合給藥1)抗雄激素如CPA、氟他胺、casodex等2)促性腺激素(GnRH)激動劑3)5α-還原酶抑制劑如非那雄胺4)細胞生長抑制劑5)VEGF-激酶抑制劑6)抗促孕激素7)抗雌激素8)反義寡核苷酸9)EGF抗體10)雌激素并且，本發(fā)明通式I的化合物可用于治療或預防其它上述未提及的病理癥狀。本發(fā)明還包括通式I化合物的制備。本發(fā)明通式I的化合物可用下述方法進行制備合成通法部分如文獻(T.Nambara等，Chem.Pharm.Bull.1979，18，474-480)所述，雌-1，3，5(10)-三烯-17-酮衍生物的2位碳原子的官能化優(yōu)選為通過傅克酰基化反應(Friedel-Craftsacylation)進行。在改變3位的保護基后，通過Baeyer-Villiger氧化反應(M.B.Smith，J.March，March’sAdvancedOrganicChemistry，5thEdition，WileySons2001，1417-1418以及該文所引用的文獻)生成2-羧基-雌-1，3，5(10)-三烯-17-酮。將該酯皂化并在堿性條件下與相應的鹵代烷反應轉化為2-烷基醚?；蛘撸撘阎?7-酮可被還原、醚化。3位保護基團的斷裂可如文獻(T.W.Greene，P.G.M.Wuts，ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis，Wiley&Sons，1999，249-275)所述進行。該方法或從文獻中(P.N.Rao，J.W.Cessac，Steroids2002，67，1065-1070及其所引用的文獻)得知的其它方法可用于18a-高衍生物。優(yōu)選通過傅克?；磻@得的2-?；苌锟赏ㄟ^以硼氫化鈉還原隨后經(jīng)氫化生成相應的2-烷基衍生物。從其中R14和R15一起組成亞甲基橋或在甾體骨架上具有另外的雙鍵的通式II化合物(R2＝H)開始2位羥基化作用，該2位羥基化作用通過鄰位金屬化(ortho-metallation)實施，其中優(yōu)選以醚類保護基(如H.E.Paaren，S.R.Duff，US6448419及其所引用的文獻)或氨基甲酸酯保護基(V.Snieckus，Chem.Rev.1990，90，879-933)作為鄰位定位保護基(otho-directingprotectivegroup)用于R3。用三烷基硼酸鹽進行2位鋰化然后用過氧化氫進行堿性氧化后實施親電取代。選擇性獲得的2-羥基可按已知的方法(Z.Wang，M.Cushman，Synth.Commun.1998，28，4431)轉化為2-烷氧基化合物并脫去保護。隨后的Oppenauer氧化(C.Djerassi，Org.React.1951，6，207，S.Schwarz等，Pharmazie[Pharmaceutics]2001，56，843-849)得到17-酮化合物，其可進一步官能化并經(jīng)已知方法反應生成氨基磺酸酯。從2-官能化的17-羰基衍生物開始，該17-羰基官能團可通過Wolff-Kishner還原反應除去(例如R.H.Peters等，J.Med.Chem.1989，32，1642；G.E.Agoston等，WO02/42319)，然后在3一位進行氨磺酸酯化。以下將基于下述實施例非限制性地對本發(fā)明進行更詳細的闡述實施例制備方法制備氨基磺酸酯的合成通法1在攪拌下將一當量的雌-1，3，5(10)-三烯衍生物溶解或混懸于二氯甲烷中，然后與5當量的2，6-二-叔丁基吡啶混合。之后，在氬氣下加入10當量的氨磺酰氯并于室溫下攪拌。攪拌溶液直到反應完全(TLC監(jiān)測，1-5小時)然后與水混合。在對酸敏感的化合物中，事先用10當量的三乙胺來進行緩沖。用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取水相若干次。合并的有機相經(jīng)硫酸鈉干燥并真空濃縮，然后通過快速色譜(flashchromatography)純化。氨基磺酸酯?；铣赏ǚ?將一當量的雌-1，3，5(10)-三烯-氨基磺酸酯或雙氨基磺酸酯溶于吡啶中，并在冰浴(0-5℃)冷卻下與5當量的酸酐混合。室溫下繼續(xù)攪拌1小時然后與水混合。用二氯甲烷或乙酸乙酯萃取水相若干次。合并的有機相用6N鹽酸，然后用水及氯化鈉溶液洗滌。接著用硫酸鈉將其干燥、真空濃縮，然后用快速色譜純化。實施例117β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(1)將400mg的2-甲氧基-17-氧代-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯溶解在5ml的甲醇和5ml的四氫呋喃中，然后在室溫下用兩刮勺尖的硼氫化鈉混合。2小時后，用1N鹽酸進行酸化，然后在旋轉蒸發(fā)器中蒸發(fā)濃縮。殘留物與水混合，并用乙酸乙酯萃取(3×)。合并的有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌，干燥，然后在旋轉蒸發(fā)器中蒸發(fā)濃縮。得到425mg(定量)無色泡沫狀的17β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(1)。1H-NMR(DMSO-d6)δ＝0.93(t，J＝7.4Hz，3H；18-CH3)，2.70-2.74(m，2H；6-CH2)，3.60(m，1H；17α-H)，3.76(s，3H；2-OCH3)，4.54(d，J＝4.3Hz，1H；OH)，6.96(s，2H；1-H，4-H)，7.79(brs，2H；NH2).實施例22-乙氧基-17β-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(2)將400mg的2-乙氧基-17-氧代-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯溶解在5ml的甲醇和5ml的四氫呋喃中，然后在室溫下用兩刮勺尖的硼氫化鈉混合。2小時后，用1N鹽酸進行酸化，然后在旋轉蒸發(fā)器中蒸發(fā)濃縮。殘留物與水混合，并用乙酸乙酯萃取(3×)。合并的有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌，干燥，然后在旋轉蒸發(fā)器中蒸發(fā)濃縮。得到387mg(96％)無色泡沫狀的2-乙氧基-17β-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(2)。1H-NMR(DMSO-d6)δ＝0.93(t，J＝7.2Hz，3H；18-CH3)，1.30(t，J＝7.0Hz，3H；2-CH3)，2.71-2.73(m，2H；6-CH2)，3.59-3.62(m，1H；17α-H)，4.01-4.06(m，2H；2-OCH2)，4.53(d，J＝4.3Hz，1H；OH)，6.95，6.96(2s，2H；1-H，4-H)，7.76(brs，2H)；NH2).實施例32-乙氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙氨基磺酸酯(3)根據(jù)通法1，使144mg的2，17β-二羥基-2-乙氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯反應，形成產(chǎn)物，然后通過快速色譜進行純制(甲苯/乙酸乙酯＝3∶1)。得到125mg(59％)2-乙氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙氨基磺酸酯(3)，其為無定型固體。1H-NMR(DMSO-d6)δ＝0.92(t，J＝7.0Hz，3H；18-CH3)，2.71-2.76(m，2H；6-CH2)，4.04(q，2H；2-OCH2)，4.36(t，3J＝8.0Hz，1H；17aα-H)，6.96，6.97(2s，2H；1-H，4-H)，7.39(s，2H；NH2)，7.79(s，2H；NH2).實施例42-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(4)根據(jù)通法1，使3-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯反應，形成產(chǎn)物，然后通過快速色譜進行純制(甲苯/乙酸乙酯＝20∶1→10∶1)。得到無色晶體狀的2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯(4)，其產(chǎn)率為91％。1H-NMR(CDCl3)δ＝0.81(t，3J＝7.4Hz，3H；18-CH3)，2.78-2.81(m，2H；6-CH2)，3.86(s，3H；2-OCH3)，5.02(s，2H；NH2)，6.92，7.02(2s，2H；1-H，4-H).實施例52，17β-二甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯17.00(s，1H)，6.90(s，1H)，5.14(s，2H)，3.86(s，3H)，3.36(m，4H)，2.78(m，2H)，2.44(m，1H)，2.20(m，2H)，2.08(m，1H)，1.87(m，1H)，1.62(m，2H)，1.5-1.1(m，8H)，0.98(m，3H)實施例62-乙基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基氨基磺酸酯17.92(s，2H)，7.38(s，2H)，7.20(s，1H)，7.00(s，1H)，4.36(s，1H)，2.80(m，2H)，2.62(m，2H)，2.32(m，2H)，2.18(m，2H)，1.80(m，1H)，1.64(m，1H)，1.52-1.10(m，12H)，0.92(m，3H)權利要求1.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯及其藥物學可接受的鹽在制備藥物中的應用，其中基團R2、R14-R17以及X具有以下含義R2代表C1-C5烷基、C1-C5烷氧基或基團-O-CnFmHo，其中n＝1、2、3、4、5或6，m＞1且m+o＝2n+1，R14和R15各自代表氫原子或一起組成亞甲基或額外的鍵，R16代表氫原子，R17代表氫原子、羥基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基或基團-CnFmHo，其中n＝1、2、3、4、5或6，m＞1且m+o＝2n+1，或代表基團SO3NHX，X代表氫原子、C1-C5烷基或C1-C5?；?，其中在甾體骨架的B環(huán)和D環(huán)中，虛線也可以最多形成兩個雙鍵。2.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，其中X為氫原子或C1-C5?；?.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，其中R2為甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或2，2，2-三氟乙氧基。4.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，其中R14和R15各自為H或一起組成亞甲基。5.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，其中R16為氫原子。6.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，其中R17為氫原子、羥基、OC1-C5烷基或SO3NHX。7.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，即1)、17β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯2)、17α-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯3)、2，17β-二甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯4)、2，17α-二甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯5)、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，14-四烯-3-基氨基磺酸酯6)、17β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯7)、17β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基(N-乙?；?-氨基磺酸酯8)、17α-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯9)、2-乙氧基-17β-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯10)、2-乙氧基-17β-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基(N-乙酰基)-氨基磺酸酯11)、2-乙氧基-17α-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯12)、2，17β-二甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯13)、17β-乙氧基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯14)、2-甲氧基-17β-(1-丙氧基)-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯15)、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯16)、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基(N-乙?；?-氨基磺酸酯17)、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯18)、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基(N-乙酰基)-氨基磺酸酯19)、2-乙基-17β-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯20)、17β-乙氧基-2-乙基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯21)、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙氨基磺酸酯22)、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙-(N-乙?；?-氨基磺酸酯23)、2-乙氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙氨基磺酸酯24)、2-乙氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙-(N-乙酰基)-氨基磺酸酯25)、2-乙基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙氨基磺酸酯26)、2-乙基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3，17β-二基雙-(N-乙酰基)-氨基磺酸酯。8.如前述權利要求之一所述的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，其是制備用于治療通過抑制微管蛋白聚合可對其產(chǎn)生積極影響的腫瘤疾病的藥物。9.如前述權利要求之一所述的通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，其是制備用于治療男性及女性性腺、男性和女性生殖器官包括乳腺的腫瘤疾病的藥物。10.如前述權利要求之一所述的通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，其是制備用于治療乳腺癌的藥物。11.如前述權利要求之一所述的通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯的應用，其是制備用于治療前列腺癌的藥物，其中可使用至少一種其它活性成分。12.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯及其藥物學可接受的鹽，其中基團R2、R14-R17以及X具有以下含義R2代表C1-C5烷基、C1-C5烷氧基或基團-O-CnFmHo，其中n＝1、2、3、4、5或6，m＞1且m+o＝2n+1，R14和R15各自代表氫原子或一起組成亞甲基，R16代表氫原子，R17代表氫原子、羥基、C1-C5烷基、C1-C5烷氧基或基團-CnFmHo，其中n＝1、2、3、4、5或6，m＞1且m+o＝2n+1，或基團SO3NHX，X代表氫原子或C1-C5烷基，其中在甾體骨架的B環(huán)和D環(huán)中，虛線也可以形成最多兩個雙鍵。13.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯，其中X為氫原子或甲基。14.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯，其中R2為甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或2，2，2-三氟乙氧基。15.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯，其中R14和R15各自代表氫原子或者一起組成亞甲基。16.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯，其中R16為氫原子。17.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯，其中R17代表氫原子、羥基或OC1-C5烷基。18.通式I的2-取代的18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯，即、1)、17β-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯2)、17α-羥基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯3)、2-乙氧基-17β-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯4)、2-乙氧基-17α-羥基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯5)、2，17β-二甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯6)、17β-乙氧基-2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯7)、2-甲氧基-17β-(1-丙氧基)-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯8)、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯9)、2-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)，16-四烯-3-基氨基磺酸酯10)、2-乙基-17β-甲氧基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯11)、17β-乙氧基-2-乙基-18a-高雌-1，3，5(10)-三烯-3-基氨基磺酸酯。19.一種藥物組合物，其含有至少一種如權利要求12至18之一所述的通式I化合物及藥物學相容性的輔料和/或載體以及任選的至少一種其他活性成分。全文摘要本發(fā)明涉及通式I的2－取代的18a－高雌－1，3，5(10)－三烯－3－基氨基磺酸酯及其藥物可接受的鹽在制備藥物中的應用，其中R文檔編號A61K31/565GK1751060SQ200480004594公開日2006年3月22日申請日期2004年2月19日優(yōu)先權日2003年2月19日發(fā)明者亞歷山大·希里施,奧拉夫·彼得斯,克里斯蒂安·格格,伊娜·舍利茨－霍夫曼,格哈德·西邁斯特,埃伯哈德·翁格爾,維爾科·雷根哈特申請人:舍林股份公司