專利名稱：燈盞細辛酚及其制備方法和在制藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療心腦血管疾病的藥物，具體地說涉及從燈盞細辛中提取的有效部位燈盞細辛酚，其制備方法和在制藥中的應(yīng)用。
2、背景技術(shù)心腦血管疾病日益增多，其病情嚴(yán)重，是人類病死的第一原因，因而其發(fā)病與治療也受到醫(yī)藥界和社會的格外關(guān)注。加以經(jīng)濟發(fā)展，人口老齡化，老年人的心腦血管疾病又多，使問題更尖銳。燈盞細辛又名燈盞花，系菊科飛蓬屬植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.的干燥全草，具有散寒解表，祛風(fēng)除濕，活絡(luò)止痛的功效。燈盞花首見于明代醫(yī)學(xué)家藍止庵所著《滇南本草》中記載“燈盞花，一名燈盞菊，細辛草。味苦、辛，性溫”，能治“左癱右瘓，風(fēng)濕疼痛，水煎，點酒服”等[藍止庵，《滇南本草》，第二卷，第300頁]。云南省邱北縣苗族醫(yī)生羅氏使用燈盞花治療中風(fēng)偏癱，為祖?zhèn)髅胤剑?0年代中草藥群眾運動中，羅氏獻出了該秘方。經(jīng)現(xiàn)代藥理和臨床驗證表明，燈盞細辛用于治療腦血管病療效確切，爾后，燈盞細辛被收載入《中國藥典》1977年版一部[《中國藥典》，77年版，一部，245頁]。云南藥物研究所張人偉等首次從燈盞細辛中分離到黃酮類化合物燈盞乙素，并把燈盞花乙素為主、含少量燈盞甲素(芹菜素苷)的混合物稱為燈盞花素(breviscapin)[張人偉，楊生元，林永月，藥學(xué)學(xué)報(1981)，16(1)，68-6]，在此基礎(chǔ)上研究和開發(fā)了燈盞花素片、燈盞花素注和注射用燈盞花素等制劑，與燈盞花素相關(guān)的專利有以下(見表1)。
表1與燈盞花素相關(guān)的專利公開號申請日期發(fā)明名稱發(fā)明者 申請者CN1053609AAug.，7，1991 燈盞花素片原料藥的 左丞益，楊生元，云南生物制藥廠提取工藝張卓申，江鐵英，王杰生，張曉東CN1133180AOct.，16， 注射用燈盞花素凍干 馬騰云，趙爾耀，昆明群星制藥廠1996劑及制備工藝郭海霞CN1049212CFeb.，9，2000 燈盞花素粉針劑及制 楊兆祥 昆明制藥股份有備方法 限公司CN1385162ADec.，18，2002 燈盞花素控釋放片及 靳玲，王昕，張瑩， 沈陽東宇工業(yè)技制備方法徐建軍，高欣術(shù)研究院有限公司CN1383817ADec.，11， 口服燈盞花素緩釋制 張均壽，李永紅，昆明制藥集團有2002劑 丁江生，字文光 限公司CN1359682AJul.，24，2002 燈盞花素磷脂復(fù)合物 鄧意輝 沈陽藥科大學(xué)及其制備方法CN1364516AAug.，21，2002 納米燈盞花素制劑及 楊孟君 楊孟君其制備方法CN1385163ADec.，18， 具有活血化淤作用的 王建蓉 四川成都青羊中2002燈盞花素的新藥物制 醫(yī)藥科技應(yīng)用研備方法 究所CN1062161CFeb.，21， 制備穩(wěn)定燈盞花素注 張紅軍，趙化芳，大連弘豐制藥廠2001射液的方法 許宏昌CN1069520CAug.，15， 燈盞花素軟膠囊及其 冉立新，金兆云，昆明制藥股份有2001生產(chǎn)方法王存志，李南高 限公司CN1318373AOct.，24，2001 燈盞花素在制藥中應(yīng) 朱邦豪 朱邦豪用US.6084080Jan.15，2000BrevscapinumLipin，Zeng FarlongInternati onalInc.CN1191730ASep.，2，1998 燈盞花大輸液系列制 李春華，邵建本，李春華，邵建本，劑 任志才 任志才1252277A May.，10，2000 一種燈盞花乙素速溶 羅國安，王義明，清華大學(xué)片的制備方法包如財，曲峻CN1136434 Nov.27，1996咖啡酰氧基奎寧酸岳建民，孫漢董，云南安泰高新技在制藥中的應(yīng)用 蒲家耀，丁靖凱，術(shù)公司林中文 中國科學(xué)院昆明植物研究所CN1064236CFeb.13，1996焦袂康酸及其葡萄糖 孫漢董，岳建民，中國科學(xué)院昆明苷在制藥中的應(yīng)用陳玉磐，張憲昌，植物研究所蒲家耀，林中文，丁靖凱CN1252276 Oct.27，1998一種含1-(2’-γ-吡 張衛(wèi)東，孔德云，國家醫(yī)藥管理局喃酮)-6-咖啡酰基-β李惠庭 上海醫(yī)藥工業(yè)研-D-葡萄糖苷的制劑及 究院制備方法燈盞花素特點是成分基本清楚，其中燈盞乙素含量在90％以上，含有其它少量的其它類化合物，有關(guān)它的專利大都為制劑專利，其中U.S.Pat.No.60840是燈盞乙素(scutellarin)及其苷元黃芩素(scutellarein)混合物的提取工藝專利，而CN1318373A是燈盞花素新用途的專利?，F(xiàn)有技術(shù)認(rèn)為燈盞細辛中的有效成分只為燈盞花乙素，本發(fā)明人從1992年開始對燈盞細辛的化學(xué)和活性成分進行了系統(tǒng)研究，首次發(fā)現(xiàn)了燈盞細辛中存在一咖啡酸奎寧酸酯類化合物3，5-二咖啡酰基奎寧酸，3，4-二咖啡?；鼘幩?3，4-dicaffeoyl quinic acid)]，申請專利CN1136434。并發(fā)現(xiàn)了燈盞細辛中焦袂康酸(promenonic acid)及飛蓬苷(erigenoide)在治療心腦血管疾病方面應(yīng)用，并申請專利CN1064236C。張衛(wèi)東等申請了從燈盞細辛中分離到的活性成分1-(2’-γ-吡喃酮)-6-咖啡?；?β-D-葡萄糖苷的制劑和制備方法的專利CN1252276。在本發(fā)明人深入研究燈盞細辛活性成分中，發(fā)現(xiàn)了新活性成分飛蓬酯乙。專利CN10911301A公開了一中從燈盞細辛提取物制成的制劑燈盞花注射液，其特征在于采用燈盞花原料用水提取，在用乙酸乙酯精提，再制成注射劑，在其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中主要測定其總黃酮，然而經(jīng)我們實驗，用乙酸乙酯只能提取極少量的燈盞細辛中主要活性成分燈盞乙素，而大部分是咖啡?；鼘幩狨ヮ悾驗闊舯K乙素的最大紫外吸收與咖啡?；鼘幩狨ヮ愒谙嗤秶鷥?nèi)，因此用紫外法測定總黃酮含量無專屬性，實際上是測定的是咖啡酸酯類化合物和少量黃酮的含量，因此，此專利公開的是一種成分不明的提取物及其制劑。CN1381236A公開了野黃芩苷(即燈盞乙素，Scutellarein)和咖啡?？鼘幩岬乃幱媒M合物的專利，其特征是野黃芩苷和由3種以上的一、二咖啡?？鼘幩峤M成的混合物，其中野黃芩苷的含量為5-25％，咖啡?？鼘幩岷吭?5-95％在此發(fā)明中，用HPLC測定野黃芩苷含量，用UV法測定咖啡?？鼘幩犷惖目偤?。前已述及，由于燈盞乙素的最大紫外吸收與咖啡?；鼘幩狨ヮ愒谙嗤秶鷥?nèi)，用紫外法測定含量無專屬性，在測定制劑的咖啡?？鼘幩岷繒r實際上測的野黃芩苷和咖啡?？鼘幩岬目偤俊ｕ；鼘幩狨ヮ愒谙嗤秶鷥?nèi)，用紫外法測定含量無專屬性，在測定制劑的咖啡酰奎寧酸含量時實際上測的野黃芩苷和咖啡?？鼘幩岬目偤?。
3、發(fā)明內(nèi)容基于現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含新的活性成分的有效部位燈盞細辛酚，并提供該有效部位作為藥物的應(yīng)用。本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案一種燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚，該提取物活性成分主要由含量為10-40％的燈盞乙素(黃芩素苷、野黃芩苷)和含量為40-60％的咖啡酸酯組成，其中咖啡酸酯為3，5-二咖啡?；鼘幩帷?，5-二咖啡酰基奎寧酸、飛蓬酯乙和4，5-二咖啡?；鼘幩崴膫€化合物。
本發(fā)明同時提供了有效部位燈盞細辛酚的制備方法，取燈盞細辛(Erigeronbrevicapus)的全草或地上部分，粉碎，用0-95％乙醇水溶液或丙酮水溶液提取三次，合并三次提取液，減壓濃縮，濃縮液上大孔樹脂層析，先用水洗脫，再用40％-50乙醇洗脫，收集40％-50乙醇洗脫液后減壓濃縮，該濃縮液用乙酸乙酯萃取三次，回收乙酸乙酯萃取液得總咖啡酸酯；乙酸乙酯萃取后的母液加濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，靜置24小時后析出燈盞乙素粗結(jié)晶，用乙醇重結(jié)晶兩次得精制燈盞乙素；合并總咖啡酸酯和燈盞乙素得有效部位燈盞細辛酚。
本發(fā)明進一步提供了燈盞細辛酚在制備預(yù)防和治療心腦血管疾病、老年癡呆疾病、高脂疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的發(fā)明思路基于在深入研究燈盞細辛化學(xué)成分和活性成分過程中，發(fā)現(xiàn)了新活性成分，提供了一種含新的活性成分的有效部位燈盞細辛酚。該提取物特征在于含有五個活性成分燈盞乙素、3，5-二咖啡?；鼘幩?、1，5-二咖啡酰基奎寧酸、飛蓬酯乙和4，5-二咖啡?；鼘幩幔行碌幕钚猿煞诛w蓬酯乙，其中燈盞乙素含量10-40％，四個咖啡酸酯含量之和在40-60％。其中它們具有如下結(jié)構(gòu)特征(見附圖2)
燈盞細辛燈盞細辛酚中活性成分峰號 化合物5 燈盞花乙素(黃芩素苷，Scutellarin)7 3，5-二咖啡?；鼘幩?3，5-dicaffeoyl quinic acid)8 1，5-二咖啡?；鼘幩?1，5-dicaffeoyl quinic acid)10 飛蓬酯乙(Erigoster B)12 4，5-二咖啡?；鼘幩?1，5-dicaffeoyl quinic acid)本發(fā)明提供由從燈盞細辛中提取有效有效部位燈盞細辛酚，該提取物提取工藝顯著特點在于通過該工藝能夠提取新的活性成分，并在提取工藝中應(yīng)用大孔樹脂，能有效地出去糖、蛋白質(zhì)、氨基酸等雜質(zhì)，提高了活性成分含量。
制備工藝取燈盞細辛(Erigeron brevicapus)的全草或地上部分，粉碎，用0-95％乙醇水溶液或丙酮水溶液提取三次，合并三次提取液，減壓濃縮。濃縮液上大孔樹脂層析，先用水洗脫，再用40％-70乙醇洗脫，收集40％-70乙醇洗脫液后減壓濃縮，該濃縮液用乙酸乙酯萃取三次，回收乙酸乙酯萃取液得總咖啡酸酯；乙酸乙酯萃取后的母液加濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，靜置24小時后析出燈盞乙素粗結(jié)晶，用乙醇重結(jié)晶兩次得精制燈盞乙素；合并總咖啡酸酯和燈盞乙素得有效部位燈盞細辛酚。(工藝流程圖見圖1)本發(fā)明提供有效有效部位燈盞細辛酚的HPLC的含量測定方法，含量測定方法如下色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，檢測波長為330nm，理論板數(shù)按燈盞乙素計算不低于6000。流動相與指紋圖譜測定相同，見表1。
表1燈盞細辛酚指紋圖譜HPLC測定流動相條件時間(min) 腈(％) 甲醇(％) 水(含0.5％甲酸)(％)0 11.5 15 73.53011.5 15 73.54015 15 705545 0 5560100 0 0
供試品溶液的制備 取本品25mg，精密稱定，用甲醇溶解置50ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。
對照品溶液的制備 取燈盞乙素、3，5-二咖啡?；鼘幩?、1，5-二咖啡?；鼘幩帷w蓬酯乙和4，5-二咖啡?；鼘幩岣?0mg，精密稱定，加甲醇溶解置于50ml容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計算，含燈盞乙素(C21H18O12)不得低于10-40％，總咖啡酸酯含量＝3，5-二咖啡?；鼘幩岷?1，5-二咖啡?；鼘幩岷?飛蓬酯乙含量+4，5-二咖啡酰基奎寧酸，總咖啡酸酯含量在40-60％。
為了便于理解本發(fā)明在治療和預(yù)防心腦血管疾病，下面提供燈盞細辛有效有效部位燈盞細辛酚藥理、毒理研究結(jié)果。
藥理作用(1)燈盞細辛酚5，15和30mg/kg靜脈給藥，對沙土鼠雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎再灌注造成的全腦缺血模型有治療作用；能減輕大鼠大腦中動脈阻斷造成的局部腦缺血；能明顯抑制大鼠動、靜脈旁路血栓的生成；能劑量依賴性地抑制ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集反應(yīng)。
(2)燈盞細辛酚7.5，22.5，75mg/kg靜脈給藥，能顯著增強小鼠的耐缺氧能力。
(3)燈盞細辛酚10，30，60μg/ml均能顯著降低大鼠在位灌流的腦血管阻力、增加腦組織的灌注量，表明燈盞細辛酚可增加腦血流、降低血管阻力。
(4)燈盞細辛酚10，30，100mg/kg靜脈給藥，對小鼠的一般行為沒有影響。
(5)燈盞細辛酚10，30，100mg/kg靜脈給藥，對小鼠的自發(fā)活動量有抑制作用，但其作用明顯弱于氯丙嗪。
(6)燈盞細辛酚5，20mg/kg靜脈給藥，對犬的收縮壓、舒張壓、心率、心律無明顯影響；劑量為100mg/kg時，出現(xiàn)一過性的血壓降低。
(7)燈盞細辛酚5，20，100mg/kg靜脈給藥，對犬的呼吸頻率和呼吸幅度無明顯影響。
毒理作用(1)小鼠一次靜脈注射燈盞細辛酚，LD50為577.00mg/kg。
(2)小鼠一次腹腔注射燈盞細辛酚，LD50為713.82mg/kg。
(3)SD大鼠腹腔注射燈盞細辛酚90天，無毒劑量為10mg/kg(臨床推薦最大劑量的10倍)；安全劑量為低于30mg/kg(臨床推薦最大劑量的30倍)；中毒劑量為90mg/kg(約為小鼠LD50的1/8，臨床推薦最大劑量的90倍)。
(4)Beagle狗靜脈注射燈盞細辛酚90天，無毒劑量為5mg/kg(臨床推薦最大劑量的5倍)；安全劑量為低于20mg/kg(臨床推薦最大劑量的20倍)；中毒劑量為80mg/kg(約為小鼠LD50的1/7，臨床推薦最大劑量的80倍)。
本發(fā)明涉及的有效部位燈盞細辛酚可單獨或與其它藥用許可的的輔料按現(xiàn)有技術(shù)制成片劑、膠囊、滴丸、顆粒劑、口服液等劑型。將提取物單獨或與其它藥用許可的輔料配合后按現(xiàn)有方法制成注射液或凍干劑。
有效部位燈盞細辛酚的口服劑型制備方法，是將提取物單獨或與其它藥用許可的輔料配合后按現(xiàn)有方法制成片劑、膠囊、滴丸、顆粒劑、口服液等劑型。
有效部位燈盞細辛酚的注射劑的制備方法，是將提取物單獨或與其它藥用許可的輔料配合后按現(xiàn)有方法制成注射液或凍干劑。


圖1為本發(fā)明燈盞細辛酚的HPLC分析圖；圖2為本發(fā)明燈盞細辛酚五個活性成分的結(jié)構(gòu)圖。
下面將結(jié)合本發(fā)明的實施例來進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不局限于此。
實施例1.燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚的制備工藝取燈盞細辛藥材250公斤，粉碎，過篩，藥粉置于3000升的滲濾罐，用70％乙醇2000升室溫滲濾提取三次(三次共用6000毫升)。合并三次提取液(約5400升)，用球形濃縮罐濃縮至原體積十分之一(約400升)，溫度控制在50℃以下。濃縮液直接上250公斤大孔樹脂(DM-130)層析，層析柱規(guī)格為0.4×2.5米，先用100升水洗洗脫，再用100升50％乙醇洗脫，層析柱用95％乙醇洗去殘留吸附物質(zhì)，供下次使用，收集50％乙醇洗脫部分。50％乙醇洗脫液用用球形濃縮罐濃縮至原體積十分之一(約10升)，該濃縮液用乙酸乙酯萃取三次，每次用10升。濃縮回收乙酸乙酯萃取液得總咖啡酸酯2.45kg(A部分)，乙酸乙酯萃取后的母液加濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，靜置24小時后析出燈盞乙素粗結(jié)晶，該粗結(jié)晶用乙醇重結(jié)晶兩次得精制燈盞乙素1.82kg(B部分)。合并A和B得4.27kg有效有效部位燈盞細辛酚(C部分)。
實施例2.燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚的片劑制備片劑處方有效部位燈盞細辛酚100g淀粉 50g10％淀粉漿10g硬脂酸鎂 2g將提取物與淀粉混合均勻后，加如10％的淀粉漿制成軟材，過14目篩制粒，在70-80℃溫度下干燥，過12目篩整粒，加硬脂酸鎂混合后，壓制成1000片，即得。每片含有效提取物100mg。
實施例3.燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚的膠囊劑制備膠囊劑處方有效部位燈盞細辛酚100g淀粉 50g硬脂酸鎂 2g加處方量得提取物，加80℃干燥的淀粉和硬脂酸鎂混合均勻后，分裝成1000粒膠囊，每粒膠囊含有提取物1000mg。
實施例4.燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚的滴丸劑制備膠囊劑處方有效部位燈盞細辛酚 10g聚乙二醇6000 70g聚乙二醇6000于油浴上加熱至90-100℃，待全部溶解后加入燈盞細辛提取物，攪拌溶解，保持85-90℃，滴入15℃液體石蠟中成丸，制成1000粒滴丸。每片含有效提取物10mg。
實施例5.燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚的口服液制備膠囊劑處方有效部位燈盞細辛酚 100g單糖漿 5000ml苯甲酸鈉 2g加處方量得提取物，溶解與8000ml，加水至10000m1分裝成1000瓶。每瓶10ml，每瓶含有效提取物10mg。
實施例6.燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚的顆粒制備片劑處方有效部位燈盞細辛酚 100g蔗糖 500g淀粉 200g將提取物與淀粉和蔗糖混合均勻后，過10目篩制粒，在70-80℃溫度下干燥，過12目篩整粒，整粒，分裝，即得。
實施例7.燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚的注射劑制備片劑處方有效部位燈盞細辛酚 50g氯化鈉 85g亞硫酸鈉 10g土溫-8020g乙二胺四醋酸二鈉 0.3g50g有效部位溶解在5000ml冷的注射用蒸餾水中，85g氯化鈉、10g亞硫酸鈉、0.3g EDTA-Na2混合后溶解在1000ml熱的注射用蒸餾水中。將兩種溶液混合，加水至10000ml，調(diào)節(jié)pH值在5.0-7.0濾棒過濾，膜過濾，澄明度檢查合格后加氮氣封瓶，在115℃，10atm壓力下滅菌25分鐘。
實施例8.燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚的注射用凍干劑制備片劑處方燈盞細辛酚 18g碳酸氫鈉 6g氯化鈉 24g甘露醇 252g注射用水 加至2000ml按處方取輔料碳酸氫鈉、氯化鈉、甘露醇，加注射用水1600毫升溶解，加活性炭3.2g，吸附30分鐘除熱原，過濾除去活性碳，在濾液中加入燈盞細辛酚，超聲處理使溶解，用1N鹽酸調(diào)節(jié)pH為5.0～7.0，微孔濾膜濾過，加注射用水至2000ml，分裝為1000支，冷凍干燥，上塞，軋蓋，即得。
權(quán)利要求
1.一種燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚，其特征在于該提取物活性成分主要由含量為10-40％的燈盞乙素(黃芩素苷、野黃芩苷)和含量為40-60％的咖啡酸酯組成，其中咖啡酸酯為3，5-二咖啡?；鼘幩帷?，5-二咖啡?；鼘幩?、飛蓬酯乙和4，5-二咖啡?；鼘幩崴膫€化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的有效部位燈盞細辛酚的制備方法，其特征在于取燈盞細辛(Erigeron brevicapus)的全草或地上部分，粉碎，用0-95％乙醇水溶液或丙酮水溶液提取三次，合并三次提取液，減壓濃縮，濃縮液上大孔樹脂層析，先用水洗脫，再用40％-50乙醇洗脫，收集40％-50乙醇洗脫液后減壓濃縮，該濃縮液用乙酸乙酯萃取三次，回收乙酸乙酯萃取液得總咖啡酸酯；乙酸乙酯萃取后的母液加濃鹽酸調(diào)pH值至1～2，靜置24小時后析出燈盞乙素粗結(jié)晶，用乙醇重結(jié)晶兩次得精制燈盞乙素；合并總咖啡酸酯和燈盞乙素得有效部位燈盞細辛酚。
3.權(quán)利要求1所述燈盞細辛酚在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述燈盞細辛酚在制備治療老年癡呆疾病的藥物中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述燈盞細辛酚在制備預(yù)防和治療高脂疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種燈盞細辛有效部位燈盞細辛酚，其制備方法及在制藥中的應(yīng)用，該提取物是從燈盞細辛中提取的新有效部位，主要由活性成分燈盞乙素(黃芩素苷、野黃芩苷)、3，5－二咖啡?；鼘幩帷?，5－二咖啡酰基奎寧酸、飛蓬酯乙和4，5－二咖啡?；鼘幩峤M成。在有效部位燈盞細辛酚中，燈盞乙素含量10－40％，四個咖啡酸酯含量之和在40－60％。本發(fā)明同時提供有效部位燈盞細辛酚的制備方法、有效成分含量測定方法。該提取物可單獨或與其它藥用許可的輔料配合后制成口服和注射劑型，適用于各種心腦血管疾病的預(yù)防和治療。
文檔編號A61P9/00GK1462620SQ0311775
公開日2003年12月24日 申請日期2003年4月22日 優(yōu)先權(quán)日2003年4月22日
發(fā)明者孫漢董, 趙勤實, 彭麗艷, 楊春雷, 胡志祥 申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所