專利名稱：丹參的水溶性提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種藥用原料的提取物及其制備方法和用途。具體地說(shuō)，是由藥用原料丹參得到的水溶性酚酸提取物，該提取物的提取制備方法，及以該提取物作為有效藥用成分的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑藥物，可作為治療高血壓、心力衰竭、糖尿病腎病等疾病的藥物。
背景技術(shù)：
丹參為唇形科植物丹參的干燥根莖，是臨床常用中藥。丹參的化學(xué)成分主要由脂溶性成分和水溶性成分兩部分組成，其中脂溶性成分以丹參酮為代表，藥理臨床研究證實(shí)此類成分具有良好的生理活性。據(jù)《中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用》(第二卷)(鄭虎占主編，學(xué)苑出版社出版，p1099-1110)報(bào)導(dǎo)，自二十世紀(jì)八十年代以來(lái)，不少學(xué)者對(duì)丹參的水溶性成分進(jìn)行了系統(tǒng)研究，分離得到丹參酚酸A、B、C、D，丹參酚，丹參酸甲、乙、丙、原兒茶酸、丹參素、原紫草酸等多種酚酸類化學(xué)成分。《中草藥現(xiàn)代研究》(第二卷)(中醫(yī)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所編著，北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，p492-522)也報(bào)導(dǎo)，大的量藥理研究表明，丹參酚酸類化合物具有較強(qiáng)的抗脂質(zhì)過(guò)氧化、抗血栓、改善血液循環(huán)等作用，丹參酚酸A和B的活性最強(qiáng)，對(duì)缺血缺氧，缺血再灌注引起的心腦細(xì)胞損傷有明顯保護(hù)作用。公開(kāi)號(hào)為CN 1378837A的中國(guó)專利文獻(xiàn)曾公開(kāi)了丹參丹酚酸類化合物在制備抗血栓，抗血小板聚集，抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡和抗艾滋病感染的藥物中的應(yīng)用。公開(kāi)號(hào)為CN 1242364A的中國(guó)專利文獻(xiàn)還公開(kāi)了含丹參酚酸提取物治療消化性潰瘍的應(yīng)用。但目前尚未見(jiàn)對(duì)有關(guān)丹參酚酸提取物在對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性方面影響的研究報(bào)道。
現(xiàn)有研究表明，腎素-血管緊張素廣泛存在于人體內(nèi)，其中約15％存在于血液循環(huán)中，85％存在于如血管壁、心臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟等組織器官中。在高血壓狀態(tài)時(shí)，血液循環(huán)中過(guò)多的血管緊張素II直接引起血管收縮、血壓升高，而組織中過(guò)多的血管緊張素II則可產(chǎn)生對(duì)組織器官長(zhǎng)期的損傷。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，是指直接針對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶為作用靶點(diǎn)的一類新型藥物。它通過(guò)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶而阻止血管緊張素I向血管緊張素II生成，減慢緩激肽的降解，升高緩激肽水平，促進(jìn)一氧化氮和前列腺素生成，產(chǎn)生舒血管效應(yīng)。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑在降低外周血管總阻力、降低血壓的同時(shí)，還能擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、改善心功能；能改善腎血流量和腎小球?yàn)V過(guò)率。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑的應(yīng)用對(duì)葡萄糖代謝無(wú)不良影響，并可降低膽固醇和甘油三酯，可增加胰島素敏感性，對(duì)尿酸代謝也無(wú)不良影響，還可利鈉、利尿且無(wú)低鉀低鎂癥。此外，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑還具有良好的心臟保護(hù)功能，對(duì)高血壓引起的心力衰竭等也有特殊的療效。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑不僅抑制血液循環(huán)中的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，而且還能抑制組織中的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，從而減少機(jī)體內(nèi)血管緊張素II的過(guò)度生成，從而發(fā)揮控制血壓，保護(hù)靶器官的作用。鑒于血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑作用機(jī)理的上述特點(diǎn)，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑目前已作為臨床治療高血壓的一類新型降壓藥物，不僅具有降壓作用強(qiáng)、副作用小的療效特點(diǎn)，尤其對(duì)心臟、血管和腎臟等靶器官具有良好的保護(hù)作用，適用于各種程度的高血壓病的治療，現(xiàn)已被世界衛(wèi)生組織和我國(guó)“高血壓治療指南”列為一線抗高血壓藥物。此外，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑還可以同時(shí)作為臨床治療心力衰竭、腎功能衰竭及糖尿病腎病的重要治療藥物。
眾所周知，高血壓、心力衰竭、糖尿病腎病是目前臨床中的常見(jiàn)病和多發(fā)病，已是目前危害人類健康的幾種主要疾病。因此，從天然藥物原料中篩選研究和發(fā)現(xiàn)具有血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制活性的新藥，可具有良好的臨床應(yīng)用價(jià)值和市場(chǎng)前景。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述情況，本發(fā)明首先將提供一種由藥用原料丹參提取得到的水溶性酚酸提取物。進(jìn)一步，本發(fā)明將提供一種得到所說(shuō)該提取物的提取制備方法。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明還將提供以所說(shuō)的該水溶性酚酸提取物作為有效藥用成分的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑類的藥物，可被用作為治療高血壓、心力衰竭、糖尿病腎病等方面疾病的藥物。
本發(fā)明提供了由藥用原料丹參分離得到的水溶性提取物，是由藥用原料丹參中提取得到的包含有丹參酚酸B、丹參素、原紫草酸三種丹參酚酸在內(nèi)的丹參酚酸成分，其中所說(shuō)的丹參酚酸成分的總重量比例為10-90％，優(yōu)選的是使所說(shuō)的丹參總酚酸的總重量比例為30-85％。
本發(fā)明還提供了以藥用原料丹參為原料，可以采用下述的基本方法分離制取得到上述所說(shuō)的水溶性提取物。
以藥用原料丹參為原料分離制取水溶性提取物的方法，包括a、將粉碎的丹參原料用含水乙醇充分浸漬提取后，對(duì)浸漬提取得到的溶液過(guò)濾并分離除去其中的乙醇后得到剩余的水提取溶液，濃縮，再用去離子水稀釋，離心，備用；b、將a步驟處理后得到的清液再用大孔樹脂進(jìn)行吸附，然后依次分別用水和含水乙醇分別洗滌吸附樹脂，合并洗脫液，除去溶液中的乙醇并濃縮，得到浸膏狀提取物，干燥得干粉。
其中浸漬提取液以10-40％的乙醇溶液為好。浸漬時(shí)所用乙醇溶液的量為藥材丹參重量5-20倍，浸漬提取1-2次，每次至少為24小時(shí)的方式。洗脫液使用的所說(shuō)的該含水乙醇一般可以使用體積含量為60-80％，優(yōu)選的是使用體積含量為70-75％的乙醇溶液。
在上述的提取方法中，對(duì)從所說(shuō)的各含醇提取溶液中除去乙醇的操作，均可以采用常規(guī)的減壓蒸餾方式進(jìn)行，并得到剩余的水提取物溶液部分。
在上述方法的基礎(chǔ)上，對(duì)于所得到的該浸膏狀的提取物，還可以再經(jīng)常規(guī)的真空或冷凍干燥處理后，進(jìn)一步得到為干粉狀的提取物。
用上述方法提取制備得到的浸膏狀或干粉狀的產(chǎn)物，即為含有所說(shuō)的丹參酚酸成分的棕紅色水溶性提取物，味微苦。以丹參素作為對(duì)照品，采用酚類化合物與鐵氰化鉀-三氯化鐵為顯色反應(yīng)，測(cè)定其中含有所說(shuō)的丹參總酚酸一般可為總重量的10-90％。其中該丹參總酚酸提取物經(jīng)硅膠柱正相層析分離和結(jié)構(gòu)確定，其中含有丹參素(I)、丹參酚酸B(II)、原紫草酸(III)三種酚酸類成分，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
以上述所說(shuō)的由藥用原料丹參分離得到的含有丹參酚酸成分的水溶性提取物為有效藥用成分，與藥學(xué)上可接受的輔助添加性成分混合后，按相應(yīng)的常規(guī)藥物制劑方法，可以制備成相應(yīng)的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑類的藥物。例如，與在口服制劑中可以被接受的如崩解劑、賦形劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、填充劑等常用的輔助添加成份混合后，按常規(guī)的操作方法和過(guò)程，可以制成為片劑、丸劑、膠囊劑或多種相應(yīng)的緩釋劑、控釋劑等固體口服制劑形式的藥物；與常規(guī)的增溶劑、乳化劑、潤(rùn)濕劑、起泡或消泡劑等表面活性劑、稀釋劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、矯味劑、增稠劑等混合后，按相應(yīng)的常規(guī)方法，可以制成為如水劑、糖漿等液體制劑形式的口服藥物；與注射劑中常規(guī)使用的適當(dāng)形式的溶劑和附加劑配合和操作，即可以制備成供肌肉注射或靜脈注射用的相應(yīng)粉針劑、水針劑等常規(guī)的注射型藥物制劑。
本發(fā)明還提供了丹參水溶性提取物在制備血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑類藥物、治療高血壓病、治療高血壓伴心力衰竭、治療高血壓伴糖尿病腎病的藥物中的用途。
本發(fā)明上述所說(shuō)的可作為有效藥用成分使用的丹參酚酸類水提取物，其原料為天然藥物丹參，藥源充足，提取制備的方法簡(jiǎn)便易行。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，以該提取物在作為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑藥物的有效活性成分，可具有較強(qiáng)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的作用，不僅可用于高血壓的治療，還可用于高血壓伴心力衰竭及高血壓伴糖尿病腎病的治療，療效好，毒副作用小。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。


圖1是本發(fā)明丹參酚酸提取物T1對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性影響的測(cè)定結(jié)果。其中，圖中的橫坐標(biāo)表示丹參提取物T1的濃度，縱坐標(biāo)表示ACE抑制率(％)。
圖2是丹參中的不同成分及丹參酚酸提取物T1對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性影響的測(cè)定結(jié)果。其中，圖中的橫坐標(biāo)表示丹參不同成分及丹參酚酸提取物T1，縱坐標(biāo)表示ACE抑制率(％)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1 本發(fā)明丹參酚酸提取物T1的制備取1000克丹參，經(jīng)粉碎后，依次用25％乙醇浸漬，每次24小時(shí)，重復(fù)浸漬2次(浸漬時(shí)，機(jī)械攪拌浸漬液1小時(shí))。將浸漬液合并后過(guò)濾，減壓蒸餾除去乙醇，得濃縮水溶液，用去離子水稀釋，離心，備用。取D-140型非極性大孔樹脂裝柱，將上述水溶液以20毫升/分鐘的流速通過(guò)該大孔樹脂柱，然后用500毫升去離子水以20毫升/分鐘的流速洗柱，再用75％乙醇洗脫，合并洗脫液，減壓濃縮，真空干燥，得丹參酚酸提取物T1干粉39.8克(得率約4％)。以上制備的丹參酚酸提取物，為棕紅色固體物質(zhì)，味微苦。采用比色法，利用酚類化合物與鐵氰化鉀-三氯化鐵為顯色反應(yīng)，用丹參素作為對(duì)照品，測(cè)定其中所含丹參總酚酸為總重量的55％。
實(shí)施例2 丹參酚酸提取物抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性試驗(yàn)①血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的制備取大鼠肺組織，用10mmol/l冰磷酸鉀緩沖液，清洗，切成小塊，用勻漿器打成勻漿。勻漿在4℃，取5000g離心10分鐘，棄沉淀。上清用上述冰磷酸鉀緩沖液低溫下透析過(guò)夜，每次2升，換液4次。然后于4℃，40,000g離心40分鐘，棄沉淀，上清即為酶提取物，分裝，保存于-20℃?zhèn)溆谩?br> ②丹參酚酸提取物T1對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性影響的測(cè)定取10ug/ml，50ug/ml，100ug/ml不同濃度的丹參酚酸提取物T110μl與酶提取液10μl(約含總蛋白10μg)，37℃反應(yīng)30分鐘，設(shè)空白對(duì)照為20μl緩沖液，陰性對(duì)照為10μl緩沖液與10μl酶提取液。酶與藥物充分反應(yīng)后，加入時(shí)性o-phthaldialdehyde，Hippuryl-histidyl-leucine(HHL)(鄰苯二醛，馬尿酸-組胺酰-亮氨酸)反應(yīng)液120μl(以25mmol/LNaOH配制成25mmol/L貯液，1.25×硼酸鈉緩沖液0.5mol/L，含NaCl 375mmol/L，pH8.3，反應(yīng)液為HHL貯液與1.25×硼酸鈉緩沖液1∶4混合)，37℃反應(yīng)15分鐘，加入1N NaOH40μl終止反應(yīng)。以自動(dòng)進(jìn)樣器避光加入20mg/mlo-phthaldialdehyde(鄰苯二醛)(DMSO配制)10μl，室溫避光反應(yīng)10分鐘，自動(dòng)進(jìn)樣器加入3N H鹽酸20μl終止反應(yīng)，30分鐘內(nèi)用熒光檢測(cè)儀測(cè)定熒光強(qiáng)度F，激發(fā)波長(zhǎng)405nm，發(fā)射波長(zhǎng)535nm，以下列公式計(jì)算抑制率。以臨床使用的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑卡托普利作為陽(yáng)性參考藥物，其作用濃度分別為 結(jié)果見(jiàn)附圖1。從圖1可見(jiàn)，本發(fā)明本發(fā)明的丹參酚酸提取物T1具有顯著抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶的活性，其IC50為8μg。
③丹參不同成分及丹參酚酸提取物T1對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性影響的測(cè)定為比較丹參水溶性成分、丹參脂溶性成分與丹參酚酸提取物T1對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性的作用，分別選取丹參主要水溶性成分丹參素、原兒茶醛，丹參主要脂溶性成分丹參酮I、丹參酮IIA(四種丹參單體成分標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)自四川省藥品檢驗(yàn)所)，以及丹參酚酸提取物T1，以上藥物均配制成濃度為100ug/ml溶液，參照上述血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性測(cè)定方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，丹參酚酸提取物T1對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性具有顯著的抑制作用，抑制率為97％；丹參水溶性成分丹參素和原兒茶醛對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性有一定的抑制作用，抑制率分別為64％和50％；而丹參脂溶性成分丹參酮I和丹參酮IIA對(duì)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性幾無(wú)抑制作用，抑制率分別僅為9％和7％。
實(shí)施例3 丹參酚酸提取物T1對(duì)腎性高血壓大鼠血壓的影響造模方法雌雄SD大鼠，體重200-220克，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。腹腔注射戊巴比妥30mg/kg麻醉大鼠，在大鼠左腰側(cè)行切口，將左側(cè)腎臟牽拉出，分離腎動(dòng)脈起始部，用0.2mm銀夾夾住腎動(dòng)脈，使之狹窄；并以只分離腎動(dòng)脈但不用銀夾狹窄腎動(dòng)脈作為對(duì)照(即假手術(shù)大鼠)，縫合皮膚。術(shù)后每2周測(cè)定血壓一次，血壓測(cè)定用RBP-1B大鼠血壓計(jì)(由中日友好醫(yī)院研制)測(cè)定尾動(dòng)脈收縮壓，每次測(cè)量時(shí)，重復(fù)三次，取平均值作為當(dāng)周血壓，術(shù)后5周收縮壓＞18kPa者視為高血壓大鼠。
實(shí)驗(yàn)大鼠分為4組丹參酚酸提取物T1組(以下簡(jiǎn)稱丹參T1組，n＝6)，收縮壓＞18kPa，每日灌胃丹參提取物T1(500mg/kg)連續(xù)4周；陽(yáng)性組(n＝4)，收縮壓＞18kPa，每日灌胃雷米普利(1mg/kg)連續(xù)4周；假手術(shù)組(n＝4)，收縮壓＜14kPa，以與藥物等體積生理鹽水灌胃，連續(xù)4周；模型組(n＝6)，收縮壓＞18kPa，以與藥物等體積生理鹽水灌胃，連續(xù)4周，分別于給藥后2周、給藥后4周測(cè)定大鼠血壓值。結(jié)果如表1所示。
表1丹參酚酸提取物T1對(duì)腎性高血壓大鼠血壓的影響

注#P＜0.05，與假手術(shù)組比較；*P＜0.05，與服藥前比較；**P＜0.01，與服藥前比較由表1結(jié)果可見(jiàn)，模型組與假手術(shù)組之間血壓差異顯著，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始2周后，模型組血壓由19.80±4.50kPa升至20.06±3.79kPa，4周后血壓穩(wěn)定維持原水平并略有升高(20.30±4.09)；丹參T1組2周后血壓明顯下降，由18.51±1.77kPa下降到15.89±2.03kPa，二者具有顯著差異，4周后下降至14.15±1.28kPa，接近假手術(shù)組血壓水平，與服藥前比較具有極其顯著差異。
以上結(jié)果顯示，丹參酚酸提取物T1對(duì)腎性高血壓大鼠動(dòng)物血壓有明顯降低作用。
實(shí)施例4 丹參酚酸提取物T1對(duì)腎型高血壓所致左心室肥厚的影響按實(shí)施例3的實(shí)驗(yàn)操作，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后稱體重(BW)并剖取心臟、用生理鹽水洗凈血跡，去除左、右心房和右心室，稱量左心室濕重(LVWW)，計(jì)算LVWW/BW比值，以此評(píng)價(jià)丹參對(duì)腎型高血壓所致左心室肥厚的影響。結(jié)果如表2所示。
表2丹參酚酸提取物T1對(duì)腎型高血壓所致的左心室肥厚的影響

注**P＜0.01，與模型組比較結(jié)果可見(jiàn)，腎血管性高血壓模型組大鼠左心室肥厚，左心室重量與體重比值LVWW/BW為2.55±0.16，丹參T1組大鼠左心室重量與體重比值LVWW/BW為1.88±0.20，兩組比值之間具有非常顯著的差異(P＜0.01)，表明丹參酚酸提取物T1能顯著減輕腎性高血壓大鼠左心室肥厚。
權(quán)利要求
1.由藥用原料丹參分離得到的水溶性提取物，其特征是所說(shuō)提取物包含有丹參酚酸B、丹參素、原紫草酸三種丹參酚酸在內(nèi)的丹參酚酸成分，其中所說(shuō)的丹參酚酸成分的總重量比例為10-90％。
2.如權(quán)利要求1所述的由藥用原料丹參分離得到的水溶性提取物，其特征是所說(shuō)的丹參酚酸的總重量比例為30-85％。
3.以藥用原料丹參為原料分離制取如權(quán)利要求1所說(shuō)的水溶性提取物的方法，其特征是a、將粉碎的丹參原料用含水乙醇充分浸漬提取后，對(duì)浸漬提取得到的溶液過(guò)濾并分離除去其中的乙醇后得到剩余的水提取溶液，濃縮，再用去離子水稀釋，離心，取上清夜備用；b、將a步驟處理后得到的上清液再用大孔樹脂進(jìn)行吸附，然后依次分別用水和含水乙醇分別洗滌吸附樹脂，合并洗脫液，除去溶液中的乙醇并濃縮，得到浸膏狀提取物，干燥得干粉。
4.一種血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑類藥物，其特征是以如權(quán)利要求1所說(shuō)的由藥用原料丹參分離得到的含有丹參酚酸成分的水溶性提取物為有效藥用成分，與藥學(xué)上可接受的輔助添加性成分混合而成。
5.如權(quán)利要求4所述的藥物，其特征是所說(shuō)的藥物為口服型藥物制劑。
6.如權(quán)利要求4所述的藥物，其特征是所說(shuō)的藥物為注射型藥物制劑。
7.如權(quán)利要求1或2所述的丹參水溶性提取物在制備血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑類藥物中的用途。
8.如權(quán)利要求1或2所述的丹參水溶性提取物在制備治療高血壓病的藥物中的用途。
9.如權(quán)利要求1或2所述的丹參水溶性提取物在制備治療高血壓伴心力衰竭的藥物中的用途。
10.如權(quán)利要求1或2所述的丹參水溶性提取物在制備治療高血壓伴糖尿病腎病的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明提供了由藥用原料丹參分離得到的水溶性提取物，其提取制備方法及其用途。該水溶性提取物包含有丹參酚酸B、丹參素、原紫草酸三種丹參酚酸在內(nèi)的丹參酚酸成分，并且其中所說(shuō)的丹參酚酸成分的總重量比例為10－90％。該丹參水溶性提取物在制備血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑類藥物、治療高血壓病、治療高血壓伴心力衰竭、治療高血壓伴糖尿病腎病的藥物中的用途。
文檔編號(hào)A61P13/00GK1534010SQ0311754
公開(kāi)日2004年10月6日 申請(qǐng)日期2003年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月27日
發(fā)明者高小平, 徐大勇, 劉忠榮, 李伯剛 申請(qǐng)人:成都地奧制藥集團(tuán)有限公司