前列腺癌標(biāo)志物lncRNA MALAT-1及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)MALAT-1及其作為前列腺癌標(biāo)志物的應(yīng)用、以及在制備用于檢測前列腺癌的芯片或制劑或試劑盒中的應(yīng)用。
【專利說明】前列腺癌標(biāo)志物IncRNA MALAT-1及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及尿液長鏈非編碼IncRNA MALAT-I及其作為前列腺癌標(biāo)志物的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 前列腺癌（Prostatic Cancer，PCa)是一種嚴(yán)重威脅男性健康的惡性腫瘤，其發(fā)病 及死亡率高峰在70歲左右，占全球腫瘤發(fā)病率第二位、死亡率第六位。我國PCa的發(fā)病率 近年來一直處于顯著的上升趨勢。在北京、上海、廣州等醫(yī)學(xué)、經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)城市，PCa發(fā)病率已 位于當(dāng)?shù)厥蟪Ｒ娔[瘤之列。來自上海市疾病控制中心的資料進(jìn)一步顯示，PCa的發(fā)病率 自2002年起已躍居男性泌尿生殖系惡性腫瘤的首位，從1990年2. 6/10萬上升到2009年 32. 23/10萬，躍居男性惡性腫瘤的第5位。流行病學(xué)數(shù)據(jù)還顯示，中國PCa發(fā)病率已從1993 年的1. 71/10萬男性人口增加到2005年的7. 9/10萬男性人口，年增幅13%。
[0003] PCa-旦突出包膜就失去了根治的機(jī)會，其生存時間大大下降，因此，PCa的早期 診斷就顯得尤為重要。血清PSA檢測是目前應(yīng)用最為廣泛的PCa早期診斷分子標(biāo)志物，它的 應(yīng)用大大降低了 PCa特異性死亡。但是，PSA是前列腺特異性而非PCa特異性分子標(biāo)記物， 諸如前列腺炎、良性前列腺增生等都能引起PSA的升高。在PSA的"診斷灰區(qū)"(PSA4-10ng/ ml)，其診斷陽性率僅為25-40%，這就導(dǎo)致了眾多的不必要的穿刺，同時，也給穿刺患者帶 來了經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神負(fù)擔(dān)。所以，臨床上亟需找到更具敏感性和特異性的分子標(biāo)志物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的為提供一種前列腺癌標(biāo)志物IncRNAMALAT-I及其應(yīng)用，即尿液長鏈 非編碼IncRNA MALAT-I作為前列腺癌標(biāo)志物的應(yīng)用。
[0005] 在本發(fā)明的第一方面，提供了一種分離的lncRNAMALAT-1，所述IncRNAMLAT-I序 列為MALAT-I的全長或其片段。所述IncRNA MALAT-I序列如SEQ ID NO :1所示，其基因 ID 為FR077061 ;GenBank :BK001418. 1 ;其全長序列數(shù)據(jù)庫鏈接為：
[0006] http： //www. ncbi. nlm. nih. gov/nuccore/BK001418g￡
[0007] http://www.ncrna.org/frnadb/detail.html? i name= FR077061&i tab = seq〇
[0008] 本發(fā)明中，所述IncRNA MALAT-I序列為MALAT-I的全長或其片段；所述片段包括 IncRNA的任意一個PCR片段，該任意一個PCR片段為PCR反應(yīng)產(chǎn)物，因不同的PCR引物可獲 得不同的PCR產(chǎn)物。
[0009] SEQ ID NO : 1 為：
[0010] GATCAGAGTGGGCCACTGCCAGCCAACGGCCCCCGGGGCTCAGGCGGGGAGCAGCTCTGTGGTGTGGGA TTGAGGCGTTTTCCAAGAGTGGGTTTTCACGTTTCTAAGATTTCCCAAGCAGACAGCCCGTGCTGCTCCGATTTCTC GAACAAAAAAGCAAAACGTGTGGCTGTCTTGGGAGCAAGTCGCAGGACTGCAAGCAGTTGGGGGAGAAAGTCCGCCA TTTTGCCACTTCTCAACCGTCCCTGCAAGGCTGGGGCTCAGTTGCGTAATGGAAAGTAAAGCCCTGAACTATCACAC TTTAATCTTCCTTCAAAAGGTGGTAAACTATACCTACTGTCCCTCAAGAGAACACAAGAAGTGCTTTAAGAGGCGGC GGAAGGTGATCGAATTCCGGTGATGCGAGTTGTTCTCCGTCTATAAATACGCCTCGCCCGAGCTGTGCGGTAGGCAT TGAGGCAGCCAGCGCAGGGGCTTCTGCTGAGGGGGCAGGCGGAGCTTGAGGAAACCGCAGATAAGTTTTTTTCTCTT TGAAAGATAGAGATTAATACAACTACTTAAAAAATATAGTCAATAGGTTACTAAGATATTGCTTAGCGTTAAGTTTT TAACGTAATTTTAATAGCTTAAGATTTTAAGAGAAAATATGAAGACTTAGAAGAGTAGCATGAGGAAGGAAAAGATA AAAGGTTTCTAAAACATGACGGAGGTTGAGATGAAGCTTCTTCATGGAGTAAAAAATGTATTTAAAAGAAAATTGAG AGAAAGGACTACAGAGCCCCGAATTAATACCAATAGAAGGGCAATGCTTTTAGATTAAAATGAAGGTGACTTAAACA GCTTAAAGTTTAGTTTAAAAGTTGTAGGTGATTAAAATAATTTGAAGGCGATCTTTTAAAAAGAGATTAAACCGAAG GTGATTAAAAGACCTTGAAATCCATGACGCAGGGAGAATTGCGTCATTTAAAGCCTAGTTAACGCATTTACTAAACG CAGACGAAAATGGAAAGATTAATTGGGAGTGGTAGGATGAAACAATTTGGAGAAGATAGAAGTTTGAAGTGGAAAAC TGGAAGACAGAAGTACGGGAAGGCGAAGAAAAGAATAGAGAAGATAGGGAAATTAGAAGATAAAAACATACTTTTAG AAGAAAAAAGATAAATTTAAACCTGAAAAGTAGGAAGCAGAAGAGAAAAGACAAGCTAGGAAACAAAAAGCTAAGGG CAAAATGTACAAACTTAGAAGAAAATTGGAAGATAGAAACAAGATAGAAAATGAAAATATTGTCAAGAGTTTCAGAT AGAAAATGAAAAACAAGCTAAGACAAGTATTGGAGAAGTATAGAAGATAGAAAAATATAAAGCCAAAAATTGGATAA AATAGCACTGAAAAAATGAGGAAATTATTGGTAACCAATTTATTTTAAAAGCCCATCAATTTAATTTCTGGTGGTGC AGAAGTTAGAAGGTAAAGCTTGAGAAGATGAGGGTGTTTACGTAGACCAGAACCAATTTAGAAGAATACTTGAAGCT AGAAGGGGAAGTTGGTTAAAAATCACATCAAAAAGCTACTAAAAGGACTGGTGTAATTTAAAAAAAACTAAGGCAGA AGGCTTTTGGAAGAGTTAGAAGAATTTGGAAGGCCTTAAATATAGTAGCTTAGTTTGAAAAATGTGAAGGACTTTCG TAACGGAAGTAATTCAAGATCAAGAGTAATTACCAACTTAATGTTTTTGCATTGGACTTTGAGTTAAGATTATTTTT TAAA TCCTGAGGACTAGCATTAATTGACAGCTGACCCAGGTGCTACACAGAAGTGGATTCAGTGAATCTAGGAAGA 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TTTCAGGTGATTTAATAATAATTTAAAACTACTATAGAAACTGCAGAGCAAAGGAAGTGGCTTAATGATCCTGAAGG GATTTCTTCTGATGGTAGCTTTTGTATTATCAAGTAAGATTCTATTTTCAGTTGTGTGTAAGCAAGTTTTTTTTTAG TGTAGGAGAAATACTTTTCCATTGTTTAACTGCAAAACAAGATGTTAAGGTATGCTTCAAAAATTTTGTAAATTGTT TATTTTAAACTTATCTGTTTGTAAATTGTAACTGATTAAGAATTGTGATAGTTCAGCTTGAATGTCTCTTAGAGGGT GGGCTTTTGTGATGAGGGAGGGGAAACTTTTTTTTTTTCTATAGACTTTTTTCAGATAACATCTTCTGAGTCATAAC CAGCCTGGCAGTATGATGGCCTAGATGCAGAGAAAACAGCTCCTTGGTGAATTGATAAGTAAAGGCAGAAAAGATTA TATGTCATACCTCCATTGGGGAATAAGCATAACCCTGAGATTCTTACTACTGATGAGAACATTATCTGCATATGCCA AAAAATTTTAAGCAAATGAAAGCTACCAATTTAAAGTTACGGAATCTACCATTTTAAAGTTAATTGCTTGTCAAGCT ATAACCACAAAAATAATGAATTGATGAGAAATACAATGAAGAGGCAATGTCCATCTCAAAATACTGCTTTTACAAAA GCAGAATAAAAGCGAAAAGAAATGAAAATGTTACACTACATTAATCCTGGAATAAAAGAAGCCGAAATAAATGAGAG ATGAGTTGGGATCAAGTGGATTGAGGAGGCTGTGCTGTGTGCCAATGTTTCGTTTGCCTCAGACAGGTATCTCTTCG TTATCAGAAGAGTTGCTTCATTTCATCTGGGAGCAGAAAACAGCAGGCAGCTGTTAACAGATAAGTTTAACTTGCAT 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GAGGCATTTCATCCTTCATGAAGCCATTCAGGATTTTGAATTGCATATGAGTGCTTGGCTCTTCCTTCTGTTCTAGT GAGTGTATGAGACCTTGCAGTGAGTTTATCAGCATACTCAAAATTTTTTTCCTGGAATTTGGAGGGATGGGAGGAGG GGGTGGGGCTTACTTGTTGTAGCTTTTTTTTTTTTTACAGACTTCACAGAGAATGCAGTTGTCTTGACTTCAGGTCT GTCTGTTCTGTTGGCAAGTAAATGCAGTACTGTTCTGATCCCGCTGCTATTAGAATGCATTGTGAAACGACTGGAGT ATGATTAAAAGTTGTGTTCCCCAATGCTTGGAGTAGTGATTGTTGAAGGAAAAAATCCAGCTGAGTGATAAAGGCTG AGTGTTGAGGAAATTTCTGCAGTTTTAAGCAGTCGTATTTGTGATTGAAGCTGAGTACATTTTGCTGGTGTATTTTT AGGTAAAATGCTTTTTGTTCATTTCTGGTGGTGGGAGGGGACTGAAGCCTTTAGTCTTTTCCAGATGCAACCTTAAA ATCAGTGACAAGAAACATTCCAAACAAGCAACAGTCTTCAAGAAATTAAACTGGCAAGTGGAAATGTTTAAACAGTT CAGTGATCTTTAGTGCATTGTTTATGTGTGGGTTTCTCTCTCCCCTCCCTTGGTCTTAATTCTTACATGCAGGAACA CTCAGCAGACACACGTATGCGAAGGGCCAGAGAAGCCAGACCCAGTAAGAAAAAATAGCCTATTTACTTTAAATAAA CCAAACATTCCATTTTAAATGTGGGGATTGGGAACCACTAGTTCTTTCAGATGGTATTCTTCAGACTATAGAAGGAG CTTCCAGTTGAATTCACCAGTGGACAAAATGAGGAAAACAGGTGAACAAGCTTTTTCTGTATTTACATACAAAGTCA GATCAGTTATGGGACAATAGTATTGAATAGATTTCAGCTTTATGCTGGAGTAACTGGCATGTGAGCAAACTGTGTTG GCGTGGGGGTGGAGGGGTGAGGTGGGCGCTAAGCCTTTTTTTAAGATTTTTCAGGTACCCCTCACTAAAGGCACCGA AGGCTTAAAGTAGGACAACCATGGAGCCTTCCTGTGGCAGGAGAGACAACAAAGCGCTATTATCCTAAGGTCAAGAG AAGTGTCAGCCTCACCTGATTTTTATTAGTAATGAGGACTTGCCTCAACTCCCTCTTTCTGGAGTGAAGCATCCGAA GGAATGCTTGAAGTACCCCTGGGCTTCTCTTAACATTTAAGCAAGCTGTTTTTATAGCAGCTCTTAATAATAAAGCC CAAATCTCAAGCGGTGCTTGAAGGGGAGGGAAAGGGGGAAAGCGGGCAACCACTTTTCCCTAGCTTTTCCAGAAGCC TGTTAAAAGCAAGGTCTCCCCACAAGCAACTTCTCTGCCACATCGCCACCCCGTGCCTTTTGATCTAGCACAGACCC TTCACCCCTCACCTCGATGCAGCCAGTAGCTTGGATCCTTGTGGGCATGATCCATAATCGGTTTCAAGGTAACGATG GTGTCGAGGTCTTTGGTGGGTTGAACTATGTTAGAAAAGGCCATTAATTTGCCTGCAAATTGTTAACAGAAGGGTAT TAAAACCACAGCTAAGTAGCTCTATTATAATACTTATCCAGTGACTAAAACCAACTTAAACCAGTAAGTGGAGAAAT AACATGTTCAAGAACTGTAATGCTGGGTGGGAACATGTAACTTGTAGACTGGAGAAGATAGGCATTTGAGTGGCTGA GAGGGCTTTTGGGTGGGAAT GCAAAAATTCTCTGCTAAGACTTTTTCAGGTGAACATAACAGACTTGGCCAAGCTA GCATCTTAGCGGAAGCTGATCTCCAATGCTCTTCAGTAGGGTCATGAAGGTTTTTCTTTTCCTGAGAAAACAACACG TATTGTTTTCTCAGGTTTTGCTTTTTGGCCTTTTTCTAGCTTAAAAAAAAAAAAAGCAAAAGATGCTGGTGGTTGGC ACTCCTGGTTTCCAGGACGGGGTTCAAATCCCTGCGGTGTCTTTGCTTTGACTACTAATCTGTCTTCAGGACTCTTT CTGTATTTCTCCTTTTCTCTGCAGGTGCTAGTTCTTGGAGTTTTGGGGAGGTGGGAGGTAACAGCACAATATCTTTG AACTATATACATCCTTGATGTATAATTTGTCAGGAGCTTGACTTGATTGTATATTCATATTTACACGAGAACCTAAT ATAACTGCCTTGTCTTTTTCAGGTAATAGCCTGCAGCTGGTGTTTTGAGAAGCCCTACTGCTGAAAACTTAACAATT TTGTGTAATAAAAATGGAGAAGCTCTAAATTGTTGTGGTTCTTTTGGAATAAAAAAATCTTGATTGGGAAAAAAGAT GGGTGTTCTGTGGGCTTGTTCTGTTAAATCTGTGGTCTATAAACACAGCACCCATAATTACAGCATAATCTTCAAGT AGGGTACGGACTTTGGGGGATTGGTGCGAGGGTAGTGGGTGAGTGGCCTACTAAAAAGCCCAGTAACCCCCACAGGA AAATAGGGAACTTCTTTTTAAGTAGCCTCCTTTCCACTATTTAGTAATTGGCTGTGAGCTGGGCTGGGGGAGAAATG GGGCGGGGTGTGTGTGTCATTGGAAAGCTCTCTTTTTTGTTTTTTTGAGACAGTCTCACTTTGTCCCCCAGGCTGGA GTGTAGTGGCATGATCTCTGCAAACTGCAACCTCCACTTGTGGGGTCCAAGTGGTTGTCCTGCTTCACCCTCCCTGT AGCTGGGACTACAGGTGCACACCACCACGCCTGGCTAATTTTTGTATT
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述IncRNA MLAT-I分離自人的尿液。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述尿液為前列腺按摩后尿液。所述尿液還包括非前列腺按摩 后尿液。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述IncRNA MALAT-I提取自尿液離心后的尿沉渣。
[0014] 在本發(fā)明的第二方面，提供了一種分離的MALAT-I前體IncRNA，所述的前體 IncRNA能在人細(xì)胞內(nèi)剪切并表達(dá)成第一方面所述的IncRNA MALAT-1。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的MALAT-I前體分離自人前列腺按摩后尿液，還可以分離 自非前列腺按摩后尿液。
[0016] 在本發(fā)明的第三方面，提供了一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸能被人細(xì)胞轉(zhuǎn) 錄成第一方面所述的IncRNA MALAT-I。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述的多核苷酸具有試（I)所示的結(jié)構(gòu)：
[0018] Seq正向-X-Seq反向式（I)，
[0019] 式（I)中，
[0020] Seq1自為能在人細(xì)胞中表達(dá)成所述的MALAT-I的核苷酸序列；
[0021] Seqfi自為與Secte自基本上互補(bǔ)或完全互補(bǔ)的核苷酸序列；
[0022] X為位于Seq正向和Seq反向之間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seq正向和Seq反向 不互補(bǔ)；
[0023] 并且，式⑴所示的結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)入人細(xì)胞后，形成式（II)所示的二級結(jié)構(gòu)：
[0024]

【權(quán)利要求】
1. 一種分離的IncRNA MALAT-1，其特征在于，其序列如SEQ ID勵：1所示；所述1此題八 MALAT-1為MALAT-1的全長或其片段。
2. 如權(quán)利要求1所述的IncRNA MALAT-1，其特征在于，所述IncRNA MALAT-1分離自人 的尿液。
3. -種分離的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸能被人細(xì)胞轉(zhuǎn)錄成權(quán)利要求1所 述的 IncRNA MALAT-1。
4. 一種載體，其特征在于，其含有權(quán)利要求1所述的IncRNA MALAT-1或權(quán)利要求3所 述的多核苷酸。
5. 權(quán)利要求1所述的IncRNA MALAT-1在制備前列腺癌標(biāo)志物中的應(yīng)用。
6. 權(quán)利要求1所述的IncRNA MALAT-1在制備用于檢測前列腺癌的芯片、制劑或試劑盒 中的應(yīng)用。
7. -種芯片、制劑或試劑盒，其特征在于，其含有如權(quán)利要求1所述的IncRNA MALAT-1 或如權(quán)利要求3所述的多核苷酸。 8?-種IncRNA MALAT-1芯片，其特征在于，所述IncRNA MALAT-1芯片包括： 固相載體；以及有序固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針特異 性地對應(yīng)于權(quán)利要求1所述IncRNA MALAT-1所示的部分或全部序列。
9. 權(quán)利要求7所述的IncRNA MALAT-1芯片在制備用于檢測前列腺癌的試劑盒中的應(yīng) 用。
10. 如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用中，其特征在于，通過IncRNA MALAT-1芯片檢測待測對象 的尿液中的IncRNA MALAT-1含量；所述檢測步驟包括：先獲得分離自待測對象尿液的RNA 樣品，在所述RNA上設(shè)置標(biāo)記物，將其與所述IncRNA MALAT-1芯片接觸，雜交形成寡核苷酸 探針-RNA二元復(fù)合物，檢測得到IncRNA MALAT-1含量。
11. 一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有權(quán)利要求8所述的IncRNA MALAT-1芯 片。
【文檔編號】C12N15/63GK104498495SQ201410674678
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】孫穎浩, 任善成, 王富博 申請人:上海長海醫(yī)院