一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置及其方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，包括組織消化罐，試劑瓶，蠕動(dòng)泵及收集裝置，所述獲取干細(xì)胞的裝置還包括有三通閥，所述組織消化罐通過管道與三通閥進(jìn)液口相連接，所述試劑瓶與收集裝置通連接管別與三通閥的兩個(gè)出液口相連接，所述試劑瓶?jī)?nèi)還設(shè)有出液管，所述出液管夾于蠕動(dòng)泵上并與組織消化罐相連接。本發(fā)明還包括運(yùn)用該裝置經(jīng)酶與無酶兩種提取組織干細(xì)胞的方法，本發(fā)明裝置結(jié)構(gòu)合理，可以裝置可以適用于不同組織來源，不同分離方法（經(jīng)酶或無酶消化），可安全、方便、快捷、有效地從不同組織中獲取干細(xì)胞。
【專利說明】一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置及其方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置及其方法。
【背景技術(shù)】
[0002]干細(xì)胞是具有自我更新能力、在特定的條件下可以分化成不同類型功能細(xì)胞的一類細(xì)胞。干細(xì)胞研究及應(yīng)用能夠突破傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)發(fā)展的限制，有望解決人類面臨的重大醫(yī)學(xué)難題，現(xiàn)今已為移植治療、神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療、基因治療、研究胚胎發(fā)育和疾病發(fā)生以及藥物篩選和開發(fā)等提供了可行的方法。成體干細(xì)胞可以取自患者自身，在應(yīng)用時(shí)不存在組織相容性的問題，避免了移植排斥反應(yīng)。
[0003]研究者發(fā)現(xiàn)，干細(xì)胞可以來源于眾多組織中，如骨髓、脂肪、臍帶、胎盤、蛻膜、羊膜、羊水、皮膚，肌肉，牙髓、血管、心臟、脾、腎周脂肪、腸上皮組織等。而干細(xì)胞的分離主要采用經(jīng)膠原酶、胰蛋白酶、中性組織分散酶等一種或幾種組合酶消化的方式，從組織中分離出干細(xì)胞，進(jìn)行進(jìn)一步的培養(yǎng)擴(kuò)增。然而現(xiàn)有的干細(xì)胞分離方法都是基于試驗(yàn)研究的方式，尚還缺乏一套完整的，適用于各種組織來源的干細(xì)胞分離裝置。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種從組`織中分離干細(xì)胞的裝置及其使用方法，該裝置的結(jié)構(gòu)合理，并結(jié)合該裝置的使用方法，可以安全、方便、快捷、有效地從不同組織中獲取干細(xì)胞。
[0005]本發(fā)明的第一技術(shù)方案是:一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，包括組織消化罐，試劑瓶，蠕動(dòng)泵及收集裝置，所述獲取干細(xì)胞的裝置還包括有三通閥，所述組織消化罐通過管道與三通閥進(jìn)液口相連接，所述試劑瓶與收`集裝置通連接管別與三通閥的兩個(gè)出液口相連接，所述試劑瓶?jī)?nèi)還設(shè)有出液管，所述出液管夾于蠕動(dòng)泵上并與組織消化罐相連接。
[0006]進(jìn)一步的,所述出液管包括前段出液管與后段出液管,所述前段輸液管與后段輸液管之間通過不銹鋼彎管連接，所述的不銹鋼彎管放置于可調(diào)節(jié)溫度裝置(水浴鍋)中。
[0007]進(jìn)一步的，所述組織消化罐包括罐體與蓋于罐體上方的旋蓋，所述罐體開口處設(shè)有第一濾網(wǎng)，所述旋蓋上設(shè)有用于連接管道的通孔，所述的組織消化罐罐底設(shè)有一磁力發(fā)生裝置，所述磁力發(fā)生裝置上放置有若干個(gè)磁珠，所述組織消化罐側(cè)壁上還延伸有用于與后段出液管相連接的插孔。
[0008]進(jìn)一步的，所述的收集裝置包括一漏斗狀瓶體，所述瓶體瓶頸設(shè)有第二濾網(wǎng)，瓶底漏斗狀尖口處設(shè)有開口，所述瓶體下方設(shè)有收集瓶。
[0009]進(jìn)一步的，所述可調(diào)節(jié)溫度裝置為水浴鍋。
[0010]進(jìn)一步的，所述組織消化罐罐體與旋蓋間還設(shè)有防止消化罐液體外漏的密封圈。
[0011]本發(fā)明的第二技術(shù)方案是:一種從組織中獲取干細(xì)胞的方法，包括如上述權(quán)利要求I所述一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，并按以下步驟進(jìn)行:
(I)將待分離的組織放入組織消化罐內(nèi)；(2)在試劑瓶中加入磷酸鹽緩沖液或生理鹽水；
(3)三通閥旋至使組織消化罐與收集裝置相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將試劑瓶中的試劑泵入組織消化罐中清洗組織，并將組織消化罐內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置中；
(4)待消化罐中內(nèi)清洗試劑完全泵入收集裝置后，更換新的收集裝置，同時(shí)三通閥旋至使組織消化罐與試劑瓶相連通的狀態(tài)；
(5)在試劑瓶中加入消化酶，將消化酶經(jīng)出液管泵入組織消化罐中，機(jī)械震蕩組織消化罐，使組織消化罐中的組織在消化酶及機(jī)械力的作用下分解；
(6)在步驟(5)持續(xù)20~60分鐘后，將三通閥旋至與收集裝置相連接，將組織消化罐中的干細(xì)胞輸入至收集裝置中。
[0012]進(jìn)一步的，在步驟(5)中所述出液管包括前段出液管與后段出液管，所述前段輸液管與后段輸液管之間通過不銹鋼彎管連接，所述的不銹鋼彎管放置水浴鍋中，所述的水浴鍋溫度為37°C。
[0013]進(jìn)一步的，所述的消化酶為膠原酶、胰蛋白酶或混合酶。
[0014]本發(fā)明的第三技術(shù)方案是:一種從組織中獲取干細(xì)胞的方法，其特征在于，包括如上述權(quán)利要求1所述一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，并按以下步驟進(jìn)行:
(1)將待分離的組織放入組織消化罐內(nèi)；
(2)在試劑瓶中加入磷酸鹽緩沖液或生理鹽水；
(3)三通閥旋至使組織消化罐與收集裝置相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將試劑瓶中的試劑泵入組織消化罐中清洗組織，并將組織消化罐內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置中；
(4)待組織消化罐中內(nèi)清洗試劑完全泵入收集裝置后，更換新的收集裝置；
(5)機(jī)械震蕩組織消化罐20~60分鐘后，將三通閥旋至使組織消化罐與收集裝置相連通的狀態(tài)，將組織消化罐中的干細(xì)胞輸入至收集裝置中。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:該從組織中分離干細(xì)胞的裝置為可消毒的無菌裝置，各組成部分設(shè)計(jì)合理，組織消化罐的磁珠和磁力發(fā)生裝置可以充分?jǐn)嚢柘?，并能為組織消化提供非酶的機(jī)械力分離方式。具有的不銹鋼彎管可以加熱消化酶，使酶在最適溫度發(fā)揮作用。整套系統(tǒng)可形成消化循環(huán)回路，使得消化下來的干細(xì)胞不需要完全停留在消化罐中，提高已消化的干細(xì)胞的活性。另外，通過蠕動(dòng)泵同一方向蠕動(dòng)可以不斷加壓濾過不同的過濾網(wǎng)，達(dá)到過濾殘留組織和分離單個(gè)細(xì)胞效果，利用該裝置所形成的提取組織干細(xì)胞的方法可以適用于不同組織來源與不同分離方法(經(jīng)酶或無酶消化)，為臨床提取干細(xì)胞提供一套安全、方面、有效的分離方式。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1為本發(fā)明結(jié)構(gòu)示意圖。
[0017]圖中:1-組織消化罐，2-試劑瓶，3-蠕動(dòng)泵，4-收集裝置，5-三通閥，6-出液管，7-調(diào)節(jié)溫度裝置，8-收集瓶，11-罐體，12-旋蓋，13-第一濾網(wǎng)，14-磁力發(fā)生裝置，15-磁珠，16-插孔，21-長(zhǎng)針管，41-瓶體，42-第二濾網(wǎng)，63-不銹鋼彎管，61-前段出液管，62-后段出液管，121-通孔。
【具體實(shí)施方式】[0018]下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0019]如圖1所示，一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，包括組織消化罐1，試劑瓶2，蠕動(dòng)泵3及收集裝置4，所述獲取干細(xì)胞的裝置還包括有三通閥5，所述組織消化罐I通過管道與三通閥進(jìn)液口 51相連接，所述試劑瓶2與收集裝置通連接管別與三通閥5的兩個(gè)出液口相連接，所述試劑瓶2內(nèi)還設(shè)有出液管6，所述出液管6夾于蠕動(dòng)泵3上并與組織消化罐I相連接。
[0020]其中，所述出液管6包括前段出液管61與后段出液管62,所述前段輸液管與后段輸液管之間通過不銹鋼彎管63連接，所述的不銹鋼彎63放置于可調(diào)節(jié)溫度裝置7中。該可調(diào)節(jié)溫度裝置7可以是水浴鍋。
[0021 ] 所述組織消化罐I包括罐體11與蓋于罐體11上方的旋蓋12，所述罐體11開口處設(shè)有第一濾網(wǎng)13，所述旋蓋12上設(shè)有用于連接管道的通孔121，所述的組織消化罐I罐底設(shè)有一磁力發(fā)生裝置14，所述磁力發(fā)生裝置14上放置有若干個(gè)磁珠15，所述組織消化罐I側(cè)壁上還延伸有用于與后段出液管62相連接的插孔16。組織消化罐罐體11與旋蓋12間還設(shè)有防止消化罐液體外漏的密封圈17。
[0022]上述從組織中獲取干細(xì)胞的裝置形成包括消化循環(huán)回路和收集通道。
[0023]消化循環(huán)回路主要由組織消化罐1、三通閥5、試劑瓶2、蠕動(dòng)泵3構(gòu)成。
[0024]組織消化罐I主要用于放入提取干細(xì)胞的組織，罐體12內(nèi)可設(shè)計(jì)為放入磁珠15在磁力發(fā)生裝置14的作用下可以充分?jǐn)嚢柘?，為組織消化提供非酶的機(jī)械力分離方式。組織消化罐罐體11底部的磁力發(fā)生裝置14可與組織消化罐I為一整體，也可分體為單獨(dú)裝置。磁力發(fā)生裝置14通過電路控制可分為柔和，中等，強(qiáng)，超強(qiáng)幾檔。該磁力發(fā)生裝置也可以是其他可實(shí)現(xiàn)消化罐I震蕩的裝置或方法，如采用振動(dòng)器手搖等。組織消化罐I的直徑為2~30cm,優(yōu)選的有3cm, `5cm, 8cm, 10cm, 15cm或20cm。所述罐體11開口處的第一濾網(wǎng)13的孔徑可以為100~200目，達(dá)到過濾殘留組織和分離單個(gè)細(xì)胞效果。
[0025]三通閥5用于改變流液輸送至試劑瓶2或收集裝置。當(dāng)三通閥5旋至使組織消化罐I與收集裝置4相連通的狀態(tài)時(shí)，試劑瓶2與組織消化罐I無法連通，反之，當(dāng)三通閥5旋至使組織消化罐I與試劑瓶2相連通的狀態(tài)時(shí)，收集裝置與組織消化罐無法連通。
[0026]試劑瓶2用于添加磷酸鹽緩沖液、生理鹽水或如膠原酶、胰蛋白酶或混合酶等消化酶。以實(shí)現(xiàn)對(duì)組織中的細(xì)胞進(jìn)行分解或清洗。另外，試劑瓶2可直接置換為試劑袋或生理鹽水袋。
[0027]蠕動(dòng)泵3為液體的循環(huán)提供驅(qū)動(dòng)動(dòng)力。使用時(shí)，蠕動(dòng)泵3設(shè)置于組織消化罐I與試劑瓶2之間，出液管夾于蠕動(dòng)泵3內(nèi)，利用蠕動(dòng)泵3交替進(jìn)行擠壓和釋放來泵送出流體，實(shí)現(xiàn)組織循環(huán)。
[0028]消化循環(huán)回路的連接方式:組織消化罐I通過插入旋蓋頂部通孔的管道與三通閥進(jìn)液口相連接，三通閥的一個(gè)出液口通過連接管與試劑瓶2連接，該連接管可在與試劑瓶2連接的管端部連接針管，以方便插入試劑瓶2中。試劑瓶2內(nèi)還插入有用于排除試劑瓶2液體的排液管，同樣地，為了方便插入試劑瓶2中，也可以在管端部連接插至試劑瓶2底長(zhǎng)針管21，所述的長(zhǎng)針管直徑可以為22#，材料為硬質(zhì)塑料材質(zhì)或不銹鋼材質(zhì)(針管使用前需配有蓋帽)，上述連接管材料為醫(yī)用級(jí)硅膠管。
[0029]為了使酶在最適溫度發(fā)揮作用，所述出液管中間連接有置于溫度調(diào)節(jié)裝置7內(nèi)的不銹鋼彎管63，使出液管6分割為前段出液管61與后段出液管62，所述的不銹鋼彎63放置于可調(diào)節(jié)溫度裝置7中以使消化酶保證在最適溫度。
[0030]形成的消化循環(huán)回路，使得消化下來的干細(xì)胞不需要完全停留在組織消化罐I中，提高已消化下來干細(xì)胞的活性，并且通過蠕動(dòng)泵3同一方向蠕動(dòng)可以不斷加壓濾過不同的過濾網(wǎng)，達(dá)到過濾殘留組織和分離單個(gè)細(xì)胞效果。
[0031]收集通道包括組織消化罐1、三通閥5、與收集裝置4，收集裝置4與三通閥5的一個(gè)出液口通過管道相連接，所述的收集裝置為一漏斗狀瓶體41，所述瓶體瓶頸設(shè)有第二濾網(wǎng)42，所述第二濾網(wǎng)42孔徑為200~300目。瓶底漏斗狀尖口處設(shè)有開口，所述瓶體下方設(shè)有收集瓶8。漏斗型瓶體可方便細(xì)胞收集，所述開口可與收集瓶通過管道相連接，所述收集瓶還可以是干細(xì)胞收集袋。
[0032]一種從組織中獲取干細(xì)胞的方法，包括如上述權(quán)利要求1所述一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，并按以下步驟進(jìn)行:
(1)將待分離的組織放入組織消化罐I內(nèi)；
(2)在試劑瓶2中加入磷酸鹽緩沖液或生理鹽水；
(3)三通閥5旋至使組織消化罐I與收集裝置4相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵3，將試劑瓶中的試劑泵入組織消化罐I中清洗組織，并將組織消化罐I內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置4中；
(4)待消化罐I中內(nèi)清洗試劑完全泵入收集裝置4后，更換新的收集裝置4，同時(shí)三通閥5旋至使組織消化罐I與試劑瓶2相連通的狀態(tài)；
(5)在試劑瓶2中加入消化酶， 將消化酶經(jīng)出液管6泵入組織消化罐I中，機(jī)械震蕩組織消化罐使組織消化罐I中的組織在消化酶及機(jī)械力的作用下分解；
(6)在步驟(5)持續(xù)20~60分鐘后，將三通閥5旋至與收集裝置4相連接，將組織消化罐I中的干細(xì)胞輸入至收集裝置4中。
[0033]進(jìn)一步的，在步驟(5)中所述出液管6包括前段出液管61與后段出液管62，所述前段輸液管61與后段輸液管63之間通過不銹鋼彎管63連接，所述的不銹鋼彎管63放置水浴鍋7中，所述的水浴鍋7的溫度為37°C。
[0034]進(jìn)一步的，所述的消化酶為膠原酶、胰蛋白酶或混合酶。
[0035]一種從組織中獲取干細(xì)胞的方法，其特征在于，包括如上述權(quán)利要求1所述一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，并按以下步驟進(jìn)行:
(1)將待分離的組織放入組織消化罐內(nèi)；
(2)在試劑瓶中加入磷酸鹽緩沖液或生理鹽水；
(3)三通閥旋至使組織消化罐與收集裝置相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將試劑瓶中的試劑泵入組織消化罐中清洗組織，并將組織消化罐內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置中；
(4)待組織消化罐中內(nèi)清洗試劑完全泵入收集裝置后，更換新的收集裝置；
(5)機(jī)械震蕩組織消化罐20~60分鐘后，將三通閥旋至使組織消化罐與收集裝置相連通的狀態(tài)，將組織消化罐中的干細(xì)胞輸入至收集裝置中。
[0036]下面結(jié)合集中組織提取干細(xì)胞的實(shí)施例進(jìn)行具體說明:
實(shí)施例1
從胎盤中獲取造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、亞全能干細(xì)胞，包括以下步驟:(I)無菌收集胎盤組織，剪成小塊lcm*lcm，放入組織消化罐I內(nèi)；
打開組織消化罐I，組織消化罐I直徑為20cm，放入剪好的胎盤組織，放入磁珠15，蓋上濾網(wǎng)及密封圈17，旋緊旋蓋12。檢查各裝置部分的連接，將出液管6夾于蠕動(dòng)泵3上。
[0037](2)在試劑瓶2中加入生理鹽水，或者將連接管直接插入生理鹽水袋中；
(3)三通閥5旋至使組織消化罐I與收集裝置4相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵3，將試劑瓶2中的試劑泵入組織消化罐I中清洗組織，并將組織消化罐I內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置4中。
[0038]將組織消化罐I內(nèi)的磁力發(fā)生裝置14設(shè)定為柔和擋，開啟蠕動(dòng)泵3向組織消化罐I泵入生理鹽水，這樣將胎盤組織中的紅細(xì)胞和造血干細(xì)胞等洗脫下來。清洗后的洗脫液經(jīng)300目的第二過濾網(wǎng)42過濾，收集于的含有羥乙基淀粉的收集瓶中。收集瓶自然沉淀或離心10分鐘，分離成熟紅細(xì)胞即獲得富含造血干細(xì)胞的有核細(xì)胞。
[0039](4)待消化罐I中內(nèi)清洗試劑完全泵入收集裝置4后，將裝有紅細(xì)胞的收集裝置4更換，將三通閥5旋至使組織消化罐I與試劑瓶2相連通的狀態(tài)；
(5)在試劑瓶2中加入消化酶，將不銹鋼彎管63放在37°C水浴鍋中，將消化酶經(jīng)出液管6泵入組織消化罐I中，使組織消化罐I中的組織在消化酶的作用下分解；
將組織消化罐I內(nèi)的磁力發(fā)生裝置14調(diào)至中檔或強(qiáng)檔，使組織消化罐I中的組織在消化酶與磁珠15碰撞組織機(jī)械力的作用下分解。
[0040](6)在步驟(5)持續(xù)30分鐘后，將三通閥5旋至與收集裝置4相連通，將組織消化罐I中的將胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞、內(nèi)皮祖細(xì)胞、胎盤亞全能干細(xì)胞等混合細(xì)胞群通過濾網(wǎng)過濾，收集于收集袋或收集瓶中。`
[0041]實(shí)施例2
從脂肪組織中經(jīng)酶消化法獲取脂肪干細(xì)胞，包括以下步驟:
(I)無菌抽取皮下脂肪組織，放入組織消化罐I內(nèi)；
打開組織消化罐1，組織消化罐I直徑為5cm，放入剪好的脂肪組織，放入磁珠15，蓋上濾網(wǎng)及密封圈17，旋緊旋蓋12。檢查各裝置部分的連接，將出液管6夾于蠕動(dòng)泵3上。
[0042](2)在試劑瓶2中加入磷酸鹽緩沖液；
(3)三通閥5旋至使組織消化罐I與收集裝置4相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵3，將試劑瓶2中的試劑泵入組織消化罐I中清洗組織，并將組織消化罐I內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置4中；
將組織消化罐I內(nèi)的磁力發(fā)生裝置14設(shè)定為柔和擋，開啟蠕動(dòng)泵3向組織消化罐I泵入生理鹽水，洗滌脂肪組織的紅細(xì)胞。清洗后的洗脫液經(jīng)200目的第二過濾網(wǎng)過濾，收集于收集瓶中。
[0043](4)待消化罐I中內(nèi)清洗試劑完全泵入收集裝置4后，將裝有紅細(xì)胞的收集裝置4更換，將三通閥5旋至使組織消化罐I與試劑瓶2相連通的狀態(tài)；
(5)在試劑瓶2中加入消化酶，將不銹鋼彎管63放在37°C水浴鍋中，將消化酶經(jīng)出液管6泵入組織消化罐I中，使組織消化罐I中的組織在消化酶的作用下分解；
將組織消化罐I內(nèi)的磁力發(fā)生裝置14調(diào)至中檔或強(qiáng)檔，使組織消化罐I中的組織在消化酶與磁珠15的作用下分解。
[0044](6)在步驟(5)持續(xù)25分鐘后，將三通閥5旋至與收集裝置4相連通，將組織消化罐I中的脂肪干細(xì)胞泵入收集瓶中進(jìn)行凍存、治療或培養(yǎng)。
[0045]實(shí)施例3
從脂肪組織中經(jīng)無酶法獲取脂肪血管干細(xì)胞組分，包括以下步驟:
(I)無菌抽取皮下脂肪組織，放入組織消化罐I內(nèi)；
打開組織消化罐I，組織消化罐I直徑為20cm，放入剪好的脂肪組織，放入磁珠15，蓋上濾網(wǎng)及密封圈17，旋緊旋蓋12。檢查各裝置部分的連接，將出液管6夾于蠕動(dòng)泵3上。
[0046](2)在試劑瓶2中加入生理鹽水，或者將連接管直接插入生理鹽水袋中；
(3)開啟蠕動(dòng)泵3泵入生理鹽水，開啟磁力發(fā)生裝置至柔和擋。洗滌脂肪組織的紅細(xì)胞。
[0047]三通閥5旋至使組織消化罐I與收集裝置4相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵3，將試劑瓶2中的試劑泵入組織消化罐I中清洗皮下脂肪組織。
[0048](4)將組織消化罐I內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置4中；收集洗滌的紅細(xì)胞，并棄去。
[0049](5)將磁力發(fā)生裝置調(diào)至強(qiáng)檔或用力機(jī)械震搖消化罐20-30分鐘，將三通閥旋至連接收集裝置。將磁力發(fā)生裝置調(diào)至強(qiáng)檔或用力機(jī)械震搖消化罐，將三通閥旋至連接收集裝置，通過200-300目第二濾網(wǎng)4過濾，收集脂肪干細(xì)胞于收集瓶中。以便干細(xì)胞后續(xù)進(jìn)行凍存、治療或培養(yǎng)。
`[0050]實(shí)施例4從臍帶中分離間充質(zhì)干細(xì)胞，包括以下步驟:
(I)無菌收集分離臍帶沃頓膠，放入組織消化罐I內(nèi)；
打開組織消化罐1，組織消化罐I直徑為10cm，放入剪好的臍帶組織，蓋上濾網(wǎng)及密封圈17，旋緊旋蓋12。檢查各裝置部分的連接，將出液管6夾于蠕動(dòng)泵3上。
[0051](2)在試劑瓶2中加入生理鹽水，或者將連接管直接插入生理鹽水袋中；
(3)三通閥5旋至使組織消化罐I與收集裝置4相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵3，將試劑瓶2中的試劑泵入組織消化罐I中清洗組織，并將組織消化罐I內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置4中；
將組織消化罐I內(nèi)放置于機(jī)械振動(dòng)器的上方，開啟機(jī)械振動(dòng)器，開啟蠕動(dòng)泵3，向組織消化罐I泵入生理鹽水，這樣將臍帶組織中的紅細(xì)胞和造血干細(xì)胞等洗脫下來。清洗后的洗脫液經(jīng)300目的第二過濾網(wǎng)過濾，收集于的收集瓶中。收集瓶自然沉淀或離心10分鐘，分離成熟紅細(xì)胞即獲得富含造血干細(xì)胞的有核細(xì)胞。
[0052](4)待消化罐I中內(nèi)清洗試劑完全泵入收集裝置4后，將裝有紅細(xì)胞的收集裝置4更換，將三通閥5旋至使組織消化罐I與試劑瓶2相連通的狀態(tài)；
(5)開啟機(jī)械振動(dòng)器，在試劑瓶2中加入胰蛋白酶，終濃度為0.05%將彎管放在37°C水浴鍋中，將胰蛋白酶經(jīng)出液管6泵入組織消化罐I中，使組織消化罐I中的組織在消化酶與機(jī)械力的作用下分解；
將組織消化罐I下的機(jī)械振動(dòng)器調(diào)至中檔或強(qiáng)檔，使組織消化罐I中的組織在消化酶與機(jī)械力的作用下分解。
[0053](6)在步驟(5)持續(xù)30分鐘后，將三通閥5旋至與收集裝置4相連通，將組織消化罐I中的能干細(xì)胞等混合細(xì)胞群通過濾網(wǎng)過濾，收集于收集袋或收集瓶中。將干細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)擴(kuò)增可獲得大量臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。[0054]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，其特征在于，包括組織消化罐，試劑瓶，蠕動(dòng)泵及收集裝置，所述獲取干細(xì)胞的裝置還包括有三通閥，所述組織消化罐通過管道與三通閥進(jìn)液口相連接，所述試劑瓶與收集裝置通連接管別與三通閥的兩個(gè)出液口相連接，所述試劑瓶?jī)?nèi)還設(shè)有出液管，所述出液管夾于蠕動(dòng)泵上并與組織消化罐相連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述出液管包括前段出液管與后段出液管，所述前段輸液管與后段輸液管之間通過不銹鋼彎管連接，所述的不銹鋼彎管放置于可調(diào)節(jié)溫度裝置中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的干細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述組織消化罐包括罐體與蓋于罐體上方的旋蓋，所述罐體開口處設(shè)有第一濾網(wǎng)，所述旋蓋上設(shè)有用于連接管道的通孔，所述的組織消化罐罐底設(shè)有一磁力發(fā)生裝置，所述磁力發(fā)生裝置上放置有若干個(gè)磁珠，所述消化罐側(cè)壁上還延伸有用于與后段出液管相連接的插孔。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所 述的干細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述的收集裝置包括一漏斗狀瓶體，所述瓶體內(nèi)瓶頸處設(shè)有第二濾網(wǎng)，瓶底漏斗狀尖口處設(shè)有開口，所述瓶體下方設(shè)有收集瓶。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的干細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述可調(diào)節(jié)溫度裝置為水浴鍋。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的干細(xì)胞的裝置，其特征在于，所述組織消化罐罐體與旋蓋間還設(shè)有防止消化罐液體外漏的密封圈。
7.—種從組織中獲取干細(xì)胞的方法，其特征在于，包括如上述權(quán)利要求1所述一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，并按以下步驟進(jìn)行: (1)將待分離的組織放入組織消化罐內(nèi)； (2)在試劑瓶中加入磷酸鹽緩沖液或生理鹽水； (3)三通閥旋至使組織消化罐與收集裝置相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將試劑瓶中的試劑泵入組織消化罐中清洗組織，并將組織消化罐內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置中； (4)待消化罐中內(nèi)清洗試劑完全泵入收集裝置后，更換新的收集裝置，同時(shí)三通閥旋至使組織消化罐與試劑瓶相連通的狀態(tài)； (5)在試劑瓶中加入消化酶，將消化酶經(jīng)出液管泵入組織消化罐中，機(jī)械震蕩組織消化罐，使組織消化罐中的組織在消化酶及機(jī)械力的作用下分解； (6)在步驟(5)持續(xù)20~60分鐘后，三通閥旋至使組織消化罐與收集裝置相連通的狀態(tài)，將組織消化罐中的干細(xì)胞輸入至收集裝置中。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種從組織中獲取干細(xì)胞的方法，其特征在于，在步驟(5)中所述出液管包括前段出液管與后段出液管，所述前段輸液管與后段輸液管之間通過不銹鋼彎管連接，所述的不銹鋼彎管放置水浴鍋中，所述的水浴鍋溫度為37°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種從組織中獲取干細(xì)胞的方法，其特征在于，所述的消化酶為膠原酶、胰蛋白酶或混合酶。
10.一種從組織中獲取干細(xì)胞的方法，其特征在于，包括如上述權(quán)利要求1所述一種從組織中獲取干細(xì)胞的裝置，并按以下步驟進(jìn)行: (1)將待分離的組織放入組織消化罐內(nèi)； (2)在試劑瓶中加入磷酸鹽緩沖液或生理鹽水； (3)三通閥旋至使組織消化罐與收集裝置相連通的狀態(tài)，啟動(dòng)蠕動(dòng)泵，將試劑瓶中的試劑泵入組織消化罐中清洗組織，并將組織消化罐內(nèi)清洗后的試劑排入收集裝置中； (4)待組織消化罐中內(nèi)清洗試劑完全泵入收集裝置后，更換新的收集裝置； (5)機(jī)械震蕩組織消化罐20~60分鐘后，將三通閥旋至使組織消化罐與收集裝置相連通的狀態(tài)，將組織消化罐中的干細(xì)胞輸入至收集 裝置中。
【文檔編號(hào)】C12N5/0735GK103484365SQ201310385503
【公開日】2014年1月1日 申請(qǐng)日期:2013年8月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月30日
【發(fā)明者】譚建明, 陳津, 馬予潔, 黃梁滸, 徐秀敏 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍南京軍區(qū)福州總醫(yī)院