專利名稱：一株鎖擲孢酵母菌株及其在食品、飼料中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可作為普通食品或保健食品原料用的新資源，一種可作為飼料添加劑的富含蛋白、類胡蘿卜素的酵母制品，可以濕菌體或干菌粉形式應(yīng)用。
背景技術(shù)：
提取類胡蘿卜素的一個主要問題是使用有機(jī)溶劑可能對能對這些胡蘿卜素成分造成破壞,并且除去溶劑也增加了成本。單細(xì)胞蛋白是現(xiàn)代飼料工業(yè)和食品工業(yè)中重要的蛋白來源。酵母是很好的單細(xì)胞蛋白來源。其氨基酸組成不亞于動物蛋白質(zhì)，營養(yǎng)十分豐富，含多種必需氨基酸。微生物細(xì)胞中除含有蛋白質(zhì)外，還含有豐富的碳水化合物以及脂類、維生素、礦物質(zhì)。目前，我國很多地區(qū)都以小麥作為畜禽日糧的主要原料，但以小麥型日糧飼喂蛋雞會出現(xiàn)雞蛋蛋黃發(fā)白的問題，影響雞蛋的感觀品質(zhì)。以富含類胡蘿卜素單細(xì)胞生物用于食品和飼料行業(yè)，潛力巨大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種鎖擲孢酵母y7 (保藏單位:中國典型培養(yǎng)物保藏中心；保藏時間:2012年7月19 ;保藏地址:武漢市武昌珞珈山(武漢大學(xué))，郵編為430072 ;保藏編號:CCTCC M 2012293，分類命名為:鎖擲孢酵母 y7，拉丁名-.Sporidiobolus pararoseus y7),及其菌粉制備方法，該菌粉安全無毒，富含類胡蘿卜素，富含蛋白，有很好的營養(yǎng)作用，該菌粉可作為輔料增加掛面蛋白和類胡蘿卜素含量，按2%原料加入色澤較好。菌粉作為輔料加入雞飼料可提高雞蛋的感觀品質(zhì)，提高類胡蘿卜素含量。作為食品新資源和飼料原料有很好的應(yīng)用價值。一株紅色鎖擲孢酵母parariaseiAs y7是由實驗室發(fā)明人自實驗室分離。產(chǎn)類胡蘿卜素，菌體無毒能作為食品原料，飼料。所述的一株紅色鎖擲孢酵母51 pararoseus y7其特征在于:
細(xì)胞卵球形，在LB，PSA培養(yǎng)基上生長良好，菌落粉紅色，表面光滑，扁平，邊緣整齊。所述的y7菌ITS序列: AACTTCTCAATTCTAACTTTGTGCATCTGTATTAATGGCGAGCAACTTCGGTTGTGAGCCTTCACTTACAAA
ACACTAGTCTATGAATGTAAAATTTTTATAACAAATAAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATG
AAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCATCTTGCG
CTCTCTGGTATTCCGGAGAGCATGTCTGTTTGAGTGTCATGAATTCTTCAACCCAATCTTTTCTTGTAATCGATTGG
TGTTTGGATTCTGAGCGTTGCTGGCGTTTGCCTAGCTCGTTCGTAATACATTAGCATCCCTAATACAAGTTTGGATT
GACTTGGCGTAATAGACTATTCGCTAAGGATTCGGTGGAAACATCGAGCCAACTTCATTAAGGAAGCTCCTAATTTA
AAAGTCTACCTTTTGATTAGATCTCAAATCAGGCAGGATTACCCGCTGAACTTAA
菌株ITS基因序列在NCBI數(shù)據(jù)為中分析比對，鑒定為鎖擲孢酵母。
所述的鎖擲孢酵母菌體y7生產(chǎn)方法包括:
在PSA (馬鈴薯蔗糖瓊脂)培養(yǎng)基上可產(chǎn)生紅色的類胡蘿卜素，經(jīng)PS液體發(fā)酵生成種子培養(yǎng)基，按5 %的接種量在同種培養(yǎng)基上培養(yǎng)(30°C，180rpm)五天后，收集菌液；離心后凍干(或烘干)后粉碎過80目篩，產(chǎn)生菌粉(類胡蘿卜素含量22.4mg/kg，HPLC法，SIGMA標(biāo)樣β-胡蘿卜素)。菌粉無不良?xì)馕?。蛋白含?0-50%。 用PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)等培養(yǎng)基，或用發(fā)酵罐等培養(yǎng)方式生產(chǎn)也屬本權(quán)利要求范圍。所述的鎖擲孢酵母菌y7菌粉和菌發(fā)酵液，經(jīng)小鼠急、亞慢性經(jīng)口毒理實驗證明菌體無毒。急性實驗中灌胃5g/kg bw劑量，未見動物異常；亞慢性經(jīng)口毒性試驗期內(nèi)灌胃Ig/kg bw劑量,未見動物異常。所述的鎖擲孢酵母菌y7菌體和菌發(fā)酵液，按I g/kg bw劑量灌胃，經(jīng)小鼠營養(yǎng)評價，小鼠游泳耐力實驗，體重和耐力增加。所述的鎖擲孢酵母菌y7菌液或菌粉用于生產(chǎn)面制品，其特征在于:
所述的y7菌粉菌粉添加對面粉品質(zhì)的影響:應(yīng)用粉質(zhì)拉伸儀研究分析，3%添加量降低了面團(tuán)的粉質(zhì)指數(shù)和拉伸特性指數(shù)。主要體現(xiàn)在:降低了面團(tuán)的穩(wěn)定時間、拉伸能量、延伸度、拉伸阻力，面團(tuán)的粉質(zhì)指數(shù)，增加了面團(tuán)的弱化度。但是2%及以下添加量(1%，1.5%未顯示)對面粉粉質(zhì)指數(shù)和拉伸特性指數(shù)影響不大。所述的y7菌粉菌粉添加掛面感官品質(zhì)的影響:經(jīng)感官品質(zhì)評分試驗，菌粉添加量為1.5%時，掛面感官品質(zhì)最佳。隨菌粉添加量的增加，面條色澤加重，食味增強(qiáng)變濃，其他感官指標(biāo)無明顯變化。掛面在色澤食味方面應(yīng)有該成份的屬性，但色澤不能太重，顏色太重反而造成食欲減退。因此添加量為1.5%較適宜。胡蘿卜素掛面在蒸煮過程中，色澤下降，這說明該β —胡蘿卜素具有熱不穩(wěn)定性。為了彌補(bǔ)蒸煮色澤損失，可適當(dāng)增加菌粉添加量，經(jīng)試驗，添加2.0 %比較適宜。所述的y7菌粉與其它如葡糖糖氧化酶、海藻酸鈉、復(fù)合磷酸鹽、食鹽等輔料和改良劑復(fù)配。經(jīng)單因素預(yù)實驗后，再利用5因素4水平的正交試驗優(yōu)化配方，結(jié)果表明，菌粉對掛面品質(zhì)影響極顯著，海藻酸鈉、食鹽對掛面品質(zhì)影響顯著，而葡萄糖氧化酶、復(fù)合磷酸鹽對掛面品質(zhì)影響不顯著，但其對掛面感官品質(zhì)具有不可忽略的改良作用。優(yōu)化配方為:菌粉2%、食鹽2 %、海藻酸鈉0.09%、葡萄糖氧化酶0.9 X 10 —4%、復(fù)合磷酸鹽0.4%為配方，制作胡蘿卜素掛面并測定其理化指標(biāo)。該配方制作胡蘿卜素掛面在理化指標(biāo)上都及格，無彎折斷和熟斷條現(xiàn)象，烹調(diào)損失很低，僅為0.2%。因此，無論從感官品質(zhì)還是理化指標(biāo)方面，該配方胡蘿卜素掛面的品質(zhì)都達(dá)到SB/T 10069-92標(biāo)準(zhǔn)要求。所述的y7菌粉和菌發(fā)酵液可用于雞飼料生產(chǎn)其特征在于:
取菌粉按>1%的添加量與一般配合基礎(chǔ)飼料混合，攪拌混勻后喂產(chǎn)蛋雞，10天后，所產(chǎn)蛋與未加菌粉飼料喂雞產(chǎn)蛋相比，蛋黃內(nèi)胡蘿卜素含量增加顯著，蛋黃色澤明顯偏紅。飼料領(lǐng)域技術(shù)人員在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，所作其它技術(shù)參數(shù)優(yōu)化，當(dāng)屬本發(fā)明的保護(hù)范圍。


圖1 為鎖擲抱酵母菌 Sporidiobolus pararoseus y7 (保藏編號:CCTCC M2012293)光鏡下圖像(放大200倍)。
具體實施例方式實施例一:鎖擲孢酵母5: pararoseus y7用于富含胡蘿卜素掛面的研制。材料與試劑:
小麥粉:濕面筋含量30.5% ；
菌粉:鎖擲酵母(又稱鎖擲孢酵母)菌株Sporidiobolus pararoseus y7經(jīng)PS液體培養(yǎng)，離心收集菌體，烘干粉碎過80目篩得干粉(類胡蘿卜素含量22.4mg/kg, HPLC法，SIGMA標(biāo)樣盧一胡蘿卜素)；
葡糖糖氧化酶；海藻酸鈉；復(fù)合磷酸鹽；食鹽。主要儀器:
壓面機(jī)；電子天平；電磁爐；燒杯:200mL。電子式粉質(zhì)儀。試驗方法。菌粉對面粉物理性質(zhì)影響
按照GB/T 14614-2006小麥粉面團(tuán)的物理特性，吸水量和流變學(xué)特性的測定(粉質(zhì)儀法)。掛面的制作及感官評價方法
按照SB/T 10137-93面條用小麥粉附錄A中的方法進(jìn)行。掛面的理論指標(biāo)測定方法
按照SB/T 10068掛面中第四章規(guī)定的方法測定。結(jié)果與討論。

菌粉對面粉品質(zhì)的影響
應(yīng)用粉質(zhì)拉伸儀研究分析了菌粉對面團(tuán)流變性的影響。結(jié)果表明，3%添加量降低了面團(tuán)的粉質(zhì)指數(shù)和拉伸特性指數(shù)。主要體現(xiàn)在:降低了面團(tuán)的穩(wěn)定時間、拉伸能量、延伸度、拉伸阻力，面團(tuán)的粉質(zhì)指數(shù)，增加了面團(tuán)的弱化度。但是2%及以下添加量(1%，1.5%未顯示)對面粉粉質(zhì)指數(shù)和拉伸特性指數(shù)影響不大。單一輔料與改良劑對掛面品質(zhì)的影響。菌粉對掛面感官品質(zhì)的影響:
在面粉中分別添加0-2.5%的菌粉，感官品質(zhì)評分結(jié)果見表I所示。菌粉對掛面感官品質(zhì)的影響
權(quán)利要求
1.株紅色鎖擲孢酵母5)9ο_τΥ￡//οΑο7 5.pararoseus y7是由發(fā)明人自實驗室分離；產(chǎn)類胡蘿卜素，菌體無毒能作為食品原料，飼料。
2.據(jù)權(quán)利I所述的一株紅色鎖擲孢酵母5:pararoseus y7其特征在于: a.細(xì)胞卵球形，在LB，PSA培養(yǎng)基上生長良好，菌落粉紅色，表面光滑，扁平，邊緣整齊； b.1TS序列:AACTTCTCAATTCTAACTTTGTGCATCTGTATTAATGGCGAGCAACTTCGGTTGTGAGCCTTCACTTACAAAACACTAGTCTATGAATGTAAAATTTTTATAACAAATAAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGCTCTCGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATACGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCATCTTGCGCTCTCTGGTATTCCGGAGAGCATGTCTGTTTGAGTGTCATGAATTCTTCAACCCAATCTTTTCTTGTAATCGATTGGTGTTTGGATTCTGAGCGTTGCTGGCGTTTGCCTAGCTCGTTCGTAATACATTAGCATCCCTAATACAAGTTTGGATTGACTTGGCGTAATAGACTATTCGCTAAGGATTCGGTGGAAACATCGAGCCAACTTCATTAAGGAAGCTCCTAATTTAAAAGTCTACCTTTTGATTAGATCTCAAATCAGGCAGGATTACCCGCTGAACTTAAo
3.據(jù)權(quán)利要求1所述的菌體生產(chǎn)方法包括: a.在PSA(馬鈴薯蔗糖瓊脂)培養(yǎng)基上可產(chǎn)生紅色的類胡蘿卜素，經(jīng)PS液體發(fā)酵生成種子培養(yǎng)基，按5%的接種量在同種培養(yǎng)基上培養(yǎng)(30°C，180rpm)五天后，收集菌液；離心后凍干(或烘干)后粉碎過80目篩，產(chǎn)生菌粉(類胡蘿卜素含量22.4mg/kg，HPLC法，SIGMA標(biāo)樣β —胡蘿卜素)；菌粉無不良?xì)馕叮坏鞍缀?0-50%; b.用PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)等培養(yǎng)基，或用發(fā)酵罐等培養(yǎng)方式生產(chǎn)也屬本權(quán)利要求范圍。
4.據(jù)權(quán)利要求1所述的菌體和菌發(fā)酵液，經(jīng)小鼠急、亞慢性經(jīng)口毒理實驗證明菌體無毒；急性實驗中灌胃5g/kg bw劑量，未見動物異常；亞慢性經(jīng)口毒性試驗期內(nèi)灌胃I g/kg bw劑量，未見動物異常。
5.據(jù)權(quán)利要求1所述的菌體和菌發(fā)酵液，按Ig/kg bw劑量灌胃，經(jīng)小鼠營養(yǎng)評價，小鼠游泳耐力實驗，體重和耐力增加。
6.據(jù)權(quán)利I所述利用菌體(菌液或菌粉)生產(chǎn)面制品，其特征在于: a.菌粉添加對面粉品質(zhì)的影響:2%及以下添加量對面粉粉質(zhì)指數(shù)和拉伸特性指數(shù)影響不大； b.菌粉添加掛面感官品質(zhì)的影響:添加2.0%比較適宜； c.與其它如葡糖糖氧化酶、海藻酸鈉、復(fù)合磷酸鹽、食鹽等輔料和改良劑復(fù)配；優(yōu)化配方為:菌粉2 %、食鹽2%、海藻酸鈉0.09%、葡萄糖氧化酶0.9X10 —4%、復(fù)合磷酸鹽0.4%為配方，制作胡蘿卜素掛面并測定其理化指標(biāo)；該配方胡蘿卜素掛面的品質(zhì)達(dá)到SB/T 10069-92標(biāo)準(zhǔn)要求。
7.據(jù)權(quán)利要求1所述的菌體和菌發(fā)酵液可用于雞飼料生產(chǎn)其特征在于:食添加菌粉雞所產(chǎn)蛋與未加菌粉飼料喂雞產(chǎn)蛋相比，蛋黃內(nèi)胡蘿卜素含量增加顯著，蛋黃色澤明顯偏紅。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種鎖擲孢酵母菌株，及其菌粉制備方法，該菌粉安全無毒，富含類胡蘿卜素，富含蛋白，有很好的營養(yǎng)作用，該菌粉可作為輔料增加掛面蛋白和類胡蘿卜素含量，按２%原料加入色澤較好。菌粉作為輔料加入雞飼料可提高雞蛋的感觀品質(zhì)，提高類胡蘿卜素含量。作為食品新資源和飼料原料有很好的應(yīng)用價值。
文檔編號A23L1/16GK103087930SQ20121031215
公開日2013年5月8日 申請日期2012年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月29日
發(fā)明者王飛, 羅海瀾, 豆康寧 申請人:漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校