專(zhuān)利名稱(chēng)：一種用于米曲霉菌發(fā)酵產(chǎn)曲酸的培養(yǎng)基及其發(fā)酵方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種用米曲霉菌發(fā)酵產(chǎn)生曲酸的培養(yǎng)基與發(fā)酵方法。
背景技術(shù)：
曲酸(5-羥基-2-羥甲基-1，4-吡喃酮，英文名Kojic acid)，是一種黑色素專(zhuān)屬性抑制劑，它進(jìn)入皮膚細(xì)胞后能夠與細(xì)胞中的銅離子絡(luò)合，改變酪氨酸酶的立體結(jié)構(gòu)，阻止酪氨酸酶的活化，從而抑制黑色素的形成。曲酸類(lèi)美白活性劑較其它美白活性劑具有更好的酪氨酸酶抑制效果。它不作用于細(xì)胞中的其它生物酶，對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒害作用，同時(shí)它還能進(jìn)入細(xì)胞間質(zhì)中，組成胞間膠質(zhì)，起到保水和增加皮膚彈性的作用。目前已被配入各種化妝品中，制成針對(duì)雀斑、老人斑、色素沉著和粉刺的美白化妝品。曲酸是利用發(fā)酵法生產(chǎn)的有機(jī)酸，我國(guó)自80年代開(kāi)始研究曲酸生產(chǎn)工藝，但在97 年以前卻一直以進(jìn)口為主。2001年陜西省微生物研究所采用微生物復(fù)合誘變育種技術(shù)，選育出黃曲霉突變株UCN7-17，為我國(guó)曲酸生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。目前，我國(guó)的曲酸生產(chǎn)技術(shù)還較落后，生產(chǎn)設(shè)備多，操作復(fù)雜，能耗大，生產(chǎn)工藝還有待提高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種原料易得的用于米曲霉菌發(fā)酵產(chǎn)曲酸的培養(yǎng)基及其發(fā)酵方法，該方法能耗低、培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單。本發(fā)明的技術(shù)方案如下
本發(fā)明提供了一種用于米曲霉菌發(fā)酵產(chǎn)曲酸的培養(yǎng)基，每1. 5升培養(yǎng)基中含有甘露醇10 30g，酵母膏1 5g，麥芽糖10 30g，味精1 5g，葡萄糖3 15g，蛋白胨1 10g，土豆泥50 200g，其余為水。更優(yōu)選地，每1. 5升培養(yǎng)基中含有甘露醇15g，酵母膏2. 75g，麥芽糖15g，味精 3. 75g，葡萄糖7. 5g，蛋白胨3. 75g，土豆泥150g，其余為水。
所述水為一次蒸餾水。本發(fā)明還提供了一種利用上述的培養(yǎng)基培養(yǎng)米曲霉菌產(chǎn)生曲酸的發(fā)酵方法，包括以下步驟
(1)母種擴(kuò)大培養(yǎng)；
(2)接種培養(yǎng)基靜置發(fā)酵；
(3)所述靜置發(fā)酵的條件為厭氧發(fā)酵，發(fā)酵溫度為^5-28°C，靜置發(fā)酵的時(shí)間為32-36天。所述靜置發(fā)酵的條件優(yōu)選為厭氧發(fā)酵，發(fā)酵溫度為^°C，靜置發(fā)酵的時(shí)間為34天。本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明的培養(yǎng)基原料易得，用于產(chǎn)曲酸的生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)便、能耗低、產(chǎn)量大。
具體實(shí)施例方式曲酸產(chǎn)量的測(cè)定
取50ml容量瓶1個(gè)，加入Iml顯色劑(l%FeCl3—HCL)，加入發(fā)酵后的澄清發(fā)酵液 9. 8ml，用一次蒸餾水定容至50ml，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其OD5tltl值，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，得
培養(yǎng)基曲酸產(chǎn)量。為更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例做進(jìn)一步的說(shuō)明，但是本發(fā)明不僅限于此。實(shí)施例1
1. 1培養(yǎng)基的配置
試驗(yàn)組稱(chēng)取甘露醇15g，酵母膏2. 75g，麥芽糖15g，味精3. 75g，葡萄糖7. 5g，蛋白胨 3. 75g，土豆泥150g，先用適量溫水將酵母膏溶解，后逐步加入其它成分，待全部溶解后用一次蒸餾水定容至1500ml。對(duì)照組1 稱(chēng)取酵母膏2. 25g，甘露醇15g，味精7. 5g，葡萄糖7. 5g，麥芽糖15g，硫酸鎂(MgSO4 ·7Η20) 0. 225g，磷酸氫鉀0. 375g，氯化鈉11. 25g，先用適量溫水將酵母膏溶解， 后逐步加入其它成分，待全部溶解后用一次蒸餾水定容至1500ml。對(duì)照組2 稱(chēng)取硝酸鈉4. 5g，磷酸氫鉀1. 5g，硫酸鎂(MgSO4 · 7H20) 0. 75g，氯化鉀 0. 75g，硫酸鐵0. 015g，蔗糖45g，用一次蒸餾水定容至1500ml。對(duì)照組3 稱(chēng)取蛋白胨7. 5g，酵母膏3. 75g，葡萄糖15g，先用適量溫水將酵母膏溶解，后逐步加入其它成分，待全部溶解后用一次蒸餾水定容至1500ml。對(duì)照組4 稱(chēng)取葡萄糖30g，蛋白胨7. 5g，氯化鈉3. 75g，加先用適量溫水將酵母膏溶解，后逐步加入其它成分，待全部溶解后用一次蒸餾水定容至1500ml。1. 2發(fā)酵米曲霉菌生產(chǎn)曲酸
將冰凍保存的米曲霉菌(米曲霉菌為米曲霉(Aspergillus oryzae ) IBPT-I，于2011年 12月1日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，地址武漢武漢大學(xué)，保藏編號(hào)CCTCC NO :M2011437)斜面解凍，擴(kuò)培至平板培養(yǎng)基3_5天，再擴(kuò)培至試管，2_3天后擴(kuò)培至上述培養(yǎng)基(具塞錐形瓶)，在溫度下，靜置培養(yǎng)34天，停止培養(yǎng)。1.3曲酸產(chǎn)量的測(cè)定
取50ml容量瓶1個(gè)，加入Iml顯色劑(l%FeCl3—HCL)，加入1. 2發(fā)酵后澄清發(fā)酵液 9. 8ml，用一次蒸餾水定容至50ml，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其OD5tltl值與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，得培養(yǎng)基曲酸產(chǎn)量。試驗(yàn)組與對(duì)照組1-4得到的培養(yǎng)基曲酸產(chǎn)量分別為968mg/L、173. 4mg/L, 55. 8mg/L>167. 6mg/L>133. 8mg/L。通過(guò)以上5種不同培養(yǎng)基的比較，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明培養(yǎng)基的產(chǎn)量最大。
權(quán)利要求
1.一種用于米曲霉菌發(fā)酵產(chǎn)曲酸的培養(yǎng)基，其特征在于每1.5升培養(yǎng)基中含有甘露醇10 30g，酵母膏1 5g，麥芽糖10 30g，味精1 5g，葡萄糖3 15g，蛋白胨1 10g，土豆泥50 200g，其余為水。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于每1.5升培養(yǎng)基中含有甘露醇15g，酵母膏2. 75g，麥芽糖15g，味精3. 75g，葡萄糖7. 5g，蛋白胨3. 75g，土豆泥150g，其余為水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)基，其特征在于所述水為一次蒸餾水。
4.一種利用權(quán)利要求1、2或3所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)米曲霉菌產(chǎn)生曲酸的發(fā)酵方法，其特征在于，包括以下步驟(1)母種擴(kuò)大培養(yǎng)；(2)接種培養(yǎng)基、靜置發(fā)酵；(3)所述靜置發(fā)酵的條件為厭氧發(fā)酵，發(fā)酵溫度為2648°C，靜置發(fā)酵的時(shí)間為32-36天。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的培養(yǎng)基培養(yǎng)米曲霉菌產(chǎn)生曲酸的發(fā)酵方法，其特征在于所述靜置發(fā)酵的條件為厭氧發(fā)酵，發(fā)酵溫度為^°C，靜置發(fā)酵的時(shí)間為34天。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用米曲霉菌靜置發(fā)酵產(chǎn)生曲酸的培養(yǎng)基，每1.5升所述培養(yǎng)基包括甘露醇10～30g，酵母膏1～5g，麥芽糖10～30g，味精1～5g，葡萄糖3～15g，蛋白胨1～10g，土豆泥50～200g，其余為蒸餾水；同時(shí)還提供了1種新的靜置發(fā)酵方法。本發(fā)明的原料易得、能耗低、產(chǎn)量大，可對(duì)米曲霉菌的發(fā)酵研究及曲酸醫(yī)學(xué)研究提供新思路和新方法。
文檔編號(hào)C12P17/06GK102409067SQ20111041341
公開(kāi)日2012年4月11日 申請(qǐng)日期2011年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月10日
發(fā)明者伍久林, 張其清, 方哲翔, 王家斌, 王志力, 胡筱, 陳立 申請(qǐng)人:福州大學(xué)