專利名稱：：熊果酸糖甙及含其的植物提取物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種化合物及含其的植物提取物的新應(yīng)用，具體的涉及熊果酸糖甙，及含有該化合物的植物提取物的新應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：糖尿病是一種代謝性、終身性疾病，其并發(fā)癥嚴(yán)重威脅人類的健康。由糖尿病并發(fā)癥引起的死亡人數(shù)在發(fā)達(dá)國家已是繼心腦血管疾病、癌癥之后居第三位。糖尿病的成因是胰島素(體內(nèi)的唯一降血糖激素)的絕對或相對分泌不足，以及靶組織細(xì)胞對胰島素敏感性降低，而引起蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列的代謝紊亂，其中以高血糖為主要標(biāo)志。目前，臨床上對于糖尿病的治療尚無根本的解決辦法。通常的預(yù)防、控制和治療方法中，抑制血糖水平升高是主要的目標(biāo)之一。研究顯示，低鹽、低糖、低脂、高纖維的飲食習(xí)慣可有效預(yù)防糖尿?。唤档筒秃?小時(shí)血糖能顯著減低糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生，所以控制餐后血糖是糖尿病防治的關(guān)鍵。目前，降血糖以及治療糖尿病的藥物從作用機(jī)理上區(qū)分，主要有注射胰島素；以二甲雙胍為代表的以延緩腸道對葡萄糖的吸收并增強(qiáng)外周組織糖的無氧酵解，抑制肝糖異生為作用機(jī)理；以拜耳公司生產(chǎn)的拜糖蘋為代表的以針對抑制消化相關(guān)酶(以a-葡萄糖苷酶為主)的活性，從而減少糖尿病患者對食物中的淀粉等糖類物質(zhì)的吸收為作用機(jī)理等幾種方式。上述幾類藥物從副作用來看，胰島素療法在是否會產(chǎn)生藥物依賴征方面存在較大的爭議；二甲雙胍對肝腎功能有不同程度的損傷，同時(shí)對高血壓患者以及高齡糖尿病患者的使用也存在禁忌；而拜糖蘋(抑制a-葡萄糖苷酶的活性)除需要監(jiān)控低血糖情況發(fā)生外，基本無副作用，同時(shí)拜糖蘋類藥物對于提高患者的生活質(zhì)量方面也有十分積極的作用(糖尿病患者在服藥的同時(shí)可以相對更多的享受含糖類食物)。人們的曰常飲食中，食物中的糖類多為淀粉等多糖和寡糖類物質(zhì)，這些非單糖物質(zhì)只有在消4fe^^如a-葡萄糖苷酶)的作用下才能被人體吸收。因此，抑制人體內(nèi)消化相關(guān)酶的活性能夠抑制人體對糖類物質(zhì)的消化吸收，迸而達(dá)到減少糖類物質(zhì)的攝入和抑制餐后血糖升高的效果。因此開發(fā)具有高效抑制消化相關(guān)酶(以a-葡萄糖苷酶為主)的藥物對于控制血糖水平以及治療糖尿病具有積極和重大的意義。隨著人們生活水平的不斷提高以及飲食結(jié)構(gòu)的不合理，肥胖癥及其引起的疾病己經(jīng)開始威脅人類的健康。同時(shí)，人們對減肥美體塑身的需求也隨著生活水平的提高而日漸增長。大量報(bào)道指出，過量攝入糖類物質(zhì)可導(dǎo)致肥胖。因此，控制糖類物質(zhì)的攝入是肥胖癥防治、減肥美體塑身的重要環(huán)節(jié)之一。如式1所示的化合物熊果酸糖甙是以熊果酸為母核的雙糖鍵糖甙(a-香樹脂三萜型3P-糖甙)，即在熊果酸3位羥基上接了個(gè)P鍵的吡喃葡萄糖，而呋喃阿拉伯糖1位接在葡萄糖的4位上，以下簡稱WRY-A，是一種單體化合物，屬a-香樹脂三萜型3P-糖甙(含葡萄糖和阿拉伯糖)，分子式C41H66012分子量750。OH式1化合物WRY-A可由迷迭香植物中的葉和莖中提取。迷迭香(RosmarinusofficinalisL.)屬于唇形科迷迭香屬植物。分離提取WRY-A化合物的方法可參見文獻(xiàn)GlycosidesofursilicacidfromEmpetrumsibiricum，V.Vassil,V.G.BukharovandL.N.Kameeva;RusianChemicalBulletin,v.19no.11970.目前對于該化合物僅有分離、鑒定方面的研究，其功效研究尚無報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為血糖水平升高引起的相關(guān)病癥的防治及保健提供新途徑，而公開了化合物熊果酸糖甙，及含有該化合物的植物提取物通過抑制進(jìn)食消化酶系統(tǒng)以達(dá)到抑制血糖水平升高，減少糖類攝入的效果的新應(yīng)用。本發(fā)明所述的化合物熊果酸糖甙，屬以熊果酸為母核的雙糖鍵糖甙(a-香樹脂三萜型3P-糖甙)，在熊果酸3位羥基上接了個(gè)e鍵的吡喃葡萄糖，而呋喃阿拉伯糖1位接在葡萄糖的4位上，分子式C41H66012分子量750。通過理化常數(shù)測定和各種紅外光譜、紫外光譜及核磁共振檢測光譜分析，其結(jié)構(gòu)式如式1所示理化常數(shù)如下所列熔點(diǎn)(m.p.):185-188°C;[oc]D+10°(cl，Pyridine);質(zhì)譜(ESI)m/z:750(M)，C65.24;65.43;H8.54;8.81%，經(jīng)計(jì)算C65.60;H8.80%分子式為C41H66012，分子量750，該糖甙經(jīng)水解，其母核產(chǎn)物mp278~280°C;[a]D+60°C(cl，Pyridine)發(fā)現(xiàn)C78.60;78.64;H10.65;10.46%,經(jīng)計(jì)算C78.89;H10.59%，分子式C30H48O3分子量456。經(jīng)鑒定，波譜數(shù)據(jù)與熊果酸(式2)基本一致，說明其母核為熊果酸。6<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式2熊果酸理化常數(shù)如下所列紅外光譜中有羥基強(qiáng)峰3438，2940cm";羧酸羰基1693cm";并且具有熊果酸型化合物的特征吸收峰，為熊果酸的兩個(gè)基本骨架特征，艮口熊果酸A區(qū)1386，1370，熊果酸B區(qū)1304，1269，與Raman光譜的散射峰比較，熊果酸Raman譜中峰尖銳而清晰，波數(shù)在4003400cm—1之間，且有30多個(gè)明顯的特征峰，見下表。熊果酸IR和Raman光譜鑒定比較<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>熊果酸糖甙用溶劑展開的紙層析水解，鑒定了D-葡萄糖和L-阿拉伯糖。根據(jù)水解和甲基化糖的鑒別，糖甙中的葡萄糖是吡喃糖形式，糖甙中的阿拉伯糖具有呋喃糖環(huán)。按照糖甙中心區(qū)域構(gòu)象計(jì)算，表明葡萄糖是用e鍵結(jié)合在熊果酸的羥基上，而阿拉伯糖則用a鍵結(jié)合在葡萄糖上?；衔颳RY-A可由植物中提取，較常見的為迷迭香植物。提取該化合物的方法可參見文獻(xiàn)GlycosidesofursilicacidfromEmpetrumsibiricum,V.Vassil,V.G.BukharovandL.N.Karneeva;RusianChemicalBulletin,v.19no.l1970.本發(fā)明所述的化合物WRY-A可以是粗提產(chǎn)品，也可以是WRY-A的純品。本發(fā)明還涉及WRY-A或含有該化合物的植物提取物在制備消化相關(guān)酶活性抑制劑中的應(yīng)用。所述的消化相關(guān)酶較佳的為a-葡萄糖苷酶。本發(fā)明還涉及WRY-A或含有該化合物的植物提取物在制備抑制血糖水平升高的藥品、飲品、食品和保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步涉及WRY-A或含有該化合物的植物提取物在制備預(yù)防、控制或治療糖尿病的藥品、飲品、食品和保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明再進(jìn)一步涉及WRY-A或含有該化合物的植物提取物在制備預(yù)防、控制或治療肥胖癥或減肥美體塑身用的藥品、飲品、食品和保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明中，所述的植物較佳的為迷迭香。本發(fā)明中，所述的制劑可為粉劑、片劑、液體劑、懸浮液或乳劑；所述的藥品可為粉劑、片劑、膠囊劑(包括軟膠囊和硬膠囊)、液體劑、懸浮液、？L劑、口服液、果凍或沖劑；所述的飲品和食品可為含有WRY-A或含有WRY-A化合物的植物提取物的濃縮液和/或干燥物的飲品和食品；對飲品和食品的形式?jīng)]有限制，可為粉劑、片劑、膠囊劑(包括軟膠囊和硬膠囊)、顆粒、沖劑、酒類、果凍、飲料、乳制品或小點(diǎn)心烘烤品等；所述的保健品可為粉劑、片劑、膠囊劑(包括軟膠囊和硬膠囊)、液體劑、懸浮液、乳劑、口服液、果凍或沖劑。本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于WRY-A或含有該化合物的植物提取物具有明顯的抑制消化相關(guān)酶(如a-葡萄糖苷酶)活性的作用。人們?nèi)粘Ｊ澄镏械奶穷惗鄶?shù)情況下為淀粉等多糖和寡糖類物質(zhì)，通過對消化吸收酶的抑制可抑制餐后血糖水平升高，減少糖類的攝入。上述化合物以及含有上述化合物的植物提取物應(yīng)用于抑制血糖水平升高，減少糖類攝入的藥品、飲品、食品和保健品的制備，可有效防治糖尿病和肥胖癥，以及達(dá)到減肥美體塑身的效果，對提高人民生活質(zhì)量有積極和重大意義。具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實(shí)施例范圍之中。實(shí)施例1含WRY-A化合物的迷迭香提取物和WRY-A化合物的制備1、迷迭香提取物的制備將1000克經(jīng)過干燥的迷迭香(江西產(chǎn))葉和莖磨成干粉，石油醚浸泡提取2次(45°C，2h/次)；回收石油醚；渣烘干，50%乙醇(渣重量50%乙醇重量=1:10)提取烘干的渣2次(80°C，2h/次)；過濾得酒精提取液；乙醇液濃縮至無乙醇，加熱至100。C25min。冷卻過濾棄沉淀，收集清液，熱風(fēng)干燥至干品，得100克，該干品為迷迭香提取物。2、WRY-A化合物的制備取上述迷迭香提取物10克分離WRY-A化合物，分離得到純品WRY-A化合物lg，迷迭香提取物中WRY-A化合物的含量為10wtn/。。WRY-A的分離方法按照參考文獻(xiàn)GLYCOSIDESOFURSOLICACIDFROMEmpetrumsibiricumV.Vassil，V.G.BukharovandL.N.Karneeva,RusianChemicalBulletin,v.19no.11970實(shí)施例2含WRY-A化合物的迷迭香提取物和WRY-A化合物對a-葡萄糖苷酶活性抑制試驗(yàn)1、測試原理通過分光光度計(jì)測試a-葡萄糖苷酶對a-葡萄糖苷的降解作用，從而檢測樣品對a-葡萄糖苷酶活性的抑制作用。2、測試條件-儀器722型光柵分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠制造)，電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，微量分析天平AE240(瑞士梅特勒一托利多公司制造)，PHB-1型便攜式PH/ORP計(jì)(上海三信儀表廠制造)；主要試劑a-葡萄糖苷酶(美國Sigma公司)、cl-對硝基苯酚葡萄糖苷(美國Sigma公司)、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀(上海試劑一廠制造)；樣品溶解用pH6.81磷酸緩沖液溶解；對照選用沒有樣品的上述pH6.81磷酸緩沖液；陽性對照降血糖藥物一拜糖蘋(拜耳公司產(chǎn)品)；測試樣品l:WRY-A化合物；測試樣品2:實(shí)施例2獲得的迷迭香提取物(WRY-A化合物含量為10wt%)。3、測試結(jié)果，具體如表l所示表1對a-葡萄糖苷酶活性的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>從表1可以看出WRY-A對a-葡萄糖苷酶活性有明顯抑制作用，IC5。為7ppm，含有WRY-A化合物的迷迭香提取物也有明顯抑制a-葡萄糖苷酶活性作用，IC5()為16ppm，抑制效果均優(yōu)于拜糖蘋。實(shí)施例3含WRY-A化合物的迷迭香提取物和WRY-A化合物對抑制口服淀粉所致血糖升高的大鼠驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)樣品的配置實(shí)驗(yàn)溶液1:WRY-A化合物900mg+純凈水至90ml。實(shí)驗(yàn)溶液2:實(shí)施例2獲得的迷迭香提取物1800mg+純凈水至90ml。對照溶液純凈水90ml。淀粉糊食用淀粉200g+500ml純凈水，攪拌、加熱、溶解至分布均勻的糊狀物。實(shí)驗(yàn)溶液1按60公斤體重成人計(jì)算，推薦每次服量為0.5ml/kg.b.w，設(shè)1個(gè)中劑量組；實(shí)驗(yàn)溶液2按60公斤體重成人計(jì)算，推薦每次服量為0.5ml/kg.b.w,設(shè)1個(gè)中劑量組。10倍推薦量組為5ml/kg.b.w。2.實(shí)驗(yàn)條件-動物清潔級雌性大鼠，體重200土20克；動物實(shí)驗(yàn)室清潔級屏障單元，室溫23'C士0.5r，濕度70%±5%;儀器美國強(qiáng)生穩(wěn)步血糖測定儀，蘇州生產(chǎn)小鼠固定器；試劑美國強(qiáng)生穩(wěn)步血糖測定儀配套專用試紙。3.實(shí)驗(yàn)方法(1)選36只大鼠，禁食24小時(shí)(不禁水)，隨機(jī)分成1個(gè)對照組和2個(gè)給藥組;(2)同時(shí)灌胃實(shí)驗(yàn)溶液1和實(shí)驗(yàn)溶液2以及對照溶液5ml/kg.b.w，45分鐘后測血糖值，在3組中分別選出血糖值較平均的IO只大鼠，對每只大鼠進(jìn)行編號；(3)對受試大鼠喂食淀粉糊，按10ml/kg.b.w的量進(jìn)行灌胃。(4)在喂食淀粉糊后第1、2和3小時(shí)分別測血糖值。(5)數(shù)據(jù)處理文中所列數(shù)據(jù)均以x士S表示，組間均數(shù)顯著性檢驗(yàn)采用方差分析。結(jié)果如表2所示。表2藥物對服用淀粉的大鼠血糖的影響力'服藥45分鐘后血糖喂食淀粉i小時(shí)后喂食淀粉2小時(shí)后喂食淀粉3小時(shí)后血糖(mmol/L)血糖(mmol/L)血糖(mmol/L)12<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注女A與對照組相比P〈0.01;由表2可見，WRY-A化合物和含有WRY-A化合物的迷迭香提取物對大鼠口服淀粉所致血糖升高的有明顯抑制作用。實(shí)施例4控制大鼠體重驗(yàn)證試驗(yàn)1.飼料配方(高蔗糖和高淀粉飼料配方)配方及質(zhì)量比..玉米淀粉40%，蔗糖25%，脫脂大豆18%，豬油10%，魚粉5%，鹽1%，礦物質(zhì)0.9%，維生素0.1%，合計(jì)100%。2.樣品及飼料樣品1:WRY-A化合物；樣品2:實(shí)施例2獲得的迷迭香提取物。樣品1按60公斤體重成人計(jì)算，推薦日服量為5mg/kg.b.w，設(shè)1個(gè)中劑量組；樣品2按60公斤體重成人計(jì)算，推薦日服量為30mg/kg.b.w，設(shè)1個(gè)中劑飼料l:10倍推薦量組50mg/kg.b.w，以大鼠日均食飼料40克計(jì)算，在飼料中添加0.05%的樣品1;飼料2:10倍推薦量組300mg/kg.b.w，以大鼠日均食飼料40克計(jì)算，在飼料中添加0.3%的樣品2;對照飼料在飼料中未添加任何藥物。2.實(shí)驗(yàn)條件動物清潔級雌性大鼠，體重380士20克；動物實(shí)驗(yàn)室清潔級屏障單元，室溫23。C士0.5。C，濕度70%±5%。3.實(shí)驗(yàn)方法(1)選50只大鼠，IO只大鼠為一組，隨機(jī)分成1個(gè)對照組和2個(gè)給藥組；(2)給三組大鼠分別使用飼料1、飼料2、對照詞料，共計(jì)詞養(yǎng)6周；(3)每2周稱重一次并記錄；(4)數(shù)據(jù)處理文中所列數(shù)據(jù)均以X±S表示，組間均數(shù)顯著性檢驗(yàn)采用方差分析。結(jié)果如表3所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注A女與對照組相比P〈0.01;由表3可見，WRY-A化合物和含有WRY-A化合物的迷迭香提取物對控制大鼠體重的升高有明顯作用。綜上所述1、WRY-A化合物和含有WRY-A化合物的迷迭香提取物有抑制a-葡萄糖苷酶活性的作用。2、WRY-A化合物和含有WRY-A化合物的迷迭香提取物有抑制進(jìn)食所致血糖升高的作用。3、WRY-A化合物和含有WRY-A化合物的迷迭香提取物有減肥的作用。權(quán)利要求1.如如式1所示的熊果酸糖甙，或含有該化合物的植物提取物在制備消化相關(guān)酶活性抑制劑中的應(yīng)用。式12.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的消化相關(guān)酶為a-葡萄糖苷酶。3.如式1所示的熊果酸糖甙或含有該化合物的植物提取物在制備抑制血糖水平升高的藥品、飲品、食品和保健品中的應(yīng)用。4.如式1所示的熊果酸糖甙或含有該化合物的植物提取物在制備預(yù)防、控制或治療糖尿病的藥品、飲品、食品和保健品中的應(yīng)用。5.如式1所示的熊果酸糖甙或含有該化合物的植物提取物在制備預(yù)防、控制或治療肥胖癥，或減肥美體塑身用的藥品、飲品、食品和保健品中的應(yīng)用。6.如權(quán)利要求l、3、4或5所述的應(yīng)用，其特征在于所述的植物為迷迭香。全文摘要本發(fā)明公開了如式1所示的化合物熊果酸糖甙或含有該化合物的植物提取物在制備消化相關(guān)酶活性抑制劑，抑制血糖水平升高，預(yù)防、控制或治療糖尿病或肥胖癥，或減肥美體塑身用的藥品、飲品、食品和保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明的應(yīng)用開拓了上述化合物新的應(yīng)用領(lǐng)域，同時(shí)也為上述領(lǐng)域的病癥的預(yù)防、控制和治療以及保健提供了新的途徑。文檔編號A23L1/30GK101422471SQ20071004758公開日2009年5月6日申請日期2007年10月30日優(yōu)先權(quán)日2007年10月30日發(fā)明者劉桂云,濱駱申請人:上海市新文達(dá)生物科技有限公司